PRE INFORME

PRCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRCTICA No. 1: METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

AMINOACIDOS Y PROTEINAS

Betty Segura Moreno, CDIGO: 23781.494, e-mail: seguramore@yahoo.es,

estudiante de Bioqumica UNAD Universidad Nacional Abierta y a Distancia.
Escuela de Ciencias Bsicas, Tecnologa e Ingeniera-ECBTI. Bioqumica
Mediacin: CV, Grupo: 81 CEAD: Tunja Boyac- Colombia.

Tutor de laboratorio:
Nombre APELLIDO: Nubia Valcrcel,(nubia.varcarcel@unad.edu.co). Licenciada
en Qumica y Biologa con maestra en Docencia de la Qumica.
Sesin de laboratorio 1: Octubre 05 de 2014

Estudiante
Betty
SEGURA
MORENO

Correo electrnico
estudiante
seguramore@yahoo.e
s

Cdigo

Grupo
de
campu
s

Correo electrnico
tutor campus

23.178.49
4

81

bseguram@unad.edu
.co

1. Objetivos de la prctica

Reconocer los aminocidos como unidades estructurales de las Protenas.

Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas la presencia de
aminocidos y enlaces peptdicos en las muestras.

 Establecer la relacin entre la estructura y la funcin de las protenas y

prdida de esta al variar su pH y solubilidad
(precipitacin y
desnaturalizacin).

2. Marco terico

Fundamentacin Terica

1. Captulo 1 y 2 de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso, enfatizando

en: Clasificacin de aminocidos,
Enlace peptdico, Niveles de estructuracin,
desnaturalizacin por calor y pH extremos.

Solubilidad

de

protenas:

Precipitacin por metales pesados, Precipitacin acdica

2. Pruebas cualitativas: enfatizar en las reaciones qumicas que tienen lugar y el
principio del mtodo: Reacin de la ninhidrina, Reacin xantoproteica, Reacin de
milln, Reacin del cido glioxlico, Prueba de Pauly, Prueba del Nitroprusiato,
Reacin de Sakaguchi prueba de Biuret.

3. Defina aminocido: Que grupos funcionales estn presentes en los

aminocidos? Cmo ellos estn relacionados con las propiedades cido
bsicas.
1. Algunos autores clasifican los aminocidos de varias formas, por ejemplo, en
esenciales y no esenciales, en alifticos y aromticos, o quiz la ms acertada; de
acuerdo a la polaridad, presencia de cargas y composicin qumica de la cadena
lateral R de los aminocidos. De un argumento vlido de sta ltima clasificacin
en dnde se explique el porqu de esta.

Aminocidos con grupos R no polares o hidrofbicos

Existen 8 aminocidos que contienen grupos R no polares o hidrofbicos. Entre
los cuales se encuentran la alanina, la leucina, la isoleucina, la Valina, la prolina, la
fenilalanina, el triptfano y la metionina. Estos aminocidos son menos solubles en

el agua que los aminocidos con grupos R polares. El menos hidrfobo de esta
clase de aminocidos es la alanina, la cual se halla casi en la lnea fronteriza entre
los aminocidos no polares y los que poseen grupos R polares.

Aminocidos con grupos R polares sin carga.

Estos aminocidos son respectivamente ms solubles en el agua que los
aminocidos anteriores. Sus grupos R contienen grupos funcionales polares,
neutros que pueden establecer enlaces de hidrgeno con el agua. La polaridad de
la serina, la treonina y la tirosina se debe a sus grupos hidroxilos; la de la
Aspargina y la glutamina, a sus grupos amdicos y de la cistina a la presencia del
grupo sulfhidrilo (-SH). La glicola, a veces se clasifica como un aminocido no
polar. La cistina y la tirosina poseen las funciones ms polares de esta clase de
aminocidos, sus grupos tilo e hidroxilo fenlico tienden a perder mucho ms
fcilmente protones por ionizacin que los grupos R de otros aminocidos de esta
clase.

Aminocidos con grupos R cargados positivamente.

