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58 z junho DE 2014

ilustraes mauricio pierro

tecnologia sadey

Dengue

no alvo
Entre novas armas de combate doena
est um biossensor que faz diagnstico
da infeco por vrus em 20 minutos

Dinorah Ereno

acinas, insetos geneticamente modificados e armadilhas que funcionam como coletores de dados, alm
de um teste rpido de diagnstico, so as estratgias
que j esto sendo utilizadas ou estudadas para
combater a dengue no Brasil e no mundo. Segundo o Centro de
Controle e Preveno de Doenas dos Estados Unidos (CDC,
na sigla em ingls), hoje cerca de 2,5 bilhes de pessoas, ou
40% da populao mundial, vivem em reas onde h risco de
transmisso de dengue. As estimativas apontam que a doena
atinge entre 50 milhes e 100 milhes de pessoas todos os
anos, incluindo 500 mil casos de dengue hemorrgica e 22
mil mortes, principalmente entre crianas.
O Brasil apontado como um dos 30 pases mais endmicos,
entre os mais de 100 que registram a doena. At abril deste ano,
segundo o Ministrio da Sade, foram registrados 215 mil casos
de dengue, uma reduo de 70% em relao aos quatro primeiros meses do ano passado. Como todas as doenas transmitidas
por vetores, a incidncia de dengue espacialmente localizada,
assim h aumento em algumas localidades e em outras h queda.
Tudo depende do local onde se olha, diz o infectologista Marcelo Burattini, professor de informtica mdica na Faculdade
de Medicina da Universidade de So Paulo e de infectologia na
Universidade Federal de So Paulo (Unifesp). Os vetores so
os mosquitos do gnero Aedes. Nas Amricas, a espcie Aedes
pESQUISA FAPESP 220 z 59

Monitoramento
inteligente
O que
Plataforma usa armadilhas
chamadas Mosquitrap que
funcionam como coletor de
dados de infestao.

Como funciona
Mosquitrap imita criadouro
para as fmeas adultas
do Aedes. Quando elas entram
nos cilindros pretos de plstico,
atradas por um composto
qumico, ficam presas a um
carto adesivo. Os dados
coletados por agentes de campo
so enviados por telefone celular
para a plataforma central do
MI-Dengue.

Estgio atual
Utilizada atualmente por 10
cidades brasileiras, entre elas
Santos, Vitria, Porto Alegre
e Uberaba.

aegypti a responsvel pela transmisso da dengue.


A circulao dos quatro sorotipos do vrus (1, 2, 3 e
4) transmitidos pelos mosquitos sofre constantes
mudanas pelo mundo.
Como os sintomas da infeco pelo vrus so
muito semelhantes aos de outras doenas, a deteco precoce faz toda a diferena para o paciente.
Pensando nisso, pesquisadores do Instituto de
Fsica de So Carlos da Universidade de So Paulo (USP), coordenados pelo professor Francisco
Eduardo Gontijo Guimares, desenvolveram um
teste diagnstico que demora apenas 20 minutos para dar o resultado e pode ser acessado em
tempo real pelo celular ou notebook. Para tentar
reduzir o preo do produto final e concorrer com
o teste importado, utilizado apenas em casos que
demandam confirmao, como dengue grave ou
complicada e para fins de vigilncia epidemiolgica, eles recorreram interao antgeno-anticorpo para detectar o vrus da dengue. Esse vrus secreta na corrente sangunea uma protena
estrutural, chamada de NS1, logo nos primeiros
dias de infeco. J o corpo humano produz anticorpos especficos que combatem a NS1 aps
o quinto dia de infeco. A grande novidade do
projeto foi a produo dos anticorpos em grande
concentrao em ovos de galinha, diz Guimares.
Esses anticorpos so posteriormente imobilizados
60 z junho DE 2014

