Histoquimica Manual

MANUAL PRACTICO PARA
COLORACIONES ESPECIALES
HISTOQUIMICA
Lic. T. M. Oliver David Ortega Vargas

Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen.
1
12 Nov. 2011
COLORACIONES ESPECIALES
Reactivos y solucione empleadas en Histoqumica .. 5 12
1. PAS. .. 13
2. PAS con diastasa.. 15
3. Masson. 16
4. Reticulina.. 18
5. Rojo congo.. 20
6. Alcian Blue .......... 22
7. Coloracin de Perls 24
8. Despigmentacin 25
9. Verhoeff. 26
10. Methenamine 27
11. Giemsa 29
12. Fontana Masson . 30
13. Mtodo Von Kossa. . 31
14. Van Giesson33
15. Ziehl Neelsen 34
16 Gram. 35
17 Grocott . .. 36
18 Warthin Starry 37
INTRODUCCIN
En los estudios de biopsias y muestras de autopsias con el microscopio de luz
compuesto y los cortes histolgicos se examinan teidos con hematoxilina y
eosina., tejidos incluidos en parafina slida y de los cuales se obtienen los
cortes histolgicos de 2 a 4 micras, que se tien con hematoxilina eosina y
luego se montan sobre una laminilla cubre objeto
A partir de aqu el Mdico Antomo Patlogo realizar un diagnstico ptico
con ayuda del microscopio donde le permitir realizar un diagnstico adecuado
en ms del 80% de los casos. En el 20% restante es necesario utilizar tcnicas
complementarias como microscopa electrnica, inmunohistoqumica o biologa
molecular aplicada a histopatologa.
De todo esto se tendrn que solicitar en el Laboratorio de Anatoma Patolgica
las llamadas Coloraciones especiales Histoqumica, que son preparaciones
histolgicas pueden teirse con otros colorantes para identificar estructuras
especiales como fibras elsticas, colgeno, secreciones o pigmentos .
EJEMPLOS DE TINCIONES HISTOQUIMICAS ESPECIALES
Tincin especial
Estructuras o componentes
identificados
van Gieson
colgeno y msculo liso
Fontana-Masson
melanina, argentafinidad
Perls
hierro
Tricrmica de Masson
Fibras colgenas
Coloracin de Wilders
Fibras reticulares
Zieel Neelsen
BK
Giemsa
Germenes
PAS
glicgeno, mucopolisacridos neutros
azul alciano
mucopolisacridos cidos
Verhoeff
colgeno, fibras elsticas
Gram
bacterias
Rojo de congo
amiloide
La histoqumica es la aplicacin de reacciones qumicas y bioqumicas en la
tcnica histolgica, con el fin de localizar y determinar de manera cientfica
ciertas sustancias o su actividad.
En todas estas reacciones o bien se tie la sustancia que buscamos los
colorantes reaccionan qumicamente con ella.
Finalmente se usan principalmente para ayudar en el diagnstico de las

enfermedades infecciosas, y pueden tambin ser usadas en el diagnstico del
cncer
OBJETIVOS
1. GENERAL
El objetivo general de este manual prctico es el de compartir
conocimientos tanto tericos como prcticos sobre la histoqumica y las
coloraciones especiales comn mente utilizadas en el laboratorio de
Anatoma Patolgica en forma sencilla paso a paso.
2. ESPECIFICO
Contribuir en la capacitacin de aquellas personas relacionadas al rea
de Anatoma Patolgica : Profesionales, en sus diferentes especialidades,
tecnlogos, Bilogos, Tcnicos y personas que de alguna u otra manera
estn involucrados en el rea de la histotecnologa , que quieran lograr en
forma prctica conocer y desarrollar las diferentes coloraciones especiales
y asi mismo la preparacin de nuestros propios reactivos , los cuales
contribuyen al xito de una buena coloracin.
Interpretar el fundamento de las coloraciones en la prctica
Ejercitar las tcnicas de coloracin simple y compuesta.
Practicar la preparacin de coloraciones de uso a partir de soluciones
Madre .
REACTIVOS Y SOLUCIONES EMPLEADOS EN

HISTOQUIMICA
0.1
Acido actico 3%:

Acido actico glacial ------------3ml
Agua destilada----------------------97ml
0.2
Acido clorhdrico 20%:

Acido clorhdrico HCl------------- 20ml
Agua destilada H2Od --------------80ml
0.3
cidos fosfotngsticos fosfomolbdicos:

Acido fosfomolibdico---------------1g
Acido fosfotungstico----------------1g
Agua destilada------------------------40ml
0.4
Acido oxlico 1%:

Acido oxlico------------------------- 1g
Agua destilada------------------------100ml
0.5
Acido perydico 1%:

Acido perydico---------------------1g
Agua destilada-----------------------100ml
0.6
Acido Pcrico solucin saturada:

Acido Pcrico------------------------2g
Agregar sales de cido pcrico hasta que la solucin se sature no
disuelva la sal.
0.7
Agua amoniacal: 0,5%

Hidrxido de Amonio concentrado--- 5ml
5
Agua destilada----------------------------- 1000ml
0.8
Alcian blue 1%:

Alcian blue 8GX--------------------1g
Acido Actico 3%------------------100ml
Ajustar el pH 2,5, dejar sedimentar y agregar algunos granos de Thimol.
0.9
Alcohol acido 1%:

Acido clorhdrico HCl-------------1ml
Etanol corriente--------------------99ml
0.10 Alcohol alcalino:

Solucin de Hidrxido de Sodio1%----1ml
Etanol 50%------------------------------------100ml
0.11 Azul de anilina:

Azul de anilina---------------------- 2,5g
Acido actico glacial--------------- 2 ml
Agua destilada----------------------- 100ml
0.12 Azul de metileno: (BK)
Azul de metileno-------------------- 0,5 g
Agua----------------------------------- 100 ml
Acido actico concentrado------ 0,5 ml
0.13 Azul de Toluidina:
Azul de toluidina-------------------- 0,5 g
Agua destilada----------------------- 10 ml
0.14 BK o COLORACIN DE ZIEHL-NEELSEN :
Solucin de KINYOU
Fucsina bsica ------------------------ 4g
Fenol cristal disuelto ----------------- 8g
Alcohol 95 ------------------------------ 20 ml.
Agua destilada -------------------------100 ml.
La fucsina se disuelve en alcohol y el fenol en agua, dejar a
temperatura ambiente. Filtrar antes de usar.
0.15 SOLUCION FUCSINA FENICADA BK METODO FITE MODIFICADO
6
Acido carblico o fenol ---------------2.5 ml

Alcohol absoluto ----------------------- 5 ml
Fucsina bsica ------------------------- 0,5 g
Agua destilada ------------------------- 50 ml
La fucsina se disuelve en alcohol y el fenol en agua, dejar a

temperatura ambiente. Filtrar antes de usar.
0.16 Brax 5%: es el nombre comercial de la sal de Boro.

