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Procedimento Operacional Padro

DOSAGEM DA GLICOSE

GLICOSE-PP
PRINCPIO DO TESTE
A glicose oxidase (GOD) catalisa a oxidao da glicose para cido glicnico e perxido de hidrognio.
Atravs de uma reao oxidativa de acoplamento catalisada pela peroxidase (POD), o perxido de
hidrognio formado reage com 4-aminoantipirina e fenol, formando um complexo de cor vermelha
(quinoneimina), cuja absorbncia medida em 505 nm, diretamente proporcional concentrao de
glicose na amostra.
Glicose + O 2 + H2O

GOD

cido glicnico + H2O

2 H2O + 4-aminoantipirina + Fenol

POD

Quinoneimina + 4 H 2O

APLICAO CLNICA
A dosagem da Glicose no sangue empregada na avaliao do metabolismo da glicose (controle de
produo, consumo e armazenamento), diagnosticando os diversos estados de hiper e hipoglicemias.
AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum 8 horas, salvo orientaes mdicas.
Amostras utilizadas
Plasma, Soro, Lquor e Lquidos Asctico, Pleural e Sinovial.
Estabilidade e armazenamento da amostra
Nas amostras fluoretadas, a estabilidade da glicose de 3 dias entre 2 a 8C, no havendo
contaminao bacteriana.
As amostras de sangue no contendo antiglicoltico devem ser centrifugadas imediatamente aps a
coleta, e o plasma ou soro separados das clulas ou cogulo. Nas amostras de lquor e de lquidos as
ctico, pleural e sinovial adicionar tambm o anticoagulante Fluoreto na mesma proporo usada para
as amostras de sangue e centrifugar antes de fazer a dosagem.
Volume ideal utilizado para anlise
(Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise).
Volume mnimo utilizado para anlise
(Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise).
Critrios para rejeio da amostra
Os anticoagulantes heparina, EDTA, oxalato e fluoreto no interferem na reao de dosagem.
Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material.
REAGENTE UTILIZADO
GLICOSE PP
CAT. 434

MS 80022230067

Componentes do kit
Conservar entre 2-8C.
1- Padro - Contm glicose 100 mg/dL.
O Padro rastrevel ao Standard Reference Material SRM 917 do National Institute of Standards
and Technology NIST.
2- Reagente de Cor - Contm tampo fosfato pH 7,5 fenol 5,0 mmol/L, glicose oxidase 10000 U/L,
peroxidase 1000 U/L, 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L e azida sdica 7,7 mmol/L.
Estabilidade
Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo e na caixa quando
conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso.
Sinais de Deteriorao dos Reagentes
1- Presena de partculas e turbidez indicam deteriorao dos reagentes.
2- A absorbncia do Reagente de Cor lida contra a gua em 505 nm dever ser inferior a 0,300 durante
toda a sua utilizao ou at a expirao da data de validade do mesmo.
Cuidados e Precaues Especiais
1- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica.

Procedimento Operacional Padro


DOSAGEM DA GLICOSE
2- Recomendamos o uso das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para a execuo do teste.
3- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem ser manuseadas como
materiais potencialmente infectantes.
4- O Reagente de Cor (2) contm azida sdica como conservante. Evitar contato com os olhos, pele e
mucosa. No aspirar ou ingerir.
5- No pipetar diretamente do frasco do Reagente de Cor (2) para evitar contaminao.
6- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais, estaduais e
federais de preservao do meio ambiente.
EQUIPAMENTOS
Procedimento Tcnico Manual
Espectrofotmetro (leitura em 500 +/- 20 nm);
Tubos e pipetas;
Banho-Maria a 37 C;
Cronmetro.
Procedimento Tcnico Automatizado
Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP
para utilizao do mesmo.
Procedimento Tcnico Alternativo
Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Indicar as possveis
diferenas quando os procedimentos manuais substiturem os procedimentos automatizados.
Procedimento em Analisadores Automticos
Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos
reagentes para o sistema automtico.
Interferncias
1- Mtodo de Ponto Final
cido ascrbico em concentrao acima de 10 mg/dL e de protenas abaixo de 4 g/dL interferem na
reao de dosagem produzindo resultados falsamente diminudos.
A bilirrubina at 10 mg/dL e hemlise (hemoglobina at 150 mg/dL) no produzem interferncias
significativas.
Valores de bilirrubina acima de 10 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos.
A lipemia (triglicrides at 1100 mg/dL) no produzem interferncias significativas quando se utiliza o
Branco de Amostra.
Branco de Amostra
Misturar 10 L de amostra com 1000 L de soluo de NaCL 150 mmol/L.
Medir a absorbncia da mistura em 505 nm acertando o Zero de absorbncia com gua deionizada ou
destilada.
Subtrair a absorbncia do Branco de Amostra da absorbncia do Teste e calcular o resultado final.
Nota: Procedimento aplicvel para amostras com interferncia positiva.
2-Mtodo Cintico
A bilirrubina at 10 mg/dL e hemlise (hemoglobina at 160 mg/dL) e triglicrides at 3500 mg/dL no
produzem interferncias significativas.

