UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA

Facultad de Ciencias de la Salud

Bacteriologa y laboratorio clnico

MANUAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

Presentado por:
Roger Alejandro Rojas
Bibiana Esperanza Rodrguez Len
Mnica Rodrguez Hernndez

Docente:
Esperanza Vlez

IIID
Bogot, Colombia
2016

TABLA DE CONTENIDO

1.
2.
3.
4.
5.
6.

INTRODUCCION
BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION
PREPARACION Y FIJACION DE FROTIS
MORFOLOGIA BACTERIANA
TINCIONES Y COLORACIONES
FORMAS DE SIEMBRA EN TUBO
1

7. FORMAS DE SIEMBRA EN CAJA DE PETRI

8. MEDIOS DE CULTIVO
9. PRUEBAS BIOQUIMICAS
10.HONGOS
11.PARASITOS
12.BIBLIOGRAFIA

INTRODUCCION
El objetivo de este manual queremos brindar una gua de ayuda y apoyo para el trabajo
en el laboratorio de microbiologa, de esta manera poder encontrar de una manera
rpida la informacin necesaria, para as facilitar el aprendizaje y manejo de algunos
conceptos que nos sern de gran utilidad a lo largo del proceso de formacin y como
futuros profesionales bacterilogos.

BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION
La BIOSEGURIDAD, se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a
mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biolgicos,
fsicos o qumicos, logrando la prevencin de impactos nocivos, asegurando que el
desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y
seguridad de trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente. Segn
el Ministerio de Salud y Proteccin Social.
Infraestructura
Las reas del laboratorio deben cumplir con lo estipulado en la norma de habilitacin de
laboratorios clnicos y Secretara de salud, para el buen funcionamiento:
Condiciones del laboratorio:
-

Piso lavable, antideslizante, fcil de limpiar.

Paredes blancas con pintura industrial especial que protege las mismas de
sustancias corrosivas.
Mesones fciles de limpiar, en acero y sin ranuras.
Ventilacin que no debe ser obstruida ya que esto ocasionara que se concentrara
en grandes cantidades, sustancias gaseosas en el laboratorio.
Desages, deben permanecer sin obstrucciones y desechar solo los residuos
lquidos neutralizados.
Iluminacin.
rea de eliminacin de residuos biolgicos.
rea de equipos.
rea de primeros auxilios.
rea de trabajo o anlisis de muestras.
rea de administracin.
Sealizacin.

Proteccin personal
3

Son un complemento indispensable de los mtodos de control de riesgos para proteger

al trabajador con el fin de evitar la transmisin de infecciones.
-

Bata: Indispensable para el ingreso en el laboratorio, de material antifluidos. Es

usado como mtodo de barrera para evitar el contacto directo con sustancias
qumicas, biolgicas y/o radiactivas, objetos corto punzantes y contaminados y
contaminar la ropa debajo de este.

Guantes protectores: Vienen de distintos materiales, los ms comunes son los

de nitrilo (preferiblemente usar de estos por su grosor) y ltex. Su funcin es la
de proteger las manos para poder manejar sustancias biolgicas, qumicas y que
podran ser perjudiciales al contacto directo, tambin evitan la propagacin y
contaminacin de bacterias dentro y fuera del laboratorio. Se desechan en la
caneca roja despus de su uso.

Gafas de seguridad: Sirven para proteger los ojos de sustancias peligrosas.

Zapatos antideslizantes: Deben cubrir todo el pie del usuario, ser de material
antifluidos y de goma para generar friccin a la hora de caminar. Su funcin es la
de evitar tropiezos, ya sea por la textura del suelo o el derrame de algn liquido o
solido en el laboratorio.

Uniforme: Prendas de vestir hechas de material antifluidos, cmodas para su

uso diario e identificacin rpida entre los usuarios de los laboratorios.

Peto: Delantal de material antifluidos que sirve como refuerzo de la bata para
evitar contaminacin por derrames y dems accidentes. Generalmente se
encuentran de tipo desechable y se descartan en la caneca roja.

Careta protectora: Tambin llamado tapabocas, de material de polipropileno

(tres capas de este en diferentes proporciones) tiene como funcin el bloqueo de
partculas microscpicas y/o sustancias en estado gaseoso que puedan ingresar
por vas respiratorias y digestivas. Se desechan despus de usar en la caneca
roja.

Gorro: De tela desechable, debe cubrir todo el cabello del usuario. Tiene como
funcin la de evitar contaminarse el cabello con microorganismos. Se desecha
despus de su uso en la caneca roja.