Brax------------------------------------ 1.25g
Agua destilada------------------------ 25ml
0.17 Bouin:
Acido actico glacial------------------ 5ml
Formol 40%-----------------------------25ml
Acido pcrico solucin saturada---75ml
0.18 Cloruro Frrico 2%, 10%,
Cloruro Frrico----------------------2g
2%
Cloruro Frrico---------------------10g
10%
0.19 Cloruro de oro al 2 %

Solucin cloruro de oro al 1% -------- 20 ml
Agua destilada ----------------------------- 80 ml
0.20 Escarlata de Biebrich solucin al 1%:

Escarlata de Biebrich---------------1g
0.21 Escarlata de Biebrich: (Masson)
Solucin de Escarlata de Biebrich 1%-----90ml
Solucin de fucsina cida 1%-----------------10ml
Acido actico glacial----------------------------- 1ml
0.22 Ferrocianuro de potasio 10%:
Ferrocianuro de potasio-----------10g
Solucin estable por dos semanas a ms en frasco mbar.
0.23 Formol 20%, 30%:

Formol-------------------------------20ml
20%
Formol------------------------------- 30ml
30%
0.24 Fucsina cida 1%:

Fucsina cida------------------------1g
0.25 Giemsa, solucin Stok

Giemsa en polvo ------------------- 1g
Alcohol metlico --------------------- 80 ml
Glicerina c.s.p. ----------------------- 20 ml
PROCEDIMIENTO .
a) En un matraz colocar 80 ml de metanol y 20 ml de glicerina,
agregando 1 g. de Giemsa.
b) Calentar el lquido a 60C en Bao Mara sin dejar de agitar.
c) Una vez fro se filtra y se recoge en un frasco seco y limpio que se
tapa hermticamente.
d) La glicerina debe tener un peso especfico de 1,25 y su contenido de
agua no debe exceder el 1,5 %.
NOTA : La solucin madre debe conservarse en frasco bien tapado
pues la evaporacin del metanol como la hidratacin dela
glicerina determina una precipitacin de la materia colorante.
Giemsa solucin de Trabajo:
Solujcin Stok de Giemsa ---------------- 5 gotas
Agua destilada ------------------------------ 5ml
Acido actico ---------------------------------3 gotas
0.26 GRAM,
0.27 Hematoxilina alcohlica:
Hematoxilina----------------------10g
Alcohol absoluto------------------100ml
0.28 Hematoxilina de Harris: ( 1 lt )
Hematoxilina en cristales ----------------- 5g
Alcohol absoluto ----------------------------- 50 ml
Sulfato de alumbre y potasio ------------- 100 g
Oxido amarillo/rojo de mercurio ---------- 2,5 g
Agua destilada -------------------------------- 1000 ml.
8
PREPARACION .
a) Disolver la hematoxilina en el alcohol y el alumbre en agua
destilada ayudado por calor.
b) Quitar del calor y mezclar las dos soluciones.
c) Hacer hervir rpidamente
d) Quitar del calor y agregar el Oxido amarillo de mercurio
lentamente.
e) Hacer hervir por 3 5 minutos hasta que tome color rojo morado
a oscuro.
f) Quitar de la llama y hacer enfriar.
g) Aadir 40 ml de cido actico glacial.
h) Filtrar antes de usar, estable por 6 meses.
0.29 Hematoxilina Weigerts:

Solucin A:
Hematoxilina ---------------------------- 1g
Alcohol absoluto ---------------------- 100ml
Solucin B:
Cloruro Frrico 29%------------------- 4 ml
Agua destilada -------------------------- 95 ml
Acido Clorhdrico concentrado-------1ml
Antes de usar mezclar partes iguales de solucin A y B.
Mezclar la Solucin A y Solucin B en una proporcin 1:1 al momento de
usar.
0.30 Hidrxido de sodio 1% (solucin):
Hidrxido de sodio-----------------1g
1%
Hidrxido de Sodio-----------------0.15g
0.31 Methanamine al 3%:
Methanamine--------------------------- 3 g
0.32 Nitrato de Plata al 5%:
Nitrato de Plata AgNO3----------------- 5g
0.33 Nitrato de Plata 10 % (Wilders):
Nitrato Plata ------------------------- 10 g
Agua destilada ---------------------- 100 ml
Colocar en frasco oscuro y aguardar en la oscuridad.
0.34 Solucin de trabajo de Plata-Methanamine

Solucin methanamine al 3%------ 50 ml
Nitrato de plata al 5 % -------------- 2,5 ml
Brax 5%--------------------------------- 6 ml
0.35 Permanganato de Potasio al 0.5%:

Permanganato de Potasio----------0.5g
0.36 Reactivo de shiff:
Agua destilada------------------------ 96 ml
Fucsina bsica ----------------------- 1 g
Sulfito de sodio anhidro------------ 2,5 g
Acido clorhdrico q.p. -------------------- 4 ml.
Carbn activado --------------------------- 2 g
PREPARACION:
Forrar un baln o fiola con papel carbn o papel platino para cubrir de la
luz. Colocar los 96 ml de agua destilada y agregar la fucsina bsica ,
mezclar.
Adicionar los 2,5 g de sulfito de sodio anhidro y mezclar.
Agregar los 4 ml de cido clorhdrico q.p. , mezclar por dos minutos ,
luego descansar por 4 minutos hasta llegar a los 20 minutos.
Adicionar los 2 g de carbn activado, mezclar durante 5 minutos.
Finalmente filtrar el contenido con doble papel filtro en un recipiente
cubierto de la luz.
Envasar en un frasco mbar gotero o en uno cubierto de la luz,. Todo
este filtrado deber ser totalmente transparente.
NOTA:
Guardar en refrigeracin.
0.37 Rojo congo: ( 1 % )
Rojo Congo--------------------------- 1g
0.38 Rojo Rpido: (Kernechtrot)

Rojo Rpido--------------------------------------1g
Solucin de Sulfato de Amonio 5%-------100ml
Calentar hasta hervir lentamente. Dejar enfriar, filtrar y aadir granos de
Thimol como preservante.
10
0.39 Sulfato frrico amoniacal 3%:

Sulfato Frrico amoniacal----------3g
0.40 Solucin estable de tintura de yodo:
Yodo------------------------------------- 7,5 g
Yoduro de Potasio--------------------- 5 g
Agua destilada-------------------------90 ml
Alcohol absoluto-----------------------10 ml
0.41 Solucin Yodada para Verhoeff:

Yodo ------------------------------------ 7,5 g
Yoduro de Potasio ------------------- 4 g
Agua destilada ----------------------- 100 ml
0.42 Solucin de Plata Amoniacal ( Reactivo de Wilder ):.