Ateno:
A urina contm vrias substncias que interferem na dosagem da glicose pela metodologia da glicose
oxidase podendo originar resultados falsamente diminudos. Portanto, esta metodologia no
adequada para dosar a glicose na urina.
PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
A-Condies de Reao

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DOSAGEM DA GLICOSE
Leitura: Comprimento de onda 505 nm
Medida: Contra o Branco
Tipo de reao: Ponto final
B-Tcnica de Anlise
1- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", "Teste" e "Padro:
Tubos

Branco

Teste

Padro

Amostra

10 L

Padro (1)

10 L

1000 L
1000 L
1000 L
2- Homogeneizar e incubar os tubos em banho-maria a 37C por 10 minutos. O nvel de gua do
banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos.
3- Ler a absorbncia do Padro (AP) e do Teste (AT), zerando o aparelho com o Branco em 505 nm
(490 a 510 nm).
A cor estvel durante 30 minutos.
Reagente de Cor (2)

CLCULOS
Ver Linearidade.
Como a metodologia obedece lei de Lambert-Beer, a concentrao dos testes pode tambm ser
calculada atravs do Fator de Calibrao (FC).
CP = Concentrao do Padro
AP = Absorbncia do Padro
CT = Concentrao do Teste
AT = Absorbncia do Teste
FC = CP AP
CT em mg/dL = FC x AT
Exemplo
CP = 100 mg/dL
Se AP = 0,333 e AT = 0,313
FC = CP AP = 100 0,333 = 300
CT (mg/dL) = FC AT = 300 0,313 = 94 mg/dL
2- Mtodo Cintico
Notas
1- Metodologia cintica de tempo fixo (2 pontos) e no necessita de Branco de Reao. Deve ser
utilizada em todas as amostras lipmicas.
2- Como o tempo de reao muito pequeno (90 segundos), necessita de fotmetro com cubeta
termostatizada a 37 C e controle rigoroso dos intervalos de tempo.
Tcnica de Anlise
1- Deixar a temperatura do fotmetro e a do Reagente de Cor atingir a temperatura de 37C.
2- Ajustar o comprimento de onda do fotmetro em 505 nm e acertar o Zero de absorbncia com gua
deionizada.
3- Em um tubo rotulado Padro e em outro rotulado Teste pipetar:
Tubo Padro: 1000 L de Reagente de Cor + 10 L de Padro.
Tubo Teste: 1000L de Reagente de Cor + 10 L de Amostra.
4- Misturar e transferir imediatamente para a cubeta termostatizada em 37C e acionar o cronmetro.
5- Fazer uma leitura fotomtrica do Padro (AP) e do Teste (AT) aos 30 segundos (A 30) e uma segunda
Leitura aos 90 segundos (A90).
6- Calcular diferena de absorbncia entre 90 e 30 segundos (A 90 A30) para o Padro e para o Teste.
Clculos
Ver Linearidade.
A do teste ou do Padro= A90 segundos A30 segundos
P = (A90 A30) Padro

