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Marina Isabel da Silva Domingues

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Universidade Fernando Pessoa


Faculdade de Cincias da Sade
Porto, 2015

Marina Isabel Silva Domingues

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Universidade Fernando Pessoa


Faculdade de Cincias da Sade
Porto, 2015

Marina Isabel Silva Domingues

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Atesto a originalidade do trabalho:

__________________________________________

(Marina Isabel Silva Domingues)

Trabalho apresentado Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para
obteno do grau de mestre em Cincias Farmacuticas

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Sumrio

A utilizao do cabelo como amostra biolgica para a determinao de vrios


compostos tem vindo a aumentar. Este tipo de amostra pode constituir uma mais valia
face a outras matrizes tradicionalmente escolhidas (sangue e urina), uma vez que tem
capacidade de reteno e armazenamento por um perodo de tempo relativamente longo,
desde meses a anos, de vrias substncias.
As anlises de cabelo podem ser aplicadas em vrias reas que so referidas ao longo
deste trabalho, nomeadamente no controlo de doping, na exposio ocupacional ou
acidental a determinadosxenobiticos, como auxiliar na avaliao do estado nutricional
e no auxlio do diagnstico de doenas, na avaliao quanto apatido para a conduo
de veculos sob efeito de drogas ou lcool, na toxicologia post mortem e na medicina do
trabalho com forma de julgar quanto ao consumo de drogas, como por exemplo,
cocaina, herona, anfetaminas ou lcool pelos trabalhadores.
Ao longo do trabalho so descritas de forma sucinta algumas das caratersticas
anatmicas e fisiolgicas do cabelo que permitem compreender de que forma se
processa a integrao de substncias nesta matriz. So abordadas as vantagens e
desvantagens da sua utilizao face a outras matrizes e a forma como se procede sua
colheita, armazenamento e preparao para posterior anlise.
Alguns possveis interferentes como, por exemplo, os tratamentos cosmticos, a cor de
cabelo e a possvel contaminao externa so tambm alvo de apreciao. Por ltimo
consideram-se as tcnicas analticas mais utilizadas na determinao de xenobiticos em
amostras de cabelo, a cromatografia lquida de elevada resoluo acoplada
espectrometria de massa (HPLC-MS) e a cromatografia gasosa acoplada
espectrometria de massa (GC-MS).
Palavras-chave: anlise ao cabelo, cabelo como amostra biolgica, testes de drogas de
abuso, post mortem, morfologia do cabelo, cromatografia gasosa, cromatografia lquida,
opiides.

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Abstract
The use of hair as a biological sample has been increasing with the years. This sample
can provide an added value compared with other matrices traditionally chosen (blood
and urine), since it has retention capacity and storage for a relatively period of time
from months to years of many substances.
The hair analysis can be applied in several areas that will be referred to throughout this
work, particularly in doping control, occupational or accidental exposure to certain
metabolites, nutritional status and diagnosis of diseases, driving under the influence of
drugs or alcohol, toxicology post-mortem and substance abuse workers.
Throughout the work will be are described briefly some of the anatomical and
physiological characteristics of hair that allow understand how to handle the integration
and elimination of substances in this matrix, The advantages and disadvantages are
discussed their use against other matrices and how it undertakes the harvesting, storage
and preparation for further analysis.
Some possible interferences, such as cosmetic treatments, hair color and possible
external contamination are also under consideration. Finally the most frequently used
analytical techniques for the determination of chemical species in hair samples are
considered, high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry
(HPLC-MS) and gas chromatography coupled with mass spectroscopy (GC-MS).
Keywords: analysis of hair, hair as a biological sample, drug testing, hair analysis the
post mortem, hair morphology, gas chromatography, liquid chromatography, opioids

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Dedicatria

Dedico este trabalho ao meu pai, que no estando presente fisicamente


nos ltimos dois anos deste meu percurso, sempre foi para mim um
exemplo de coragem, luta e determinao.

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Agradecimentos

Ao longo desta jornada tenho o direito e o dever de agradecer a todos


quantos me apoiaram, valorizaram e estiveram presentes quer nos
momentos de sucesso, quer nos de fracasso, o que me permitiu
concretizar mais um objetivo.

Comeo por agradecer minha orientadora Prof. Doutora Renata


Souto e co-orientadora Prof. Doutora Rita Catarino, pela
disponibilidade, orientao, dedicao e por serem um exemplo de
trabalho e empenho.

Um agradecimento minha famlia, em especial minha me e irmo


pela fora, apoio, carinho e todo o amor incondicional prestado.

Agradeo a todos os meus amigos pelo incentivo em momentos de


desnimo.

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

ndice

ndice de figuras

ndice de tabelas

Lista de abreviaturas e acrnimos

Introduo

I.

Perspetiva histrica

II.

Anatomofisiologia do cabelo e sua composio qumica

III.

Incorporao de xenobiticos no cabelo

12

IV.

Procedimento analtico para a anlise de cabelo

14

4.1.Amostragem e armazenamento

15

4.2.Preparao da amostra

17

4.2. i) Descontaminao

18

4.2. ii) Extrao/digesto

19

4.2. iii) Limpeza e preconcentrao

21

4.3.Tcnicas analticas mais comuns


4.3. i) Cromatografia gasosa acoplada espectrometria

24
24

de massa
4.3.ii) Cromatografia lquida de elevada resoluo
acoplada espectrometria de massa

V.

26

4.3. iii) Valores de cut-off

27

4.4.Interpretao dos resultados

28

4.4. i) Contaminao externa

29

4.4. ii) Influncia dos tratamentos cosmticos

29

4.4. iii) Influncia da cor do cabelo

30

4.4. iv) Relao dose-concentrao presente no cabelo

31

Aplicaes prticas

32

5.1. Estado nutricional

32

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

5.2. Auxlio no diagnstico de patologias

32

5.3. Desempenho humano

35

5.3. i)Medicina no trabalho

36

5.3. ii) Conduo de veculos

37

5.3. iii) Controlo de doping

38

5.4. Responsabilidade penal e toxicodependncia

38

5.5. Diagnstico de consumo e intoxicao crnica

39

5.6. Toxicologia postmortem

39

VI.

Concluses e perspetivas futuras

41

VII.

Referncias bibliogrficas

43

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

ndice de figuras

Figura 1. Estrutura da haste da fibra capilar

Figura 2. Formao do cabelo a partir das clulas matriz presentes na

10

membrana basal at haste permanente do cabelo

Figura 3. Incorporao de substncias no cabelo (adaptado de Pragst e

13

Balikova, 2006).

Figura 4. Etapas do procedimento seguido para colheita das amostras

16

(adaptado de Baciu et ali, 2015).

Figura 5. Uso de SPME para o processo de extrao e o de dessoro do

23

material extrado para anlise cromatogrfica (adaptado de Valente e


Augusto, 2000).

Figura 6. Frequncia de resultados positivos para o consumo de opiides,


cocana, cannabis e seus metabolitos ao longo dos anos nos condutores
italianos (adaptado de Tassoni et ali, 2014).

37

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

ndice de tabelas

Tabela 1. Tipo de fibras de microextrao em fase slida de acordo com a

22

lipofilicidade dos extratos (adaptado de Valente e Augusto, 2000).


Tabela 2. Valores de cut-off para drogas e metabolitos mais comumente

28

analisados (adaptado de Tsanaclis et alii, 2011).

Tabela 3. Concentraes de vrios oligoelementos no cabelo (ng/g) e na


urina (g/ml) (adaptado de Chen et ali, 2014).

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Lista de abreviaturas e acrnimos


CI Ionizao qumica, do ingls Chemistry Ionazation
EI Impacto electrnico, do ingls Electronic Impact
ELISA teste imunoenzimtico, do ingls Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
FAB - Bombardeamento com tomos rpidos, do ingls Fast atomic bombardment
GC-MS Cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massa, do ingls Gas
Chromatograhy - Mass Spectrometry
HPLC-MS Cromatografia lquida de elevada resoluo acoplada espectrometria de
massa, do ingls High Performance Liquid chromatography Mass Spectrometry
HS SPDE Extrao dinmica em fase slida, do ingls Headscape Solid Dynamic
Extraction
RIA Radioimunoensaio, do ingls Radioimmunoassay
SPE Extrao em fase slida, do ingls Solid phase extraction
SPME - microextrao em fase slida, do ingls Solid phase microextraction

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Introduo

O cabelo difere de outras amostras biolgicas utilizadas para anlise (tais como sangue,
urina, suor ou saliva) pela sua capacidade de reteno e armazenamento por um perodo
de tempo relativamente longo de vrias substncias. Esta particularidade bastante til
na avaliao do consumo de drogas rapidamente metabolizadas e excretadas como o
caso da cocana, opiceos e anfetaminas. De facto, o sangue e a urina so as matrizes
mais usadas e permitem a pesquisa de uma grande quantidade de substncias quando h
uma exposio recente ou crnica (Kempson e Lombi, 2011). No entanto, a sua janela
de deteo varia das 36 s 72 horas, no sangue e na urina respetivamente, e as
concentraes dos compostos esto sujeitas a alguns condicionalismos que incluem
entre outros, mecanismos homeostticos na amostra de sangue e o grau de hidratao do
indivduo na amostra de urina (Kempson e Lombi, 2011). No caso da fibra capilar, a
janela de deteo substancialmente mais longa (meses a anos) o que permite uma
investigao retrospetiva de abuso crnico de drogas e a possibilidade de identificar se
se est perante uma exposio ocasional ou crnica. Adicionalmente, o cabelo uma
matriz bastante estvel, fcil de recolher, transportar e armazenar e pode ainda
apresentar a vantagem de a concentrao de compostos ser 50 a 100 vezes superior
nesta matriz s concentraes encontradas no sangue ou na urina (Kempson e Lombi,
2011).