Nitrato de Plata 10%----------------- 5 ml
Amoniaco concentrado------------ 0,4 ml
Hidrxido de sodio al 3 % ---------- 5 ml
PREPARACION:
a) En un matraz agregar 5 ml de Nitrato de plata al 10 % y con la ayuda
de una pipeta de vidrio adicionar unas gotas de Amoniaco
concentrado ( esto har de que la solucin tome un color opaco y
precipitado)
b) Continuar adicionando gota a gota Amoniaco concentrado, hasta
que la solucin vuelva a tomar un tono transparente se requiere
alrededor de 0,4 ml de amoniaco.
c) Luego aade 5 ml de NAOH al 3 % ( esto har que el medio
transparente torne nuevamente a un color turbio u opaco).
d) Aadir gota a gota el amoniaco concentrado agitando el matraz,
hasta que la solucin quede totalmente transparente.
e) Finalmente aforar a 50 ml con agua destilada y almacenar en
refrigeracin.
o Se recomienda el uso de papel filtro en el momento de aadir
el reactivo al tejido. Solucin estable 15 a 20 das.
0.43 Solucin de Sulfato de Amonio 5%:
Sulfato de Amonio------------------5g
0.44 Solucin Thiosulfato de sodio 5%:
11
Thiosulfato de Sodio-----------------5g
0.45 Solucin de Van Giesson:
Fucsina cida 1%----------------------- 5ml
Acido pcrico solucin saturada----95ml
0.46 Solucin Alumbre de hierro sulfato frrico amnico al 2 %
Sulfato frrico amnico ---------------- 2 g
Agua destilada --------------------------- 100 ml.
0.47 Solucin de Verhoeff :

Hematoxilina 0,5 g disuelto en 5 ml de alcohol absoluto--------- 5ml
Cloruro frrico al 10 % ------------------------------------------------------ 5ml
Mezclar bien y aadir Solucin yodada de Verhoeff --------------- 5ml
0.48 Solucin de Fontana Masson.
a) 20 ml de Nitrato de plata al 10% agregar amoniaco. Este causar un
precipitado color marrn oscuro.
b) Contine agregando gota a gota el amoniaco hasta que la solucin
aclare, agitando vigorosamente para disolver el precipitado .
c) Aadir nuevamente el nitrato de plata al 10% gota a gota hasta que
aparezca una discreta turbidez permanente.
d) Dejar toda la noche en la oscuridad, filtrar.
e) Coger 20 ml del filtrado y diluirlo con 40 ml de agua destilada.
0.49 Verde Claro
Verde claro SF amarillento ----------------------- 0,2 g
Agua destilada --------------------------------------- 100 ml
Acido actico glacial -------------------------------- 2 ml
Solucin de trabajo:
Solucin Stock ------------------------------------ 10 ml
Agua destilada ------------------------------------ 50 ml
0.50 Solucin saturada de cloruro de sodio en etanol.
Etanol de 80 % ---------------------------------- 1000 ml
Cloruro de sodio c.s.p saturar ---------------g.
.
0.51 Solucin de rojo de Congo en cloruro de sodio saturado.
Rojo de Congo ------------------------------------ 1 g
Solucin cloruro de sodio saturado ----------- 100 ml
0.52 Hidrxido de sodio al 1%.
Hidrxido de sodio -------------------------------- 1 g
Agua destilada ------------------------------------- 100 ml
12
COLORACIONES
HISTOQUMICAS
PAS: ACIDO PERIODICO-SCHIFF
FUNDAMENTO:
Consiste en oxidar los tejidos mediante el cido peridico (HIO4) para
incrementar el nmero de grupos carbonilo (aldehdo o cetona) presentes en
ellos, de forma que puedan ser demostrados posteriormente mediante reactivo
de Schiff.
Los hidratos de carbono contienen grupos carbonilos relativamente aislados, en
una proporcin aproximada de uno por molcula de monosacrido.
Precisamente por ello es necesario oxidarlos con el fin de incrementar dichos
grupos, que solo pueden ser detectados por el reactivo de Schiff si se
encuentran situados en carbonos contiguos y delimitados por grupos
alcohlicos o amino.
Para los grupos aldehidos que aparecen en posicin 1,2 glicol estas
condiciones se cumplen exclusivamente tras la oxidacin de los
correspondientes radicales hidroxilo.
Los hidratos de carbono o glcidos son polialcoholes oxidados
(polihidroxicetonas o polialdehidos). Los polisacridos son glcidos formados
por la unin de varios monosacridos (mas de 10). Entre los polisacridos
adems de los polisacridos simples como el glucgeno destacan los
polisacridos complejos.: Mucopolisacaridos (Mucopolisacaridos neutros y
Mucopolisacaridos cidos). Mucoprotenas y Mucolpidos.
APLICACION
La coloracin de PAS se utiliza principalmente para identificar glicgeno en
el tejido, y tambin macromolculas de carbohidratos (glucgeno, glicoprotena,
proteoglicanos), que se encuentran habitualmente en tejidos conectivos, moco,
y laminas basales. La coloracin PAS es tambin usada para identificar
eritroleucemias, en la leucemia de clulas rojas inmaduras estas colorearan
fucsia claro.
Esta tcnica tie de color violeta las mucosustancias neutras; tie las
clulas caliciformes intestinales utilizndose por ejemplo para poner en
evidencia la metaplasia intestinal en el esfago de Barret.
Se utiliza tambin para demostracin de produccin de mucina por las
clulas tumorales de una neoplasia epitelial poco diferenciada (que no forma
glndulas) permitiendo su tipificacin como carcinoma p.e en el carcinoma
difuso de clulas en anillo de sello gstrico
13
Tambin es til para la demostracin de glucgeno; tie membranas

basales; pone de manifiesto de manera evidente la mayor parte de y parsitos;
se utiliza en la demostracin de material derivado de membranas basales,
como en el carcinoma adenoide-qustico o de cristales intracitoplsmicos, como
en el sarcoma alveolar de partes blandas, tumor de clulas granulares.
Tambin es til en la demostracin de diversos acmulos intracelulares por
defectos genticos en enfermedades metablicas como por ejemplo acmulos
de alfa 1 antitripsina en las clulas hepticas en la enfermedad de dficit de
alfa 1 AT, aunque la inmunohistoqumica, cuando se dispone de ella, es ms
sensible y especfica; etc.
Procedimiento:
1. Desparafinar e hidratar
2. Incubar con acido peridico 20 minutos
3. Lavar con agua destilada.
4. Incubar con reactivo de Schiff 5 10 minutos
6. Incubar en agua temperada por 2 minutos (viraje)
7. Contrastar con Hematoxilina Harris 30 segundos
8. Lavar con agua, diferenciar y virar
9. Lavar
10. Deshidratar , aclarar y montar.
Resultado: glicgeno mucinas y algunas membranas basales de rojo a

prpura. Hongos de rojo a prpura y ncleos azules.
Controles: bx colon, estomago, hgado.
Compuestos PAS +
1. polisacridos simples: como el glucgeno y la celulosa.
2. Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio gstrico, en
glndulas del duodeno y en cpsulas bacterianas, tambin en intestino y
estmago.
3. mucoprotenas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del rbol
respiratorio o bronquial, tambin la tiroglobulina que est en el tiroides y
la hormona estimulante.
14
4. Glucoprotenas del suero

