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UNIDAD VII- INTRODUCCION A LA

BIOLOGIA MOLECULAR Y MAQUINARIA DE


SINTESIS PROTEICA

1. Concepto de Biologa molecular


1.1 Importancia de la biologa molecular - ciencias auxiliares
1.2 Historia de la Biologa molecular
2. Estructura y propiedades fisicoqumicas de los cidos Nucleicos (ADN - ARN)
3. Replicacin y transcripcin de ADN
Sntesis de Protenas
Estructura de Protenas

Introduccin a la Biologa
Molecular

Biologa molecular
La Biologa Molecular es el estudio de la vida a un
nivel molecular.

CIENCIA, cuyo objetivo fundamental es la comprensin


de todos aquellos procesos celulares,
que contribuyen a que la informacin gentica se transmita
eficientemente de unos seres a otros,
y se exprese en los nuevos individuos

En qu se apoya la biologa
molecular?
Matemticas

Fsica

Bioqumica

Biologa
celular

Gentica

Biologa
molecular

Bioinformtica

Procesos biolgicos:
Metabolismo
Sntesis protenas
DNA
RNA

una serie de experimentos para confirmar que es el ADN la base del material
gentico (y no las protenas),

Un Opern es grupo de genes


estructurales cuya expresin est
regulada por elementos de control
o genes (promotor y operador) y
genes reguladores

El estudio de que funciones son conferidas a un organismo por una


secuencia gnica dada

AVANCES HISTRICOS DE BIOLOGA MOLECULAR


1941 Genes codifican las protenas
1944 Prueba que el ADN porta la informacin gentica
1953 Determinacin de estructura del ADN
1961 Cdigo Gentico, ARN mensajero, regulacin gnica
1967 Wise y Richardson aislaron ADN ligasa
1970 Smith y colegas aislaron y caracterizaron la Hind III
1972 Janet Mertz y Ron Davis cortaron y pegaron mol de ADN
1973 Stanley Cohen y H. Boyer pusieron ADNr en bacterias
1974 Demostracin directa de deleccin gnica humana
1975 Southern Blotting
1977 Fred Sanger secuenci el virus de ADN X174
1978 Biblioteca gnica humana
1979 RFPL para diagnstico prenatal, oncogenes celulares

Avances histricos de biologa molecular


1979-81 genes humanos clonados y secuenciados
1982 Tabaco, la primera planta modificada genticamente
1983 Kary Mullis concibe el PCR / Fred Sanger y colegas

publican la secuencia del lambda


1986 La secuenciacin del ADN es automatizada
1987 Inicia el Proyecto del Genoma Humano
1995 Es secuenciado la bacteria Haemophillus influenzae
1996 Es secuenciada la levadura Saccharomyces cerevisiae
1998 Es secuenciado el nemtodo Caenorhabditis elegans
1999 Es secuenciado el cromosoma 22 humano
2000 Es secuenciada la mosca de la fruta D. melanogaster /
26 de junio se presenta 90% borrador genoma humano
2000 14 de dic. secuencia de Arabidopsis thaliana
2001 26 de enero borrador genma del arroz Oriza sativa

ESTRUCTURA DE UN GEN, solamente para recordar

Los promotores pueden ser genricos o tejido especfico

Promotores

Realzadores
Exones

Intrones

Sitio de inicio de
la Transcripcin

< 100 Kb

Sitio de terminacin
de la Transcripcin

La funcin del gen depende de los FACTORES de TRANSCRIPCIN (FT) que activan a las
ARN pol. Los FT son: los Factores de Transcripcin General (se unen a secuencias promotoras
genricas) y los Activadores de Transcripcin (se unen a secuencias promotoras especficas).
Los FT pueden activarse o desactivarse en respuesta a estmulos del entorno del organismo.

GENOMAS
El genoma de un organismo es el juego completo de
ADN.
La planificacin del Proyecto Genoma Humano se inici
en 1986, previsto para el 2007. En Junio de 2000 se present el 90% del borrador con la
secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). Los genes
son secuencias especficas de bases que codifican instrucciones para hacer protenas.
Los genes son un 2% del genoma humano.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en
60%
0.2%

IDENTIDAD GENTICA

De 289 genes
humanos
implicados en
enfermedades,
hay 177
cercanamente
similares a los
genes de
Drosophila.

