Informe n1: Micropiteta y

Microscopia.
Pamela Espinoza Brbara Marambio Rodrigo Seplveda
Francisca Uribe.

viernes, 30 de
septiembre de 2016

Profesor Elas Leiva

ndice
Objetivos
3
Resumen
1

3
Introduccin
4
Materiales
.8
Procedimiento
Experimental8
Resultados
..10
Discusin
..12
Conclusin
12
Referencias
..13

Resumen
Dentro de este informe, se podr apreciar ms a fondo dos instrumentos de laboratorio muy
importantes dentro del mbito cientfico, uno de estos tiene la funcin de tomar volmenes muy
pequeos para preparar disoluciones, mezclas, muestras etc. En este caso es la micropipeta, la mejor
herramienta para tomar volmenes exactos.
La otra herramienta importante tiene la funcin de poder amplificar imgenes muy pequeas para el
ojo humano, el microscopio, estos dos instrumentos siempre sern fundamentales en cualquier
investigacin o trabajo en un laboratorio.
Pero cabe destacar que hay muchas ms herramientas que se usan dentro del mbito cientfico pero
en este caso definiremos las partes de la micropipeta y el microscopio, su mecnica, como usarla,
sus cuidados, sus usos, etc.

Objetivos

Conocer el uso correcto de la micropipeta.

Conocer las distintas propiedades de la micropipeta y sus partes.
Conocer las diferentes medidas de volumen que pueden ser tomadas con la micropipeta.
Aprender sobre las partes de un microscopio.
Reconocer diferentes tipos de clulas a travs del uso del microscopio.

Introduccin
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeos
volmenes de lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicas cientficas.
Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a aspirar se fija girando un botn en su parte
superior que est conectado a un sistema analgico de confirmacin de volumen, y automticas, en
las cuales dicho sistema es digital.
Hay micropipetas simples, que slo acogen una punta cada vez, y multicanales, que permiten
incorporar mltiples puntas (por ejemplo, ocho), absorbiendo el mismo volumen en todas ellas.
Actualmente, se reconocen fcilmente en el mercado dos de las mejores marcas que existen:
Eppendorf y Nichiryo.

Partes de la Micropipeta
Dentro de las partes de una micropipeta encontramos las siguientes:
1. Botn pulsador
2. Tornillo del botn pulsador
3. Rueda dentada de graduacin del volumen.
4. Cono de la pipeta.
5. Expulsor de punta.
6. Punta o tip descartable

Operacin del Equipo

4

Tcnica de pipeteo para lquidos claros:

a) Se presiona el botn superior suavemente hasta el primer tope.

b) Se sumerge la punta, en la solucin que se necesita pipetear estando seguros que la punta
este bien colocada y que no haya ningn tipo de residuos entre la punta y el cuerpo de la
pipeta.

c) Mantenga la pipeta verticalmente mientras toma la solucin.

d) Ubique la punta de la pipeta en la pared interior del vaso donde se depositar la muestra en
un ngulo de 10 a 40 grados. Presione el botn suavemente hasta el primer tope.

e) Para descartar la solucin de la punta presione el botn hasta el segundo tope.

f) Descarte las puntas utilizando el eyector que traen las pipetas.

Tcnica de pipeteo para lquidos con alta viscosidad:

a) Presione el botn superior hasta el primer tope.

b) Sumerja la punta en la solucin (2-3 mm) y suelte el botn despacio. La punta tiene que
estar bien llena.

c) Descarte el lquido de la punta presionando suavemente el botn superior hasta el primer

tope.

d) Luego de la pelcula creada, se procede a tomar la muestra normalmente.

El uso de micropipetas permite emplear distintos lquidos sin tener que lavar el aparato. Para ello, se
emplean puntas desechables, de plstico, que habitualmente son estriles. stas varan segn la
cantidad que se requiere pipetear.

Tipo de Micropipeta
P10
P20
P100
P200
P1000

Volumen
0,5 l - 10 l
0,5 l - 20 l
10 l -100 l
20 l -200 l
100 l -1000 l

Tipo de punta
Amarillas o blancas
Amarillas o blancas
Amarillas
Amarillas
Azules o blancas

Dentro de los instrumentos de laboratorio que se utilizan en la bioqumica, el microscopio es uno de

los ms importantes al realizar una investigacin a fondo de organismos, enzimas, virus, etc. El

microscopio es un instrumento que nos permite amplificar el sentido visual a travs de l para ver
una imagen que a simple vista del ojo humano no se puede detectar porque es muy, muy diminuto.
El ojo humano tiene la capacidad visual de ver hasta una distancia de 0,2mm, con un microscopio
puede aumentar su grado de visin hasta un valor de 500nm.
Existen dos tipos de microscopios que utilizan investigadores en los laboratorios, los de ptica
(funcin de luz) y elctrico (funcin de electrones), la diferencia de estos dos es muy obvio, el de
funcionamiento de luz es a base de ondas que emite la luz para poder observar con ms exactitud la
imagen que se desea ver, este microscopio se usa mucho ms que el elctrico porque este tiene que
usar los electrones para iluminar la muestra y por lo tanto su lmite de resolucin es menor al
ptico.