5. Glucolpidos: como los ganglisidos y cerebros idos.
Compuestos PAS
Los mucopolisacaridos cidos no pueden ser oxidados por el cido
peridico y por eso son PAS (ya que no aparecen los grupos carbonilos)
PAS -DIASTASA
PAS-diastasa es una coloracin histolgica frecuentemente usada como un

control negativo para el glicgeno. La diastasa es una enzima que rompe el
glicgeno y el PAS es una coloracin que colorea de color magenta en
presencia de glicgeno. Cuando ambas son usadas un color rosado bajo
reemplaza el magenta. La diferencia en la intensidad de ambas coloraciones
(PAS y PAS-D) puede ser atribuida a la concentracin de glicgeno.
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
Desparafinar e hidratar
Incubar con diastasa por 15 minutos
Lavar con agua corriente por 10 minutos
Seguir con el protocolo de PAS.
PAS
PAS VERDE
15
TRICROMICA DE MASSON
FUNDAMENTO :
Primeramente, se tien las secciones con un tinte cido tal como escarlata de
Biebrich. Todos los elementos acidfilos del tejido tales como el citoplasma, el
msculo y el colgeno se unirn a los tintes cidos. Las secciones entonces se
tratan con cido fosfotngstico y/o fosfomolbdico. Ya que el citoplasma es
mucho menos permeable que el colgeno, los cidos fosfotngsticos y
fosfomolbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno
pero no del citoplasma. Los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos tienen
numerosos grupos cidos que probablemente acten como medio de unin
entre el colgeno y el azul de la anilina, que es el tinte del colgeno.
Probablemente, el pH de la solucin fosfotngstico/fosfomolbdico tambin
aumente la coloracin y ayude al colgeno en la difusin o el retiro de los
colorantes.
APLICACIN :
Se utiliza para identificar el tejido muscular, fibras de colgeno y
eritrocitos en muestras de tejido; el principal valor de este tipo de tincin es la
evaluacin del tipo y cantidad del material extracelular. Las tres estructuras
titulares demostradas por los tres colorantes que componen la tincin son:
ncleo, citoplasma y colgena extracelular. La tincin tricrmica de Masson se
utiliza con frecuencia para demostrar una deposicin aumentada de colgeno
asociada a la sustitucin de tejido funcional por tejido de cicatrizacin. Esto
resulta til para el diagnstico de la esclerosis, en la cual un colgeno
engrosado sustituye al tejido normal provocando la disfuncin del hgado. La
tincin tricrmica de Masson tambin es ms adecuada para demostrar el
tejido muscular que la tincin con hematoxilina y eosina.
Como su nombre indica, se emplean tres colorantes que colorean
selectivamente los msculos, las fibras de colgeno, fibrina y eritrocitos.
Procedimiento:
*Hematoxilina Weight
Solucin A 1:1 Solucin B
2. Sobrefijar con la solucin de Bouin a 60C por 15 minutos
16
3. Lavar con agua que corre por unos minutos hasta que salga la
coloracin amarilla del fijador.
4. Agregar a la lmina Hematoxilina Harris por 10 minutos.
5. Lavar con agua que corre por 2 minutos.
6. Agregar a la lmina Escarlata de Biebrich por 10 minutos.
7. Lavar con agua.
8. Agregar la solucin de cidos fosfotungsticos y fosfomolibdico por 5
minutos
9. Lavar.
10. Agregar el azul de anilina por 3 - 5 minutos.
11. Lavar con agua destilada
12. Deshidratar, aclarar y montar.
Control: tero, intestino delgado, hgado, apndice o trompa de Falopio.
Resultado:
Fibras musculares:............Rojo
Fibrina:..............................Rosa
Colgeno:..........................Azul
Ncleos:............................Azul o negro
Eritrocitos: .........................Rojo
MASSON EN RION
MASSON EN HIGADO
17
RETICULINA
Las fibras reticulares estn constituidas fundamentalmente por colgeno de tipo

III, se diferencian de las tipo I en sus cadenas alfa. Son ms delgadas 0,1 a 1,5
m, ms glicosiladas (poseen ms hidratos de carbono). No se colorean en los
cortes de H-E. Se tien al MO con tcnicas argnticas (tcnicas que utilizan la
precipitacin de sales de plata sobre estructuras tisulares especficas) en
donde aparecen en color negro, mientras que las colgenas se tien de
marrn.
A diferencia de las colgenas, las reticulares forman delicadas redes en vez de
haces.
APLICACIN :
La coloracin de reticulina se emplea para identificar una forma primitiva
de tejido conjuntivo denominada reticulina. Este procedimiento emplea una
solucin de nitrato de plata amoniacal para teir las fibras de reticulina
presentes en el tejido. A continuacin, se reduce la plata para producir una
coloracin negra de las fibras, que quedan visibles mediante microscopio
ptico. Se evidencian las fibras de reticulina y material de membrana basal. Las
fibras de reticulina consisten en fibras finas constituidas principalmente por
colgeno tipo III.
Tradicionalmente, antes de la llegada de la inmunohistoqumica, la
aplicacin ms importante de estas tcnicas (tal como la tcnica de Gomori)
era la distincin entre carcinomas y sarcomas basndose en la distinta
distribucin de las fibras de reticulina segn englobaran grupos de clulas
(carcinoma) o rodearan individualmente cada clula (sarcomas). Hoy en da se
sigue utilizando la tincin de las fibras de reticulina en patologa heptica para
evidenciar la desorganizacin arquitectural trabecular y en estudios de mdula
sea para poner de manifiesto mielofibrosis incipiente (fibrosis reticulnica)
negativa en fases iniciales para tincin de colgeno.
Procedimiento:
1. Desparafinar e hidratar.
2. Agregar Permanganato de Potasio al 0.5% por 5 minutos.
4. Agregar Acido Oxlico al 5% por 2 minutos.
6. Agregar sulfato Ferrico Amonical al 3% por 3 minutos.
8. Agregar la Solucin de Plata de Wilder por 2 minutos.
9. Lavar con agua destilada rpidamente.
18
10. Agregar Formol al 2%

12. Agregar cloruro de oro 1 minuto (OPCIONAL, sirve para limpiar)
14. Contrastar con Van Giesson por 1 minuto.
15. No lavar. Secar con un papel y montar.
Control: Hgado, bazo o nodo linftico