20%

70%

95% idntico

Humanos
30,000
genes

Chimpanc
30,000
genes

Ratn
30,000
genes

A. thaliana
25,000
genes

C. elegans
19,000
genes

D. melanogaster
13,000
genes

Gentica procariotas y eucariotas

El DNAcomo una doble hlice-dna


superenrollado

Otros aspectos importantes de la estructura


del DNA

Otros aspectos importantes de la


estructura del DNA

Iniciacin de la sntesis del DNA

Cadena lder y cadena rezagada

Fidelidad de la replicacin del DNA:


comprobacin de lectura

SINTESIS DE PROTEINAS:
TRANSCRIPCIN

Transcripcin:
1- Iniciacin: Una ARN-polimerasa comienza la sntesis del
precursor del ARN a partir de unas seales de iniciacin
"secuencias de consenso " que se encuentran en el ADN.

ARNpolimerasa

A
U

C
G

C
G

G
C

T
A

T
A

G
C

C
G

A
U

A
G

Transcripcin:
2. Alargamiento: La sntesis de la cadena contina en
direccin 5'3'. Despus de 30 nucletidos se le aade
al ARN una cabeza (caperuza o lder) de metil-GTP en
el extremo 5 con funcin protectora.
ARNpolimerasa

T A C G A A C C G T T G C A C A T C
A

m-GTP

Transcripcin:
3- Finalizacin: Una vez que la enzima (ARN polimerasa) llega a la
regin terminadora del gen finaliza la sntesis del ARN. Entonces,
una poliA-polimerasa aade una serie de nucletidos con adenina,
la cola poliA, y el ARN, llamado ahora ARNm precursor, se libera.

poliA-polimerasa

m-GTP

ARNm precursor

4. Maduracin (cont.): El ARNm precursor contiene tanto


exones como intrones. Se trata, por lo tanto, de un ARNm no
apto para que la informacin que contiene sea traducida y se
sintetice la correspondiente molcula proteica. En el proceso
de maduracin un sistema enzimtico reconoce, corta y retira
los intrones y las ARN-ligasas unen los exones, formndose el
ARNm maduro.

ARNm
maduro
precursor

cola

Cabeza
AUG

AAAAAA
UAG

Maduracin del ARNm (Visin de conjunto).

Regin codificadora del gen

ADN
Promotor

E1

I1

E2

I2

E3

Terminador

TAC

Cabeza E1

ARNm
precursor

ARNm
maduro

ATC

I1

E2

I2

cola

E3

AAAAAA

AUG

UAG

Cabeza

cola
AAAAAA

AUG

UAG

SINTESIS DE PROTEINAS:
TRADUCCIN

Iniciacin: La subunidad pequea del ribosoma se une a la regin lder del ARNm y el
ARNm se desplaza hasta llegar al codn AUG, que codifica el principio de la protena. Se les
une entonces el complejo formado por el ARNt-metionina (Met). La unin se produce entre el
codn del ARNm y el anticodn del ARNt que transporta la metionina (Met).

Subunidad menor del ribosoma

AAAAAAAAAAA 3

AU G CAA U G C U UA C GA UAG

UAC

Anticodn

(i)

Codn

ARNt

ARNm

1er aminocido

Elongacin I: A continuacin se une la subunidad mayor a la menor completndose el


ribosoma. El complejo ARNt-aminocido2 , la glutamima (Gln) [ARNt-Gln] se sita enfrente del
codn correspondiente (CAA). La regin del ribosoma a la que se une el complejo ARNt-Gln
se le llama regin aminoacil (A).

Subunidad menor del ribosoma

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
UAC GUU

(i)

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin II: Se forma el enlace peptdico entre el grupo carboxilo de la metionina (Met) y
el grupo amino del segundo aminocido, la glutamina (Gln).

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
UAC GUU

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin III: El ARNt del primer aminocido, la metionina (Met) se libera.

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
GUU

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin IV: El ARNm se traslada, de tal manera que el complejo ARNt-Gln-Met queda
en la regin peptidil del ribosoma, quedando ahora la regin aminoacil (A) libre para la
entrada del complejo ARNt-aa3

ARNm

AAAAAAAAAAA

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
GUU

Elongacin V: Entrada en la posicin correspondiente a la regin aminoacil (A) del


complejo ARNt-Cys, correspondiente al tercer aminocido, la cistena (Cys).

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
GUU ACG

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin VI: Unin del pptido Met-Gln (Metionina-Glutamina) a la cistena (Cys).

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
GUU ACG

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin VII: Se libera el ARNt correspondiente al segundo aminocido, la glutamina


(Glu).

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
ACG

(i)

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin VIII: El ARNm corre hacia la otra posicin, quedando el complejo ARNt3-CysGlu-Met en la regin peptidil del ribosoma.

