UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR

DE SAN MARCOS
(Universidad del Per, DECANA
DE AMRICA)

FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLGICAS

Asignatura: Biologa Molecular

Tema: Caracterizacin espectrofotomtrica del ADN
Profesor: MSc. Gustavo A. Sandoval
Turno: Viernes 8 - 12 pm
Fecha de entrega: 12 de septiembre del 2015
Alumnos:

Cdigo:

Alcedo Chvez Adela Rosibel

Oyola Salvador Wendy Brbara
Pereira Bautista Nicolle Solange
Torres Villena Joel

15100040
13100098
15100152

ndice

1.

Introduccin.................................................................................................. 3

2.

Resultados.................................................................................................... 4

3.

Discusin...................................................................................................... 7

4.

Conclusiones................................................................................................. 8

5.

Bibliografa.................................................................................................... 9

1. Introduccin
En esta prctica determinaremos el rendimiento mediante espectrofotometra
del material gentico obtenido la prctica anterior.

2. Resultados
Anlisis espectrofotomtrico de ADN
Se realiz una primera dilucin con relacin 1:5 de los DNA vegetal y
DNA animal obtenidos en la prctica anterior en solucin C, para medir
las absorbancias de dichas diluciones a 260nm, lo cual nos mostr los
siguientes resultados:
Tabla - 1

DNA animal
DNA
vegetal

Absorbancia a 260nm
de la dilucin 1
0,524
0,469

DNA vegetal: muestra obtenida de Pisum sativum

DNA animal: muestra obtenida de gnadas de Argopecten

Ya obtenida las dos diluciones a una absorbancia cercana a 0.500, se

prepar una batera de tubos los cuales presentaron el siguiente
contenido:
Tabla - 2

Muestra
Solucin C (mL)
ADN Argopecten
diluido (mL)
ADN Pisum diluido
(mL)
Agua destilada (mL)
NaOH (mL)

B
2.0

1
--

2
--

3
--

4
--

--

1.0

1.0

--

--

--

--

--

1.0

1.0

---

1.0
--

-1.0

1.0
--

-1.0

Se obtuvieron los siguientes resultados a distintas absorbancias:

Absorbancia a 260nm
Absorbancia
a 280nm
B=
0,004

0,006

0,271

2=

0,314

2 = ---

3=

0,274

0,323

4 = ---

1=

0,169

0,172
4=

Restando los tubos numerados con su blanco respectivo, obtenemos:

Tabla - 3

ADN Animal
ADN Vegetal

H2Od
NaOH
H2Od
NaOH

A 260nm
0,265
0,308
0,268
0,317

A 280nm
0,165
-0,168
--

Con los datos obtenidos se realizaron los siguientes anlisis para poder
caracterizar al DNA:

a. Estado del DNA:

Se hall el porcentaje de incremento de absorbancia a 260nm
comparando las soluciones de agua destilada con hidrxido de sodio
obtenidas anteriormente:

Para el tubo 2 vs 1 (DNA animal) :

((0,308/0,265)*100)-100 = 16,23 %

Para el tubo 4 vs 3 DNA vegetal:

((0,317/0,268)*100)-100 = 18,28%

Debido a que el porcentaje de incremento fue menor al 30 %, el DNA

vegetal y DNA animal se encontraron denaturados o en otro caso, en
ellos persisten ARN en las soluciones.

b. Concentracin de la muestra:
Debido a que los DNA se encontraron en estado denaturado, se
consider la siguiente relacin:
1 mg/mL DNA = 27 unidades de absorbancia a 260nm
Para as obtener los siguientes resultados:

Para DNA Animal:

0,265 x 1

mg
mL

27

x 2 x 5=0,098

Para DNA Vegetal:

0,268 x 1

mg
mL

27

x 2 x 5=0,099

** El producto por dos y cinco se derivan del nmero de diluciones y la dilucin

1:5 realizada al inicio de la prctica.
Tabla - 5

ADN animal

Absorbancia
A 260nm
0,265

Concentracin
(gm/mL)
0,098

ADN vegetal

0,268

0,099

c. Grado de pureza:
Para ello se encontr la relacin de absorbancias a 260 y 280 nm en
cada muestra.
Abs260/Abs28

0
ADN vegetal sin
diluir
ADN animal sin
diluir

1.55
1.60

Como los resultados obtenidos de las muestras no estn dentro del

rango de 1.8 a 2.0, se determina que la muestra est contaminada. Por
lo cual procedemos a hallar la concentracin de protenas contaminantes
utilizando la siguiente relacin:

Protena (mg/mL)= 1.55 (abs280)-0.76 (abs260)

El resultado obtenido fue el siguiente:

DNA animal:
1.55 (0,165)-0.76 (0,265) = 0,054

DNA vegetal:
1.55 (0,168)-0.76 (0,268) = 0,057

ADN animal
ADN vegetal

Accin de nucleasas

a. Sobre sustrato sinttico :

Protena contaminante
(mg/mL)
0,054
0,057

Para ello preparamos la siguiente batera de tubos:

Tubo
Sustrato sinttico
Buffer pH 8.5(mL)
Nucleasa (2mg/mL)

B
0.5
0.5
-

1
0.5
0.4
0.1

2
0.5
0.4
0.1

Registramos las siguientes absorbancias a 400 nm en los dos tiempos de

incubacin (se agreg NaOH cumpliendo dicho tiempo logrando detener
la reaccin), obteniendo los siguientes resultados:

Absorbancia
400 nm

T1 (3 min)
0.361

T2 (6 min)
0.457

Determinamos la actividad especfica de la nucleasa empleada usando la

siguiente relacin:

A.E.= Cantidad de producto liberado

(min)/cantidad de enzima usada (mg)

(M)/unidad

de

tiempo

CANTIDAD DE PRODUCTO LIBERADO

*Considerando que el factor de calibracin (p-nitrofenol)= 6 M

Tubo 1:
Producto liberado = absorbancia x factor de calibracin
= 0,361 x 6 M
= 2,166

Tubo 2:
Producto liberado = 0,457 x 6 M
= 2,742

CANTIDAD DE ENZIMA USADA

2 mg 1 mL
X mg 0,1 mL
X = 0,2 mg

Tubo 1
Tubo 2

Producto liberado
(M)
2,166
2,742

Tiempo
(min)
3
6

Enzima usada
(mg)
0,2
0,2

Actividad especifica
(M.min-1.mg-1)
3,61
2,29

Como los resultados obtenidos en la actividad especfica son distintos, estos se

promediarn y se calcular la desviacin estndar.

M=

3,61+ 2,29
=2.95
2

(3,612,95)2 +(2,292,95)2
=0,933
21

*desviacin: 0.933

3. Discusin
a. Estado de ADN
Al obtener un porcentaje de 16,23% en ADN animal y

4. Conclusiones

5. Bibliografa