En la eliminacin o muerte de microorganismos que contiene un objeto o sustancia,

por lo general se acondicionan de tal manera que no puedan contaminarse
nuevamente. El material que se utiliza para determinacin de microorganismos
debe esterilizarse previamente.
MTODO

FUENTE

TIPOS
Esterilizacin al rojo

CALOR SECO Accin directa de la llama

Incineracin

Accin directa por generadores de

calor.
4

Estufa de calor seco

Bao de mara hirviente

Calentamiento rpido

CALOR SECO Accin de agua caliente

Accin de vapor de agua

Autoclave
Rayos X

Ionizantes

Rayos Gamma

RADIACIN

Uv 260nm (ADN/ARN)

FILTRACIN

Ultravioleta

Uv 280nm (protenas)

Filtros

Filtros de diferente
composicin, tamao de
poro y estructura

CALOR SECO
Ventajas
- Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, as como,
sustancias viscosas no voltiles.
- No es corrosivo para metales e instrumentos.
Desventajas
- Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la
baja penetracin del calor.

CALOR HMEDO
- Ventajas
- Rpido calentamiento y penetracin
- Destruccin de formas vegetativas y esporas en corto tiempo
- No deja residuos txicos.
- Hay un bajo deterioro del material expuesto.
- Es posible por este mtodo esterilizar materiales que no resisten al calor seco.
HIPOCLORITO DE SODIO
Es un compuesto oxidante de rpida accin utilizado a gran escala para la desinfeccin
de superficies, desinfeccin de ropa hospitalaria y desechos, descontaminar
salpicaduras de sangre, desinfeccin de equipos y mesas de trabajo resistentes a la
oxidacin, eliminacin de olores.
Cmo se prepara la solucin de hipoclorito de sodio?
Ej: Hipoclorito comercial 5% y se desea preparar 1L, con una concentracin de 0.5%
(5000 ppm)
Frmula:
V: Cd x Vd / Cc
Donde,
V.d.: volumen deseado
C.d.: Concentracin deseada
C.c.: Concentracin conocida
5

Entonces,
V: 0.5% x 1000 c.c / 5% = 100 c.c
Usted debe agregar 100mL de NaClO comercial 5% a 900 mL de Agua, para un volumen
total de 1L, de una dilucin al 0,5%.

PREPARACION Y FIJACION DE FROTIS

1. Desengrasar los portaobjetos y marcarlos
2. Prender mechero y esterilizar el asa en la ama del mechero
3. Dejar enfriar el asa
4. En caso de tener el cultivo en tubo, acercar este al mechero, quitarle el tapn y
amear la boca del mismo. Introducir el asa en el tubo y tomar cuidadosamente un
poco de la muestra
5. Para el caso de tener el cultivo en un medio slido, poner una gota de solucin salina
en la lmina previamente desengrasada, tomar un poco de la muestra
6. Extender suavemente la muestra sobre la lmina, con y sin solucin salina, en un
rea circular de 2 cm de dimetro aproximadamente
7. Esterilizar el asa nuevamente y dejar secar el frotis al aire
8. Una vez, haya secado, jar al calor, pasando tres veces la lmina con el frotis por la
ama y dejando enfriar

http://img.webme.com/pic/m/microbiologiaitt/07p6.jpg

MORFOLOGIA BACTERIANA
Las bacterias en condiciones normales se desarrollan con formas definidas, las cuales
se proporcionan por la rigidez de la pared celular, estas formas son esfricas, ovaladas,
en forma de bastn o espirales. De acuerdo a lo anterior, la correcta observacin de
6

estas es importante ya que se convierte en uno de los principales marcadores para la

identificacin inicial de gneros bacterianos.

https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a2/Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg

TINCIONES Y COLORACIONES
Las tinciones simples, se aplican el contraste de las clulas a observar bajo el
microscopio, por medio de un nico colorante que, tie con la misma tonalidad
toda la clula. Las tinciones Compuestas, son aquellas en las cual se
utiliza ms de un colorante y tienen por objetivo, la observacin de estructuras
especficas de las bacterias, estas se caracterizan por tener un colorante
primario que tie las clulas cargadas negativamente, un agente mordiente, un
agente decolorante y un colorante secundario o de contraste.
COLORACIN DE GRAM
Imagen:

Foto tomada por Roger

Rojas.