Materiais e mtodos

A fim de realizar este trabalho de reviso bibliogrfica e de facilitar a pesquisa foram


utilizadas bases de dados eletrnicas como o PubMed, o ScienceDirect, e o Google
acadmico, no perodo de Fevereiro a Setembro de 2015. Foram efetuadas pesquisas em
Ingls e Portugus.

Para o efeito utilizaram-se as palavras-chave: cabelo como amostra biolgica, estrutura


do cabelo e a sua formao, drogas de abuso, anlise de drogas em cabelo, anlises

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

toxicolgicas, anlise forense e clnica, preparao de amostras de cabelo,


procedimentos para a anlise de cabelo, drogas de abuso e anlise capilar.

O critrio de seleo foi limitado a publicaes com foco em diferentes aspetos


relacionados com a anlise do cabelo humano no perodo de 2005 at o presente.
Alguns estudos publicados antes de 2005 tambm foram selecionados e discutidos, uma
vez que foram considerados relevantes para uma melhor compreenso e interpretao
dos resultados da anlise do cabelo.

O cabelo utilizado como amostra biolgica menos comum, mas, no entanto, possui
algumas vantagens face s amostras mais usais, nomeadamente, o sangue e a urina.

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

I.

Perspetiva histrica

Os metais txicos tais como o tlio, arsnio, chumbo e mercrio foram os primeiros
elementos a ser analisados em amostras de cabelo (Pragst e Balikova, 2006). A primeira
anlise de cabelo foi efetuada em 1858, por Hoppe que conseguiu detetar nveis de
arsnio em cadveres exumados, sepultados h 11 anos (Cit in Lima e Silva, 2007).

Flesh, no ano de 1945, props que o cabelo fosse utilizado como amostra biolgica para
a determinao de elementos que poderiam ser relevantes na causa da morte, tendo em
conta que este um rgo excretor (Cit in Lima e Silva, 2007).

O desenvolvimento gradual das tecnologias analticas permitiu que substncias


orgnicas fossem tambm analisadas e, em 1979, foi determinada por radioimunoensaio
a concentrao de herona presente no cabelo de consumidores deste opiceo. Em 1980,
foi realizada a primeira deteo cromatogrfica de opiides e observada a correlao
entre a concentrao desta substncia ao longo da fibra capilar e o tempo de ingesto da
substncia (Lima e Silva, 2007).

Ao longo dos ltimos 50 anos a anlise de cabelo tem sido importante para avaliar a
exposio ocupacional e ambiental a compostos txicos, bem como do estado
nutricional das pessoas (Wolowiec et alii, 2013). Tambm a existncia de desequilbrio
mineral no cabelo pode ser indicador de algumas doenas, comprovando que este uma
importante ferramenta no auxlio ao seu diagnstico precoce (Wolowiec et alii, 2013).

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

II.

Anatomofisiologia do cabelo e sua composio qumica

O cabelo uma fibra heterognea, com 15 a 120 m de dimetro, que consiste num
conjunto de clulas queratinizadas aglomeradas em trs estruturas concntricas: a
cutcula, o crtex e a medula (Figura 1) (Pragst e Balikova, 2006).

Medula
Crtex

Cutcula

Figura 1. Estrutura da haste da fibra capilar.

A cutcula a camada externa da fibra do cabelo sendo, por isso, a parte do cabelo
sujeita s agresses externas (sol, chuva, poluio, etc.), aes mecnicas (escovar,
pentear, etc.) e transformaes qumicas (permanente, coloraes, reflexos, etc.).
constituda por vrias camadas sobrepostas (5 a 10 camadas), compostas por clulas
extremamente pequenas e incolores que esto unidas umas s outras por compostos
lipdicos oferecendo uma excelente proteo ao crtex (Pragst e Balikova, 2006).

O crtex a parte principal da fibra capilar e da sua estrutura depende o grau de


resistncia e a elasticidade do cabelo. Representa 65 a 95% do peso da fibra capilar e
formado por clulas cilndricas preenchidas por queratina. tambm no crtex que os
gros de melanina, que do cor ao cabelo, se encontram (Pragst e Balikova, 2006).

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

A medula, ou canal medular, a parte central da fibra e pode estar ausente, ou ter uma
presena descontnua ao longo do cabelo, o que no leva a modificaes na sua
estrutura (Pragst e Balikova, 2006).

O cabelo tem origem nos folculos pilosos situados 3 a 5 mm abaixo da superfcie da


pele (Figura 2) (Pragst e Balikova, 2006; Pozebon et alii, 1999). A parte da fibra que sai
da pele designada de haste e a poro interna, de raiz. A raiz irrompe a partir de uma
expanso arredondada do folculo (o bolbo piloso) tendo na sua base uma concavidade
chamada papila drmica rodeada por um sistema capilar sanguneo que fornece o
material metablico necessrio para o crescimento do cabelo. Na parte mais profunda
do folculo piloso esto as clulas germinativas, responsveis pela formao de
queratina, melanina e outras estruturas necessrias formao do cabelo (Pragst e
Balikova, 2006).

Figura 2. Formao do cabelo a partir das clulas matriz presentes na membrana basal
at haste permanente do cabelo.

O ciclo celular das clulas germinativas da matriz (queratincitos e melancitos) um


dos ciclos mais rpido dos tecidos do corpo humano. Durante a fase de crescimento do
cabelo, as clulas da matriz vo proliferar e diferenciar-se para formar as trs camadas
internas acima referidas, que so empurradas a partir do bolbo piloso para a superfcie
da pele, devido s rpidas divises mitticas (Pragst e Balikova, 2006).
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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Acima do bolbo piloso surge a zona queratognica onde os genes para a formao da
queratina so expressos, sintetizando os longos filamentos proteicos e tambm ocorre a
incorporao de pigmentos de melanina (Kempson e Lombi, 2011; Pragst e Balikova,
2006).

As clulas da cutcula tm origem nas clulas da matriz da zona mais externa da papila.
So constitudas por protenas e por um complexo protena-lpido sendo a via de difuso
primria para a incorporao e eliminao de drogas e frmacos lipoflicos (Pragst e
Balikova, 2006).

Associado a cada fibra capilar h uma glndula sebcea, que produz o sebo, responsvel
pela lubrificao dos fios e couro cabeludo, e que tambm pode contribuir para a
incorporao de drogas e frmacos lipoflicos (Pragst e Balikova, 2006). Na superfcie
do couro cabeludo h ainda glndulas sudorparas cujo fludo secretor molha a haste do
cabelo, podendo contribuir para a incorporao de xenobiticos (Pragst e Balikova,
2006).

Cada fio de cabelo tem um ciclo de crescimento que consiste em trs fases sucessivas. A
fase de desenvolvimento e crescimento (fase angena que dura entre 4-8 anos) em que o
metabolismo da raiz bastante ativo, garantindo a rpida diviso das clulas capilares
para a formao e crescimento do novo cabelo. Como a papila drmica est em contato
com os vasos sanguneos, substncias presentes no sangue podem ser incorporadas no
cabelo. Segue-se a fase de transio (fase catgena que dura apenas algumas semanas)
em que a diviso celular declina, a raiz reduz-se a cerca de um tero do seu tamanho
original, o cabelo solta-se (pelo que deixa de haver irrigao sangunea e morre) e sobe
para o couro cabeludo. Por ltimo, existe a fase de repouso (fase telgena que dura de 46 meses) que o perodo no qual o cabelo cai, empurrado por um novo fio que nasce no
mesmo local (Pragst e Balikova, 2006).

Em mdia, o cabelo cresce 0,6-1,4 cm por ms havendo, no entanto, diferenas


significativas de acordo com a raa, gnero, idade e estado de sade. Em qualquer
momento, aproximadamente 85% do cabelo no couro cabeludo de um adulto est na

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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

fase de crescimento (angena) com os restantes 15% na fase de repouso (Pragst e


Balikova, 2006).

Quanto composio qumica, o cabelo humano composto por protenas (65% a


95%), lpidos, gua, oligoelementos e pigmentos. O componente primrio a queratina
uma protena fibrosa, constituda pela combinao de cerca de 20 aminocidos, cuja
estrutura tridimensional confere ao cabelo caractersticas de resistncia, elasticidade e
impermeabilidade gua (Kempson e Lombi, 2011).