Los aminocidos en los que los grupos R poseen carga positiva neta a PH 7,
poseen todos seis tomos de carbono. Aqu se encuentran la lisina, la arginina y la
histidina. Esta ltima tiene propiedades lmite. A pH 6 ms del 50 % de las
molculas de la histidina, poseen un grupo R cargado positivamente, pero a pH 7
menos del 10 % de las molculas poseen carga positiva.

Aminocidos con grupos R cargados negativamente.

Los dos miembros de esta clase son los cidos asprtico y glutmico, cada uno de
los cuales posee un segundo grupo carboxilo que se halla completamente
ionizado y por tanto cargado negativamente a pH 6 y 7.

2. Qu implicaciones tiene la Cadena lateral de los aminocidos en sus

propiedades qumicas y en los mtodos de identificacin en el laboratorio?

R de los aminocidos. De un argumento vlido de sta ltima clasificacin en

dnde se explique el porqu de esta.
Porque ello afecta las caractersticas bien sea que el aminocido se encuentre
libre o en solucin o combinados con otros en una protena. En efecto la carga
laterales de las protenas est determinada por los grupos ionizables de las
cadenas laterales de los aminocidos.

3. En este laboratorio, Usted va a identificar algunos aminocidos que estn

dentro de la composicin de un tejido biolgico. Explique brevemente, que
pruebas usara para identificar los siguientes aminocidos y porque?:
Tirosina, Fenilalanina, Aminocidos aromticos, Triptfano, Metionina y
cistena, Grupos aminos libres.

Aminocidos que estn dentro de la composicin de un tejido biolgico que

pruebas usara para identificar los siguientes aminocidos y porque?: Tirosina,
Fenilalanina, Aminocidos aromticos, Triptfano, Metionina y cistena, Grupos
aminos libres.edu.co
Prueba xantoprotica:
aromticos.

Fenilalanina,

Tirosina,

Triptfano,

Aminocidos

Es una reaccin que reconoce los aminocidos que poseen el grupo bencnico
(tirosina, fenilalanina, triptfano). Las protenas que tienen en su composicin
estos aminocidos tambin darn la reaccin. La positividad se reconoce por la
aparicin de un color amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos.

Prueba de Sakaguchi: Grupos aminos libres

Es una prueba para identificar arginina y se usa para identificar protenas ya que
casi todas las protenas poseen ese aminocido. El desarrollo de un color rojo
marca la reaccin positiva y se debe a la presencia del grupo guanidina, que
caracteriza la arginina.

4. Que es el enlace peptdico, represntelo. Qu prueba usa en el

laboratorio para identificarlos? en qu se fundamenta?

El enlace peptdico es un enlace entre el grupo amino (NH2) de un aminocido y

el grupo carboxilo (COOH) de otroaminocido. Los pptidos y las protenas estn
formados por la unin de aminocidos mediante enlaces peptdicos. El enlace
peptdico implica la prdida de una molcula de agua y la formacin de un enlace
covalente CO-NH. Es, en realidad, un enlace amida sustituido.
Para nombrar el pptido se empieza por el NH2 terminal por acuerdo. Si el primer
aminocido de nuestro pptido fuera alanina y el segundos erina tendramos el
pptido alanil-serina.

5. Que es una protena

Las protenas son molculas de un enorme tamao formadas por aminocidos,

que tienen diversas funciones, desde estructurales como el colgeno en nuestra
piel, funciones metablicas como la insulina, que regula los niveles de azcar en
nuestra sangre, tambin existen protenas que presentan una funcin de
transporte como la hemoglobina, la cual transporta el oxgeno que respiramos a
todo nuestro cuerpo.
Las protenas son biopolmeros (macromolculas orgnicas), de elevado peso
molecular, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y
nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en
menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (Y), entre otros
elementos.