Resultado: fibras de reticulina color
Reticulita: negro.
Ncleos: grisceo.
Colgena: prpura-grisceo.
19
ROJO DE CONGO
Este mtodo utiliza una solucin alcalina del colorante Rojo de Congo con la
finalidad de eliminar tinciones de sustancias diferentes al amiloide.
Reactivos :
A : Solucin alcohlica de cloruro-hidrxido de sodio.
a) Solucin Stock.
Solucin saturada de cloruro de sodio en alcohol etlico al 80 %.
b) Solucin de Trabajo.
Solucin Stock ---------------------------- 50 ml
Solucin hidrxido de Na 1% ---------- 0,5 ml
o Mezclar y filtrar. Esta solucin se prepara 15 minutos antes de
usarla.
B Solucin de Rojo de Congo alcalino.
a) Solucin Stock
Solucin saturada de rojo de Congo en solucin en solucin saturada
de cloruro de sodio en alcohol etlico al 80 %. ( 1g Rojo congo)
b) Solucin de Trabajo
Solucin Stock ----------------------------- 50 ml
Solucin hidrxido de Na 1% ---------- 0,5 ml
o Mezclar y filtrar. Esta solucin se prepara 15 minutos antes de
usarla.
APLICACIN :
El rojo congo es la tcnica ms prctica para demostracin de sustancia
amiloide. Este procedimiento utiliza una solucin alcohlica de rojo Congo, as
como sales para reducir la tincin electroqumica de fondo y refuerza la unin
entre el colorante rojo Congo y los amiloides.
La coloracin con rojo Congo funciona sobre la base de enlaces por
puente de hidrgeno con el componente de hidrato de carbono del substrato. El
amiloide, teido por el rojo Congo, muestra un llamativo bicromatismo bajo la
luz polarizada, los sedimentos muestran sectores verdes luminosos sobre
fondo oscuro, mientras que otros materiales, como colgeno, que tambin son
teidos por el rojo Congo, no muestran este efecto.
Procedimiento:
2. Teir los ncleos con Hematoxilina de Harris 2 min., diferenciar y azular.
20
3. Tratar los cortes con solucin alcohlica de cloruro hidrxido de sodio

(Solucin A) por 20 minutos. Escurrir.
4. Teir con Rojo de Congo alcalino ( Solucin B) por 40 minutos a mas ,
controlar al microscopio.
6. Deshidratar aclarar y montar.
o Puede Ud. , tambin lavar y secar a estufa, luego montar.
Control: caso positivo

Resultado: miloides, colgeno y otros materiales fibrosos: Rosa plido
Ncleos: Azul
ROJO DE CONGO CON PERMANGANATO
ALCIAN BLUE pH 2.5

21
Es un colorante ftalocianina que contiene cobre. Colorea mucopolisacridos

cidos y glicosaminoglicanos
Los mucopolisacaridos cidos son unos polisacridos que no tienen grupos
alcohlicos en posicin 1,2 glicol sino grupos cidos carboxilos o sulfatados.
Las tcnicas para determinar mucopolisacridos cidos son principalmente:
a) Azul Alcin
b) Reaccin Metacromtica
se ha comprobado que usando el azul alcin en condiciones de pH en torno a
2,4 -2,6 se colorean los mucopolisacridos cidos sulfatados y los carboxlicos.
Si por el contrario se emplea a un pH muy bajo, en torno a 1, slo se
colorea los mucopolisacridos sulfatados, los carboxlicos no se tien.
Si se sigue disminuyendo el pH hasta 0,5 se incrementa la selectividad de la
tincin y en este caso slo se tien los mucopolisacridos fuertemente
sulfatados
APLICACIN :
Esta coloracin permite identificar los mucopolisacridos cidos y
mucosustancias. Las cantidades excesivas de mucosustancias acidas nosulfatadas se observan en los mesoteliomas. Ciertas cantidades se producen
normalmente en las paredes de los vasos sanguneos, pero incrementan en
lesiones tempranas de aterosclerosis. Este mtodo se basa en la competencia
de los iones de magnesio con alcian blue por los sitios de unin sobre los
mucopolisacridos; a mayor concentracin de iones magnesio mayores sitios
de unin estarn bloqueados para unirse con el alcian blue.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Incubar en acido Actico al 3% durante 3 minutos.
Decantar.
Incubar con Alcian Blue al 1% por 30 minutos.
Lavar con agua
Contrastar con Rojo Neutro (rojo rpido) 1minuto.
Lavar
Deshidratar y montar
Resultado: Mucopolisacridos cidos se observan de color azul y los

ncleos de color rojo; el citoplasma rosa plido.
Controles: Bx de colon y cordn umbilical.
Intestino, apndice y colon.
22
Resultados:
Azul alcin a pH 2,5 los mucopolisacaridos cidos (carboxilos y

sulfatos) se tien de azul.
Azul alcin a pH 1 slo se tien de azul los mucopolisacaridos
cidos sulfatados.
Azul alcin a pH 0,5 slo se tien de azul los mucopolisacaridos
cidos fuertemente sulfatados.
NOTA :
Si desea preparar azl alcian a pH 1 , diluir 0,1 ml de colorante azl
alcian 1% en 10 ml de HCl 0,1 N.
23
AZUL DE PRUSIA, FIERRO, O PERLS
En el interior de los tejidos el hierro se puede depositar de 2 formas:

1.
En forma inica, o formando sales ferrosas y ferricas, por lo general
en forma de cloruros o hidrxidos.
2.
Como hierro ligado a protenas.
La tcnica del azul de Perls es la de mayor importancia para detectar
hierro, ya que el hierro ferrico es el ms frecuente en los tejidos. El
fundamento de esta tcnica se basa en la propiedad que tiene el
ferrocianuro potasico, para transformarse en presencia de hierro frrico en
ferrocianuro ferrico, o azul de Prusia por accin del cido clorhdrico que
acta como desencadenante de la reaccin.
Ferrocianuro potsico + HCL
CL3Fe
Ferrocianuro frrico.
APLICACIN :
Esta coloracin se utiliza para visualizar depsitos de iones frricos en
muestras de tejido. Un exceso de hierro depositado en rganos como el
hgado, el bazo y la mdula sea puede ser resultado de una hemocromatosis.
Estos depsitos interfieren en el funcionamiento del rgano afectado y pueden
ser fatales. Este procedimiento se basa en los trabajos de Perl.
La hemosiderina representa las reservas de hierro del cuerpo, el cual se
encuentra en estado frrico; el hierro se puede visualizar por su liberacin de
la hemosiderina con acido clorhdrico, formando cloruro frrico; el hierro
reacciona con el ferrocianuro de potasio para formar ferrocianuro frrico, esto
es un compuesto azul insoluble conocido como azul de Prusia o azul de
Berln, la intensidad del color da una indicacin en cuanto a cantidad, pero es
slo cualitativa. Otras fuentes de hierro frrico tambin sern visualizadas.
Procedimiento
2. Mezclar Ferrocianuro de potasio al 10% en una proporcin 1:1 con la
solucin de HCl al 20%.
3. Agregar la mezcla a la lmina por 30 minutos.
5. Contrastar con Rojo rpido por 1 minuto o con eosina solo segundos.
6. Lavar,
7. Deshidratar , aclarar y montar.
Control: caso positivo.

