O gnero Staphylococcus composto por 37 espcies, 17 delas podem ser
isoladas de amostras biolgicas humanas. Geralmente so encontrados na pele e mucosas. Rotineiramente o teste de catalase usado para diferenciar estafilo (catalase +) de estreptococos (catalase -), mas no significa que no exista nenhuma espcie de estafilococos que no possua a enzima catalase. A seguir um esquema que identifica as principais espcies de Staphylococcus. Se tiver dificuldade de ver, clique na imagem.
Prova da catalase
Tem a finalidade de verificar a presena da enzima catalase, que decompe
H2O2 em gua e oxignio. Colocar uma colnia numa lmina de microscopia e dissolver perxido de hidrognio. Observar a presena (+: estafilococos) ou no (-: estreptococos) de bolhas. Prova da coagulase
Existe o teste em tubo e em lmina. Tem a finalidade de verificar se o
microrganismo possui a coagulase (fator aglutinante). TUBO
Colocar 0,5mL de plasma em tubo de ensaio
Adicionar uma colnia com ala bacteriolgica diretamente no plasma de
coelho com EDTA Incubar por 4h em estufa a +/- 37C Observar a formao de cogulo (brumos), caracterstica de S. aureus. LMINA Colocar 2 gotas de salina na lmina
Emulsionar a colnia
Adicionar 1 gota de plasma e misturar
Observar a formao de cogulo (brumos), caracterstica de S. aureus.
A prova em tubo pesquisa coagulase livre e ligada que, reagindo com um fator plasmtico, forma um complexo que atua no fibrinognio do plasma formando a fibrina. O teste em lmina verifica a coagulase ligada na superfcie da parede celular, que reagindo com o fibrinognio do plasma, causa a coagulao do mesmo.
Teste de DNAse com HCl
Tem o objetivo de verificar se a bactria possui a enzima desoxirribonuclease.
Fazer inculo denso e circular em uma regio do meio. Incubar por aproximadamente 24h a cerca de 37C. Aps incubao, realizar leitura com aplicao de HCl de modo que cubra as colnias. Aguardar 30s. A formao de um halo transparente identifica S. aureus. Se no houver halo, identificar como estafilococo coagulase negativa.
Fermentao em manitol
Observar a capacidade do microrganismo em crescer num meio salino (7,5%
de NaCl) e fermentar o manitol. Semear no gar manitol Leitura: formao de halo amarelo ao redor das colnias, tpico de S. aureus. Teste de resistncia novobiocina
Finalidade: Verificar se o germe resistente ao antibitico.
Semear por atapetamento (como para biograma) em gar sangue
Colocar um disco de novobiocina
Incubar a 37C por aproximadamente 24h.
A formao de halo igual ou inferior a 16mm identifica Staphylococcus
saprophyticus.
O S. pyogenes tambm pode ser identificado com teste de PYR
Como supracitado, a negatividade no teste da catalase
indica Streptococcus. Todos os procedimentos de identificao deste gnero se baseia inicialmente no tipo de hemlise apresentada no gar sangue de carneiro. Teste de Camp Visa a identificao de cepas de S. agalactiae, que produzem o fator CAMP.
Inocular uma estria de S. aureus de um ponto a outro na placa de gar
sangue.
Semear perpendicularmente a colnia a ser estudada, sem que haja o
contato com a outra bactria! Levar estufa. A formao da seta hemoltica entre a colnia de aureus e o outro microrganismo indica positividade pra Streptotococcus agalactiae.
Teste de sensibilidade bacitracina
Esse teste vai diferenciar S. pyogenes das outras espcies beta-hemolticas.
Semeio por atapetamento em sangue de carneiro Aplicao do disco de bacitracina Incubao A presena de qualquer halo de inibio interpretada como sensibilidade = S. pyogenes. Teste de PYR
Determina a atividade de enzima pyrrolidonil arilamidase produzida pelo S.
pyogenes. Com auxlio de pina, colocar um disco de PYR sobre uma lmina
Pingar uma gota de gua estril
Realizar um esfregao com a bactria sobre o disco mido
Colocar uma gota do reagente PYR. A reao ocorrer em 1min.
O resultado positivo se apresenta na cor vermelha, enquanto a cor amarela/laranja significa negatividade.
Prova da Optoquina
A presena de halo maior ou igual a 14mm indica que a bactria identificada se
trata do Streptococcus pneumoniae.
Quando a bactria apresenta -hemlise, segue-se a identificao da figura.
Bile esculina Esse teste serve para identificar o gnero Enterococcus sp. A bile esculina um meio rico em sais biliares. Alguns microrganismos possuem a capacidade de hidrolisar a esculina em esculetina na presena de bile. O composto formado complexa-se com ons ferro presente no meio e forma um precipitado perto que indica a positividade do teste. Teste de crescimento em NaCl 6,5% Confirma o gnero Enterococcus sp. depois da bile. Os enterococos so capazes de crescer em meio hipertnico.
Inocular as colnias em caldo NaCl 6,5% e observar o crescimento aps
incubao. A leitura positiva se d por alterao da cor - de roxo para amarelo.
Baseado nos livros Bacteriologia Clnica: Manual de aulas prticas (2010) e