BACTERIAS HALFILAS

Se llaman halfilos a aquellos organismos que requieren cierta

concentracin de NaCl para su desarrollo y crecimiento. Pueden ser
clasificados en funcin de la cantidad de sal que requieren, siendo
capaces de crecer en condiciones de extrema salinidad.
a) Caractersticas morfolgicas y de cultivo
Caractersticas Morfologa: Cocos, bacilos, formas raras. Coloreadas
por la presencia de Carotenoides
Caractersticas de cultivo: Halfilos extremos (crecen mejor en medios
que contienen 2.5- 5.2 M de sales totales), halfilos extremos en el
lmite (crecen mejor en medios que contienen 1.5-4.0 M de sales
totales), halfilos moderados (crecen mejor en medio que contienen
0.5-2.5 M de sales totales). Asimismo, un microorganismo
halotolerante es el que no muestra un absoluto requerimiento de sal
para crecer pero que se desarrolla bien en alta salinidades.
b) Hbitat y fuentes de aislamiento
La diversidad de los microorganismos halfilos es muy variada.
Muchos de estos microorganismos han sido aislados de hbitats que
presentan alta salinidad. Los ambientes extremadamente salinos son
raros, la mayora se encuentran en zonas calientes y secas, como son
lagos salinos, suelos salados y alimentos salados principalmente.
Se han aislado halfilos extremos en alimentos con alta concentracin
de sal, como salmueras, salsa de soya y pescado
c) Resistencia a los agentes fsicos y qumicos
Alta resistencia contra los antibiticos y los agentes lticos

d) Contaminacin y efecto sobre los alimentos

Las primeras evidencias de contaminacin de alimentos por bacterias
halfilas, o amantes de la sal, provienen de principios del siglo XX,
cuando se observaba crecimientos bacterianos de coloracin rojoprpura en algunos alimentos salados. Entonces, si la idea era
preservar por largos periodos de tiempo los alimentos salados, la
presencia de esas manchas color rojo-prpura era muy mala noticia.
Sucede que las bacterias halfilas secretan carotenoides, un tipo de
pigmentos que les permite obtener energa y protegerse de la

radiacin UV. Ese era el origen de las manchas coloridas; seal de la

irremediable descomposicin de los alimentos.

e) Factores que influyen en su supervivencia y desarrollo

Las clulas de los organismos no halfilos se rompen cuando son
expuestas a salinidades mayores de 10-12% de NaCl, debido a la
marcada diferencia en la concentracin del catin sodio (Na+) entre
el interior y el exterior de las clulas; pues la alta concentracin de
Na+ en el exterior provoca un incremento en la presin ejercida sobre
la clula, lo que conduce a una prdida de agua celular y,
consecuentemente, a su inevitable ruptura.
Esto no sucede con las clulas de los organismos halfilos, porque
ellos cuentan con alguna de las dos estrategias adaptativas
conocidas, las cuales evitan su ruptura. Una de ellas es utilizada por
los halfilos ms extremos, y consiste en liberar cationes de sodio
(Na+) hacia el exterior de la clula, al mismo tiempo que incorporan
iones de potasio (K+). Esta estrategia se conoce como sal interior. Las
cargas positivas acumuladas se compensan con iones negativos,
como cloruro (Cl-) o fosfato (PO 32-). De este modo, se propicia la
adaptacin de todos los sistemas intracelulares a una alta
concentracin (hasta 373 g/L) de cloruro de potasio (KCl) en el
citoplasma. La estrategia de sal-interior es utilizada por las
haloarqueas y las bacterias del orden Halanaerobiales, as como
Salinibacter ruber.
La otra estrategia se basa en la sntesis o acumulacin de solutos
compatibles. En este caso, los sistemas intracelulares no requieren
adaptacin alguna, ya que la sal se mantiene fuera de la clula. Por
ello, esta estrategia se conoce como sal-exterior. Los solutos
compatibles son compuestos orgnicos de tipo aminocido, azcar o
alcohol (figura 2), y su presencia es caracterstica de cada especie.
Los ms comunes son aquellos que requieren poca energa para su
produccin dentro de la clula, como polioles alcohol polihdroxilado
y azcares, los cuales tambin se pueden incorporar del medio.
Para ello, los halfilos utilizan transportadores especficos localizados
en la membrana celular que permiten la entrada de los solutos
compatibles hacia el citoplasma o interior de la clula. Algunos
microorganismos anaerobios, con metabolismos de baja energa,
simplemente incorporan solutos compatibles cuando stos se agregan
al
medio
de
cultivo
en
el
que
se
desarrollan.
Estos mecanismos de adaptacin a la salinidad permiten a los

halfilos tener tiempos rcord de vida en fase de latencia. Se

reportado la presencia de haloarqueas dentro de halitas, o rocas
sal, que constituyen una forma mineral del NaCl, con una edad
hasta 250 millones de aos, y pueden crecer si son colocadas en
medio nutritivo.