Fundamento: El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con

el yodo una laca insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para
aclarar, deshidratan las paredes de los microorganismos Gram positivos y
forma una barrera que la laca no puede atravesar, mientras que en las Gram
negativas, los lpidos de la pared se disuelven lo que permite el escape del
complejo de cristal violeta con el yodo.
Utilidad: Permite la clasificacin de las bacterias en Gram positivas y Gram
negativas segn la composicin de su pared celular. Se basa en las
diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y
Gram negativas. Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular
gruesa compuestas de peptidoglicano la cual resiste la decoloracin,
mientras que la pared de las Gram negativas es soluble en solventes
orgnicos.
Procedimiento:
1. Marcar la lmina previamente desengrasada.
2. Agregar una gota de solucin salina en la lmina.
3. Con un asa curva coger la colonia y mezclar con la solucin salina.
4. Dejar secar.
5. Agregar Cristal violeta por 2 min.
6. Lavar con agua.
7. Agregar lugol por 3 min.
8. Lavar con agua.
9. Decolorar con alcohol por 30 seg.
10.Lavar con agua.
11.Agregar fucsina de Gram por 1 min.
12.Lavar con agua.
13.Dejar secar la preparacin.
8

14.

14. Observar al microscopio.

ECHYO RIV
Imagen:

Foto tomada por Bibiana

Rodrguez.

Fundamento: La coloracin se basa en la afinidad del colorante por los

componentes celulares.
Utilidad: Observar el microorganismo completo con sus diferentes
morfologas (cocos, bacilos y espirilos).
Procedimiento:
1. Marcar la lamina
2. Tomar con un palillo la muestra (sarro) con cuidado de no sacar
sangre
3. Realizar el frotis en la lmina previamente desengrasada
extendiendo la muestra suave y circularmente.
4. Dejar secar la lmina y luego fijarla en el mechero.
5. Colocar la lmina fijada en un soporte que este nivelado.
6. Agregar la fucsina de Gram por 3 min.
7. Agregar 2 o 3 gotas de bicarbonato de sodio por 3 min.
8. Lavar y dejar secar.
9. Observar al microscopio.

COLORACION NEGATIVA
Imagen:

Foto tomada
tomada por
por Mnica
Mnica
Foto
Rodrguez.
Rodrguez.

Fundamento: Se utiliza un colorante cido (Tinta china), de forma que las

bacterias repelen el colorante en vez de absorberlo; y por tanto se observa
todo el campo teido y las zonas brillantes en donde no penetr el colorante
estarn las bacterias.
Utilidad: Encontrar presencia de cpsulas alrededor de las clulas
microbianas.
Procedimiento:
1. Marcar la lmina con el nmero de colonia.
2. Aplicar una gota de solucin salina en una lmina.
3. Con un asa curva coger la colonia y mezclarla con las SS.
4. Pasar una gota de la mezcla a otra lamina.
5. Extenderla
6. Dejar secar y fijar en el mechero.
7. 7. Observar al microscopio.

COLORACION NEGATIVA CON CONTRASTE

Imagen:

Fundamento: Se utiliza un colorante cido (Tinta china), de forma que las

bacterias repelen el colorante en vez de absorberlo, y por tanto se observa
10

todo el campo teido y las zonas brillantes en donde no penetr el colorante

estarn las bacterias. Para darle contraste a la cpsula, se le agrega la
fucsina en la cual se observa la estructura de la bacteria dentro de la
cpsula.
Utilidad: Encontrar presencia de cpsulas alrededor de las clulas
microbianas y dentro de esta observar su estructura.
Procedimiento:
1. Marcar la lmina con el nmero de colonia.
2. Aplicar una gota de solucin salina en la lmina.
3. Con un asa curva coger la colonia y mezclarla con la solucin
salina.
4. Pasar una gota de la mezcla
a otra lamina previamente
desengrasada.
5. Extenderla
6. Dejar secar y fijar en el mechero.
7. Cubrir el frotis con fucsina de Gram por 2 min.
8. Lavar y dejar secar.
9. 9. Observar al microscopio

VAN STOLTEMBERG
Imagen:

Foto tomada por Roger

Rojas.

Fundamento: Las inclusiones son cuerpos inertes en las clulas. Muchas de

ellas son materiales alimenticios de reserva, dado que se acumulan durante
tiempo de aporte nutricional y disminuye la duracin de la inanicin. El
carcter de las inclusiones vara con el organismo. En muchas especies
bacterianas y en hongos, algas y protozoarios aparecen grnulos de bolutina,
llamados grnulos metecromaticos; se les colocan intensamente con
colorantes bsicos y estn integrados por cido fosfrico polimerizado,
conocido como polifosfato.
Utilidad: Identificar grnulos metacromticos en corynebacterium.
Procedimiento:
1. En una lmina previamente desengrasada agregar una gota de
solucin salina.
2. Con un asa curva tomar la colonia y mezclar con la solucin salina.
3. Dejar secar y fijar con el mechero.
11

4. Agregar el colorante Van Stoltemberg por 30 min.

5. Lavar y dejar secar
6. 6. Observar al microscopio.

AZUL DE METILENO DE LOEFFLER

Imagen:

Foto tomada por .