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
ACG

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin IX: Entrada del complejo ARNt-Leu correspondiente al 4 aminocido, la


leucina.

ARNm

AAAAAAAAAAA 3

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
ACG
AAU

Leu

Elongacin X: Este se sita en la regin aminoacil (A).

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
AC G AAU

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin XI: Unin del pptido Met-Gln-Cys con el 4 aminocido, la leucina (Leu).
Liberacin del ARNt de la leucina. El ARNm se desplaza a la 5 posicin

ARNm

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
AAU

AAAAAAAAAAA 3

Elongacin XII: Entrada del ARNt de la leucina, el 5 aminocido, la arginina (ARNt-Arg).

ARNm

AAAAAAAAAAA 3

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
AAU
GCU

Elongacin XIII: Unin del pptido Met-Gln-Cys-Leu con el 5 aminocido, la


arginina (Arg). Liberacin del ARNt de la leucina (Leu). El ARNm se desplaza a la
6 posicin, se trata del un codn de finalizacin o de stop.

ARNm

AAAAAAAAAAA 3

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
GCU

Arg-Leu-Cys-Gln-Met

Finalizacin I: Liberacin del pptido o protena. Las subunidades del ribosoma se disocian
y se separan del ARNm.

ARNm

AAAAAAAAAAA 3

AU G CAA U G C U UA C GA UAG
GCU

Arg-Leu-Cys-Gln-Met

Finalizacin II: Despus unos minutos los ARNm son digeridos por las enzimas del
hialoplasma.

ARNm

AAAAAAAAAAA 3

A U G C A A U G C U U A C GA U A G

(i)

ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS

QU SON LAS PROTENAS?


Son biomleculas formadas bsicamente por carbono,
hidrgeno, oxgeno y nitrgeno

polmeros lineales construidos a partir de


monmeros llamados aminocidos, que
bajo condiciones fisiolgicas tienen una
estructura tridimensional definida.

PPTIDO
Los amino cidos estn ligados linealmente a travs de una
unin peptdica.

Estas uniones se forman por medio de una reaccin de


sntesis deshidratante:
Entre el grupo carboxilo del primer amino cido con el
grupo amino del segundo amino cido.

Estructura de una protena


APRKFFVGGNWKMNGDKK
SLGELIHTLNGAKLSADTEVV
CGAPSIYLDFARQKLDAKIGV
AAQNCYKVPKGAFTGEISPA
MIKDIGAAWVILGHSERRHV
FGESDELIGQKVAHALAEGLG
VIACIGEKLDEREAGITEKVVF
EQTKAIADNVKDWSKVVLA
YEPVWAIGTGKTATPQQAQE
VHEKLRGWLKSHVSDAVAQ
STRIIYGGSVTGGNCKELASQ
HDVDGFLVGGASLKPEFVDII
NAKH

CUATRO NIVELES
ESTRUCTURALES

ESTRUCTURA PRIMARIA:
FORMACIN DE UN ENLACE PEPTDICO
Una cadena polipeptdica consiste en una cadena lineal de
aminocidos unidos por enlaces peptdicos.

ESTRUCTURA SECUNDARIA
Se refiere al ordenamiento espacial de los aminocidos
que se encuentran cerca en la secuencia.

Los aminocidos, a medida que van siendo enlazados


durante la sntesis de protenas y gracias a la
capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una
disposicin espacial estable, la estructura secundaria

- hlice:
Esta estructura se forma al enrollarse
helicoidalmente sobre s misma la
estructura primaria. Se debe a la
formacin de enlaces de hidrgeno.

Forma-
Los aminocidos forman una cadena en forma de zigzag,
denominada disposicin en lmina plegada.

ESTRUCTURA TERCIARIA

Es su disposicin espacial; es decir, el plegamiento de los


elementos estructurales secundarios, junto con las
disposiciones espaciales de sus cadenas, esto es, el arreglo
tridimensional de todos los aminocidos.

ESTRUCTURA CUATERNARIA

Las cadenas polipeptdicas se pueden ensamblar en


estructuras de mltiples subunidades.

(se presenta en protenas que contienen ms de una


cadena polipeptdica, conocidas como subunidades)

ESTRUCTURA DE PROTEINAS

estructura
primaria

secuencia
de
aminocidos

estructura
secundaria

-hlice

estructura
terciaria

plegamiento
tridimensional

estructura
cuaternaria

ensamblaje de
subunidades

La FUNCIN de una protenas es directamente dependiente


de su estructura tridimensional.