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DOSAGEM DA GLICOSE
T = (A90 - A30) Teste
CP = Concentrao do Padro = 100 mg/dL
CT = Concentrao do Teste em mg/dL
FC = CP P
CT = FC T
Exemplo
Se A30 Padro = 0,094 e A90 Padro = 0,182
Se A30 Teste= 0,102 e A90 Teste= 0,176
P= 0,182 0,094 = 0,088 T = 0,176 0,102 = 0,074
FC = 100 0,088 = 1136
CT = FC T = 1136 0,074 = 84 mg/dL
Ateno
As tcnicas de apresentao adequadas para fotmetros com volume mnimo para leitura igual ou
menor que 1000 L.
O analista sempre deve fazer uma verificao da necessidade de ajuste do volume para o fotmetro
empregado no seu laboratrio.
Os volumes de amostra e de reagente podem ser modificados proporcionalmente, sem alterar o
desempenho do teste e os clculos.
Em caso de reduo dos volumes necessrio observar o volume mnimo de leitura fotomtrica.
Volumes da amostra menores do que 10 L so crticos em aplicaes manuais e devem ser usados
com cautela porque aumentam a impreciso da medio.
RESULTADOS
Fator de Converso de Unidades (mg/dL para SI)
mmol/L de Glicose = mg/dL de Glicose 0,0555
CONTROLE DA QUALIDADE
Materiais
Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de
catlogo. Descrever as Instrues de preparo e freqncia da utilizao dos mesmos.
Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados.
Controle Interno
Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura
ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits.
Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas
anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento
de verificao de novos lotes de controles e reagentes.
Citar POP para controle interno.
Controle Externo
Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de
comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade: PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC
Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo
Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados.
Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade.

VALORES DE REFERNCIA
Amostra: Plasma coletado aps jejum de 8 horas
Crianas e Adultos
65 a 99 mg/dL
Prematuro
20 a 60 mg/dL
De 0 a 1 dia
40 a 60 mg/dL
Acima de 1 dia
50 a 80 mg/dL

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DOSAGEM DA GLICOSE

Interpretao dos resultados da glicemia de jejum


1- Glicose entre 65 a 99 mg/dL: Glicemia normal
2- Glicose entre 100 a 125 mg/dL: Glicemia alterada (Pr-Diabetes)
3- Glicose 126 mg/dL: Diagnstico provisrio de Diabetes Mellitus
Interpretao dos Resultados do Teste de Tolerncia Glicose (TTG)
(Glicemia de 2 horas aps 75 g de Dextrosol)
1- Glicose < 140 mg/dL: TTG normal
2- Glicose entre 140 e 200 mg/dL: TTG Alterado ( Pr- Diabetes)
3- Glicose 200 mg/dL: Diagnstico provisrio de Diabetes Mellitus
Critrios Diagnsticos para Diabetes Mellitus
1- Glicemia de jejum 126 mg/dL
2Glicemia casual (aleatria) 200 mg/dL
3- Glicemia de 2 horas aps dextrosol 200 mg/dL
Ateno
Qualquer um dos critrios dever ser confirmado em uma outra ocasio.
SIGNIFICADO CLNICO
A glicose a principal fonte de carboidrato do organismo e sua concentrao sangunea est
intimamente ligada ao da insulina.
Aps uma refeio rica em carboidratos, a glicose que absorvida para o sangue causa uma rpida
secreo de insulina. Esta, por sua vez, provoca a captao, armazenamento e uso rpido da glicose
por quase todos os tecidos corporais, porm especialmente pelos msculos, tecido adiposo e o fgado.
Valores elevados de glicose ocorrem nos vrios tipos de diabetes primrias, nos estados de intolerncia
glicose e nas diabetes secundrias a vrias doenas (hipertireoidismo, hiperpituitarismo,
hiperadrenocorticismo, etc).
Valores diminudos de glicose ocorrem nas hipoglicemias que tm vrias causas. Quando a ocorrncia
de sintomas de hipoglicemia relacionada alimentao, duas formas de hipoglicemia podem ser
definidas, hipoglicemia do jejum e hipoglicemia ps-prandial.
As causas mais comuns de hipoglicemia do jejum so: hiperinsulinismo endgeno (insulinoma e
sulfonilurea), hiperinsulinismo exgeno (factcio), tumores extra pancreticos, sndrome auto imune
(formao espontnea de anticorpos para receptores da insulina), insuficincia supra renal e ou
hipofisria, doena heptica grave e alcoolismo.
A hipoglicemia ps-prandial, dependendo da histria clnica e da resposta ao teste oral de tolerncia a
glicose, classificada em: 1) hipoglicemia alimentar; 2) hipoglicemia do diabtico tipo 2 e do paciente
com intolerncia glicose; 3) hipoglicemia funcional ou reativa.
LINEARIDADE
A reao linear at 500 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com soluo de NaCL 150
mmol/L (0,85%) e realizar uma nova determinao. Multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio
empregado.
LIMITAES DO MTODO
Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e
outros procedimentos diagnsticos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1- GLICOSE-PP, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica.
Elaborado por:
Aprovado por:

Nome
Gustavo Nantes

Assinatura

Data
03/10/2016
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Razo:

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Nmero
Cpias

Destino