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5/10/2016

Biodiagnsticodelasdiarreasagudasbacterianasyvirales

Biodiagnsticodelasdiarreasagudasbacterianasyvirales
I.Poilane1,A.Collignon1
1.LaboratoiredeMicrobiologie,HpitalJeanVerdier,APHP,Bondy

PublicadoporlaAsociacinEspaoladeFarmacuticosAnalistas(AEFA)conautorizacindelarevistafrancesa
BiologisteetPracticien.
Editor:Dr.CamiloFernndezEspina
Colaboracin:Dr.MiguelBlascoVega
AsociacinEspaoladeFarmacuticos
Analistas
ModestoLafuente,328010Madrid
AEFAagradeceaBiologisteetPracticienlasfacilidadesyautorizacindesinteresadaparalatraduccinalespaolyla
insercindesusartculosenlosCuadernosdeFormacin.Losautoresdelosoriginalesnoson,enningncaso,
responsablesdelaabsolutafidelidadenlatraduccindelosmismos.

1.Obtencindelamuestra
2.Coprocultivoestndar
2.1.Examenmacroscpico
2.2.Examenmicroscpico
2.3.Cultivo
3.Interpretacindelcoprocultivoestndar
4.Diagnsticodelagastroenteritisviral
5.Coprocultivoenuncontextoepidemiolgicoclnicoparticular
6.MtodosdediagnsticodeunainfeccinporECEH
6.1.Cultivo
6.2.Serotipado
6.3.Serodiagnstico
6.4.Deteccindelastoxinas
Resumen
Eldiagnsticodelasdiarreasagudasbacterianasserealizamediantelaprescripcindecoprocultivostpicosu
orientados,realizadosdespusdelinterrogatorio.Despusdelexamenmacroscpicoymicroscpicodelasheces
(diagnsticodeorientacin),elcultivopuedeponerenevidenciaSalmonella,Shigella,CampylobacteroYersinia,que
sernsiempreconsideradoscomopatgenos,mientrasque,salvoexcepcinnotable,lapresenciadeE.coliformaparte
delafloraclicacomensal.Enelnio,losagentesresponsablesdelasgastroenteritisviralesson,porordendecreciente
defrecuencia,losrotavirus(sobretodolosdelgrupoA),calicivirus,astrovirusyadenovirus.Eneldiagnsticovirolgico
derutinaslosedetectanrotavirusyadenovirus4041.Algunoscoprocultivosserealizanenelcursodeuncontexto
epidemiolgicoclnicoparticularenbsquedadebacteriasenteropatgenascomoVibriocholerae,Clostridiumdifficileo
E.Colienterohemorrgico.EstepatotipodeE.colipuedeserresponsabledelsndromehemolticoyurmicoligadoala
produccindetoxinas.Suresponsabilidadamenudoseestableceporcultivodespusdeserotipado,pordeteccinde
lastoxinasproducidasomsraramentepormtodosserolgicos.Ladiarreaagudaesunfenmenopatolgicodefinido
segnlaOMSporlaemisindealmenostresheceslquidasoblandasaldaconmenosde14dasdeantelacin.
Puedetenerdiferentesorgenes,infecciososono.Cuandoelorigendeladiarreaagudaesinfecciosopuedeser
bacteriana,viraloparasitaria.Esfrecuenteenelnio,enelquerepresentaunacausamayordemorbilidadymortalidad
enelmundo.EnFrancia,cercadetresmillonesdepacientesconsultanporunadiarreaagudayslodel3al4%de
estasconsultasoriginanlaprescripcindeuncoprocultivo(1).Esimportanteparaelmicrobilogoconseguirinformacin
delossignosclnicos(doloresabdominales,fiebre,aspectodelasheces)ydelcontextoepidemiolgico.Enadultosy
niosdemsdedosaosoenausenciadeinformacin,serealizaruncoprocultivoestndar.Comprendelabsqueda
deSalmonellaspp.,Shigellaspp.,Campylobacterspp.yllegadoelcaso,Yersiniaenterocolitica.Enalgunassituaciones
particulares,laprescripcindeberestardirigida:bsquedadeVibrio,Aeromonas(signosclnicos,regresodezonade
endemia),deClostridiumdifficile(diarreapostantibitica,colitispseudomembranosa),deciertospatovaresde
Escherichiacoli(diarreahemorrgica,sndromehemolticoyurmico).Sehablardecoprocultivoorientadoo
especializadoconbsquedadeunmicroorganismoconcreto.