Partes del microscopio ptico.

El microscopio ptico est formado por dos sistemas:
I) El sistema mecnico, que le da soporte y estructura al microscopio: Los elementos bsicos que lo
componen son el pie, que soporta el microscopio, la columna, donde se apoyan las piezas restantes,
el tubo, que es el elemento de unin entre el ocular y el revlver (pieza giratoria que contiene los
objetivos), la platina, sobre la que se apoya la preparacin a observar, y los tornillos micromtrico y
macromtrico que se utilizan para enfocar la preparacin; el macromtrico se usa para los ajustes
gruesos y el micromtrico para el ajuste fino o de precisin.
II) El sistema ptico, que permite la formacin de la imagen; est formado por:

Dos sistemas de lentes que amplifican la imagen del objeto:

1) Lentes objetivos. Los lentes de 4x, 10x y 40x reciben el nombre de objetivos secos
y el de 100X, objetivo de inmersin, debido que en los primeros no se utiliza un
medio entre la muestra y el lente, solo hay aire, pero, en 100X se coloca aceite de
inmersin.

2) Lentes oculares, se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general tienen
un aumento de 8x, 10x o 12x.

Condensador, que concentrar la luz sobre la preparacin y permitir regular su intensidad.

Diafragma o iris; que permite regular la cantidad de luz que sale de ste.

Anillo porta filtro, que permite adicionar un filtro de color al condensador para destacar
estructuras de inters en la preparacin.

USO DEL MICROSCOPIO

1) Coloque el microscopio en una posicin cmoda sobre una superficie plana. Tmelo
siempre del brazo o columna. Si desea cambiar la posicin del instrumento levntelo y NO
lo arrastre por el mesn.

2) Al inicio del laboratorio, es conveniente chequear la limpieza de los diferentes lentes antes
de comenzar la observacin. Los lentes deben limpiarse con solucin limpiadora de
microscopio y pauelos desechables o un pao humedecido con Xilol o lquido limpiador
de microscopio.

3) Encienda la lmpara, baje el condensador y abra el diafragma completamente.

4) Si se utiliza aceite de inmersin, el lente objetivo de 100x debe limpiarse al finalizar la
observacin.

5) Cuando finalice la observacin baje la platina, retire la preparacin. Limpie el objetivo y la

preparacin con un pao humedecido con Xilol. Apague la lmpara y enrolle el cordn en
el pie del microscopio.

Materiales
7

Materiales
Micropipeta
Puntas
Vaso de precipitado
Microscopio ptico
Azul de metileno
Pinzas
Cebolla
Muestras de bacterias

Saliva
Bistur
Portaobjetos
Cubreobjetos
Etanol
Pauelos desechables
Torula
Aceite de

Procedimiento experimental
Micropipeta
1. Tome y vace los siguientes volmenes de agua: 2 ml, 1.5 ml, 1.38 ml, 250 ul, 200
ul, 40 ul, 18 ul, 2 ul.
2. Tome y vace los siguientes volmenes de alcohol: 2 ml, 1.5 ml, 1.38 ml, 250ul, 200
ul, 40 ul, 18 ul, 2 ul.
3. Tome y vace los siguientes volmenes de aceite: 2 ml, 1.5 ml, 1.38 ml, 250ul, 200
ul, 40 ul, 18 ul, 2 ul.
a) Tomar la micropipeta adecuada para el volumen solicitado (que no sea mayor al mximo
especificado en la micropipeta)

b) Colocar una punta nueva que corresponda al volumen de la micropipeta, seleccionar el

volumen deseado.
c) Para succionar se debe presionar hasta el primer tope en el aire y luego sumergir la
micropipeta en el lquido y soltar el botn con suavidad.
En el caso del Glicerol es ms complicado de pipetear, ya que es un lquido ms viscoso
que el agua. Por esto se debe hacer una "medicin de prueba" para que no se produzca un
error en la medicin, con esta medicin se crea una capa de lquido en las paredes internas
de la punta, y as resultan resultados ms exactos.