Por lo tanto, LA ESTRUCTURA DICTA LA FUNCIN

Determina la especificidad de interaccin con otras molculas,


Determina su funcin,
Determina su estabilidad y tiempo de vida media

DESNATURALIZACIN DE
LAS PROTENAS.

Cambios en la estructura de
las protenas que incluye las
prdida de las propiedades
que determinan sus funciones.

Por qu se puede dar?


Aumento de la
temperatura

Cambios de pH

Exposicin a rayos
UV

A qu se debe?

- Rompimiento de uniones dbiles que


mantiene estables las estructuras cuaternarias
o terciarias, lo que hace que pierdan su
funcin. Sin embargo, los enlaces peptdicos
se mantienen unidos.

Renaturalizacin

Recuperacin de la configuracin
normal de las protenas al
restablecerse las condiciones de
T y pH (normales).

La chaperona BiP y el plegamiento de protenas en el RER

La familia de chaperoninas Hsp60


(citosol y orgnulos, no en el RER)

Las chaperoninas Hsp60 (cont)

UNIDAD VIII
Organizacin de genomas- recombinacin- regulacin de la
expresin gnica

8.1 Recombinacin en virus,


bacterias y clulas eucariticas
8.2 Mecanismos de reparacin del
ADN
8.3 Organizacin genomas
8.3.1 Genoma Procariota
8.3.2 Genoma eucariota
8.3.3 Mitocondrial
8.4 Regulacin de la expresin
gnica

Un gen es una secuencia de DNA


genmico o de RNA que es
esencial para especificar una
determinada funcin

Recombinacin gentica
Es el proceso por el que los elementos genticos
contenidos en dos genomas separados, se juntan
en una unidad.
Trae como consecuencia un cambio.

Se transfieren genes completos, grupos de genes


o cromosomas completos.

Formas de Recombinacin

Transformacin: el DNA libre se incorpora a una clula.


Transduccin: La transferencia del DNA donador esta
mediada por un virus.
Conjugacin: la transferencia de DNA implica contacto
clula clula y la presencia de un plsmido y de una
estructura llamada pili.

Transformacin
Este descubrimiento fue uno de los hechos mas relevantes, pues
condujo a experimentos que probaron que el DNA es el material
gentico. Fred Grifth (1920).
Trabajos con Streptococcus pneumoniae.

Transformacin: Etapas
1.

Unin del DNA: protena asociada a la


membrana: autolisina y nucleasas.

2. Incorporacin del DNA: Primero se fija


reversiblemente, luego se vuelve irreversible.
3. Integracin del DNA: protena de unin, en el
cromosoma protena RecA

Transformacin

Experimento de Griffith
Neumococo vivo
capsulado. (S)
Neumococo muerto
por calor

Neumococo vivo
rugoso (R) no
capsulado
Neumococo (R)
vivo +
Neumococo muerto

Ratn muerto
Se aslan cepas lisas

Ratn vivo

Ratn vivo
Ratn muerto: se aslan
cepas S

Cuando una clula es capaz de tomar una


molcula o un fragmento de DNA y transformarse
se denomina clula competente.
Solo algunas cepas poseen esta caracterstica,
parece ser una propiedad hereditaria.

Transduccin

Transduccin
Cuando un fago infecta a una bacteria,
capta fragmentos del genoma de la clula
hospedadora.
Al infectar a otra bacteria el fago
transductor puede transferir sus propios
genes y
tambin los de la clula
hospedadora de la cual procede.

Puede ocurrir de 2
formas:
1.
Transduccin
generalizada:
Cualquier porcin del
genoma de la clula
hospedera pasa a
formar parte del
genoma de la
partcula vrica.

Transduccin

Transduccin
2.

Transduccion
especializada:
El DNA de una
regin especifica del
cromosoma de la
clula hospedera se
integra
directamente en el
genoma del virus.
No todos los fagos
pueden transducir,
ni todas las
bacterias son
transducibles.

CONJUGACION
Implica el contacto clula
clula.
El material gentico
transferido puede ser un
plsmido, o una porcin
del cromosoma.
Una clula donadora
trasmite la informacin
gentica a otra clula, la
receptora.
La clula donadora posee
el pili o pelo sexual.

conjugacin

La capacidad de la clulas para actuar como donantes se debe a la


presencia de factor f o factor de fertilidad.
Las clulas que carecen de factor f, son receptoras.

RECOMBINACIN DEL DNA EN LA


NATURALEZA
1.

2.

Cambio de la
composicin de
nucletidos del DNA
de una sola clula,
unas cuantas clulas o
de un organismo
completo.
Seleccin de
combinaciones de
DNA valiosas.