1.Obtencindelamuestra
Lashecesrecientementerecogidassellevarnlomsrpidamenteposibleallaboratorio.Siel
anlisisesdiferido,lamuestrasepuedeconservardurante12a24horasa4Cparaevitarla
proliferacinbacteriana.
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S032529572006000300015

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2.Coprocultivoestndar
Serprescritoenciertassituaciones:encasodediarreahemorrgicaomucososangrienta
(sndromedisentrico),enpresenciadesignosclnicosdegravedad(deshidratacin,sndrome
septicmico,fiebre)enpacientesdebilitadosoinmunodeprimidos,encasodetoxiinfeccin
alimentariacolectiva.
2.1.Examenmacroscpico
Hayqueobservarelaspectodelasheces(lquidas,acuosas,mucosas,mucososangrientas,
hemorrgicas,blandas),porquepuedeorientarsobreelpatgenoresponsable,enteroinvasivo
(Salmonellaspp.,Shigellaspp.)oenterotoxingeno(Vibriocholerae,Escherichiacoli
enterotoxingeno).Lashecesnormalesnicamenteseanalizarnenelcasodebsquedade
portadoressanosenuncontextoepidemiolgicoynodiagnstico.
2.2.Examenmicroscpico
2.2.1.Estadofresco
Silashecessonlquidas,unexamendirectoentreportaycubrepermitirponerdemanifiestola
presenciadeleucocitos,hematesolamovilidaddealgunasbacteriastalescomoCampylobacter
spp.yVibriospp.Lapresenciadeleucocitosenlashecesestafavordeunainfeccinpor
grmenesinvasivos(Salmonella,Shigella,Campylobacter)oporgrmenesnoinvasivos
productoresdetoxinasqueinducenlesionesmucosasclicas(C.difficiletoxingeno).
2.2.2.TincindeGram
Serecomiendaefectuar,apesardesufaltadesensibilidad,unatincindeGramparaevaluarla
riquezayelequilibriodelaflora(unafloraequilibradaestcompuestamayoritariamentedebacilos
gramnegativos)paraobservarlevadurasybacteriasdemorfologacaractersticacomo
Campylobacterspp.
2.3.Cultivo
Lafloraintestinalesunafloracomensalricaycomplejaconstituidaporunas1011bacteriaspor
gramodeheces.Hayqueutilizarmediosselectivosparaaislarespecficamentelos
enteropatgenoseinhibirelcrecimientodelafloraasociada.
Lashecessesembrarnsistemticamenteenunmediodecultivolactosadopocoselectivo
(Drigalski,EMB),enunmediomsselectivoyenunmedioselectivodeenriquecimiento,elegido
enfuncindelabacteriaainvestigar.
2.3.1.Salmonella
Mediosselectivosdeaislamiento
LosmediosselectivosparaSalmonellacontienensustratosquepermitenuncribadodelas
coloniasporloscaractereslactosayreduccindelossulfatos:agarSS(SalmonellaShigella),
XLD,DCL(desoxicolatocitratolactosa),Hektoen.Atodacoloniasospechosa,(lactosa,H2S)
seleharunapruebadeurea.Siesnegativaencuatrohoras(eliminacindeProteusyciertas
Klebsiellas)seseguirconlaidentificacin.Puedenusarseotraspruebasdecribado:labsqueda
delaC8esterasaconunsustratocromognico,lametilumbeliferonacaprilato(MUCAP):las
salmonellassonMUCAPpositivas.ElmedioSMID(bioMrieux)contieneglucuronatoyXGal(5
bromo4cloro3bDgalactopiransido):lassalmonellassonglucuronatopositivasyb
galactosidasanegativa:lascoloniasdesalmonellasonrosadascomociertascepasdeE.coli,
MorganellayShigella.
Mediosselectivosdeenriquecimiento
SeutilizaelmediodeMllerKaufmannoelcaldodeselenitodeLeifson.Despusde24horasde
incubacin,lascoloniasseresiembranenmediosdeaislamientoselectivos.Estosmediosse
utilizansistemticamenteparaaumentarlasensibilidaddedeteccindesalmonellasenlasheces
oenbacteriologaalimentaria(2).
Identificacin
Sehaceporpruebasbioqumicas(galerasAPI20E10SyunmediodeKliglerHajna).Atoda
identificacinqueconcluyaenSalmonellaentericaspp.leseguirobligatoriamenteuna
identificacinantignicaparadeterminarelserotiposegnelesquemadeKauffmannWhite.
ElserotipolodefinenelantgenosomticoOyelantgenoflagelarH.Todoaislamientoenelque
nosedetermineelserotipocompletotienequeserenviadoalCentroNacionaldeReferenciapara
hacerlosestudiosepidemiolgicos.SepodrhacerunainversindefasesegnSvenGarden
casodebacteriaenfaseflagelarnoespecfica(2).
http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S032529572006000300015

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EnFrancia,lassalmonellassonlosprincipalesagentesenteropatgenosaisladosenlas
infeccioneshumanas.Losserotiposmsfrecuentesson:enteritidis,typhimurium,hadar(3).Son
responsablesdegastroenteritisydetoxiinfeccionesalimenticias.Encasodetoxiinfeccin
alimenticiacolectiva(TIAC)odesalmonelosisma

http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S032529572006000300015

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