sobre uma membrana metlica (biossensor) que,


em contato com o sangue infectado, reage com a
protena NS1, produzindo um sinal eltrico. Apesar de o corpo ter milhes de protenas, s aquela
gerada pelo vrus da dengue se liga ao anticorpo.
Atualmente, o exame mais utilizado em postos
de sade para detectar a doena s pode ser feito
a partir do sexto dia, o que faz ela ser confundida
com outras infeces e nem sempre ser tratada
da forma adequada. O teste convencional no
pode ser feito nos primeiros dias porque ele mede
a concentrao de anticorpos, presentes a partir
do sexto dia, ressalta. J o biossensor em testes
avalia uma pequena concentrao da protena
NS1, que produzida pelo vrus assim que ele
entra na corrente sangunea da pessoa infectada. Em setembro do ano passado, a USP fez um
depsito de patente da inovao.

projeto foi desenvolvido no mbito do


Instituto Nacional de Eletrnica Orgnica, um dos Institutos Nacionais de Cincia e Tecnologia (INCTs) com sede no Instituto
de Fsica de So Carlos da USP, financiado pela
FAPESP e pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq). Ns j
trabalhvamos com biossensores quando, h trs
anos, tivemos a ideia de desenvolver um aparelho
porttil e de baixo custo para deteco da dengue,
diz Guimares. A ideia que todo posto de sade,
mesmo em lugares remotos, possa fazer o teste
sem que o sangue tenha de ser levado para grandes
centros. O projeto est em fase final de execuo.
Uma outra linha de pesquisa trabalha com uma
ttica inovadora, cujo objetivo bloquear o vrus
da dengue em Aedes aegyptiutilizando a bactria
Wolbachia. Essa bactria simbitica encontra-se
presente nas clulas de cerca de 70% de todas
as espcies de insetos, como moscas-das-frutas,
pernilongos e borboletas. O projeto, iniciado em
2006 e coordenado pelo professor Scott ONeill,
da Universidade Monash em Melbourne, na Austrlia, envolve ainda pesquisadores de outros seis
pases, entre os quais o Brasil. Aqui os estudos so
conduzidos na Fundao Oswaldo Cruz (Fiocruz),
do Rio de Janeiro, sob a coordenao de Luciano
Moreira e a participao de 15 pesquisadores.
A bactria retirada de moscas-das-frutas e
introduzida em ovos do Aedes. Aps a criao de
colnias de mosquitos em laboratrio, elas so liberadas na natureza. Alm de bloquear a transmisso do vrus da dengue pelo mosquito, a bactria
atua na sua reproduo. Estudo publicado em 25
de agosto de 2011 na revista Nature divulgou os
resultados de um teste experimental em campo
feito em duas localidades da cidade de Cairns, em
Queensland, durante 10 semanas. Foram liberados
300 mil Aedes adultos com a Wolbachia e, aps
cinco semanas, em uma das localidades 100% dos

mosquitos selvagens carregavam a bactria e na fmeas selvagens, so gerados descendentes que