A gua constitui, em condies normais, 12 a 15% da composio do cabelo e os lpidos


(estruturais e livres) representam cerca de 3% (Kempson e Lombi, 2011). Uma parte
deles produzida no bolbo capilar (a partir de esterides, cidos gordos e ceramida) e
esto presentes no crtex e na cutcula, garantindo a coeso da fibra capilar e conferindo
ao cabelo uma certa impermeabilidade. A restante mistura de lpidos produzida pela
glndula sebcea e forma um filme na superfcie que lubrifica o fio de cabelo,
preservando a sua flexibilidade e brilho. A melanina, pigmento responsvel pela cor
natural do cabelo, representa apenas 1% da composio total do cabelo e alguns outros
elementos (provenientes do ambiente ou trazidos pelo sangue) esto geralmente
combinados com as cadeias laterais de grupos proteicos ou com grupos de cidos
gordos e existem em pequenas quantidades (Kempson e Lombi, 2011).

III. Incorporao de xenobiticos no cabelo

Apesar de os mecanismos precisos envolvidos na incorporao de drogas no cabelo


ainda no estarem completamente esclarecidos, a maioria dos modelos assume que os
xenobiticos entram no cabelo, por difuso passiva, a partir dos capilares sanguneos
para as clulas em crescimento na zona de queratinizao na base do folculo piloso.
Alm deste mecanismo de transporte endgeno a partir do sangue, as substncias podem
tambm ser incorporadas apartir de uma exposio crnica, atravs de compartimentos
profundos da pele durante a formao do cabelo, como o caso da deposio por
difuso a partir do suor e secrees sebceas (Figura 3) (Pragst e Balikova, 2006).

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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Decomposiopor
tratamentos e pela
radiao UV
Extrao por lavagem e
uso de cosmticos

Suor

Fatores externos (p, fumo, mos sujas


mediadas pelo suor)

Sebo

Incorporao atravs dos tecidos


circundantes
Incorporao atravs do sangue

Figura 3. Incorporao de xenobiticos no cabelo (adaptado de Pragst e Balikova,


2006).

De notar que a natureza da substncia incorporada (estrutura, propriedades qumicas),


bem como as caractersticas fsicas / fisiolgicas do indivduo influenciam fortemente o
mecanismo que ir dominar (Pragst e Balikova, 2006).

Os trs principais fatores que influenciam a incorporao de uma droga so o contedo


em melanina do cabelo e a lipofilicidade e a basicidade da substncia propriamente dita
(Pragst e Balikova, 2006).

Sabe-se que os melancitos e a pigmentao desempenham um papel importante na


incorporao de drogas bsicas no cabelo. Vrios estudos demonstraram que aps a
exposio da raiz capilar mesma dosagem de substncias bsicas no sangue, a
concentrao de drogas no cabelo pigmentado (isto , com melanina e por isso nobranco) era bastante superior (cerca de 10 vezes maior) encontrada em cabelos no
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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

pigmentado (brancos), no se observando, no entanto, diferenas para a incorporao de


compostos neutros nos 2 tipos de cabelos (pigmentados e no pigmentados) (Pragst e
Balikova, 2006).

De um modo geral, a incorporao de xenobiticos no cabelo a partir do sangue


controlada pelos mesmos princpios farmacolgicos da distribuio de substncias. As
molculas orgnicas lipoflicas (no carregadas) podem facilmente penetrar membranas
e difundir-se de acordo com o gradiente de concentrao nas clulas matriciais. J para
as molculas hidrfilas ou ies orgnicos de massa molecular mdia, as membranas
formam uma barreira impermevel. As drogas bsicas ou cidas ionizam-se em grande
extenso ao valor de pH fisiolgico podendo atingir as clulas responsveis pela
formao da fibra capilar, em diferentes estados de protonao. Assim sendo, o pKa do
composto e o pH das clulas da matriz so importantes no que dita a possibilidade da
sua incorporao no cabelo. O pH intracelular dos queratincitos mais acdico do que
o plasma e o pH de melancitos varia entre 3 e 5. Este efeito do pH associado,
afinidade da melanina para drogas bsicas, leva acumulao de frmacos lipoflicos e
bsicos em clulas da matriz com clara preferncia por cabelos pigmentados. Para
drogas cidas ou metabolitos, o equilbrio de distribuio claramente desfavorvel
para as clulas matriciais pelo que estes compostos so encontrados apenas em
concentraes muito reduzidas no cabelo (Pragst e Balikova, 2006).

IV.

Procedimento analtico para anlise de cabelo

Num procedimento analtico para determinao de uma substncia em cabelo, todo o


processo desde a amostragem at interpretao dos resultados deve ser bem
organizado e realizado de forma correta de modo a evitar potenciais erros (Pragst e
Balikova, 2006).

O historial deve ser devidamente registado e deve ser apresentado um resumo do caso,
bem como o objetivo da investigao, juntamente com o xenobitico e perodo em que
o individuo esteve exposto (Pragst e Balikova, 2006).

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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Embora a determinao da concentrao de muitas drogas ilcitas e teraputicas no


cabelo tenha sido descrita em numerosos estudos, apenas uma pequena frao delas foi
efetuada em condies devidamente controladas, ou seja, em que a dose diria e a
durao da ingesto da droga eram conhecidas. Exemplos incluem testes para a herona,
frmacos antiepilticos, benzodiazepinas e frmacos neurolpticos (Pragst e Balikova,
2006).

4.1. Amostragem e armazenamento


O primeiro passo para a anlise inicia-se com a colheita da amostra. A recolha deve ser
efetuada no vrtice posterior da cabea que a zona onde o cabelo apresenta menor
variabilidade, pois existe menor influncia do crescimento, da idade ou do sexo (Baciu
et alii, 2015). Antes de ser cortada, a amostra de cabelo deve ser amarrada para garantir
que cortada o mais prxima possvel do couro cabeludo. O tamanho da amostra
depende do objetivo da anlise mas normalmente deve ser uma quantidade de cabelo
equivalente espessura de um lpis. Para fins forenses, necessrio a recolha de duas
amostras: a primeira para que sejam efetuadas as anlises de rotina e a segunda que
armazenada para possibilitar uma eventual repetio para confirmao dos resultados
em casos onde se verifica a objeo do resultado final (Baciu et ali, 2015; Cooper et ali,
2012; Pragst e Balikova, 2006).

Aps a recolha das amostras, estas devem ser enroladas em folhas de alumnio
separadas e colocadas com a extremidade da raiz alm da extremidade da folha (Figura
4), de forma a evitar o desalinhamento da amostra de cabelo e a facilitar a sua
identificao (Baciu et alii, 2015). Cada folha de alumnio dobrada longitudinalmente
uma ou duas vezes de forma a segurar o cabelo alinhado e colocada dentro de um
envelope de papel selado, rubricado e datado (Baciu et alii, 2015; Cooper, 2011; Cooper
et alii, 2012).

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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Figura 4. Etapas do procedimento seguido para colheita das amostras (adaptado de


Baciu et ali, 2015)

As amostras devem ser armazenadas temperatura ambiente, em locais secos e escuros


(Baciu et alii, 2015).

Os procedimentos descritos permitem que grande parte dos xenobiticos e dos seus
metabolitos permaneam estveis ao longo do tempo, o que torna possvel a sua deteo
anos aps o seu armazenamento (Pragst e Balikova, 2006).

O armazenamento em frigorficos ou congeladores, bem como em sacos plsticos no


aconselhvel devido ocorrncia de turgescncia, libertao de contedo, ou, no caso
de sacos plsticos, devido sua capacidade para extrair substncias lipoflicas que
possam estar presentes no cabelo (Pragst e Balikova, 2006).

As amostras que sejam colhidas hmidas devero ser obrigatoriamente secas antes de
armazenadas e analisadas (Pragst e Balikova, 2006).

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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Frequentemente em acidentes rodovirios ou em cadveres em decomposio, o cabelo


encontra-se embebido em sangue ou fluidos corporais. Nestas situaes a tcnica
descrita pode no ser a mais adequada, sendo necessrio recorrer ao uso de frascos para
a colheita da amostra. Os frascos devem estar devidamente lavados, isentos de
interferentes, contendo anticoagulante e/ou conservante apropriado e, devem estar bem
tapados e fixos, para que no quebrem ao longo do transporte (Cooper, 2011; Junior,
2012).

Nos casos de colheita post mortem, esta dever ocorrer antes da autpsia (Cooper,
2011). Quando so necessrias informaes adicionais sobre o consumo recente de
drogas, alm do procedimento de colheita referido, ainda se dever obter uma amostra
por ao mecnica de forma a deixar as razes intactas (Cooper et alii, 2012).