La recombinacin del DNA sucede de manera


natural mediante procesos como la
reproduccin sexual (recombinacin gentica y
sexual), la transformacin bacteriana y la
infeccin viral.
La transformacin puede combinar DNA de
diferentes especies bacterianas.
Los virus pueden transferir DNA entre
especies eucariotas
La recombinacin proporciona la materia
prima para la evolucin.

Bacteria
adquiriendo DNA

Virus transfiriendo DNA

PLASMIDOS

Son elementos genticos que se replican independientemente del


cromosoma.
Se encuentran dentro de la clula.
Existen varios tipos de plsmidos.
En E coli, se han aislado mas de 300

Tipos de plsmidos
Plsmidos conjugativos: codifican pili sexuales
y protenas necesarias para la transferencia de
DNA.
Plsmidos R (resistencia a los antibiticos,
mercurio).
Plsmidos de Produccin de bacteriocinas y
antibiticos.

Tipos de plsmidos
Plsmidos de funciones fisiolgicas:
Utilizacin de urea,
Fermentacin de carbohidratos.
Produccin de pigmentos.
Plsmidos de virulencia: produccin de toxinas,
enzimas, tumores.

Se denomina episoma a un plsmido


incorporado al cromosoma bacteriano. Los
plsmidos se replican en manera similar
al cromosoma bacteriano.

El ADN procariota se organiza en paquetes


coherentes denominados OPERONES, en
los cuales se encuentran los genes para
funciones interrelacionadas.

DNA MITOCONDRIAL

GENOMA VIRAL
Los virus son organismos
intracelulares obligados
Su estructura incluye un
cido nucleico viral (genoma
viral) DNA o RNA pero nunca
ambos) ubicado dentro de
una cpside proteica.

Utilizan la maquinaria celular


del husped (transcripcional
y traduccional) para su
propia replicacin.
El genoma viral codifica toda
la informacin para la
replicacin viral.

Las bacterias contienen 3 tipos de RNA:

1.

RNAm: (mensajero), su funcin es copiar el cdigo gentico del gen


(DNA cromosmico) y llevar este mensaje al sitio de sntesis de
protenas (Ribosomas).

2.

RNAt (transferencia), traduccin del mensaje de RNA en una


secuencia especifica de aminocidos.

3.

RNA (ribosomal) sntesis de protenas.

EXPRESION GNICA

Flujo de informacin gentica en


la clula eucariota

MODELO OPERN
Jacob, Monod y colaboradores analizaron el sistema de la lactosa
en E. coli, de manera que los resultados de sus estudios
permitieron establecer el modelo gentico del Opern que permite
comprender como tiene lugar la regulacin de la expresin gnica
en bacterias. Jacob y Monod recibieron en 1965 el Premio Nobel
por estas investigaciones
Jacques Monod

Francois Jacob

Un Opern es grupo de genes estructurales cuya


expresin est regulada por elementos de
control o genes (promotor y operador) y genes
reguladores

Un opern consiste en:


un operador: controla el acceso de la RNA
polimerasa al promotor
un promotor: donde la RNA polimerasa reconoce
el sitio de inicio de la transcripcin

un gen regulador: controla el tiempo y velocidad


de transcripcin de otros genes
un gen estructural: codifican las enzimas
relacionadas o las protenas estructurales

El gen regulador codifica para una protena


que se pega al operador, obstruyendo al
promotor (y por lo tanto a la transcripcin),
del gen estructural.

Cuando se remueve la protena


represora, puede producirse la
transcripcin.
El operador y el promotor son sitios de
unin sobre el DNA y no se transcriben.

Los operones son:

Inducibles
Reprimibles
De acuerdo al mecanismo de
control

OPERONES INDUCIBLES
El Opern lactosa, que abreviadamente se
denomina Opern lac, es un sistema
inducible.
La protena reguladora, producto del gen
regulador , es un represor que impide la
expresin de los genes estructurales en
ausencia del inductor.

El inductor en este caso es la


lactosa

Opern lactosa en ausencia de lactosa

Operones reprimibles

Cuando un producto del metabolismo, el


triptofano por ejemplo, est en cantidades
suficientes la bacteria puede dejar de fabricar
las enzimas que los sintetizan.

En este sistema, el producto funciona como


correpresor unindose al represor y de este
modo detiene la sntesis proteica.

Tanto la represin como la induccin son


ejemplos de control negativo, dado que la
protena represora detiene ("turn off") la
transcripcin.

