E.M.B. Agar.

Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de

bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite
el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras
especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos capaces de
utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por
los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.
presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen
centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y
puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C.
albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y
transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar
colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces
de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de
metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de
especies de Salmonella y Shigella.

Frmula (en gramos por litro)

Peptona

10.0

Lactosa

5.0

Sacarosa

5.0

Fosfato dipotsico

2.0

Agar

Eosina

Azul de metileno

13.5

0.4

0.065

Instrucciones

Suspender 36 g del polvo en un litro de

agua destilada. Reposar 5 minutos;
mezclar, calentando a ebullicin durante
1 o 2 minutos hasta su disolucin.
Esterilizar en autoclave a no ms de
121C durante 15 minutos. Enfriar a
45C y distribuir agitando suavemente.

pH final: 7.2 0.2

Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias
aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubacin
De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados

Microorganismos

Tipo de Colonia

Escherichia coli ATCC 25922

Verdosas con brillo metlico y centro

negro azulado

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Mucosas, rosa prpura, confluentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Incoloras, pequeas, puntiformes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Incoloras

Caractersticas del medio:

Placas preparadas: color prpura.
La esterilizacin del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El
color prpura se restaura por agitacin. La presencia de un precipitado en el medio
esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
El Agar Levine o Agar EMB Levine es un medio de cultivo usado para el aislamiento y
diferenciacin de E.coli, tiene un aspecto purpreo, aunque naranja tras su esterilizacin, es
semislido, y est destinado al cultivo en placa.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias, que inhibe el
crecimiento de bacterias Gram positivas y permite la diferenciacin de bacterias fermentadoras y
no fermentadoras de lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no fermentadoras, y colonias de
color azulado-negro con cierto brillo metlico, las fermentadoras.
Las colonias de E.coli sobre agar Levine miden 2-3mm de dimetro, con centros oscuros, casi
negros, y pueden presentar o no cierto brillo verde metlico
Composicin
Peptona
Lactosa
Fosfato dipotsico
Eosina
Azul de metileno
Agar

10g
10g
2g
0,40g
0,065g
15g

Agar almidn

Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una hidrlisis
extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias
elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio.
El almidn es un carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que contienen
amilasas.

Las molculas de yodo estn atrapadas dentro de la hlice no ramificada de unidades de glucosa
de la cadena de amilosa para formar un compuesto de inclusin azul. Si la red se desintegra como
ocurre durante la hidrlisis del almidn y las dextrinas por definicin se produce una mezcla de dos
molculas de polisacridos poliglucosa: amilosa lineal que solo da glucosa con la hidrlisis se
denomina glucosn
Mac Conkey Agar.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no,
lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce
un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la
precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Frmula (en gramos por litro)

Peptona

Pluripeptona

Lactosa

17.0

3.0

10.0

Mezcla de sales biliares

1.5

Cloruro de sodio

5.0

Agar

13.5

Rojo neutro

0.03

Instrucciones

Suspender 50 g del polvo por litro de

agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar. Calentar
suavemente y hervir 1 a 2 minutos
hasta disolver. Esterilizar en
autoclave a 121C durante 15
minutos.

Cristal violeta

0.001

pH final: 7.1 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados

Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras,
opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

MacConkey, Agar (Cultimed)

Medio de cultivo utilizado en la investigacin de organismos coliformes.
Historia
Este medio se basa en la frmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo
neutro y lactosa para el aislamiento de bacilos entricos Gram-negativos. El medio ha
sufrido mltiples variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adicin de otros
ingredientes o por la modificacin de las proporciones entre ellos. Actualmente
corresponde a las recomendaciones de la USP y la Ph. Eur.
Fundamento
Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las
bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de
fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias
rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar.
Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.
Frmula (por litro)
Lactosa .................................................. 10,0 g
Peptona.................................................. 3,0 g
Sales Biliares .......................................... 1,5 g
Peptona de Gelatina ............................... 17,0 g
Rojo Neutro ............................................ 0,03 g
Sodio Cloruro ......................................... 5,0 g
Violeta Cristal.......................................... 0,001 g
Agar........................................................ 13,5 g
pH final: 7,1 0,2
Preparacin
Suspender 50 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir
durante 1 minuto. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45C y
distribuir en placas de Petri estriles con 20 ml en cada una. Dejar solidificar las placas
parcialmente destapadas.
Modo de empleo
Sembrar por estra en la superficie de la placa. Incubar a 37C de 18 a 24 horas.
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino. Solubilidad: total.
Color: beige-rosado. pH: 7,1 0,2
Solubilidad: total.
pH: 7,1 0,2
Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn, despus de
incubacin a temperatura de 37C y observados a las 24 horas.

El agar MacConkey es un medio de cultivo especfico para bacterias gram

negativas y cepas que fermenten la lactosa.1
Ingredientes[editar]
Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: sales biliares(medio inhspito para
el crecimiento de bacterias Gram positivas, exceptoEnterococcus y algunas especies
de Staphylococcus), colorante cristal violeta(inhspito para cierto tipo de bacterias Gram-positivo),
colorante rojo neutro (el cual marca microorganismos que fermenten la
lactosa), lactosa, peptona y cloruro sdico.2
Usos[editar]
Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias gram negativas que pueden
fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).
Lac+[editar]
Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+ como Escherichia
coli, Enterobactery Klebsiella producen acidez, lo cual baja el pH bajo 6,8 lo que tiene como
consecuencia la aparicin de colonias de color rosadas o rojas. Algunas bacterias en cambio
fermentan la lactosa de manera lenta, estas siguen siendo Lac+ por ejemplo: Serratia y Citrobacter
Lac-[editar]
Bacterias que no fermenten la lactosa como Salmonella, Proteus y Shigellautilizaran peptona en su
lugar, formando amoniaco, lo cual incrementa el pH delagar, formando colonias blancas o
incoloras.

TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la
fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los
hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones
Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de
color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Extracto de carne

Pluripeptona

Cloruro de sodio

3.0

20.0

5.0

Lactosa

10.0

Sacarosa

10.0

Glucosa

1.0

Sulfato de hierro y amonio

0.2

Tiosulfato de sodio

0.2

Rojo de fenol

Agar

Suspender 62,5 g del polvo por litro

de agua destilada. Mezclar bien y
calentar con agitacin frecuente,
hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin
total. Llenar hasta la tercera parte
de los tubos de ensayo. Esterilizar a
121C por 15 minutos. Enfriar en
pico de flauta profundo.

0.025

13.0

pH final: 7.3 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la
superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta

glucosa, lactosa y/o sacarosa.

3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.

Microorganismo

Pico/Fondo

Produccin de gas

Produccin
decido
sulfhdrico

E. coli ATCC 25922

A/A

K. pneumoniae ATCC
700603

A/A

P. mirabilis ATCC 43071

K/A

S. typhimurium ATCC
14028

K/A

S. enteritidis ATCC 13076

K/A

S. flexneri ATCC 12022

K/A

P. aeruginosa ATCC
27853

K/K

A: cido
K: alcalino
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de

los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin deenterobacterias segn:
1. Fermenten o no glucosa.
2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.
3. Produzcan o no cido sulfhdrico.
4. Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:
1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a amarillo el
indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio
permanecer de color rojo.
2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie
volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar
de color rojo.
3. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales dehierro), se presentar un
ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento
pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica
directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.
4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de
gas.
Composicin[editar]
Peptona
Extracto de levadura
Extracto de carne
Sacarosa
Sulfato de hierro
Cloruro sdico
Tiosulfato de sodio
Rojo fenol

15 g
3g
3g
10 g
0,20 g
5g
0,30 g
0,024 g