Fundamento:
Los
corpsculos
metacromticos,
son
inclusiones
citoplasmticas que aparecen en algunas bacterias. Estn constituidos
principalmente por polifosfatos y presentan una gran afinidad por colorantes
bsicos, como el azul de metileno. Los corpsculos metacromticos ms
intensamente que el resto de los componentes celulares.
Utilidad: Identificar grnulos metacromticos en corynebacterium.
Procedimiento:
1. En una lmina previamente desengrasada agregar una gota de
solucin salina.
2. Con un asa curva tomar la colonia y mezclar con la solucin salina.
3. Dejar secar y fijar con el mechero.
4. agregar azul de metileno de Loeffler por 15 min.
5. Lavar y dejar secar
6. 6. Observar al microscopio.
SCHAFFER FULTON
Imagen:
Foto tomada por Roger
Rojas.

12

Fundamento: El verde de malaquita es un colorante dbilmente bsico

(tiene una carga positiva dbil) y por lo tanto, se une dbilmente a la
bacteria. Penetra en las clulas vegetativas. Cuando se calienta la
preparacin tambin penetra las endosporas. Durante el lavado con agua, el
verde de malaquita se elimina de las clulas vegetativas pero no de la
endosporas .
Utilidad: Identificar esporas
Procedimiento:
1. En una lmina previamente desengrasada agregar una gota de
solucin salina.
2. Con un asa curva coger la colonia y mezclarla con la solucin
salina.
3. dejar secar y fijar.
4. Agregar verde de malaquita Flameando (con un hisopo con alcohol)
durante 10 min hasta la emisin de vapores.
5. Lavar con agua.
6. agregar fucsina durante 5 min.
7. Lavar con agua.
8. Dejar secar
9. Observar al microscopio.

ZIEHL NEELSEN
Imagen:

Foto tomada por Roger

Rojas.

Fundamento: Se basa en que las paredes celulares de ciertas bacterias

contienen cidos grasos de cadena larga que les confiere la propiedad de
resistir la decoloracin con alcohol-acido despus de la tincin con colorantes
bsicos. Por esta razn la coloracin de Ziehl Neelsen requiere calentamiento
para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene las ceras.
Esto provoca la solidificacin de los cidos grasos y as el colorante no sale
de la bacteria
Utilidad: Identificacin de microorganismos patgenos.
Procedimiento:
1. Marcar una lmina previamente desengrasada.
2. Partir un baja lenguas esterilizado en dos mitades.
3. Coger un poco de muestra de esputo sin saliva.
4. Extender la muestra en la lmina.
13

5. Dejar secar y fijar al mechero.

6. Agregar fucsina de Ziehl Neelsen por 10 min flameando hasta la
emisin de vapor.
7. Lavar con agua.
8. Agregar alcohol acido de Ziehl Nelssen por 5 min
9. Lavar con agua.
10.Agregar azul de Ziehl Nelssen por 5 min.
11.Lavar con agua y dejar secar.
12.
Observar al microscopio.

FORMAS DE SIEMBRA EN TUBO

Esterilizar el asa redonda, enfriar,

tomar colonia, introducir el asa en
elcaldo y agitarla para revolver la
colonia con el caldo, sacar asa,
flamear tubo, tapar, esterilizar asa
e incubar medio de 24-48 horas a
35-37C.

Siembra en agar liquido

http://www.fvet.edu.uy/sites/default/files//micro
biolog%C3%ADa/medios%20y

Esterilizar el asa recta, enfriar,

tomar colonia, introducir el asa y
punzarhasta el fondo del medio,
sacar,
flamear
tubo,
tapar,
esterilizar asa e incubar medio de
24-48 horas a 35-37C.
Si es para motilidad se punza
hasta la mitad del medio.

Siembra en agar solido

14

http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/
quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf

Siembra en agar inclinado

Esterilizar el asa recta, enfriar,

tomar colonia, introducir el asa y
punzarhasta el fondo del medio,
sacar hasta el comienzo del pico
de flauta, en este hacer siembra
en estra, flamear tubo, tapar,
esterilizar asa e incubar medio de
24-48 horas a 35-37C.
Si el pico de flauta est muy
inclinado y el agar no cubre por
completo el fondo del tubo, solo
se siembra en estra sin hacer
puncin inicial.

http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/
quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf

FORMAS DE SIEMBRA EN CAJA DE PETRI

CLASICA

15

Foto tomada por Bibiana

Rodrguez.