Existen algunos procesos metablicos


que son necesarios para el
funcionamiento normal de casi todas las
clulas, de manera que existen una serie
de necesidades bsicas para el
mantenimiento normal de una clula.
Los genes que codifican para las
enzimas necesarias para el metabolismo
bsico celular se estn expresando
continuamente, es decir, se expresan de
forma constitutiva o continua.

Los genes constitutivos codifican para


sistemas enzimticos constitutivos, que
se necesitan siempre para la actividad
normal de la clula.

Frente a los genes constitutivos, nos encontramos


con los genes que se expresan solamente en
determinadas situaciones y que, por consiguiente,
codifican para enzimas que solamente se necesitan
en momentos concretos.

A este tipo de genes se les llama genes adaptativos


y a las enzimas codificadas por ellos, sistemas
enzimticos adaptativos. Se denominan as
pensando en que se expresan cuando la clula se
adapta a una determinada situacin ambiental.

Control positivo y control


negativo
Control positivo: Se dice que un sistema est
bajo control positivo cuando el producto del gen
regulador activa la expresin de los genes, acta
como un activador.
Control negativo: se dice que un sistema est
bajo control negativo cuando el producto del gen
regulador reprime o impide la expresin de los
genes, acta como un represor.

Control de la
expresin gnica en eucariontes

Niveles:
DNA-cromatina
Transcripcional
Postranscripcional
Traduccional
Postraduccionales

Regulacin de la expresin gnica a


nivel de la cromatina
Existen cuatro subniveles de regulacin al nivel
de la cromatina:

1. Condensacin de la cromatina: sitios sensibles


e hipersensibles a la DNasa I
2. Zonas superenrolladas
3. Metilacin de las citosina
4. Reordenamiento del genoma

Condensacin de la cromatina: sitios


sensibles e hipersensibles a la DNasa I
La estructura cromatina descondensada representa, al parecer, el primer
y ms elevado nivel de regulacin. Es a este nivel que se llevar a cabo la
seleccin entre los genes que la clula est autorizada a transcribir y
aquellos que ella no debe transcribir.

En las regiones activas o potencialmente activas, ocurren cambios


estructurales en sitios especficos asociados con la iniciacin de la
transcripcin o con determinadas caractersticas estructurales del DNA.
(enzima DNAsa I).

Cuando la cromatina se digiere con DNAsa I, el primer


efecto es la introduccin de cortes en la doble cadena en
sitios hipersensibles especficos.

Un sitio hipersensible tpico en la cromatina es cien veces


ms sensible al ataque de las enzimas. Estos sitios tambin
son hipersensibles a otras nucleasas y a agentes qumicos.
Ellos representan fragmentos de DNA desprovistos de
nucleosomas.

La mayora de los sitios hipersensibles se encuentran


solamente en la cromatina de las clulas en las cuales se
est expresando el gen asociado; no se encuentran
cuando el gen est inactivo

Zonas superenrolladas
El superenrollamiento negativo del DNA hace que las bases
estn ms accesibles a las protenas.

Algunos resultados experimentales demuestran que la variacin


del grado de torsin del DNA se utiliza como medio para modificar el
acceso de las protenas al promotor, lo mismo en eucariontes que
en procariontes, regulando as la expresin de los genes
correspondientes.

Las topoisomerasas implicadas en esta regulacin parecen


fijarse a determinadas secuencias especficas del DNA situadas
antes de los promotores.

La expresin gnica est asociada a la


no metilacin
La metilacin del DNA tiene lugar en sitios especficos.
En eucariontes, su funcin primordial conocida est asociada al
control de la transcripcin.

Entre el 2 y el 7% de las citosinas en el DNA de las clulas


animales est metilado (el valor vara con las especies).

La mayora de los grupos metilo se encuentran en los "dupletes"


CG, y, de hecho, la mayora de las secuencias CG estn metiladas.

Reordenamiento del genoma


Los reordenamientos del DNA generan diversidad, tanto en
procariontes como en eucariontes. Las consecuencias generales
del reordenamiento pueden ser:

a) Crear nuevos genes como es el caso de las


inmunoglobulinas, necesarias para la expresin en
determinadas circunstancias.
b) El reordenamiento puede ser responsable del
cambio de la expresin de un gen ya existente en
otro. Esto ofrece un mecanismo para la regulacin
gnica. Este es el caso del fenotipo sexual o
esporulacin de las levaduras.