24
Resultado: Depsitos de Fierro (hemosiderina), algunos xidos y sales de

hierro se observan de color azul, los ncleos y citoplasma de rosado a rojo.
DESPIGMENTACIN DE MELANINA
Procedimiento:
2. Agregar Permanganato de Potasio al 0.25% por 5 minutos.
4. Agregar Acido Oxlico al 5% por 2 minutos (slo hasta que blanquee
completamente).
6. Colorear con H&E.
25
VERHOEFF (Fibras Elsticas)
Es usada para demostrar cambios patolgicos en las fibras elsticas.

Esto incluye atrofia de tejido elstico, adelgazamiento o prdida que puede
resultar en cambios arteriosclerticos, reduplicacin rompimiento o partimiento
que derivan en enfermedades vasculares.
Tambin se usa para demostrar tejido elstico normal, como
identificacin de venas y arterias, para determinar si hay o no invasin de
vasos sanguneos en el tumor. El cloruro frrico y yodo sirven como
mordientes, pero tambin tiene una funcin oxidante que ayuda a convertir la
hematoxilina en hematena, el probable mecanismo de coloracin es que el
colorante se une formando puentes hidrogeno, sin embargo el grupo que
reacciona con la hematoxilina no se ha identificado aun. Este mtodo requiere
que las secciones sean sobreteidas y luego diferenciadas, de modo que es
regresiva. La diferenciacin se logra mediante el uso de mordiente en exceso,
o cloruro frrico, para romper el complejo tejido-mordiente-colorante. El
colorante ser atrado por la gran cantidad de mordiente en la solucin de
diferenciacin y ser removido del tejido. El tejido elstico tiene una mayor
afinidad por el complejo hematoxilina-fierro y retendr el colorante ms que
otros elementos del tejido. Esto permite que los otros elementos sean
decolorados y las fibras elsticas permanezcan coloreadas, el tiosulfato de
sodio ayuda a remover el exceso de yodo y el Van Giesson es el contraste mas
usado pero pueden usarse otros.
Procedimiento:
* Preparar la Solucin Verhoeff: (en proporcin 1:1:1:1) (5GOTAS DE CADA
UNO)
25 ml hematoxilina alcohlica al 10%
25 ml Alcohol absoluto
(100%)
25 ml Cloruro Frrico al 10%
25 ml Solucin yodo
1.
2.
3.
4.
5.
Agregar la solucin de Verhoeff por 1 hora.
Colocar en el bao mara por 10-20m
Diferenciar con cloruro frrico 2% y enjuagar con agua.
Repetir el paso 4 hasta que decolore la coloracin negra viendo al
microscopio que solo las fibras estn negras. (1 o 2 veces mas)
6. Agregar Tiosulfato de sodio 5% por 30 segundos a 1 minuto.
8. Contrastar con Van Giesson por 1 minuto.
9. NO LAVAR, solo secar con papel.
10. Xilol y montar.
Control: Arteria o piel.

Resultado:
26
Fibras elsticas: negras

Fondo: amarillo con fucsia.
Colgeno: rojo a naranja.
Ncleo: azul a negro.
IMPREGNACION DE PLATA METODO GOMORRI METHENAMINE

REACTIVOS :
Solucin de methenamine Gomorri -----------------cido peridico al 2 % ---------------------------------Cloruro de oro -------------------------------------------Thiosulfato de sodio -----------------------------------PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.
5.
Desparafinar en xilol, alcohol hasta hidratar en agua.

Lavar las lminas con agua destilada.
Incubar en Acido peridico 2% por 20 minutos.
Lavar las lminas con agua destilada.
Preparar la solucin de plata de methenamine y poner las lminas en la
solucin de methenamine, incubando en Bao mara de 40 a 1 hora.
Chequear al microscopio el tejido quedar de color marrn a
negro..
6. Lavar con agua destilada y cuando las asas capilares estn color marrn
oscuro , asi como las membranas basales y tbulos con impregnacin
argntica.
7. Sumergir de 5 a 10 veces en coplin que contiene solucin de cloruro de
oro hasta que el tejido deje de ser dorado y tome un color gris a negro.
8. Lavar en agua destilada.
27
9. Cubrir las lminas con thiosulfato de sodio 1 minuto para fijar (opcional).
11. Contrastar con H-E.
RESULTADOS :
Membrana basal -------------------------- marrn oscuro negro.
Hongos ------------------------------------- marrn oscuro - negro
Fondo ------------------------------------ rosado plido.
Hemates -------------------------------- amarillo.
28
COLORACION DE GIEMSA
Fijaci{on :
Formol neutron.
Clortes :
3 micras en parafina.
REACTIVOS:
Solucin stock de Giemsa -----------------------Solucin de trabajo de Giemsa-----------------PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar en xilol, alcohol ,hasta hidratar en agua.
2. Diluir el colorante de Giemsa 1 /5 y filtrarlo sobre la lmina.
3. Incubar el colorante por 30 minutos.
5. Diferenciar en cido actico al 1 % durante 1 minuto.
Chequear al microscopio que los hemates estn de color rosado.
Repetir en caso necesario.
7. Deshidratarlo rpidamente en alcohol corriente, absoluto y aclarar en
xilol.
8. Montar con Blsamo de Canad
RESULTADOS:
Ncleos ------------------------ Az.
Citoplasma--------------------- Rosado.
Bacterias ----------------------- Azl.
29
COLORACION PARA GRANULOS ARGENTAFINES METODO

FONTANA MASSON
APLICACIN .
Fontana. Se utiliza para demostracin de pigmento de melanina.
En la reaccin argirfila se aade un agente externo para reducir la plata;
una de las ms conocidas es la tincin de Grimelius.
Estas tcnicas se utilizan en la demostracin de clulas neuroendocrinas
Fijador
:
Formol neutro al 10 %
Cortes
:
3 micras en parafina.
REACTIVOS .
Nitrato de Plata 10 % ---------------------------Solucin de Fontana Masson------------------Cloruro de Oro 0,2 % ---------------------------Thiosulfato de sodio 5 %-----------------------
PROCEDIMIENTO .
NOTA: Preparar la solucin de Fontana Masson el da anterior a la coloracin.
(ver reactivos).
1. Desparafinar, alcholo absoluto, corriente hasta hidratar con agua.
3. Sumergir las lminas en la solucin de Fontana Masson por 1 hora a
60C.
4. Enjuagar con agua destilada.
Chequear al microscopio que los grnulos argentafines estn de
color marrn oscuro. Si es necesario regresar a la solucin
Fontna Masson e incubar por mas tiempo.
5. Diferenciar con cloruro de oro 0,2 %, donde el tejido se pondrn de color
gris a negro (Precipitado de methenamine).
6. Fijar en Thiosulfato de sodio 5 % por 1 minuto.
8. Contratar con Eosina.
RESULTADOS :
Grnulos argentafnicos ----------------------- Negro.
Grnulos carcinoides --------------------------- Marrn
Resto del tejido ---------------------------------- Rosado a rojo.
30
METODOS PARA LA DETERMINACIN DE CALCIO. TECNICA DE