Utilidad: Es la ejecucin de sembrado en estra horizontalmente con la

ayuda de un asa bacteriolgica recta, para obtener colonias de bacterias
aisladas.
Procedimiento: Esterilizar el asa recta en el mechero, enfriarla en una
esquina del agar que no contenga colonia, coger colonia, en otro agar, con
inoculo arriba, sembrar en estra (zigzag) horizontalmente terminando abajo,
hacerlo junto al mechero, esterilizar el asa de nuevo, tapar e incubar el
medio de 24-48 horas a 35-37C

AGOTAMIENTO

Foto tomada por Bibiana

Rodrguez.

Utilidad: Conseguir una buena separacin de colonias quedando bien

aisladas. Empezando con una concentracin mayor y terminando con una
concentracin menor de colonias.
Procedimiento: Esterilizar el asa recta, enfriarla, coger colonia, en otro
agar, hacer inoculo arriba, sembrar en estra horizontalmente hasta la mitad,
esterilizar el asa, voltear la caja a la izquierda, desde las ltimas tres
estras pasar el asa igualmente en estra hasta la mitad, esterilizar el asa,
voltear la caja de nuevo a la izquierda, desde las ltimas tres estras hacer
lo mismo terminando con una colita. Esterilizar el asa, tapar e incubar el
16

medio de 24- 48 horas a 35-37C.

CUADRANTE

Foto tomada por Bibiana

Rodrguez.

Foto: Grupo 3
Utilidad:Consiste en dividir el medio en cuadrantes para obtener en el
ltimo cuadrante una concentracin menor de colonias. Colonias aisladas.
Procedimiento:Con un baja lenguas dividir el agar en 4 cuadrantes,
esterilizar el asa recta, enfriar, coger colonia, en el primer cuadrante hacer
inoculo y sembrar en estra, sin esterilizar el asa, pasar al otro cuadrante y
sembrar en estra, y hacer lo mismo con los otros dos restantes en orden,
finalmente esterilizar, tapar en incubar medio de 24-48 horas a 35-37C

REJILLA

17

Foto tomada por Bibiana

Rodrguez.

Utilidad:Tiene la misma finalidad, se busca que el nmero de colonias final

sea mucho menor al inicial.
Procedimiento:Esterilizar el asa recta, enfriarla, coger colonia, en otro agar,
hacer inoculo, sembrar en lneas verticales paralelas en todo el agar, sin
esterilizar el asa voltear la caja 90 y hacer de nuevo lneas verticales
paralelas, quedando finalmente una rejilla, esterilizar, tapar e incubar medio
de 24-48 horas a 35-37C.

RADIAL

Foto tomada por Bibiana

Rodrguez.

Foto: Grupo 4
Utilidad:Aislamiento de colonias desde el inoculo
Procedimiento:Esterilizar el asa recta, enfriar, coger colonia, hacer inoculo,
desde all hacer una siembra en estra al lado izquierdo del agar, esterilizar
asa, hacer lo mismo en el centro y al lado derecho, quedando finalmente 3
siembras desde el inoculo. Esterilizar asa, tapar e incubar a medio de 24-48
horas a 35-37C.

18

MEDIOS DE CULTIVO
AGAR SANGRE
Imagen:

Foto tomada por Roger

Rojas.

CLASE DE MEDIO: Enriquecimiento.

INDICADOR: No tiene.
INHIBIDOR: No tiene.
FUNDAMENTO: Dada la excelente base nutritiva, permite el crecimiento de
prcticamente todos los microorganismos que pudieran estar presentes. Si se
aade sangre se pueden determinar las distintas formas de hemlisis que
pudieran tener lugar. Si se calienta se obtiene el Agar Chocolate, tambin
muy empleado. Por la adicin de distintos antibiticos se obtienen medios
con caracteres selectivos.
ALFA: Hemlisis parcial (Verde) (A)
BETA: Hemlisis total (Blanco)
Foto tomada por Bibiana
(B)
GAMMA: No hemlisis (Negro) Rodrguez.
(C)

B
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AGAR CHOCOLATE
Imagen:

Foto tomada de:

https://upload.wikimedia.org/w
ikipedia/commons/3/38/Chocol
ate_agar_1.jpg

CLASE DE MEDIO: Enriquecimiento.

INDICADOR: No tiene.
INHIBIDOR: No tiene.
FUNDAMENTO: El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un
importante elemento para el crecimiento: el factor X o Hemina termoestable.
Otros factores, en particular el factor V (dicotn-adenina nucletido)
termosensible, que no se encuentran en el Agar chocolate pueden aportarse
en una mezcla qumicamente definida: elPolyViteX. Est particularmente
indicado para aislamiento de las Neisserias patgenas y de los Haemophilus.
AGAR NUTRITIVO
Imagen:

Foto tomada por Mnica

Rodrguez.