Muchas evidencias indican que el grado de


condensacin y, en general, los cambios en
la estructura de la cromatina, desempean
un papel principal en la regulacin de la
expresin gnica en las clulas
eucariticas, pudiendo distinguir, por lo
tanto, entre una cromatina activa
transcripcionalmente y una cromatina
inactiva

Para obtener un organismo "funcional" no


es suficiente que sus clulas se diferencien.
Tambin hace falta que stas respondan de
manera adecuada al ambiente.
Para esto es necesario que la expresin de
cada uno de los genes autorizados a
expresarse para la diferenciacin est
perfectamente regulado.

A nivel de la transcripcin

Regulacin del inicio de la transcripcin


Determina:
Que genes son expresados
Que cantidad de mRNA es producido
Cuanta protena va a originarse
Se da por dos factores:
1. CIS: cuando el elemento regulador hace parte de la
misma cadena de DNA donde se localiza el gen a regular
(promotores, secuencias intensificadoras enhancers).

2. TRANS: cuando los elementos reguladores se originan en


otro sitio diferente a la secuencia gentica a controlar
(factores de transcripcin generales, protenas
reguladoras con capacidad de unin al DNA).

Regulacin CIS
Regiones proximales

Secuencias de Regulacin
Muchos genes eucariotas estn controlados por secuencias de
regulacin localizadas a grandes distancias del sitio de inicio
de la transcripcin
Llamadas estimuladores (enhancers) si estimulan
Silenciadores (silencers) si la inhiben
Aqu se unen factores transcripcionales que regulan a la ARN
polimerasa

Pueden estimular o
inhibir la
transcripcin
situados corriente
arriba o abajo del
promotor, y
orientados en
cualquiera de los
dos sentidos

Regulacin TRANS
Factores transcripcionales:

A diferencia de las ARN polimerasas bacterianas, las


eucariticas no hacen contacto directo con el ADN promotor
sino que son reclutadas hacia este por complejos de
protenas especficas para cada tipo de ARN polimerasas:
SL1 para la ARN polimerasa I,
TFIID para la ARN pol, II
TF IIIB para la RNA pol III

Muchos de ellos estn codificados por protooncogenes, que


al activarse pueden alterar la tasa transcripcional o la
calidad de las protenas fisiolgicas desencadenando un
proceso oncolgico

Accin de factores unidos a enhancer y promotor sobre


la ARN polimerasa

Protenas de regulacin
transcripcional
Son protenas que reconocen secuencias
especficas del ADN, hay de 2 tipos:
Activadores de la transcripcin
Represores de la transcripcin

Factores de transcripcin
Factores de transcripcin que se unen
directamente a ADN:
FTIID

Accin de los represores eucariticos


Activador

Represor

Dominio
represor
Dominio de
unin al ADN

Represor compite con el


activador por unin al ADN

Represor se une al ADN e inhibe la


transcripcin

PROTEINAS CON MOTIVOS DE


UNIN AL ADN

MOTIVO HELICEGIRO-HELICE (HLH: Helix- loop-helix)


Constituye una zona proteica o dominio
compuesto por dos regiones de alfa
hlice separadas por una de longitud
variable que forma un rulo o bucle entre
ellas. Los dominios alfa helicoidales son
similares estructuralmente y necesarios
para la interaccin con secuencias de la
protena que permiten una conformacin
simtrica respecto de un eje.

Esta clase de protenas a menudo contiene una regin rica en


aminocidos bsicos localizada en el extremo amino terminal que le
permite su unin a secuencias del ADN reconocidas especficamente.
Varias protenas que no contienen la zona rica en aminocidos bsicos no
se unen al ADN y actan como represores de la transcripcin por esta
causa.

DEDOS DE ZINC
Este motivo consiste en espaciamientos
especficos conformados por residuos de
cistenas e histidinas que permiten la unin de
cationes Zn2+ a la protena, producindose un
enlace coordinativo del metal en el centro de
ellos. Este fenmeno confiere al dominio
aspecto de un dedo, por lo cual es llamado
comunmente dedo de zinc. Estos dominios
pueden encajar en los surcos mayores del
ADN. El acople de estos factores regulatorios
abarca la mitad de una vuelta de la doble hlice
del ADN.