Em crimes sob efeito de drogas a colheita da amostra dever ocorrer num perodo entre
as quatro e as seis semanas aps a ocorrncia. E, se o resultado for positivo dever-se-
proceder a uma segunda colheita para verificao de resultados, sendo que o indivduo
no poder efetuar tratamentos cosmticos ou cortar o cabelo entre as colheitas (Cooper
et alii, 2012).

4.2. Preparao da amostra


A preparao da amostra uma das etapas fundamentais de qualquer mtodo analtico,
tendo uma influncia relevante nos passos subsequentes da anlise e na qualidade dos
resultados (Baciu et alii, 2015).

Devido ao facto de ser uma matriz complexa, o cabelo requer uma preparao longa e
detalhada que envolve a descontaminao da amostra, para eliminar possveis
contaminaes externas, a extrao de xenobiticos e os seus metabolitos, e, ainda uma
etapa de lavagem adicional para eliminar substncias interferentes. O desempenho
correto de todas estas fases essencial para a obteno de resultados fiveis (Baciu et
alii, 2015).

A concentrao dos xenobiticos ao longo do fio de cabelo no uniforme tornando-se


necessrio efetuar uma anlise segmentar do cabelo (Baysal e Akman, 2010).
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Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

A anlise segmentar do cabelo assenta em dois pressupostos: o crescimento de forma


linear para a zona do vrtice posterior (cerca de um centmetro por ms) e a sua colheita
efetuada o mais prximo possvel da poro proximal do cabelo que emerge superfcie
da pele (LeBeau et alli, 2011).

Diferentes estratgias na anlise segmentar podem ser adotadas tendo em conta que,
geralmente, a concentrao do xenobitico diminui com o aumento da distncia raiz
do cabelo e por isso recomendada uma anlise de segmentos de tamanho cada vez
maior medida que se distanciam desta (Pragst e Balikova, 2006).

4.2.i) Descontaminao

A descontaminao da amostra de cabelo deve fazer-se por dois motivos, o primeiro dos
quais eliminar os resduos de produtos utilizados para o cabelo (como champ, ceras,
lacas) e remover suor, sebo ou poeiras. O segundo motivo o facto de a droga poder
aderir matriz a partir do ambiente externo, o que pode contribuir para resultados no
fidedignos (Baciu et alii, 2015; Pragst e Balikova, 2006). Para excluir um resultado
analtico positivo originado a partir deste tipo de contaminao do meio ambiente, a
primeira soluo de lavagem deve ser analisada ou armazenada para posterior anlise
(Baciu et alii, 2015).

Os solventes utilizados para a descontaminao do cabelo devem, tanto quanto possvel,


remover as impurezas externas sem remover as drogas presentes na matriz do cabelo
(Pragst e Balikova, 2006).

Diferentes estratgias so relatadas na literatura, no entanto todas elas incluem solventes


orgnicos, tampes aquosos, gua, sabes ou uma combinao destas vrias estratgias.
Podem demorar desde minutos a horas, a serem executadas e, o nmero de vezes que
tm de ser repetidas depende do grau de contaminao do cabelo (Baciu et alii, 2015).

No existe por isso, um procedimento consensual relativamente lavagem das amostras


de cabelo. No entanto, no caso de a lavagem ser post-mortem geralmente utilizada
uma soluo de 0,1% de laurilsulfato de sdio, gua destilada e acetona (Pragst e
18

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Balikova, 2006). Outros procedimentos incluem, por exemplo, uma ou duas lavagens
com diclorometano, uma sequncia de solventes orgnicos, ou ainda, algumas lavagens
com metanol (Pragst e Balikova, 2006).

Solventes, tais como o diclorometano ou a acetona, so mais vantajosos do que o


metanol ou o tampo fosfato, uma vez que no provocam o intumescimento do cabelo
(Pragst e Balikova, 2006).

No caso concreto dos recm-nascidos os procedimentos de descontaminao so muito


importantes, j que o lquido amnitico tem capacidade de excretar xenobiticos
maternos que so depositados no cabelo (Lozano et alii, 2007).

4.2.ii) Extrao/digesto

Os analitos que se encontram no interior da matriz capilar podem ser obtidos por
diversas tcnicas, tais como digesto cida ou alcalina, por extrao com solvente,
hidrlise enzimtica, ou incubao com vrios sistemas tampo (Baciu et alii, 2015). O
tratamento com ureia e tioglicolato, bem como o uso de fluidos supercrticos,
encontram-se igualmente mencionados na literatura (Pragst e Balikova, 2006).

Estas prticas envolvem por norma temperaturas elevadas e perodos de incubao que
se situam entre as 16 e as 20 horas (Baciu et alii, 2015).

A escolha da tcnica normalmente depende das propriedades qumicas do xenobitico,


bem como da sua estabilidade nas diferentes solues de extrao. Uma escolha
incorreta da tcnica pode resultar na degradao do analito de interesse (Baciu et alii,
2015; Pragst e Balikova, 2006).

A extrao com metanol por um perodo de 5 a 18 h no banho de ultrassons uma das


tcnicas mais utilizadas, uma vez que um procedimento compatvel com quase todas
as substncias (Pragst e Balikova, 2006). O metanol um composto hidroflico que ao
penetrar na matriz do cabelo leva a que esta se dilate e liberte os compostos por um
processo de difuso. Este, como solvente orgnico, tem a capacidade para dissolver
19

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

compostos neutros e lipoflicos, sendo o processo facilitado com o auxlio do ultrassons


que degrada a estrutura do cabelo (Pragst e Balikova, 2006).

Drogas como, por exemplo a herona, e frmacos lipoflicos que so sensveis


hidrlise podem ser determinados a partir do mesmo extrato metanlico, no entanto
compostos que se encontrem em elevadas concentraes, o extrato de metanol dever
ser diretamente injetado em cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa
(GC-MS), no sendo, por isso necessrio efetuar uma pr concentrao (Pragst e
Balikova, 2006).

Apesar de esta tcnica poder ser aplicada a uma grande quantidade de compostos
possui, no entanto, as desvantagens de possuir uma baixa e incompleta capacidade de
recuperao de compostos, quando comparada a outras tcnicas, e de o extrato
metanlico possuir baixo grau de pureza, devido formao de steres de metilo de
alguns compostos. Por conseguinte, necessrio um procedimento de limpeza
secundria envolvendo a extrao lquido / lquido ou extrao em fase slida (Pragst e
Balikova, 2006).

Relativamente extrao efetuada atravs de solues de tampo fosfato ou por soluo


aquosa 0,01 M de HCl, tm a principal vantagem de possuir uma elevada capacidade de
extrao de compostos de natureza bsica, como por exemplo, opiceos, cocana e os
seus metabolitos, as anfetaminas, metadona (Pragst e Balikova, 2006).

Os extratos aquosos obtidos por este mtodo apresentam menos impurezas quando
comparados aos extratos metanlicos (Pragst e Balikova, 2006).

Agentes desnaturantes, tais como a ureia e o tioglicolato em meio cido (pH 3,2),
facilitam a extrao de compostos no cabelo pela quebra das pontes de hidrognio e
dissulfureto presentes no cabelo. Esta abordagem particularmente bem sucedida
quando aplicada extrao de benzodiazepinas (Pragst e Balikova, 2006).

A utilizao de fludos supercrticos, que consistem em substncias que esto a um


temperatura e presso acima do seu ponto crtico, no existindo distino entre as fases
20

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

lquida e gasosa tambm uma tcnica de extrao, que apesar de ser rpida, e de
elevado rendimento pouco utilizada devido aos custos a ela associados (Pragst e
Balikova, 2006).

Os extratos obtidos atravs desta tcnica so de elevada pureza, da que no seja


necessrio proceder a posteriores tcnicas de limpeza, podendo ser inseridos
directamente no GC-MS (Pragst e Balikova, 2006).

A estrutura do cabelo pode tambm ser desintegrada por um processo de digesto


enzimtica (Pragst e Balikova, 2006). As enzimas mais utilizadas so a pronase e a
proteinase K que possuem a capacidade de hidrolisar a protena do cabelo atravs da
quebra das ligaes dissulfureto (Pragst e Balikova, 2006). Esta tcnica pode ser
substancialmente melhorada pela presena de ditiotreitol durante ou antes do
procedimento enzimtico (Pragst e Balikova, 2006). Tambm o processo de sonicao
favorece a digesto enzimtica (Bermejo et alii, 2004).

Um mtodo de extrao para drogas que sejam estveis em solues alcalinas a


digesto com soluo aquosa de hidrxido de sdio. Este tipo de extrao vantajosa no
caso da extrao de nicotina, anfetaminas, antidepressivos e neurolpticos, devido a
uma recuperao quantitativa deste tipo de drogas e frmacos a partir da matriz do
cabelo (Pragst e Balikova, 2006).