VON KOSSA.
Las sales de calcio estn presentes normalmente en los huesos, dientes y
sangre aunque en ocasiones tambin aparecen reas de calcificacin en
tejidos desprovistos de ellas.
En general las sales que con mayor frecuencia se depositan son carbonatos,
oxalatos y fosfatos.
TCNICA
Fijacin: formol al 4 % preferiblemente y utilizar secciones en parafina.
1.
2.
3.
Soluciones:
Solucin acuosa de nitrato de plata al 1 %.
Solucin de tiosulfato sdico al 2,5 %.
Rojo neutro al 1 %.
Procedimiento tcnico:
2. Tratar con la solucin de nitrato de plata a plena luz.. 30 60
min.
4. Lavar en la solucin de tiosulfato.. 5 min.
5. Volvemos a lavar con agua destilada.
6. Contrastar con el rojo neutro. 2 3 min.
Resultados:
- Iones calcio o calcificacin: negro.
- Ncleos: rojo.
31
METODOS PARA LA DETERMINACION DE COBRE. TCNICA CIDO

RUBENICO.
Este metal se encuentra presente de forma casi exclusiva en el hgado y otros
rganos de pacientes con enfermedad de Wilson.
En ocasiones se encuentra presente en algunas cirrosis hepticas aunque en
muy pequea proporcin.
TCNICA
Fijacin: cualquier fijador es vlido. Se deben utilizar secciones en

parafina o en congelacin.
1.
2.
3.
Soluciones:
Solucin madre de cido rubenico al 0,1 %.
Solucin de acetato sdico al 10 %.
Solucin de trabajo:
- De la solucin 1: por cada 2.5 ml se echan de la solucin 2, 50 ml
Procedimiento Tcnico:
2. Tratar con solucin de trabajo a 37 durante toda la noche en un recipiente
tapado hermticamente.
3. tratar los cortes con alcohol etlico al 70 % 15 min.
4. Alcohol etlico absoluto.. 6 horas.
5. Aclarar con xileno y montar.
Resultados:
- Depsitos de Cobre: con granulaciones de verde a negras.
32
VAN GIESSON (Fibras colgenas)
La Tincin de Van Gieson corresponde a la mezcla de cido pcrico-fucsina

cida y hematoxilina frrica de Weigert. Es el mtodo ms simple mediante
tincin para diferenciar colgeno de otros tejidos conectivos. Esta tecnica fue
desarrollada por el neuropsiquiatra y patlogo Ira Van Gieson.
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Agregar la hematoxilina de Weigert (tricrmica).por 10 min
Lavar con agua que corre por 2 minutos
Agregar Van Giesson por 10 minutos
Lavar con agua destilada rapidamente
Esperar a que seque , luego xilol y montar
Ncleos: Color marron a negro

Colageno(tejido conectivo - fibroso): color rosa o rojo
Msculo y citoplasama: color amarillo
33
COLORACIN DE ZIEHL-NEELSEN o BK
FUNDAMENTO
Estos bacilos son gran positivos, pero con esta coloracin , se colorean difcil e
irregularmente, de ah que emplee este tipo de tincin (Ziehl- Neelsen) o su
variante (Kinyoun).,
Se emplea para detectar la presencia de BAAR (Bacilos Acido-Alcohol
Resistentes), como diagnostico de enfermedades infecciosas producidas por:
a. Micobacterias: Micobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae.
b. Bacterias del gnero Nocardia Nocardiosis y Micetoma
actinomictico (micosis subcutnea).
El fundamento de la tcnica se basa en la pared celular rica en lpidos y cidos
carboxlicos (cido miclico) de los BAAR que tienen la propiedad de unirse
excepcionalmente fuerte al colorante 1rio, Carbol fucsina. Una vez que se forma
este complejo colorante-pared, ni siquiera la accin conjunta del diferenciador,
cido y alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen el colorante en
forma "resistente", apareciendo los bacilos de color rojo sobre un fondo azul
Procedimiento:
2. Agregara la lmina carbol fucsina por 15 minutos
3. Diferenciar con alcohol cido (hasta que el tejido tome una coloracin
rosada)
5. Contrastar con azul de metileno por 10 segundos.
6. Deshidratar rpidamente y montar (el alcohol tiende a bajar el azul de
metileno).
Control:
Resultado: Los BAAR se observan en rojo, todo el fondo (contraste) aparece en
celeste o azul.
34
COLORACION GRAM
Esta tcnica se basa en las diferencias de la pared celular existentes
entre BGP (pared gruesa) y BGN (pared fina); sirve para clasificar bacterias u
hongos en Gram+ y Gram-; mediante esta clasificacin se puede descartar u
orientar el diagnstico de una amplia gama de enfermedades infecciosas.
Al aplicar el colorante 1rio todas las clulas (G+ y G-) absorben el colorante, al
aadir el mordiente, slo las cel. G+ formarn el complejo Yodo-Cristal Violeta
dentro de la pared celular. Este complejo fija fuertemente el colorante 1rio
(cristal violeta) a la pared celular de las clulas G+ quedando coloreado de
color violeta azulado. Cuando se aplica el decolorante las clulas G- (que no
han formado el complejo) pierden los lpidos de su pared (y con ellos el
colorante 1rio) y sta se torna porosa dejando el paso libre a cualquier otra
sustancia colorante para que ingrese a la clula. Finalmente, cuando se aade
el colorante 2rio (zafranina) ste atraviesa fcilmente la pared celular (que
qued muy porosa tras el decolorante) y tie todo el citoplasma de la clula de
un color rosado.
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Agregar a la lmina Cristal Violeta por 1 minuto.
Lavar con lugol o agua destilada.
Agregar lugol a la lmina por 1 minuto.
Lavar con agua destilada
Diferenciar con el cido .
Agregar zafranina por 1 minuto.
Deshidratar y montar
Control: Los controles del kit de tincin pueden realizarse con bacterias
grampositivas
(estafilococos) y bacterias gramnegativas (Escherichia coli).
Resultado:
Microorganismos grampositivos violeta azulado
Microorganismos gramnegativos rosa a rojo
35
GROCOTT
APLICACIN
La coloracin Grocott es empleada para identificar cualquiera de los