outra 90%, portanto eles eram incapazes de trans- morrem ainda nos primeiros estgios de desenmitir o vrus. Testes de campo esto sendo feitos volvimento (ver mais sobre o assunto na edio
no Vietn e na Indonsia e a previso que ainda n 180 de Pesquisa FAPESP). No Brasil, os pareste ano eles comecem tambm no Brasil, aps a ceiros da Oxitec tm sido o Instituto de Cincias
Biomdicas da USP, responsvel pelos testes em
aprovao das instncias regulatrias.
Na mesma linha, mas com outra abordagem, laboratrio com a linhagem transgnica, e a oresto os mosquitos geneticamente modificados ganizao social Moscamed, que cuida dos testes
criados em 2002 pela empresa britnica Oxford em campo e tem uma biofbrica para a produo
Insect Tecnologies (Oxitec), que foram libera- dos mosquitos em Juazeiro, na Bahia. Desde
dos em abril deste ano pela Comisso Tcnica 2002 estamos fazendo testes e ensaios com essas
Nacional de Biossegurana (CTNBio) para uso linhagens, inclusive no Brasil, diz Glen Slade,
diretor global de desenvolvicomercial. No entanto, sua
mento de negcios da Oxitec.
produo depende ainda de
registro comercial no MinisAs prefeituras sero os prin
trio da Sade com base na
cipais clientes para a compra
anlise tcnica da Agncia
dos mosquitos transgnicos.
Nacional de Vigilncia SaniAinda no temos informao
Ttica inovadora
tria (Anvisa). Os mosquitos
fechada sobre custos, mas
bloqueia vrus
carregam um gene letal para
temos estudos para uma rea
a prole, que morre antes de
com 50 mil pessoas, relata
da dengue em
chegar fase adulta. O mSlade. O primeiro ano, que
todo consiste em liberar um
considerado de soltura intenAedes aegypti
grande nmero de machos
siva para que haja uma redugeneticamente modificados
o na quantidade de Aedes
com a bactria
em reas onde h infestao
adultos selvagens, custar enWolbachia
os machos no picam e,
tre R$ 2 milhes e R$ 5 miportanto, no transmitem a
lhes. O segundo ano, chamadengue. Ao copularem com as
do de manuteno, ficar em
at R$ 1 milho. Existe ainda
a opo de fazer parcerias
com os municpios para treinar pessoas para o
programa de manuteno, o que ir reduzir o valor da soluo, diz. Durante quatro a seis meses
da fase intensiva preciso soltar entre 100 e 200
mosquitos por semana por pessoa. A Oxitec est
comeando a produzir os primeiros mosquitos
em gaiolas em uma fbrica prpria instalada em
Campinas, com capacidade para produo de 2
milhes de mosquitos transgnicos por semana.
uma produo pequena, que d para tratar uma
rea com 10 mil pessoas. A inteno criar outras
fbricas mais prximas dos projetos futuros.

Teste de
diagnstico rpido
foto eduardo cesar ilustraO mauricio pierro

O que
Biossensor detecta vrus da dengue
em apenas 20 minutos.

Como funciona
Anticorpos imobilizados sobre uma
membrana metlica entram em contato
com o sangue infectado pelo vrus e
reagem com uma protena chamada
NS1, produzindo um sinal eltrico.

Estgio atual
Projeto est em fase final de execuo.

s vacinas so outra frente bastante promissora de combate doena, mas ainda


no h nenhuma delas no mercado. A mais
adiantada entre todas as que esto em desenvolvimento a do laboratrio Sanofi Pasteur, que est
na fase 3 de desenvolvimento clnico, com testes
em larga escala para avaliar a sua eficcia. Resultados preliminares divulgados em abril deste ano
pelo laboratrio demonstraram 56% de reduo
de casos de dengue em um estudo feito entre 2011
e 2013 com mais de 10 mil voluntrios na sia.
Participaram crianas com idades entre dois e 14
anos em reas endmicas para dengue da Indonsia, Malsia, Filipinas, Tailndia e Vietn. Os
participantes receberam trs injees da vacina
pESQUISA FAPESP 220 z 61