CLASE DE MEDIO: General

INDICADOR: No tiene.
INHIBIDOR: No tiene.
FUNDAMENTO: Se trata de un medio muy simple que contiene los
nutrientes necesarios para el desarrollo de la mayor parte de los
microorganismos no exigentes.

20

AGAR MACCONKEY
Imagen:

Foto tomada por Roger

Rojas.
Foto tomada por Bibiana
Rodrguez.

CLASE DE MEDIO: Diferencial

INDICADOR: Rojo Neutro
INHIBIDOR: Cristal violeta, sales biliares.
FUNDAMENTO: Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se
inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la
lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando
el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo
presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias
lactosa-negativas dan colonias incoloras.
FERMENTADOR: Vira a Rojo o Fucsia
NO FERMENTADOR : Colonias Incoloras
AGAR EMB
Imagen:

CLASE DE MEDIO: Diferencial

INDICADOR: Eosina azul de metileno.
INHIBIDOR: sales biliares.
FUNDAMENTO: Por la combinacin de estos dos colorantes y los dos
hidratos de carbono se pueden distinguir algunos gneros. Las bacterias
lactosa-negativas y sacarosa negativas (Salmonella y Shigella) dan colonias
incoloras, mientras que las lactosa y/o sacarosapositivas dan colonias
prpura-violeta negruzco con/sin un centro oscuro y quedan rodeadas de una
zona incolora. Por el efecto de estos mismos colorantes tambin queda
inhibido el crecimiento de la microflora acompaante, sobre todo la Grampositiva. Tambin es posible la identificacin de Cndida Albicans.
21

AGAR ENDO
Imagen:

Foto tomada por Mnica

Rodrguez.

CLASE DE MEDIO: Diferencial

INDICADOR: Fucsina base.
INHIBIDOR: Sulfito de sodio y fucsina bsica
FUNDAMENTO: La combinacin del sulfito de sodio con fucsina Bsica,
ocasiona la supresin parcial de los microorganismos gram-positivos. Los
coliformes fermentan la lactosa, produciendo colonias color rosa oscuro a
rojizo con un brillo metlico verdoso iridiscente y una coloracin similar en el
medio. Las colonias de microorganismos que no fermentan la lactosa son
incoloras o de color rosa plido en contraste con el fondo rosa claro del
medio.
FERMENTADOR: Rojo oscuro o fucsia
NO FERMENTADOR: Colonias incoloras o rosa plido.
AGAR XLD
Imagen:

Foto tomada por Mnica

Rodrguez.

CLASE DE MEDIO: Selectivo.

INDICADOR: Rojo de fenol.
INHIBIDOR: Sales biliares.
FUNDAMENTO: La degradacin de la xilosa, lactosa y sacarosa genera la
22

produccin de cido cambiando el color del medio de rojo a amarillo. La

produccin de H2S bajo condiciones alcalinas, da colonias con el centro
negro. Esta reaccin es inhibida en condiciones cidas. La decarboxilacin de
la lisina en ausencia de fermentacin de lactosa o sacarosa, ocasiona la
reversin del medio a alcalino y el color del medio regresa a rojo.
FERMENTADOR: Colonia amarilla
NO FERMENTADOR: Colonias incoloras
H2S: Colonias amarillas con puntos negros

AGAR SALADO MANITOL

Imagen:
Foto tomada por Mnica
Rodrguez.

CLASE DE MEDIO: Altamente selectivo.

INDICADOR: Rojo de fenol.
INHIBIDOR: cloruro de sodio NaCl.
FUNDAMENTO: El efecto inhibidor se debe a la alta concentracin de Sodio
Cloruro del medio. Con la fermentacin de la D(-)-Manita se genera cido que
ocasiona el viraje del rojo de fenol al amarillo, permitiendo as una mayor
claridad en el momento de establecer el diagnstico, ya que la mayora de
los Estafilococos patgenos fermentan este azcar.
FERMENTADOR: colonias amarillas
NO FERMENTADOR: no color