6. Complete el siguiente cuadro, relacionada con protenas

Niveles de estructuracin que puede tener
una protena
Estructura primaria

Clasificacin de las protenas segn su

solubilidad
Segn su composicin:

La estructura primaria es la secuencia de

aminocidos de la protena. Nos indica qu
aminocidos componen la cadena polipeptdica
y el orden en que dichos aminocidos se

Protenas simples u Holoprotenas: Las

cuales estn formadas exclusivamente o
predominantemente por aminocidos.

encuentran. La funcin de una protena

depende de su secuencia y de la forma que
sta adopte.
Estructura secundaria
La estructura secundaria es la disposicin de la
secuencia de aminocidos en el espacio. Los
aminocidos, a medida que van siendo
enlazados durante la sntesis de protenas y
gracias a la capacidad de giro de sus enlaces,
adquieren una disposicin espacial estable, la
estructura secundaria.
Estructura terciaria
La estructura terciaria informa sobre la
disposicin de la estructura secundaria de un
polipptido al plegarse sobre s misma
originando una conformacin globular. En
definitiva, es la estructura primaria la que
determina cul ser la secundaria y por tanto la
terciaria.
Esta conformacin globular facilita la solubilidad
en agua y as realizar funciones de transporte,
enzimticas, hormonales.

Protenas
conjugadas:
Poseen
un
componente de proporcin significativa no
aminoacdico que recibe el nombre de grupo
prosttico. Segn la naturaleza de este grupo
consideramos:
Glicoprotenas: Se caracterizan por poseer en
su estructura azcares. Se pueden citar como
ejemplo:
las
inmunoglobulinas,
algunas
protenas de membrana, el colgeno y otras
protenas
de
tejidos
conectivos
(glucosaminoglicanos).
Lipoprotenas: Protenas conjugadas con
lpidos que se encuentran en las membranas
celulares.
Nucleoprotenas: Se presentan unidas a un
cido nucleico, como en los cromosomas,
ribosomas y en los virus.
Metaloprotenas: Contienen en su molcula uno
o ms iones metlicos que no constituyen un
grupo hem. Por ejemplo algunas enzimas.
Hemoprotenas o Cromoprotenas: Protenas
que tienen en su estructura un grupo hem
(Figura 1). Ejemplo: Hemoglobina, Mioglobina y
ciertas enzimas como los citocromos.

Estructura cuaternaria
De acuerdo con su morfologa y solubilidad:
Esta estructura informa de la unin, mediante
enlaces dbiles (no covalentes) de varias
cadenas polipeptdicas con estructura terciaria,
para formar un complejo proteico. Cada una de
estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre
de protmero.
El nmero de protmeros vara desde dos,
como en la hexoquinasa; cuatro, como en la
hemoglobina, o muchos, como la cpsida del
virus de la poliomielitis, que consta de sesenta
unidades proteicas.

Protenas fibrosas: Son insolubles en agua,

presentan formas moleculares alargadas, con
un nmero variado de cadenas polipeptdicas
que constituyen fibras resistentes, con cierto
grado de elasticidad, fragilidad o ductilidad.
Funcionan como protenas estructurales o de
soporte. Las ms comunes son: Elastina,
Colgeno, Queratina, Fibrina, etc.
Protenas Globulares: Tienden a ser ms
solubles en agua, debido a que su superficie es
polar. Sin embargo, pueden presentar mayor
solubilidad en otros solventes como soluciones
salinas, cidos o bases diluidas o alcohol. Su
estructura es compacta con formas casi
esfricas. La mayora de las protenas
conocidas son globulares, dentro de las que se
consideran todas las enzimas, las protenas del