4.2.iii) Limpeza e pr-concentrao

Os extratos resultantes de todas as tcnicas mencionadas exceo dos extratos


metanlicos e dos extratos obtidos dos fluidos supercrticos, que so analisados por
injeo direta de GC-MS, necessitam de ser separados dos interferentes (compostos
endgenos ou outras substncias administradas concomitantemente com os xenobiticos
alvo) atravs de tcnicas que so tambm usadas em amostras de sangue e urina
(Cooper, 2011).

As tcnicas utilizadas para a limpeza dos extratos so a extrao lquido-lquido ou


extrao em fase slida (SPE, do ingls solid phase extaction). Este ltimo atualmente
21

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

o mais usado devido disponibilidade de sistemas automatizados de materiais


melhorados para a extrao (Baciu et alii, 2015).

Nesta tcnica, os xenobiticos contidos na matriz aquosa so extrados, juntamente com os


compostos interferentes, aps passarem por um cartucho que contm um solvente orgnico
seletivo geralmente utilizado para remover os interferentes (Baciu et alii, 2015).

A microextrao em fase slida (SPME do ingls solid phase microextraction) permite


uma eliminao de interferentes e preparao da amostra para as tcnicas usadas na
confirmao de resultados, devido elevada sensibilidade do mtodo e possibilidade
de automatizao (Pragst e Balikova, 2006). Consiste num tubo de fibra tica, de slica
fundida de 100 mm de dimetro, com 10 mm de uma extremidade recoberta com um
filme fino de um polmero ou de um slido adsorvente (Valente e Augusto, 2000). A
fibra de SPME tem capacidade de captar substncias lipoflicas, mesmo as de baixa
volatilidade, como por exemplo antidepressivos tricclicos, fenotiazinas, lidocana ou
metadona e os seus metabolitos (Pragst e Balikova, 2006).

As fibras possuem um revestimento de acordo com a lipofilicidade e volatilidade da


substncia a extrair (Tabela 1).

Tabela 1. Tipo de fibras de microextrao em fase slida de acordo com a lipofilicidade


dos extratos (adaptado de Valente e Augusto, 2000).

a. No esto relacionadas fibras para cromatografia lquida b. TC faixa de temperatura para a


dessoro Lf. Espessura de recobrimento

22

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Na SPME efetuada a temperaturas elevadas os analitos so transportados para a fibra


atravs de pequenas gotas de gua, at que seja estabelecido um equilbrio entre a
soluo de extrao, a fibra e a fase de vapor (Pragst e Balikova, 2006).

Este mtodo possui a vantagem de poder ser realizada sem o uso de solventes orgnicos,
ter grande poder de concentrao dos xenobiticos e adequar-se sensibilidade dos
detetores de GC-MS, sendo por isso aplicvel a diversos tipos de analitos (Valente e
Augusto, 2000). Alm disso, a sua fibra regenerada durante o processo de dessoro
da amostra no orifcio de injeo por GC-MS (Pragst e Balikova, 2006) (figura 5).

Figura 5. Uso de SPME para o processo de extrao e dessoro do material extrado


para anlise cromatogrfica (adaptado de Valente e Augusto, 2000).

Existe, contudo, uma variante desta tcnica, a extrao dinmica em fase slida no
modo headspace (HS-SPDE) (Pragst e Balikova, 2006). Nesta tcnica a fase gasosa
aspirada atravs de um capilar de ao revestido com um composto adsorvente. uma
23

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

alternativa mais resistente comparativamente com a fibra de SPME e com maior


rendimento de extrao (Pragst e Balikova, 2006).

4.3.Tcnicas analticas mais comuns

A primeira anlise ao cabelo para deteo de frmacos foi efetuada por


radioimunoensaio (RIA) (Pragst e Balikova, 2006).

No entanto, os RIA no foram bem aceites pelo facto de s serem sensveis a um


nmero limitado de xenobiticos, de no possurem especificidade relativamente ao
analito que est a analisar e de terem sensibilidade insuficiente para o uso de extratos de
cabelo (Pragst e Balikova, 2006).

Ao longo dos ltimos anos foram desenvolvidos testes ELISA, (do ingls EnzymeLinked Immunosorbent Assay) para opiceos, canabinides, cocana, benzodiazepinas e
metadona que provaram ser suficientemente sensveis para uso em anlise do cabelo
(Pragst e Balikova, 2006).

Apesar disso, as tcnicas de cromatografia lquida de elevada eficincia acoplada


espectrometria de massa (HPLC-MS) e a cromatografia gasosa acoplada
espectrometria de massa (GC-MS) so, hoje em dia, as metodologias de eleio para a
confirmao devido sua elevada especificidade (Lima e Silva, 2007), uma vez que
mesmo no caso dos testes de ELISA, os resultados quando positivos tm sempre de ser
confirmados,pois normalmente so colocados em causa pelo individuo cuja anlise a
substncias ilcitas foi efetuada (Pragst e Balikova, 2006).

4.3. i) Cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massa (GC-MS)

A GC-MS o mtodo mais utilizado para a anlise de metabolitos no cabelo (Pragst e


Balikova, 2006).

24

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

As caratersticas de funcionamento do cromatgrafo gasoso so compatveis com a


necessidade de uma velocidade reduzida da admisso do gs no espectrmetro de modo
a manter um vcuo suficientemente elevado no seu interior tornando a associao dos
dois equipamentos possvel. No entanto, para a realizao de GC-MS necessrio que a
substncia seja voltil e estvel a elevadas temperaturas (Baciu et ali, 2015). Compostos
que contenham grupos amina livres, grupos hidroxilo ou grupos carboxilo no possuem
estas caratersticas, logo para que possam ser analisados por este mtodo torna-se
necessrio proceder a uma derivatizao prvia dos mesmos por exemplo por reaes
com compostos de anidrido pentafluoropropinico e pentafluoropropanol (Pragst e
Balikova, 2006).

A amostra injetada no capilar do cromatgrafo, os seus componentes so separados na


coluna, e entram no espectrmetro de massa atravs da interface existente entre os dois
equipamentos (Qui et alii, 2007). A espectrometria de massa permite identificar
quantidades de amostra muito reduzidas, o que a torna num detetor ideal para a tcnica
cromatogrfica. Os problemas de incompatibilidade de acoplamento no que diz respeito
s diferenas de presso entre as duas tcnicas (a cromatografia gasosa opera presso
atmosfrica enquanto a espectrometria de massa funciona em condies de alto vcuo
necessrias para a converso da maior parte das molculas em ies, com um tempo de
reteno suficientemente longo para ser analisado) so ultrapassados atravs de uma
interface adequada que permita a associao destas duas tcnicas (Qui et alii, 2007). Os
analitos introduzidos no MS tm depois de ser ionizados. Posteriormente os ies
formados fragmentam-se e aps separao no analisador de massas interatuam com um
detetor multiplicador de eletres dando origem a uma corrente eltrica. A magnitude do
sinal eltrico em funo da razo m/z convertida por um processador de dados que
gera os espectros de massa correspondentes ao composto que se est a ser detetado
(Pragst e Balikova, 2006).
Existem diversos mtodos de ionizao, tais como, ionizao qumica (CI), ionizao
por bombardeamento com tomos rpidos (FAB), ionizao por impacto eletrnico (EI)
que so escolhidos de acordo com o tipo de espcie (s) qumica (s) que se pretende
analisar (Qui et alii, 2007). O mtodo de ionizao por impacto electrnico atualmente
o mtodo mais empregue na GC-MS devido possibilidade de obteno de uma
informao mais detalhada sobre cada molcula (Pragst e Balikova, 2006). Na EI, as
25

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

molculas so bombardeadas com eletres de elevada energia, sofrem ionizao,


resultando na formao de ies moleculares que se fragmentam total ou parcialmente e
so separados pelo analisador de massas do espetrmetro de acordo com a relao
massa/carga (m/z). Tal como acontece nas cromatografias com os tempos de reteno,
em MS os fragmentos resultantes so caratersticos de cada composto sendo assim
possvel a sua identificao e quantificao (Pragst e Balikova, 2006).
Estes recursos permitem o desenvolvimento de procedimentos especficos e sensveis
para uma grande variedade de drogas ou metabolitos com preciso suficiente mesmo em
reduzidas concentraes. Alm disso, vrias substncias podem ser medidas na mesma
corrida cromatogrfica, desde que o cromatograma seja divido em vrias janelas de
tempo com diferentes massas (Pragst e Balikova, 2006).

A CI surge como alternativa EI quando se pretende obter apenas um espectro simples


do io molecular. Este processo implica a presena de um reagente gasoso em excesso
que promove uma fragmentao suave da molcula em anlise sendo usada, por
exemplo, na anlise de benzodiazepinas mas, devido a apresentar um menor grau de
fragmentao, possui uma menor especificidade quando comparada IE (Pragst e
Balikova, 2006).

4.3. ii) Cromatografia lquida de alta resoluo acoplada espectrometria de


massa (HPLC-MS)

A cromatografia lquida de alta eficincia acoplada espectrometria de massa uma


tcnica muito til na anlise do cabelo dado que so contornadas algumas das limitaes
associadas GC, nomeadamente no que diz respeito volatilidade e estabilidade das
molculas (Pragst e Balikova, 2006).