ha
de
de
un

Por otro lado, se ha demostrado que microorganismos encontrados en

cristales de yeso-halita (formas minerales del sulfato de calcio
CaSO42H2O y el NaCl) estn activos, porque han sido capaces de
incorporar carbono y nitrgeno por periodos de hasta un ao.

f) Demostracin y recuento en el laboratorio

El mtodo se basa en realizar un cultivo sobre un medio slido
selectivo y observar el desarrollo de colonias rojas propias de las
bacterias halfilas.

REACTIVOS
Medio de cultivo (Dussault y Lachance). Mezclar, en un recipiente
adecuado, 5 g de sulfato de magnesio, 1 g de nitrato de magnesio,
0,025 g de cloruro frrico, 5 g de peptona, 10 g de glicerina, 200 g de
cloruro de sodio y 1000 cm3 de agua destilada. Calentar un poco la
mezcla para disolver los ingredientes, ajustar el pH de la solucin a
7,5 usando un medidor potenciomtrico de pH, esterilizarla en
autoclave a 121 C durante 15 min y luego dividirla en dos porciones
iguales. A la una porcin, A, aadir un 10 por ciento de leche
descremada y a la otra, B, un 3 por ciento de agar. Inmediatamente
antes de usar el medio, fundir la porcin B, calentar la porcin A (que
debe estar bien mezclada para asegurar una suspensin uniforme) y,
luego de mezclarlas ntimamente, verter porciones de 15 cm 3 a 20
cm3 en cada caja de Petri y dejarlas solidificar a temperatura
ambiente.
PREPARACIN DE LA MUESTRA
Mezclar ntimamente la muestra y guardarla en un frasco estril
hermticamente cerrado hasta el momento del anlisis.
PROCEDIMIENTO
Espolvorear 1 g de la muestra para ensayo (ver 7.1) sobre la
superficie del medio de cultivo en una caja de Petri.

g) Interpretacin de su hallazgo y abundancia

Se encuentran en el agua saturada o casi saturada de sal. Tambin
son llamados halfilos extremos, aunque este nombre tambin se
refiere a otros organismos que viven en medios con alta
concentracin salina.
Los ambientes hipersalinos contienen una concentracin de sales
mayor de la que se considera promedio en los mares y ocanos
terrestres, que es de, aproximadamente, 3.5% de NaCl. Existen dos
tipos de ambientes hipersalinos: los talasohalinos (del griego
thalasa: mar y hals, hals: sal) que surgen a partir de la evaporacin
del agua marina, por lo que su proporcin inicial de sales es similar a
la del agua de mar y los atalasohalinos que proceden de la
disolucin de los depsitos de sales originalmente ubicados en los
continentes. En los ambientes talasohalinos predomina inicialmente
el NaCl, pero van acumulando otras sales a medida que el agua se
evapora. Las salinas son ejemplos tpicos de ambientes talasohalinos.

h) Gneros y especies prominentes

Domini
Archaea
o:
Filo:

Euryarchaeota

Clase:

Halomebacteria Cavalier-Smith
1986
Halobacteria Grant et al. 2002
Haloarchaea DasSarma et
DasSarma 2008

Orden:

Halobacteriales
GRANT & LARSEN, 1989

Familia:

Halobacteriaceae
GIBBONS, 1974

BACTERIAS OSMFILAS
Los Organismos osmoflicos son microorganismos adaptados a ambientes
con altas presiones, baja actividad de agua, as como altas concentraciones
de azcar (10 a 20% de glucosa). Se sabe que casi todos los
microorganismos osmfilos son levaduras (sin embargo tambin existen
bacterias osmfilas) muy similares a los organismos halfilos (que se
encuentran en medios salinos). Estos microorganismos suelen ser
microorganismos de vida libre muy cercanas a las salinas.
Estos organismos no requieren un alto valor de actividad de agua y toleran
los ambientes ms secos que los organismos no osmotolerantes.
Las altas concentraciones de azcar representan un factor de crecimiento
limitante para muchos microorganismos, sin embargo, los organismos
Osmfilos se protegen contra esta alta presin osmtica por la sntesis de
osmoprotectores tales como alcoholes y aminocidos.
Su gran importancia es debido a que causan el deterioro de productos
como los zumos de frutas, los jarabes o la miel, adems de tener
aplicaciones industriales como la fermentacin de la cerveza, panificacin,
produccin de vinos entro otros.
Algunos ejemplos de este tipo de microorganismos osmfilos son:
Saccharomyces cerevisiae (levadura de la cerveza), Saccharomycesboulardii
(usado en medicina), Saccharomyces bayanus (elaboracin de vino y sidra)
y Debaryomyces. El trmino "Saccharomyces" deriva del griego, que
significa "moho del azcar".