Con el etanol se debe tener cuidado en el momento de pipetear, ya que puede saltar liquido
dentro de la micropipeta, esto se debe a que es menos viscoso que el agua.
d) Para soltar, se debe ubicar la punta en la pared interior del recipiente y apretar el botn
hasta el primer tope. Apretar hasta el segundo tope para eliminar los restos que puedan
quedar en la punta.
e) Remover la micropipeta por arrastre sobre la superficie del recipiente. Desechar la punta
para utilizar otro lquido.

Microscopio
1.- Microscopia Bsica.
Se nos facilita una muestra de B. subtilis la cual observaremos en el microscopio con los diferentes
objetivos.
2.- Microscopa clula eucariota vegetal. Epidermis de cebolla con tincin.
Utilizando una hoja de bistur y pinzas, se extrajo un trozo pequeo de la epidermis de cebolla (tela
de cebolla) y se coloc un portaobjetos.
Se aaden dos gotas de azul de metileno y se cubri con un cubreobjetos.
Con el microscopio se observ su estructura celular a diferentes objetivos
3.- Microscopa clula eucariota animal: Clulas descamativas de mucosa bucal con tincin.
Con una torula rasparemos suavemente la cara interna de la mejilla de un compaero. Luego,
colocaremos una gota de agua destilada sobre un portaobjeto y depositaremos el producto obtenido
en la torula, extendindolo con precaucin.
Agregaremos 2 gotas de azul de metileno y pondremos un cubreobjetos dejndolo caer suavemente
sobre la muestra del portaobjeto.
Observar con todos los objetivos del microscopio.

Resultados
Microscopia Bsica.

B. Subtilis: Se aprecia los bacilos en forma de "tubos"

9

en color morado.

Microscopa clula eucariota vegetal. Epidermis de cebolla con tincin.

Cebolla: Se nota a simple vista la estructura de las

capas de cebolla

Microscopa clula eucariota animal: Clulas descamativas de mucosa bucal con tincin.
10

Saliva: Clulas

Discusin.
En la primera parte de reconocimiento de la micro pipeta, se debe esclarecer la relevancia de buscar
11

la micro pipeta correcta que segn la tabla puede ser PX donde x indica el valor mximo que
soporta en micro litros y que estn categorizadas por colores en el mercado. No se puede obviar
adems que es un instrumento analgico y por ende existe un error instrumental y un error asociado
a quien est midiendo, en la actualidad ya existen micro pipetas digitales mucho ms precisas a las
utilizadas en el laboratorio.
En la parte de reconocimiento del uso del microscopio aparte de diferenciar el microscopio
electrnico del de luz, uno ptico como su nombre lo indica usa lentes para aumentar, en cambio
uno electrnico usa un rayo de electrones q rebota en los objetos de acuerdo a esa informacin la
pantalla crea una imagen del objeto. La diferencia en cuanto al aumento que se puede lograr es que
en uno de luz puede llegar hasta 500.000 aumentos comparados con los 1000 aumentos de los
mejores microscopios pticos, esto debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho
menor que la de los fotones.

Conclusin
Este caso a modo experimental se llevaron a cabo las actividades de calibracin y uso de la micro
pipeta en diferentes lquidos y luego el uso del microscopio. Si bien las imgenes captadas por el
microscopio en el primer caso los bacilos, las capas de la cebolla y de la saliva, aparte de identificar
diferentes rangos de operacin las imgenes obtenidas fueron muy claras denotando la precisin en
el uso del microscopio.
Pero a pesar de ello se deben considerar las causas posibles con problemas en las imgenes:

Verificar la iluminacin correcta

Verificar los lentes del objetivo estn limpias

Comprobar que entre el diafragma de campo y el de abertura no exista ningn filtro

difusor

El centrado del revolver portaobjetos debe ser el correcto

Revisar la limpieza de todo el sistema ptico

Comprobar que el aceite de inmersin sea el suficiente, sin burbujas ni impurezas, y que
no sea fluorescente.

Asegurarse de que el objetivo est bien enroscado.

Verificar el grosor del cubreobjetos, portaobjetos y medio de montaje, que es decisivo,

sobre todo en medianos y grandes aumentos. Es importante, igualmente, no colocar dos
cubreobjetos superpuestos.

La montura del condensador debe estar bien central

Referencias.
http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_mo.php?it=1031
12

 Gua de Laboratorio n1: Manejo de micropipetas.

Gua de Laboratorio n2: Microscopia.

13