No entanto, a HPLC-MS apresenta tambm algumas restries designadamente as que


esto associados com o efeito matriz dado que os espectros da matriz tambm so
observados, levando a uma maior complexidade na interpretao e anlise dos
resultados. Estes efeitos da matriz podem provocar realce ou supresso de ies, o que
afeta vrios parmetros de desempenho analtico da metologia: o limite de deteo, o
limite de quantificao, a linearidade, a exatido e a preciso. Considerando isto,
26

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

necessria a avaliao dessas possveis interferncias para que haja validao dos
resultados (Baciu et alii, 2015).

A separao da amostra ocorre por distribuio diferencial entre os diversos


componentes da amostra e as duas fases imiscveis (a fase mvel e a fase estacionria).
A eluio/separao dos solutos tem por base a diferena de solubilidade relativa destas
espcies nas fases mvel e estacionria que possuem polaridades distintas. Aps esta
separao os compostos seguem para o espectrmetro de massa onde so ionizados e
separados de acordo com a razo massa/carga (Jickells e Negrusz, 2008).

4.3. iii) Valores Cut-off

A designao de cut-off vem do ingls e traduzido como valor de corte. Estes


valores de cut-off so valores numricos determinados durante o processo de validao
dos mtodos analticos ou que podem ser sugeridos por sociedades cientficas (por
exemplo, Substance Abuse & Mental Health Services Administration ou a Society of
Hair Testing) s quais resultados analticos so comparados para interpretao dos
resultados finais (Tsanaclis et alii, 2011).

Sempre que os resultados da anlise se encontram abaixo dos valores estabelecidos


como os valores de cut-off, os resultados so considerados como No Detectados ou
Negativos, sempre que valores se encontram acima dos valores de cut-off so
considerados Detectados ou Positivos (Tsanaclis et alii, 2011).

Os valores de cut-off na anlise do cabelo no esto estabelecidos, tendo por base a


literatura disponvel. No entanto, a Society of Hair Testing recomenda determinados
valores cut-off para os xenobiticos mais comummente encontrados no cabelo,
permitindo por sua vez a identificao do seu uso crnico (Tabela 2) (Cooper et alii,
2012).

27

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Tabela 2. Valores de cut-off para drogas e metabolitos mais comumente analisados


(adpatdado de Tsanaclis et alii, 2011).

Grupo

Xenobiticos e
metabolitos
Anfetamina
Metanfetaminas

Cut-off (ng/mg)

MDA
MDMA
THC
THC-COOH
Cocana
BZE, EME, CE, NOC
Morfina
Codena
6-acetilmorfina
Herona
Metadona
EDDP
Buprenorfina
Norbuprenorfina
Etil glucuronido
FAEEs
Diazepam
Lorazepam
Nordiazepam
Oxazepam

0,2
0,2
0,5
0,0002
0,5
0,5
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,05
0,01
0.,01
0,03
0,5
0,05
0,05
0,05
0,05

Anfetaminas

Canabinides

Cocana
Opiides

Metadona
Buprenorfina
Etanol
Benzodiazepinas

0,2
0,2

BZE: Benzoilecgonina; CE: Cocaetileno; EDDP: 2-etilideno-1,5-dimetil-3,3-difenilpirrolideno; EME:


ster metlico de ecgonina; FAEEs: steres etlicos de cidos gordos; MDA: Metildioxianfetamina;
MDMA: Metilenodioximetanfetamina; NOC: Norcocana; THC: Delta 9 tetrahidrocanabinol;
THCCOOH: cido-11-nor-delta-9-tetrahidrocanabinol-9-carboxlico

4.4. Interpretao dos resultados

Como referido anteriormente, o cabelo permite a avaliao de drogas, etanol, frmacos


em diversas situaes. Contudo, aquando da interpretao dos resultados necessrio
ter em conta diversos fatores que podem interferir na anlise dos xnobiticos ou
metabolitos encontrados.

28

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

4.4. i) Contaminao externa

A anlise de cabelo pode ter a desvantagem de fornecer falsos positivos quando o


indivduo apesar de no consumir as substncias de alguma forma a elas exposto. o
caso de drogas que possam ser fumadas (nomeadamente a cannabis, a cocana e a
herona) ou da manipulao das drogas (em que os resduos que ficam nas mos podem
passar para o cabelo) que surgem como fontes de contaminao passiva (Baciu et alii,
2015).

No sentido de minimizar o risco de resultados falso-positivos, os laboratrios utilizam


dois procedimentos distintos: a descontaminao da amostra e a deteo dos metabolitos
das drogas ou dos frmacos (Baciu et alii, 2015). Apesar de, na literatura existirem
vrios procedimentos descritos, no h consenso acerca de qual mais preciso uma vez
que se presume nenhum deles remove a droga ou frmaco depositado na sua totalidade.

4.4. ii) Influncia dos tratamentos cosmticos

Na anlise ao cabelo necessrio ter em considerao a possvel interferncia dos


vrios produtos e tratamentos capilares a que este est sujeito, nomeadamente o uso de
cosmticos, tintas, permanentes, etc.

A lavagem do cabelo tem relativamente pouca influncia sobre a remoo das drogas ou
frmacos j incorporados, mas pode remover frmacos que sejam adsorvidos devido
contaminao ambiental (Baciu et alii, 2015).

Adicionalmente, os tratamentos cosmticos podem danificar a porosidade do cabelo,


levando a uma contaminao externa facilitada, pois quanto maior a porosidade do
cabelo, maior a sua capacidade de reter drogas ou frmacos presentes no ambiente
(Baciu et alii, 2015).

tambm necessrio ter em conta que a porosidade pode ser influenciada por
diferenas raciais ou ainda pelo descuido do cabelo (Baciu et alii, 2015).

29

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Num dos estudos levados a cabo sobre a influncia dos tratamentos de descolorao,
verificou que as concentraes de todos os analitos neste tipo de cabelos eram inferiores
s presentes em cabelos no submetidos a este tratamento (Baciu et alii, 2015).

Desta forma, o consumo pouco frequente de drogas ou frmacos pode no permitir a sua
deteo em cabelo com este tipo de tratamento, devido s baixas concentraes de
analito, no entanto, se o consumo de drogas for recorrente, mesmo aps este tratamento
de descolorao elas sero detetadas, ainda que as concentraes de metabolitos estejam
diminudas (Baciu et alii, 2015).

4.4. iii) Influncia da cor do cabelo

A cor natural do cabelo tem tambm influncia na avaliao da concentrao de


metabolitos presentes no cabelo, uma vez que as drogas ou frmacos tm capacidade de
se ligar melanina (Baciu et alii, 2015).

A concentrao de metabolitos presente no cabelo diretamente proporcional ao teor de


melanina presente no cabelo, ou seja, quanto mais escuro o cabelo, maior o teor em
melanina e por conseguinte, maior a concentrao de drogas ou frmacos incorporados
(Baciu et alii, 2015).

Kronstrand et alii realizaram um estudo com nove indivduos aos quais foi administrada
uma dose de codena diria por via oral e, em seguida, as amostras de cabelo foram
recolhidas uma vez por semana durante um ms (Baciu et alii, 2015).

Os autores verificaram que existia uma correlao entre a concentrao de codena e de


melanina, pois a codena estava aumentada sempre que a quantidade de melanina era
maior (Baciu et alii, 2015).

Na tentativa de eliminar o enviesamento de resultados, os autores sugerem que as


concentraes de frmaco no cabelo devem ser expressas em funo da concentrao de
melanina, reduzindo assim a influncia da cor do cabelo (Baciu et alii, 2015).

30

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

4.4. iv) Relao dose-concentrao

A principal questo que se coloca se aps a anlise quantitativa de cabelo este pode
fornecer informao quanto quantidade de droga ou frmaco consumida (Baciu et alii,
2015).

Os estudos realizados mostram uma fraca correlao entre a concentrao existente no


cabelo e a dose consumida (Baciu et alii, 2015).

Num estudo realizado por Kintz et alii, demonstrou no existir correlao entre as doses
de herona e a concentrao de opiides totais medidos em amostras de cabelo de
indivduos expostos (Baciu et alii, 2015). O estudo consistiu na administrao de vrias
doses dirias de herona, compreendidas entre 30 e 800 mg, a indivduos com
caractersticas diferentes no que concerne ao cabelo, tais como a colorao, ou
descolorao. Verificou-se que no existia uma correlao entre as doses administradas
de herona e as concentraes totais de opiides no cabelo (Baciu et alii, 2015). Os
resultados deste estudo sugerem que a determinao quantitativa de drogas ou frmacos
no cabelo para a determinao da concentrao que foi ingerida no aplicvel, pois
diversos so os fatores que se devem ter em conta tais como, a pureza da droga, o
mecanismo de incorporao do frmaco no cabelo, o metabolismo de um frmaco, a
frequncia de abuso, a cor do cabelo e os tratamentos cosmticos a que este submetido
(Baciu et alii, 2015).