A nivel del procesamiento


del ARNm

SITIOS DE POLIADENILACION ALTERNATIVA:


Puede ocurrir algo similar a la ocurrencia de sitios alternativos de inicio de
la transcripcin pero en el extremo 3. En este caso hallndose sobre un
mismo gen varios sitios susceptibles de ser poliadenilados como es el
caso del gen para la cadena pesada m de inmunoglobulina. Dependiendo
del sitio 3 poliadenilado, la protena resultante puede anclarse a
membrana o ser secretada, de acuerdo al estado de desarrollo en que se
encuentra la clula

Splicing alternativo
Hace referencia a variaciones en la forma de
combinar exones que generan diversas formas de
una protena
El splicing alternativo de pre-ARNm es un importante
mecanismo de regulacin de la expresin de genes
en eucariotas superiores. Regulacin cualitativa
Explica por ejemplo la existencia de
aproximadamente 1.000.000 de anticuerpos
diferentes en humanos a pesar de que el genoma
humano contiene nicamente unos 30.000 genes

Regulacin post-transcripcional
Procesamiento (splicing) alternativo

EDICIN DEL ARN (Mutagnesis dirigida del ARN):


La mutacin puntual de una base en el ARNprecursor o en el
ARNm, puede alterar el producto. Esto no constituye un error
sino que es una herramienta utilizada por la clula para lograr
una determinada protena.
En el ser humano este es el caso de las apoprotenas B100 y
B48. Ambas son codificadas por el mismo gen y contienen en el
ARNprecursor los mismos exones e intrones. Cuando el gen se
expresa en el hepatocito, el ARNprecursor no sufre ningn tipo
de modificacin y el RNAm procesado se traduce en ApoB100.
En cambio, cuando el gen se expresa en el enterocito se
produce una mutacin puntual que convierte C por U en el
ARNm configurando un codn de terminacin que codifica para
la ApoB48.

TRANSPORTE DEL ARN AL


CITOPLASMA:
Los primeros estudios sobre el
ARNprecursor probaron que una
fraccin de ste es desdoblada en el
ncleo por completo antes de generar
ARNm. Si bien an los mecanismos no
se conocen con certeza, los estudios
actuales sugieren que la clula puede
controlar que un ARNprecursor sea o no
procesado.

Este es el caso de la porcin proteica


de una ribonucleoprotena, la U1A.
Cuando sta se expresa en cantidades
altas se puede ligar a su propio
ARNprecursor e inhibir su
poliadenilacin de modo que el
mensajero resultante tiene baja
estabilidad y disminuye as tu tasa de
expresin.

ESTABILIDAD DEL ARNm:


A diferencia de los ARNm procariotas, cuyas vidas medias rondan los 15 minutos, los ARNm eucariontes varan ampliamente en su
estabilidad. Por ejemplo: el ARNm de c-fos tiene una vida media de
entre 10 y 30 en cambio el de las cadenas de globina es de ms de 24
hs.

La longitud de la cola de poli A est directamente relacionada a la


estabilidad citoslica del ARNm y esto se asocia a la proteccin que
ejerce esta secuencia al competir con el resto de la cadena por la unin
a nucleasas citoslicas.
La cola de poli A se halla ligada a una protena llamada Protena de
Enlace de Poli A (PEPA) que protege a la secuencia de la accin de
nucleasas generales y la sensibiliza para nucleasas especficas de poli
A. A medida que estas nucleasas actan la cola de poli A se acorta hasta
que ya no puede ligar a PEPA y el ARNm se vuelve susceptible a las
nucleasas generales y es rpidamente degradado .

A nivel de la traduccin

Control a nivel de traduccin


Determinan si un RNAm particular ser
realmente traducido, con qu frecuencia y
durante cuanto tiempo

Longevidad del RNAm ( determina la duracin


de la traduccin del mensaje)
Protena de enlace poli (A) = (PEPA)

Regulacin en la traduccin
Un mecanismo de
regulacin es la unin
de protenas represoras
que bloquean la
traduccin
Otro mecanismo ocurre
al modular la accin de
los factores de
iniciacin de la
transcripcin

INDUCCIN DE LA EXPRESIN GNICA POR


HORMONAS ESTEROIDES

Las hormonas esteroideas,


moleculas hidrofbicas, se
difunden libremente en el interior
de las clulas. Sus clulas
"diana" contienen protenas
citoplsmicas y/o nucleares que
funcionan como receptores
hormonales. La hormona se une
al receptor y el complejo acta
como un factor de transcripcin
estimulando o frenando a los
diana, de los genes

Reparacin de dmeros de pirimidinas


mediante fotoreactivacin

Reparacin del DNA:


remocin de grupos metilo

Sistemas de
reparacin de
DNA: NER
(Nucleotide
Excision Repair)

Mecanismos
de reparacin
de DNA: BER
(Base excision
Repair)

Enfermedades genticas y sistemas de


reparacin del DNA
Xeroderma pigmentosa
Defecto en alguno de los sistemas de reparacin de los dmeros
de pirimidinas.

Cncer hereditario colorectal


no poliposo
hMSH2 hMLH1
Homlogos a MutS y

Reparacin de G:T

MutL de E. coli

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