plasma y las presentes en las membranas

celulares. A su vez las protenas globulares se
pueden clasificar de acuerdo con su solubilidad:
Albminas: Protenas fcilmente solubles en
agua, que coagulan con el calor y precipitan
con las soluciones salinas saturadas. Por
ejemplo la Lactoalbmina, albmina del suero,
la ovoalbmina (presente en la clara del huevo).
Globulinas: Escasamente solubles en agua
pura, pero solubles en soluciones salinas
diluidas como cloruro de sodio, entre ellas se
encuentran
las
seroglobulinas
(sangre),
ovoglobulina, inmunoglobulinas, etc.
Glutelinas: Solubles en cidos y bases
diluidos, insolubles en solventes neutros.
Ejemplo: La Glutenina del trigo.
Prolaminas: Solubles en alcohol del 70 al 80%,
insolubles en agua, alcohol absoluto y otros
solventes neutros, como la Zena del maz y la
Gliadina del trigo.
3. de acuerdo con su funcin biolgica:
Protenas estructurales: Forman parte de
clulas y tejidos a los que confieren apoyo
estructural. Dentro de estas podemos citar, el
colgeno y la elastina presentes en el tejido
conectivo de los vertebrados. La queratinas de
la piel, pelo y uas y la espectirna presente en
la membrana de los eritrocitos.
Protenas de transporte: Como su nombre lo
indica, transportan sustancias como el oxgeno
en el caso de la hemoglobina y la mioglobina,
cidos grasos en el caso de la albmina de la
sangre, o las que realizan un transporte
transmembrana en ambos sentidos.
Protenas de defensa: Protegen al organismo
contra posibles ataques de agentes extraos,
entre las que se consideran los anticuerpos
(inmunoglobulinas) de la fraccin gamma
globulnica de la sangre, las protenas
denominadas interferones cuya funcin es
inhibir la proliferacin de virus en clulas

infectadas e inducir resistencia a la infeccin

viral en otras clulas, el fibringeno de la
sangre importante en el proceso de
coagulacin.
Protenas hormonales: Se sintetizan en un
tipo particular de clulas pero su accin la
ejercen en otro tipo. Ejemplo, la insulina.
Protenas como factores de crecimiento: Su
funcin consiste en estimular la velocidad de
crecimiento y la divisin celular. Como ejemplo
se puede citar la hormona de crecimiento y el
factor de crecimiento derivado de plaquetas.
Protenas catalticas o enzimas: Permiten
aumentar la velocidad de las reacciones
metablicas. Dentro de las clulas son variadas
y se encuentran en cantidad considerable para
satisfacer adecuadamente sus necesidades.
Entre otras se consideran las enzimas
proteolticas cuya funcin es la degradacin de
otras protenas, lipasas, amilasas, fosfatasas,
etc.
Protenas contrctiles: Son protenas capaces
de modificar su forma, dando la posibilidad a
las clulas o tejidos que estn constituyendo de
desplazarse, contraerse, relajarse razn por la
cual se encuentran implicadas en los diferentes
mecanismos de motilidad. Las protenas ms
conocidas de este grupo son la actina y la
miosina.
Protenas receptoras: Protenas encargadas
de combinarse con una sustancia especfica. Si
se encuentran en la membrana plasmtica, son
las encargadas de captar las seales externas
o simplemente de inspeccionar el medio. Si
encuentran en las membranas de los
organelos, permiten su interaccin. Sin
embargo, no son protenas exclusivas de
membrana ya que algunas se encuentran en el
citoplasma. El ejemplo ms tpico de stas son
los receptores de las hormonas esteroides.
Casi todos los neurotransmisores, la mayora
de las hormonas y muchos medicamentos
funcionan gracias a la presencia de estas
protenas.

Protenas de transferencia de electrones:

Son protenas integrales de membrana,
comunes en las mitocondrias y cloroplastos
cuya funcin se basa en el transporte de
electrones desde un donador inicial hasta un
aceptor final con liberacin y aprovechamiento
de energa. Como ejemplo se citan a los
Citocromos que hacen parte de la cadena
respiratoria.

7. Cul es la diferencia de precipitar y desnaturalizar una protena.

Es unos mtodos para precipitar las sustancias de sus soluciones. Estos mtodos
tienen su principal aplicacin en la desproteinizacin de los diversos fluidos
biolgicos (sangre, orina, liquido cefalorraqudeo, etc.) en los cuales se hace
necesaria su interferencia en la determinacin de otras sustancias presentes en
estos medios.

Las protenas son precipitadas de sus soluciones por ciertos cidos tales como Zn
+++, Hg ++, Fe ++, Cu++ y Pb ++.
En general se aplica esta precipitacin para los precipitantes pacidos a travs de
la formacin catinica de las molculas de protena.

La desnaturalizacin de las protenas es la prdida de las estructuras de orden

superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica
reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente
disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin.

