VALOR DE HEMOGLOBINA

INTRODUCCIN
La hemoglobina es una protena conjugada, la cual proporciona el color rojo de la
sangre. Se encarga de llevar el oxgeno a los tejidos y participa en el transporte
del CO2 para el equilibrio cido-base. La porcin porfirnica de la hemoglobina es
una protoporfirina IX, la cual combinado con Fe(II) constituye el grupo heme; este
ms la parte proteica (globina) constituye la hemoglobina.
Existe una amplia variedad de tcnicas para cuantificar a la hemoglobina, entre las
que destacan: determinacin de su contenido de Fe, espetrofotometra,
refractometra, gasometra, etc.
El mtodo de cianometahemoglobina es el mtodo recomendado por el Comit
Internacional para la Estandarizacin en Hematologa y las ventajas que ofrece
este mtodo son:
Existen soluciones estndar certificadas de cianometahemoglobina (HbCN) con
una estabilidad mayor de un ao.
El espectro de absorcin de (HbCN) permite efectuar lecturas en la regin del
visible en cualquier tipo de fotmetro ya que representa un mximo de 540 nm y
las soluciones de (HbCN) siguen la ley de Beer a esta longitud de onda.
FUNDAMENTO
El Fe (II) es oxidado a Fe(III) por accin del ferricianuro y por lo tanto la
hemoglobina se convierte en metahemoglobina, la cual se combina con cianuro
para producir la cianometahemoglobina (CNHb) que es estable y se puede medir
en la regin de 530-550 nm. La hemoglobina, oxihemoglobina, metahemoglobina y
carboxihemoglovina es decir todas las formas de hemoglobina y presentes son
transformadas en cianometahemoglobina excepto la sulfohemoglobina.
OBJETIVOS:

Realizar una curva de calibracin de cianometahemoglobina.

Valorar las concentraciones de hemoglobina en sangre total.
Distinguir valores normales de patolgicos.

PROCEDIMIENTO
Material:
Tubos de ensayo de 13x100 mm
Pipetas de 1.0 mL
Pipetas de 5.0 mL
Pipetas de Sahli (0.02 mL)
Boquilla
Gradilla

Celdas de 1 cm de dimetro
Material biolgico:
Sangre capilar o venosa con anticoagulante.
Equipo:
Espectrofotmetro o fotmetro
Reactivos:
Solucin de EDTA al 10%
Reactivo de Drabkin
Solucin estndar de cianometahemoglobina 80 mg/gl
Etanol al 70%
Toxicidad se sustancias:
El reactivo de Drabkin y la solucin estndar de (HbCN) contiene derivados de
cianuro los cuales son txicos; sin embargo; las concentraciones de estos estn
por debajo de la dosis letal referido a un litro de solucin. Se recomienda utilizar
perillas de seguridad para pipetear estas soluciones y no ingerir alimentos durante
la prctica; al finalizar la determinacin es necesario lavarse las manos.
Tcnica
B
Solucin
estndar de
(HbCN)(mL)
Reactivo de
Drabkin
mL
Concentraci
n g/dl
Moles/L

Curva Estndar
1
2

0.0

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

5.0

4.0

3.0

2.0

1.0

0.0

Agitar cuidadosamente despus de la adicin de cada reactivo, dejar reposar 10

minutos, leer la absorcin o el % de transmitancia contra el blanco de reactivos a
540 nm.
Trazar la grfica en papel milimtrico o semilogartmico segn sea el caso};
colocando en el eje de las abscisas la concentracin en g/dl y en el eje de las
ordenadas las lecturas de la absorbancia o % de transmitancia.
Muestra Problema:

1) Colocar en el tubo de 13x100 mm, 5 mL de reactivo de Drabkin.

2) Homogenizar perfectamente la muestra.
3) Empleando una boquilla, tomar con la pipeta de Sahli 0.02 mL de sangre,
aforar cuidadosamente y limpiar la sangre adherida en el exterior de la
pipeta.
4) Transmitir el volumen de muestra al tubo que contiene el reactivo de
Drabkin y mezclar cuidadosamente. Enjuagar 3 veces la pipeta en la
dilucin.
5) Dejar reposar durante 10 minutos y leer contra un blanco de reactivos
(reactivo Drabkin). Interpolar las lecturas en la curva de calibracin. La
reaccin es estable un mnimo de 2 horas.
Clculos
Es necesario aplicar la siguiente frmula para calcular la concentracin de cada
uno de los tubos de la curva de calibracin.
g/dl de Hb =

( mLdel estndar )( concentracin del estndar )

251
mL totales

Valores de referencia.
Hombres
Mujeres

15.4-17.6 g/dl
13.6-15.6 g/dl

VALOR DE HEMATOCRITO
INTRODUCCIN
El hematocrito representa la proporcin de glbulos rojos en la sangre circulante.
Este valor depende de nmero de hemates de sangre perifrica, de la forma y
tamao de los mismos. Al igual de la hemoglobina y la cuenta de eritrocitos, el
hematocrito es uno de los parmetros importantes para determinar los ndices
eritrocticos (VGM, CMHG).
FUNDAMENTO
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresado como un porcentaje del
volumen de sangre total existente en una muestra. Es determinado en sangre
anticoagulada por medio de centrifugacin y es expresado como volumen de
eritrocitos por unidad de volumen.
OBJETIVOS:

Explicar los fundamentos de las tcnicas de hematocrito.

Evaluar su importancia diagnstico.

PROCEDIMIENTO
Material:
Tubos de ensayo de 13x100 mm
Tubos de Wintrobe graduado
Pipetas Pasteur con bulbo
Capilares
Plastilina
Material biolgico:
Sangre capilar o venosa con anticoagulante
Equipo:
Centrfuga
Disco lector de hematocrito.
Reactivos:
Anticoagulante EDTA al 10%
Tcnica Macrohematocrito:
a) Homogenizar perfectamente la muestra de sangre.
b) Con una pipeta Pasteur llenar con sangre un tubo de Wintrobe hasta la
marca superior 10, evitar la formacin de espuma, no debe quedar ninguna
burbuja de aire dentro de la columna o en el fondo.
c) Centrifugar a 3600 rpm durante 30 minutos.

d) La lectura se realiza en la lnea de separacin superior de la columna de

glbulos rojos, donde empieza la de glbulos blancos, haciendo la referencia
a la escala ascendente del lado derecho. Cada lnea de la escala equivalente
a 1%.
Tcnica de microhematocrito
a) Se llenan con sangre proveniente del tubo de la muestra, las 2/3 partes de
dos tubos capilares. Puede hacerse tambin a partir del punto de puncin
con dos capilares heparinizados.
b) El extremo vaco se cierra a la flama o con plastilina efectuando un
movimiento de rotacin.
c) Colocarlos en los canales o surcos radiales de la centrfuga (cabezal
ranurado con numeracin para colocar los capilares) con el extremo cerrado
dirigido hacia fuera, centrifugar a 12,000 rpm durante 5 minutos.
Clculos
Calcular el % del paquete eritrocitario midiendo la altura (M 2) con relacin al
volumen total de la muestra (M1).
M1 100%
M2 x%
Valores de referencia:
Varones
47%
Mujeres
42%
Nios
35%
Recin nacidos
56%