23

AGAR HECTOEN ENTRICO

Imagen:
Tomado de:
http://www.microb
Foto tomada por Mnica
iologyinfo.com/wp
Rodrguez.
content/uploads/2
015/12/ColonyMorphology-onTCBS-Agar.jpg
CLASE DE MEDIO: selectivo.
INDICADOR: Azul de bromotimol y fucsina cida.
INHIBIDOR: Sales biliares.
FUNDAMENTO: Por la presencia de los dos indicadores se diferencian las
colonias de bacterias lactosa positivas de las lactosa negativas, las primeras
toman un color amarillo anaranjado y las segundas un azul verdoso. Los
microorganismos que fermentan la sacarosa y la salicina tambin toman un
color amarillo anaranjado. La presencia de sacarosa y salicina evita la
seleccin de patgenos falsamente positivos. Con el Sodio Tiosulfato y el
Amonio Hierro (III) Citrato se detectan los productores de Hidrgeno Sulfuro
por el precipitado negro de Hierro Sulfuro que presentan en el centro de las
colonias. La presencia desales biliares inhibe el crecimiento de una gran
parte de la flora acompaante.
FERMENTADOR: Presencia de colonias color salmn
NO FERMENTADOR: Colonias incoloras
H2S: Colonias negra

AGAR TCBS
Imagen:

CLASE DE MEDIO: Diferencial.

24

INDICADOR: Azul de bromotimol y azul de Timol.

INHIBIDOR: Sodio Tiosulfato, tri-Sodio Citrato.
FUNDAMENTO: Debido al contenido de Sodio Tiosulfato, tri-Sodio Citrato y
al pH alto del medio se inhibe el crecimiento de las Coliformes. A su vez la
Bilis de buey y el Sodio Colato inhiben el crecimiento de los microorganismos
Gram-positivos, aunque pueden crecer algunos Enterococos formando
colonias pequeas e incoloras. Las Peptonas, el Extracto de Levadura y la
Sacarosa aportan los nutrientes. Los dos indicadores hacen que los vibrios
den colonias amarillas por acidificacin del medio y el Sodio Tiosulfato
combinado con el Hierro (III) Citrato permiten la deteccin de la produccin
de Hidrgeno Sulfuro.

AGAR CETRIMIDE
Tomado de:
http://www.micro
biologyinfo.com/
wpcontent/uploads/2
015/09/ColonyMorphology-onCetrimideAgar.jpg
Imagen:
CLASE DE MEDIO: Altamente selectivo
INDICADOR: No tiene.
INHIBIDOR: Cetrimide.
FUNDAMENTO: El Cetrimide acta como elemento inhibidor de una amplia
variedad de microorganismos, de tal manera que no inhibiendo el
crecimiento de las Pseudomonas aeruginosa s lo hace con otras especies de
Pseudomonas. Adems su accin tensioactiva produce la liberacin del
fsforo y del nitrgeno a las clulas bacterianas distintas de Pseudomonas
aeruginosa. Por la presencia de Magnesio Cloruro y Potasio Sulfato se
favorece la produccin de Piocianina que dar al medio una coloracin azul
verdoso o marrn. La presencia de un color verde-azulado corresponde a
produccin de Piocianina, mientras que un color verde corresponde a la
produccin de Pioverdina y un color rosa claro, rojizo o marrn oscuro
corresponde a la produccin de Piorrubina.

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AGAR S.S.
Imagen:

Tomad de: http://www.kohjinbio.co.jp/products/up_img/12

69855809-001599_2.jpg

CLASE DE MEDIO: Selectivo

INDICADOR: Rojo neutro.
INHIBIDOR: Verde brillante, bilis de buey y tiosulfato de citrato.
FUNDAMENTO: Es un medio selectivo para aislamiento de Salmonellas y
Shigellas a partir de agua, alimentos, heces y otros materiales. El verde
brillante, la bilis de buey y la alta concentracin de Tiosulfato inhiben la flora
no patgena. El Tiosulfato evidencia la formacin de sulfuro y se observa un
color negro en las colonias. Las bacterias que usan la lactosa y la fermentan
a cido se manifiestan por el color rosado por el indicador de ph: ROJO
NEUTRO.
NO FERMENTADOR: incolora (Shigella, salmonella y Yersinia)
FERMENTADOR: rosadas o rojas (E.coli)
H2S: Centro negro (Proteus y salmonella)

PRUEBAS BIOQUIMICAS

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HONGOS
Los hongos son organismos eucariotas, de mayor tamao y complejidad que
las bacterias. Se distinguen de otros eucariontes, como los animales, por ser
inmviles y, de las algas y plantas, por carecer de pigmentos fotosintticos.
Son de nutricin hetertrofa; es decir, dependen de nutrientes orgnicos
disueltos por sistemas enzimticos especficos, que son absorbidos a travs de
su pared celular y membrana plasmtica.
Clasificacin
Los
hongos
filamentosos (mohos)
tienen una estructura
vegetativa caracterstica
denominada
hifa.
El
conjunto
de
hifas
ramificadas
constituye
el micelio. Las hifas de
algunos
hongos
presentan
tabiques
transversales o septos,
aunque en el caso de los
hongos que pertenecen
al grupo Zygomycota,
las hifas no presentan
estos
septos
y
se
conocen
como
hifas
cenocticas.
Las
levaduras
son
clulas
de
forma
esfrica
u
oval,
ampliamente
distribuidas
en
la
naturaleza;
con
frecuencia
se
encuentran
formando
una
cubierta
pulverulenta fina sobre
frutos y hojas. Las
levaduras se reproducen
en forma asexual por
gemacin, un proceso
por el cual brota una
protuberancia o yema
de la clula madre que,
posteriormente
se