agentes causales de las micosis sistmicas endmicas (y de las micosis en
general, incluyendo la neumocistosis). Posee una sensibilidad aceptable, por lo
cual es aconsejable su empleo cuando otras tcnicas son negativas o se
sospecha la presencia de escasos elementos fngicos en la muestra.
Los elementos fngicos se tien de color negro, lo que beneficia su
localizacin sobre un fondo celeste. Posee sobre otras tcnicas empleadas
para la visualizacin de hongos, como la de PAS, la ventaja de teir estructuras
fngicas no viables.
REACTIVOS :
Metanamina al 3%:
Metanamina----------0.75g
Agua destilada-------25ml VT: 25ml
Nitrato de Plata al 5%:
Nitrato de Plata -------0.05g
Agua destilada--------1ml VT: 1ml
Nitrato de Plata-Metenamina - solucin matriz:
Nitrato Plata al 5%-----------------1ml
Metanamina al 3%----------------25ml VT: 26ml
Brax 5%:
Brax------------------0.1g
Agua destilada--------2ml
VT: 2ml
Nitrato de Plata-Metenamina solucin de trabajo:

Solucin matriz plata metanamina--- 25 ml
Agua destilada-------------------------------25 ml
Brax 5%---------------------------------------2 ml
Procedimiento:
2. Agregar cido peryodico al 1% por 10minutos (reemplaza al acido
crmico de la tcnica original)
4. Colocar en la solucin diaria a 60C por 1 hora o microondas no ms de
6 minutos.
6. Agregar cloruro de oro 1 minuto (OPCIONAL, sirve para limpiar)
36

8. Agregar Tiosulfato de Sodio 5 % por 1 minuto
10. Contrastar con Light green por 1 minuto.
12. Deshidratar rpido (el color verde puede bajar) y montar.
WARTHIN STARRY
Se utiliza para identificar, por microscopa ptica, Helicobacter pylori y

microorganismos espiroquetas en muestras de tejidos. Esta tcnica es muy
buena para visualizar el microorganismo, pero es relativamente complicada de
realizar en ocasiones pueden producirse falsos positivos al ser difcil distinguir
al microorganismo de los precipitados de plata en la capa mucosa. Ello hace
que habitualmente no se utilice como tcnica de rutina, reservndose para
aquellos casos en que existan dudas diagnsticas.
Preparar en el momento:
* Acido Ctrico al 1%:
0.5g Acido ctrico
50 ml de agua destilada
* Agua Acidulada:
20gotas de acido ctrico al 1%
1000ml H20d (hasta pH 4)
* Solucin de impregnacin: NO3Ag al 1%
37
1g
NO3Ag
1000ml de agua Acidulada
Soluciones de Trabajo
A. NO3Ag al 2%
(0.5g NO3Ag / 25ml agua acidulada)
B. Gelatina al 5%
(gelatina 2,5g / 50ml agua acidulada)
C. Pyrocatecol
(pyrocatecol 0,15g / 100ml agua acidulada)
*Dejar todo en Bao mara a 54C
*Combinar en el siguiente orden:
1,5 ml de a
3,75 ml de b
2,0 ml de c
Procedimiento:
2. Impregnacin en NO3Ag 1% a 43C por 30 minutos
3. Solucin de trabajo (A+B+C) de 4 a 7 minutos
5. Deshidratar, montar con blsamo de Canad
Resultado: Espiroquetas-negro/ fondo-amarillo pardo.
Uso: Dx verruga peruana/ grmenes
38

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MANUAL PRACTICO PARA

Lic. T. M. Oliver David Ortega Vargas

colgeno y msculo liso

glicgeno, mucopolisacridos neutros

colgeno, fibras elsticas

Finalmente se usan principalmente para ayudar en el diagnstico de las

REACTIVOS Y SOLUCIONES EMPLEADOS EN

Acido actico 3%:

Acido clorhdrico 20%:

cidos fosfotngsticos fosfomolbdicos:

Acido oxlico 1%:

Acido perydico 1%:

Acido Pcrico solucin saturada:

Agua amoniacal: 0,5%

Agua destilada----------------------------- 1000ml

Alcian blue 1%:

Alcohol acido 1%:

0.10 Alcohol alcalino:

0.11 Azul de anilina:

Acido carblico o fenol ---------------2.5 ml

La fucsina se disuelve en alcohol y el fenol en agua, dejar a

0.16 Brax 5%: es el nombre comercial de la sal de Boro.

0.19 Cloruro de oro al 2 %

0.20 Escarlata de Biebrich solucin al 1%:

0.23 Formol 20%, 30%:

0.24 Fucsina cida 1%:

0.25 Giemsa, solucin Stok

0.29 Hematoxilina Weigerts:

0.34 Solucin de trabajo de Plata-Methanamine

0.35 Permanganato de Potasio al 0.5%:

0.38 Rojo Rpido: (Kernechtrot)

0.39 Sulfato frrico amoniacal 3%:

0.41 Solucin Yodada para Verhoeff:

0.42 Solucin de Plata Amoniacal ( Reactivo de Wilder ):.

0.47 Solucin de Verhoeff :

PAS: ACIDO PERIODICO-SCHIFF

Tambin es til para la demostracin de glucgeno; tie membranas

Resultado: glicgeno mucinas y algunas membranas basales de rojo a

4. Glucoprotenas del suero

PAS-diastasa es una coloracin histolgica frecuentemente usada como un

Las fibras reticulares estn constituidas fundamentalmente por colgeno de tipo

10. Agregar Formol al 2%

Control: Hgado, bazo o nodo linftico

3. Tratar los cortes con solucin alcohlica de cloruro hidrxido de sodio

Control: caso positivo

ROJO DE CONGO CON PERMANGANATO

ALCIAN BLUE pH 2.5

Es un colorante ftalocianina que contiene cobre. Colorea mucopolisacridos

Resultado: Mucopolisacridos cidos se observan de color azul y los

Azul alcin a pH 2,5 los mucopolisacaridos cidos (carboxilos y

AZUL DE PRUSIA, FIERRO, O PERLS

En el interior de los tejidos el hierro se puede depositar de 2 formas:

Ferrocianuro potsico + HCL

Control: caso positivo.

Resultado: Depsitos de Fierro (hemosiderina), algunos xidos y sales de

VERHOEFF (Fibras Elsticas)

Es usada para demostrar cambios patolgicos en las fibras elsticas.

Control: Arteria o piel.

Fibras elsticas: negras

IMPREGNACION DE PLATA METODO GOMORRI METHENAMINE

Desparafinar en xilol, alcohol hasta hidratar en agua.

COLORACION PARA GRANULOS ARGENTAFINES METODO

METODOS PARA LA DETERMINACIN DE CALCIO. TECNICA DE

Fijacin: formol al 4 % preferiblemente y utilizar secciones en parafina.