8. Elabore el diagrama de flujo de la marcha de la prctica y tablas de resultados

en blanco.
Los aminocidos como unidades
estructurales.

Relacin entre la estructura

la funcin de las protenas

Reacciones cualitativas
coloreadas: presencia de
aminocidos y enlaces
peptdicos

Reactivos

Tabla de resultados

3. Metodologa

Imagen

La prdida de esta al variar

su pH y solubilidad
(precipitacin y
desnaturalizacin

a. Materiales: Listado

Equipos
Estufas
pHmetro (1)
Centrifuga
Balanza analtica
Termmetros 120C
Mecheros

Material de vidrio
Material de vidrio
Gradillas
Esptulas
Pipetas 1, 5 y 10ml
Malas de asbesto
Papel filtro
Embudos
Agitador de vidrio
Erlenmeyer 10 y 250 ml
Vasos de precipitado 250 ml
Vasos precipitado 50 ml
Probeta 10 ml
Pinzas para tubos en madera
Vidrios reloj grandes

Mortero con mango

Soporte para embudos
Pinzas para tubos de ensayo metlicas
Vasos de precipitado de 100 ml plstico
Vasos de precipitado de 60 plstico

Material biolgico y otros (estudiantes)

Alimento de origen vegetal o animal: concentrados, protena crnica, hgado,

huevo, etc.
Tapabocas
Libros de bioqumica
Marcador de vidrio
Cinta para rotular
Cuaderno de laboratorio
Bata blanca
Marcador para vidrio

Reactivos
Reactivo de milln
Agua destilada, Solucin de CuSO4 1%
Solucin NaOH 30% y 40%, Solucin saturada de NaCl
HNO3 concentrado, Cristales de sacarosa
HCl concentrado, Acido triclorcetico 10%
Solucin cido pcrico saturada, Etanol 95%
Solucin de (NH4SO4) al 50%, acetona

Solucin de acetato de plomo 0.5 %

Reactivo de sakaguchi, cido actico glacial
HSO4 concentrado, cido actico al 30%
Aminocidos: glicina, tirosina, triptfano, aminocidos azufrados, leucina
Ninhidrina (2 g/l) preprese en fresco, Hidrxido de amonio.
cido sulfanilco (10 g/l en solucin de HCl 1 mol/).
Nitrito de sodio, Carbonato de sodio
Acetato de plomo, Nitrato de mercurio.
Nitroprusiato de sodio (20 g/l, preprese fresco).
Alfa- naftol, Agua de bromo
cido fosfrico, Molibdato de sodio
Tungsteno de sodio, Sulfato de cobre, Nitrato de sodio

Descripcin de la prctica

Procedimiento:
1. Pruebas Cualitativas
1. 1 Obtencin de los Extractos:
-En el caso de alimentos en polvo, coloque unos 30 gramos en un vaso de
precipitado, agregue 10 ml de agua destilada, agite durante 10 minutos y filtre a
travs de tela limpia. Conserve el lquido (filtrado) para las pruebas de las
protenas.
-En el caso de los alimentos concentrados slidos, mulala o macrelas por
separado y recoja el molido en vasos de precipitado. Agregue 10 ml de agua
destilada, agite durante 10 minutos y filtra a travs de tela. Recoja los filtrados en
vasos de precipitado o en Erlenmeyer previamente marcados. Deseche los
residuos.

-En el caso de la solucin de clara de huevo: Haga un pequeo orificio en uno de

los extremos del huevo y vierta por l aclara en un vaso precipitado, dejando
dentro la yema. Luego agregue a la clara 10 ml de agua destilada y agite con el fin
de disolverla.

5. Referencias

(2014, 10, 02.) Disponible en: http://www.monografias.com/trabajos10/amin/amin.shtml

(2014, 10, 02.) Disponible en

http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_01_12.htm

(2014, 10, 02.) Disponible en

http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO
%202%20IDENT%20AA%2006-04.pdf

(2014, 10, 02.) Disponible en

http://es.slideshare.net/Ichiriki/bioquimica-estructural

(2014, 10, 02.) Disponible en

http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp05a.pdf