Especies
Los tipos de mohos
ms comunes son:
Penicillium
Aspergillus
Alternaria
Cladosporium
Mucor

Debaryomyces
Pichia
Hanseniaspora
Cndida
Brettanomyces
Schanniomyces
Saccharomycode
s
Zygosaccharomy
ces
Sccharomyces
Rhodotorula
Schizosaccharom
yces

27

Hongo

separa
como
individual.

clula

PARSITOS
Son los organismos que pasan toda o parte de su existencia a expensas del
hospedante, causndole o no dao, y con quien tienen una dependencia
obligada y unilateral. Entre los parsitos que el hombre puede
adquirir a travs de la ingestin de la comida y/o el agua, se encuentran
los protozoos y helmintos.
Clasificacin
Los protozoos son organismos unicelulares que con frecuencia forman
quistes o esporos de elevada resistencia. Microorganismos unicelulares
eucariotas, poseen membrana nuclear, mitocondria y otros organelos, carecen de
pared celular, son hetertrofos. Se desarrollan en ambientes hmedos, miden de
10-50 m
Tipos de protozoos
Foto

28

Mastigoforos:
Poseen flagelos, se encuentran en
sangre, tejidos e intestinos
Intestinales:
- Giardia
Chilomastix
- Trichomonas.
Sangre:
- Tripanosomas
- Leishmania.
Cilioforos:
Poseen cilios
- Paramecio
- Balantidium.
Sarcodina
son pseudpodos
- Amoebas
- Entamoebas
- Iodamoeba
Esporozoos
Destruyen glbulos rojos.
- Toxoplasmas
- Plasmodium
Clasificacin
Los helmintos
son
organismos pluricelulares y los transmitidos por los
alimentos pertenecen
a los Trematodos
(distomas), Cestodos (tenias) y
Nematodos (vermes redondos) los cuales son gusanos o lombrices, su tamao
oscila de 1 mm a 1 m o ms, la superficie externa se recubre de una cutcula
protectora que puede ser lisa, en crestas, espinas o tubrculos. Poseen
estructuras de fijacin como ganchos, ventosas, dientes o placas. Generalmente
son hermafroditas. Se clasifican en Platelmintos (gusanos planos) y
Nematelmintos (gusanos redondos)
Tipos de Helmintos
Foto

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Platelminto
- Cestodos: Taenias.
- Trematodo: fasciola.
Nematelmintos
- scaris
Trichuris Truchuria
(tricocefato)
- Oxyuro
- Larvas Strongylordes
stercoralis

Fotos
tomadas por
Mnica
Rodrguez.

Clasificacin
Son organismos invertebrados que pertenecen al reino animal, poseen patas
articuladas, adems poseen antenas, branquias, pulmones, mandbulas,
quelceros etc. Cuentan con un esqueleto externo quitinoso que mudan
peridicamente. Viven en medios terrestres, acuticos y areos. Se reproducen
sexualmente, las hembras ponen huevos, donde puede nacer un individuo similar
al adulto pero ms pequeo, o nace una larva la cual pasa por una metamorfosis.
Tipos de Artrpodos
Foto

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Insectos
Arcnidos
Crustceos
Miripodos

Imagen tomada de: http://4.bp.blogspot.com/eF6k60PZWyw/Ue6GoYZBT_I/AAAAAAAAc_4/ryd97V

u0HIY/s640/Artr%C3%B3podos.jpg

BIBLIOGRAFIA
Catedra y Practica en Clase de Microbiologia General con la
profesora Esperanza Velez.
- Baker, F. J., y breach, M.R 1990. Manual tcnicas de Microbiologa
mdica. Editorial Acribia. Zaragoza, Espaa. 676 p.
- CULTIMED. (s.f.). Manual Bsico de Microbiologa.
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotec
nologia/practicoIII.pdf
31

http://www.fvet.edu.uy/sites/default/files//microbiolog
%C3%ADa/medios%20y%20siembra%20%5BModo%20de
%20compatibilidad%5D.pdf
http://coodan.org/calidad/ccc/_GSO-002.pdf
http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbio
logia_general.pdf
http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/5%20virus%20y
%20parasitos.pdf

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