tudo divulgado recentemente foi feito em diferentes ambientes epidemiolgicos da sia, assim
como na Amrica Latina.
A divulgao dos 56% de eficcia da vacina
tambm foi questionada por alguns especialistas.
A hiptese aventada pelos crticos que, se no
inda no foram fechados os estudos que houver proteo total contra todos os sorotipos
iro mostrar se a imunizao eficaz con- e se a pessoa vacinada for infectada novamente,
tra os quatro sorotipos do vrus. Os re- aumentaria o risco de contrair a dengue hemorsultados preliminares da sia sero complemen- rgica. Esse risco terico e no foi observado
tados no segundo semestre deste ano com os da- nos ensaios feitos at agora, diz Sheila. Temos
pacientes vacinados desde o indos de um segundo estudo que
cio do estudo e o bom perfil de
est sendo realizado na Amsegurana da vacina se manterica Latina e conta com mais
de 20 mil voluntrios, de nove
Alm da Sanofi, ve conforme estudos prvios.
a 16 anos, do Brasil, Colmbia,
A vacina feita com o vgrupos de
Honduras, Mxico e Porto Rirus atenuado e recombinante.
co, diz a mdica. A anlise da
Parte do envelope dos quapesquisa
eficcia ser feita por sorotipo.
tro sorotipos do vrus da denEm relao s crticas feitas por
gue atenuado e por dentro
brasileiros
infectologistas e imunologistas
recheado com o vrus vacinal da
ao estudo feito na Tailndia em
febre amarela, que estvel em
trabalham em
2012, em que foi relatado que
termos de eficcia e segurana,
vacinas contra
a vacina no protegia contra o
explica a mdica. As pesquisas
sorotipo 2, Sheila diz que ainque resultaram na vacina tivea dengue
da era um estgio precoce de
ram incio h 20 anos. A previdesenvolvimento. Foram avaso que at o final de 2015 ela
liadas apenas 4 mil pessoas e
esteja disponvel no Brasil.
numa nica regio, diz. O esAlm da Sanofi, outros grupos
de pesquisa brasileiros, como o
Instituto Butantan, em So Paulo, e o Instituto de
Tecnologia em Imunobiolgicos da Fundao Oswaldo Cruz (Bio-Manguinhos/Fiocruz), do Rio de
Janeiro, esto trabalhando no desenvolvimento de
vacinas tetravalentes para a dengue. A do Butantan,
cujas pesquisas comearam em 2005, tem como
parceiro os Institutos Nacionais de Sade (NIH)
dos Estados Unidos. A tecnologia a de vrus vivo
atenuado atravs de modificao gentica de vrus
selvagens. O agente infeccioso permanece capaz
de estimular a produo de resposta de defesa do
organismo, mas no de causar a doena. Diversos
estudos de fase 1 com seres humanos foram realizados nos Estados Unidos para selecionar os quatro
vrus atenuados que compem a vacina e provar a
segurana e a resposta imune gerada pela combiO que
nao dos quatro vrus. A fase 2 do estudo, primeira
Insetos geneticamente modificados
dos testes clnicos em humanos no Brasil que tm
produzidos pela empresa britnica Oxitec.
como finalidade avaliar a segurana e a imunogeComo funciona
nicidade (capacidade de induzir resposta imunoMachos transgnicos carregam um gene
lgica) da vacina tetravalente, comeou em outuletal. Quando cruzam com fmeas selvagens
bro do ano passado. At o incio de junho haviam
so gerados descendentes que morrem nos
sido vacinados 50 voluntrios, com idade entre 18
primeiros estgios de desenvolvimento.
e 59 anos, que nunca tiveram dengue. A vacina deEstgio atual
monstrou ser segura nesse grupo. Em uma segunda
Aps aprovao de uso comercial pela
etapa sero recrutados mais 250 voluntrios com
CTNBio, empresa depende de registro
ou sem infeco prvia pelo vrus. Os resultados
comercial no Ministrio da Sade para
desse estudo devem ser conhecidos em meados
produo em larga escala.
de 2015 e, se forem favorveis, um estudo de fase 2
ou um placebo com intervalos de seis meses entre
cada dose. As crianas foram escolhidas porque
so elas que apresentam os casos mais graves da
doena, relata a mdica Sheila Homsani, gerente do departamento mdico da Sanofi Pasteur.

Mosquitos
transgnicos

62 z junho DE 2014

Vacinas
O que
Vacina tetravalente contra os
quatro sorotipos do vrus. A mais
avanada, j em fase 3 de
desenvolvimento clnico em
humanos, com testes em larga
escala para avaliao de eficcia,
a da Sanofi Pasteur.

Como funciona
Ela feita com o vrus atenuado
e recombinante, a partir do vrus
vacinal da febre amarela.