Como no possvel determinar a quantidade exata de medicamento ou droga que foi


utilizada, alguns laboratrios tm proposto uma classificao qualitativa para as
concentraes da droga (baixa, mdia e altas concentraes) como um guia geral para
indicar o nvel de uso de drogas, por exemplo, baixas concentraes correspondem a um
uso ocasional ou baixo (por exemplo, uma ou duas vezes por semana), altas
concentraes correspondem a um consumo dirio (Baciu et alii, 2015).

31

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

V.

Aplicaes prticas

5.1. Estado nutricional

Os elementos presentes no corpo humano desempenham um papel importante em


processos vitais tais como nas reaes enzimticas, na conduo do impulso nervoso e
na contrao muscular (Wolowiec et alii, 2013).

A anlise destes elementos em amostras de cabelo bastante utilizada pelo facto de


fornecer a concentrao em que esto presentes no organismo. Desta forma, so
recomendadas dietas para aumentar a concentrao dos elementos em falta ou presentes
em baixas concentraes ou so eliminados os metais txicos ao organismo atravs de
reaes de complexao (Pozebon et alii, 1999).

De facto, a anlise de cabelo tem sido tambm solicitada como indicador do estado
nutricional de indivduos e de possveis contaminaes por metais pesados tais como,
crmio (Cr), cobre (Cu), cobalto (Co), mangans (Mn), molibdnio (Mo), selnio (Se),
zinco (Zn), estanho (Sn), nquel (Ni) e vandio (V). Apesar de serem elementos
essenciais ao organismo, a sua presena em quantidades excessivas pode provocar
doenas ou at mesmo morte (Pozebon et alii, 1999).

Existem ainda outros elementos, tais como o arsnio (As), o mercrio (Hg) e o bismuto
(Bi) cuja presena em qualquer concentrao indesejvel (Pozebon et alii, 1999).

necessrio ter em conta que podero estar presentes quantidades vestigiais deste tipo
de metais no organismo devido alimentao e poluio (Pozebon et alii, 1999).

5.2. Auxlio ao diagnstico de patologias

Na literatura verifica-se que existe uma correlao entre o estado mineral do corpo e a
presena de doenas fsicas ou mentais (por exemplo, autismo, cancro, hipertenso,
enfarte do miocrdio, doena renal e diabetes mellitus). A anlise mineral ao cabelo
escolhida como uma ferramenta que reflete o panorama mineral do organismo dos
32

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

indivduos, sendo que nveis mais elevados ou mais baixos de determinado mineral no
cabelo so indicadores da presena ou ausncia de doenas. Desta forma o perfil
mineral do cabelo uma ferramenta til para o diagnstico de muitas doenas
(Wolowiec et alii, 2013).

Uma das doenas crnicas mais frequentes no mundo a diabetes mellitus que se
caracterizada por uma hiperglicemia resultante de deficincia absoluta ou relativa de
insulina. A diabetes mellitus est intimamente associada ao desequilbrio de
oligoelementos, que frequentemente o resultado de ingesto indevida, da exposio
excessiva e de defeitos genticos (Tsanaclis e Wicks, 2007).

Chen et alii (2014), efetuaram uma anlise entre a relao da diabetes mellitus e os
nveis de diversos elementos presentes no cabelo e na urina. Foram utilizadas 66
amostras de cabelo e 82 amostras de urina de indivduos clinicamente saudveis como
controlo e 30 amostras de cabelo e 33 amostras de urina de doentes com diabetes
mellitus tipo II, mas sem complicaes. As idades variaram de 28-76, para o grupo
controlo, quer na amostra de urina ou de cabelo e, no grupo de diabticos a idade pode
variar entre os 41-79 anos, tambm em ambas as amostras. Foram analisadas
concentraes de oito elementos: ltio (Li), crmio (Cr), ferro (Fe), zinco (Zn), cobre
(Cu), mangans (Mg), nquel (Ni) e vandio (V). A fim de investigar qual a influncia
da idade sobre o nvel de elementos, foram consideradas trs faixas etrias diferentes
dos grupos de controlo, para ambas as amostras, sendo considerados os intervalos: 2839, 40-49 e 50-79 (Chen et alii, 2014).

De um modo geral, para as amostras de cabelo os elementos no grupo de controlo


apresentaram uma concentrao mais elevada do que no grupo de doentes diabticos, no
entanto, verificou-se que os nveis mdios de ltio, zinco, cobre, ferro e mangans foram
maiores nos grupos de diabticos do que no grupo controlo nas amostras de urina
(Tabela 2) (Chen et alii, 2014).

A idade um fator importante na concentrao destes elementos, uma vez que tanto na
amostra de cabelo como na de urina, as concentraes de zinco e ferro tm tendncia a
diminuir com o aumento da idade. No caso especifico do ferro, a sua concentrao
33

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

diminui com a idade, principalmente por causa da ingesto de alimentos com reduzida
concentrao deste elemento e, alm disso, tambm pelo aparecimento de doenas com
o avano da idade que prejudicam a absoro de ferro e / ou aumentam a sua excreo
(Chen et alii, 2014).

No foi possvel quantificar os nveis de Cr nestas amostras por estarem abaixo do


limite de quantificao. Quanto s amostras de urina, as concentraes da maioria dos
elementos foram mais baixas no grupo controlo do que no grupo de doentes diabticos
(Tabela 3). Isto deve-se ao facto de alguns elementos serem excretados na urina a taxas
mais elevadas em pacientes com diabetes do que os indivduos normais (Chen et alii,
2014).

Em geral, concentraes mais elevadas de um elemento na urina implicam a sua


deficincia no corpo, pois est a ser excretada. No caso do Zn, isto um fator indicador
no diagnstico de diabetes (Chen et alii, 2014) dado que a sua deficincia e
desequilbrio pode desempenhar um papel importante na patognese da diabetes tipo II.
Concentraes baixas deste elemento podem afetar a capacidade das clulas dos ilhus
pancreticos responsveis pela produo e secreo de insulina, especialmente nas fases
progressivas posteriores da diabetes tipo II (Tabela 3) (Chen et alii, 2014).

34

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Tabela 3. Concentraes de vrios oligoelementos no cabelo (ng/g) e na urina (g/ml)


(adaptado de Chen et ali, 2014).

Grupo controlo

Grupo diabticos

Concentrao (ng/g)

Concentrao (g/ml)

Li

0,38 0,340

0,112 0,0514

Zn

146,23 85,793

51,621 6,9746

Cu

10,324 4,886

0,5773 0,0056

Fe

33,548 33,913

15,653 1,3841

Mn

9,2323 12,500

2,4806 0,2938

Ni

0,6457 1,8804

0,0988 0,0206

0,1375 0,1282

0,1342 0,0174

Li

0,0097 0,0070

0,0130 0,0122

Zn

0,1289 0,0847

0,3279 0,2141

Cr

0,0077 0,0070

0,0068 0,0042

Cu

0,0783 0,0210

0,0854 0,0147

Fe

0,7147 0,1539

0,8406 0,2030

Mn

0,0167 0,0100

0,0389 0,0035

Ni

0,0081 0,0015

0,0077 0,0015

0,0077 0,0049

0,0077 0,0046

Cabelo

Urina

5.3. Desempenho humano

A anlise do cabelo na investigao de frmacos e de drogas de abuso atualmente


aplicada em vrios cenrios como, por exemplo, na proteco de menores, em
programas de controlo de abstinncia de drogas e lcool em trabalhadores e/ou
condutores, doping em desportistas e em toxicologia post mortem (Allibe et alii, 2015).

35

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Como j foi mencionado, esta matriz oferece vrias vantagens, dando especial realce ao
facto da sua janela de deteco ser elevada (meses) e colheita no ser invasiva (Allibe
et alii, 2015).

5.3. i) Medicina no trabalho

Muitos empregadores exigem que os funcionrios se submetam periodicamente a testes


de drogas para verificar o uso de drogas ilcitas ou o excesso de consumo de lcool
como forma de garantir a segurana corporativa, segurana pblica e minimizar imensas
perdas de produtividade. At data, o teste de drogas na urina tem sido a tcnica mais
comum para deteo do uso de drogas no local de trabalho. A partir do incio da dcada
de 1980, amostras alternativas, tais como o fluido bucal ou suor tem sido testados
(Pragst e Balikova, 2006).

5.3. ii) Conduo de veculos

A dependncia de drogas e abuso regular de drogas so geralmente incompatveis com a


capacidade de conduo. Na Alemanha e Itlia, a anlise do cabelo faz parte do
processo de concesso ou re-concesso da carta de motorista. No caso da Alemanha,
analisado um segmento da amostra de cabelo que abrange um perodo 12 meses. Em
Itlia, a anlise ao cabelo est includa num conjunto de testes clnicos e laboratoriais
para investigar o comportamento toxicolgico do requerente carta de motorista e como
forma de verificar a aptido fsica e mental dos ex-utilizadores. De acordo com a
legislao italiana, aps cessao de consumo de drogas necessrio a recolha e anlise
de 8 amostras de urina e cabelo recolhidas ao longo de 40 dias. As amostras de cabelo
(4-5 cm de comprimento) so rastreadas para os opiceos, cocana e ecstasy por
radioimunoensaios (nvel de cut-off de 0,1 ng/mg). Os resultados positivos so depois
alvo de confirmao por HPLC, CE ou GC-MS (Pragst e Balikova, 2006).

Em Itlia, a maioria dos acidentes e mortes nas estradas so causadas por condutores
que esto sob o efeito de substncias psicoativas, nomeadamente opiceos, cocana,
cannabis e seus metabolitos. Estas so, as substncias ilcitas mais consumidas em Itlia
(Tassoni et alii, 2014).
36

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

Durante o perodo de 2004 a 2013, em Itlia foram analisadas cerca de 8612 amostras
de cabelo o que demonstra que este tipo de anlise tem sido utilizada com maior
relevcia ao longo dos anos. Isto deve-se ao facto de a conduo sob efeito de drogas
ser considerado um problema de sade pblica significativo. Devido lei italiana
permitir a proibio ou revogao da licena de conduo do motorista infrator, o
consumo destas substncias tem vindo a diminuir desde 2004 at 2013, como se verifica
na figura 6 (Tassoni et alii, 2014).

Figura 6. Frequncia de resultados positivos para o consumo de opiceos, cocana,


cannabis e seus metabolitos ao longo dos anos nos condutores italianos (adaptado de
Tassoni et ali, 2014).

5.3. iii) Controlo de doping


Para vrias modalidades desportivas, as regras oficiais indicam que um resultado de
doping positivo estabelecido pela deteo qumica inequvoca de uma substncia
proibida na urina. A anlise de cabelo pode complementar estes testes, mas no os
substitui. Assim, um resultado positivo numa amostra urina no pode ser anulado por
um resultado negativo da mesma substncia numa amostra de cabelo. No entanto, o
resultado positivo da droga do cabelo pode demonstrar exposio durante o perodo
anterior recolha da amostra de urina. A anlise do cabelo importante para testar
substncias permanentemente proibidas, tais como os esterides anabolizantes. Em
contraste, as substncias proibidas apenas temporariamente (durante o perodo de
37

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

competio, por uma determinada via, ou acima de uma certa dose) geralmente no
podem ser controladas desta forma (Pragst e Balikova, 2006).

5.4.Responsabilidade penal e toxicodependncia

A anlise do cabelo pode ser usada em casos criminais, a fim de averiguar se foram
efetuados consumos regulares de drogas no perodo de tempo a que se reporta o crime.
Nestas situaes, o diagnstico de dependncia geralmente tido como atenuante na
sentena. Esse diagnstico pode ser apoiado pelos resultados obtidos em amostras de
cabelo pelo que seria til e aconselhvel efetuar a recolha da amostra logo aps a
deteno (Pragst e Balikova, 2006).

No caso dos presos, os testemunhos de autoconsumo de drogas nem sempre so


verdadeiros, uma vez que possvel obter atenuantes pena como por exemplo,
internamentos em centros de recuperao, se forem considerados viciados no consumo
de drogas de abuso (Vignali et alii, 2012). Assim, este tipo de relatos de consumo
excessivo de drogas necessitam de determinao quantitativa das mesmas para
validao (Vignali et alii, 2012).

5.5. Diagnstico de consumo e intoxicao crnica

As amostras de cabelo podem ser utilizadas como uma ferramenta de diagnstico para a
deteo de abuso de drogas e elucidao de outras intoxicaes crnicas (por poluio
ambiental de longo prazo, adulterao de alimentos ou atividade criminal) (Pragst e
Balikova, 2006).

De facto, na presena de sintomas clnicos patolgicos

(hepatotoxicidade, neurotoxicidade) sem explicao lgica a hiptese de intoxicao por


uma substncia desconhecida deve ser considerada no diagnstico diferencial.

Vrios estudos analisaram amostras de cabelo de indivduos em abstinncia, a fim de


determinar a identidade de drogas de abuso antes do tratamento e controlar as mudanas
no comportamento de consumo aps o seu incio. A anlise segmentar do cabelo pode
fornecer um histrico do consumo (incluindo mudanas de uma droga para outra ou
mistura entre drogas ilcitas e teraputicas) e dos perodos de abstinncia. Apesar das
38

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

vantagens, a utilizao desta tcnica no tem aplicao generalizada devido ao aumento


do custo e maior tempo de anlise em comparao com a urina (Pragst e Balikova,
2006).

5.6. Toxicologia post mortem

comum a recolha de amostras de cabelo durante a autpsia. Apesar de vrios estudos


demonstrarem que em casos de intoxicao aguda o exame raiz do cabelo pode ser
bastante til (por ser encontrarem elevadas concentraes de algumas drogas), o
principal uso da anlise de cabelo nestes casos auxiliar a causa da morte quanto ao
consumo crnico (ou no) de drogas (Pragst e Balikova, 2006).

O consumo a longo prazo ou a intoxicao crnica pode induzir vrios efeitos nocivos
ou agravar doenas preexistentes. Por exemplo, o abuso crnico de metanfetaminas e
cocana est associado com o aparecimento de doenas cardiovasculares e, por isso,
consumidores desta substncia tm geralmente alteraes morfolgicas no corao.
Assim, a deteo de drogas em segmentos de cabelo pode ser til na avaliao da causa
de morte (Pragst e Balikova, 2006).

Tambm a anlise da presena de esterides anabolizantes pode ser til para explicar a
morte inesperada de jovens atletas como consequncia do seu abuso crnico (Pragst e
Balikova, 2006).

Existem drogas cuja concentrao aumenta aps a morte em consequncia da sua


distribuio de tecidos e rgos para a corrente sangunea, portanto necessrio ter em
conta que ocorre uma serie de processos no cadver capazes de influenciar o resultado
toxicolgico (Kintz, 2004).

A anlise de xenobiticos usando o cabelo como matriz tem vantagens nos casos em
que o cadver se encontra em avanado estado de decomposio, uma vez que esta
matriz permite uma anlise retrospetiva, pois o cabelo no cresce continuamente mas
sim em ciclos. Permite deste modo, avaliar a presena ou ausncia dos xenobiticos em

39

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

momentos anteriores morte, o que importante em situaes em que seja


desconhecido o historial clnico do indivduo (Balikova, 2005).

Este tipo de anlise retrospetiva pode indicar se o indivduo estava exposto de forma
crnica ou ocasional ao xenobitico (Kintz, 2004).

40

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

VII. Concluses

O cabelo como matriz biolgica tornou-se fundamental com o decorrer dos anos em
alternativa s matrizes mais comummente utilizadas, o sangue e a urina (Baciu et ali,
2015). Tem recebido especial importncia devido sua capacidade de reteno e
armazenamento por um perodo de tempo relativamente longo de vrias substncias,
sua janela de deteo ser substancialmente mais longa (meses a anos) o que permite
uma investigao retrospetiva de abuso crnico de drogas e a possibilidade de
identificar se se est perante uma exposio de curto ou longo prazo e, ainda, devido ao
facto de ser uma matriz bastante estvel, fcil de recolher, transportar e armazenar
(Kempson e Lombi, 2011).

Em comparao com outras matrizes, como por exemplo o caso da urina possui tambm
a vantagem de existir maior dificuldade em adulterar resultados (Kempson e Lombi,
2011).

Por seu lado, o cabelo uma matriz bastante complexa o que exige que sejam aplicados
mtodos de deteo bastante sensveis e seletivos de anlise (Baciu et ali, 2015).

Os avanos tecnolgicos levaram ao uso do cabelo como uma ferramenta til e objetiva,
proporcionando o desenvolvimento de novas geraes GC-MS e HPLC-MS que
passaram a ser tecnologias normais em laboratrios toxicolgicos (Pragst e Balikova,
2006).

Esta matriz obrigatria em muitas reas da investigao toxicolgica como por


exemplo no controlo de doping, na monitorizao clnica de frmacos, nas mortes
relacionadas com o consumo de drogas, nos casos de criminalidade associadas ao
consumo de drogas de abuso ou lcool, ou ainda, em casos de exposio ocupacional
(Pragst e Balikova, 2006).

Existe algum progresso no que toca analise de cabelo, no entanto existem pontos que
podem ser melhorados como por exemplo a preparao de padres de referncia
confiveis para a calibrao e controlo de qualidade, a padronizao dos processos de
41

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

descontaminao e de extrao de procedimentos, o estabelecimento de padres de


desempenho para a droga, frmacos e identificao de metabolito, o uso de valores cut-off cientificamente fundados, a fim de facilitar a interpretao consistente e abordagem
de consensual deste tipo de anlise (Pragst e Balikova, 2006).

42

Anlise de cabelo procedimentos e aplicaes

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