Estgio atual
A previso que at o final de
2015 esteja disponvel no Brasil.

com milhares de participantes dever avaliar a


eficcia da vacina.
A de Bio-Manguinhos feita em colaborao
com o laboratrio britnico GlaxoSmithKline
(GSK) desde 2009, quando firmaram um acordo
de pesquisa e desenvolvimento para a obteno
de uma vacina inativada tetravalente para a dengue. Aps testes em camundongos, em 2013 foram
feitos testes em macacos, como parte dos estudos
pr-clnicos. A prxima etapa ser o incio dos
testes clnicos em humanos, prevista para ocorrer
no ano que vem. Estudos epidemiolgicos para a
definio de locais para a avaliao da vacina j foram feitos em Fortaleza, Rio de Janeiro, Salvador e
Manaus. Paralelamente, outra parceria da Fiocruz
com a GSK esta envolvendo tambm o Walter
Reed Army Institute of Research, do exrcito dos
Estados Unidos j est testando uma vacina de
dengue em adultos no Caribe e Estados Unidos.
Para o infectologista Burattini, as vacinas so,
em uma perspectiva futura, o mtodo mais eficaz de combate s epidemias de dengue. Ele, no
entanto, ressalva que nenhuma das vacinas desenvolvidas at agora 100% eficaz. Como elas
demandam um esquema posolgico de duas a
trs doses, o que limita muito a eficcia real da
vacina, e h um intervalo grande de tempo para
a repetio das doses, difcil saber se elas vo
funcionar na prtica, diz Burattini, coordenador

de uma pesquisa encomendada pelo Ministrio


da Sade, prevista para terminar no final do ano,
que tem como objetivo estabelecer a melhor estratgia de vacinao para a dengue.
Na sua avaliao importante estudar e diferenciar a eficcia da vacina de sua efetividade em condies de uso na sade pblica. A eficcia depende
da sua capacidade de suscitar uma resposta imune
protetora e duradoura contra os quatro sorotipos
do vrus, j a efetividade real depende tambm de
uma srie de fatores relacionados s condies
operacionais e s caractersticas das populaes
onde as vacinas forem utilizadas, ressalta. Outro
aspecto abordado que, na sua avaliao, a vacina
ideal deveria ser aplicada em uma nica dose ou
com o menor intervalo de tempo entre uma dose
e a prxima. E o terceiro que ela deve ser isenta
de efeitos adversos duradouros. A vacina precisa
mostrar, em ensaios clnicos, que os antgenos que
ela usa no estaro relacionados a efeitos adversos,
como a propenso a formas graves da doena se
houver reinfeco com outro sorotipo, devido a
uma exacerbada resposta inflamatria.

ma das formas de controle de insetos adultos


em uso atualmente por 10 cidades brasileiras, entre elas Santos, Vitria, Porto Alegre
e Uberaba, todas com mais de 300 mil habitantes,
um sistema de informao chamado monitoramento inteligente da dengue (MI- Dengue), desenvolvido em parceria entre a Universidade Federal
de Minas Gerais (UFMG) e a empresa Ecovec, de
Belo Horizonte. uma plataforma que utiliza
armadilhas para a captura de Aedes adultos como
coletor de dados, que tem como grande vantagem
a possibilidade de se ter fotografias semanais da
populao do vetor por cada quarteiro da cidade, explica Gustavo Mamo, diretor da empresa.
Criada pelo professor lvaro Eiras, da UFMG, a
armadilha Mosquitrap imita um criadouro para as
fmeas adultas do Aedes. No momento em que elas
entram nos cilindros pretos de plstico para depositar seus ovos, atradas por um composto qumico,
acabam presas a um carto adesivo (ver mais na
edio n 142 de Pesquisa FAPESP). Os dados coletados so enviados pelo agente de campo da prefeitura atravs de um telefone celular para a plataforma central do MI-Dengue, que tem dentre as suas
funcionalidades a gerao de mapas do municpio
com manchas coloridas que trazem indicativos de
infestao do vetor. Santos, no litoral de So Paulo,
utiliza o MI-Dengue desde 2012. Esto espalhadas pela cidade 461 armadilhas vistoriadas por seis
agentes e um supervisor, diz Mamo. A partir de
julho, o projeto ser aplicado, experimentalmente,
em um condado da Flrida, nos Estados Unidos,
durante seis meses. Desde que o sistema foi criado,
50 cidades brasileiras j testaram a plataforma, alm
de pases como Austrlia, Cingapura e Colmbia. n
pESQUISA FAPESP 220 z 63