a) Caractersticas morfolgicas y de cultivo

Casi todos los microorganismos osmfilos son levaduras y debido a que
el gnero en la mayora de los casos es Saccharomyces, en base a esto
se presentar su morfologa:

Las levaduras son muy parecidas a bacterias macroscpicamente pero son

ms cremosas y los colores que presentan son blancos, beiges o un poco
ms oscuros. Algunas son rosadas o rojas porque tienen carotenoides; son
unicelulares; sus clulas tienen forma y dimensiones diversas, desde las
esfricas ovoides y elipsoidales, a las cilndricas que pueden ser muy
alargadas y aun filamentosas.

Las levaduras crecen en medios slidos (con agar) formando colonias

muy semejantes a las de las bacterias. La mayora de las colonias
jvenes son redondas, de 2-3 mm de dimetro, blancuosas.

b) Hbitat y fuentes de aislamiento

Estos microorganismos viven en presencia de alta concentracin de
azcares, por ejemplo frutas, flores, y cortezas de arboles.
El aislamiento de las levaduras puede efectuarse, habitualmente, con el
mtodo de las placas. Este consiste en introducir un asa de platino
esterilizada en una suspensin de microorganismos convenientemente
diluida; esta despus se deposita sobre la superficie del cultivo agarizado en
placa petri.

c) Resistencia a los agentes fsicos y qumicos

1.-Oxigeno
Las levaduras crecen bajo condiciones aerobias. Algunas son estrictamente
aerobias y otras son facultativas. Las facultativas crecen mejor en aerobiosis
y bajo condiciones anaerobias lo hacen ms lentamente. Las levaduras
aerobias estrictas se conocen como oxidativas; y las que pueden
desarrollarse tanto en medios aerobios como anaerobios se denominan
fermentativas.
2.-pH
La acidez o alcalinidad de un medio de cultivo se expresa por su pH. Para la
mayora de las bacterias el pH ptimo de crecimiento est entre 6,5 y 7,5
aun cuando algunas pocas especies pueden crecer en los extremos del
rango de pH. En general, se considera que las levaduras, al igual que los
mohos, se desarrollan mejor en medios cidos (3,8- 5.6). Sin embargo estas
pueden tolerar un rango de pH que va desde 2.0 hasta los 8.0.
3.- Temperatura
Existen levaduras que pueden crecer a muy diversas temperaturas,
generalmente en un rango que va de 0 a 50C. la mayora de las especies

saprfitas, sin embargo, tienen temperaturas optimas de crecimiento entre

los 22 y 30C.
4.- Concentracin de soluto
Las levaduras pueden generalmente desarrollarse en medios con
concentraciones relativamente altas de solutos. Existe, adems, un grupo
de levaduras que toleran cantidades de soluto aun mayores, por lo que se
denominan osmfilas.
5.- Actividad de Agua
El aw mnimo en que las bacterias crecen vara ampliamente pero los valores
ptimos para la mayora de las especies son mayores de 0,99. Existen
ciertos microorganismos que pueden crecer en medios con elevadas
concentraciones de solutos y se conocen como osmotolerantes. Otros
microorganismos necesitan para crecer elevadas concentraciones de
solutos, a stos se les denomina osmflicos.
En la siguiente tabla se presentan como ejemplo algunos microorganismos y
el valor de aw en el que se produce su crecimiento.

d) Contaminacin y efecto sobre los alimentos

Son importantes debido a que causan el deterioro de la industria
azucarera y productos dulces, con productos como zumos de frutas,
zumos concentrados de frutas, azcares lquidos, la miel y en algunos
casos el mazapn.

Los organismos Osmfilos con posible patogenia son Aspergillus,

Saccharomyces, Enterobacter aerogenes y Micrococcus. Sin embargo,
ninguno de ellos es altamente patgeno, y slo causan infecciones
oportunistas, es decir, las infecciones en personas con el sistema
inmunolgico debilitado. Son ms bien una causa intoxicacin
alimentaria en humanos.

e) Factores que influyen en su supervivencia y desarrollo

Requieren para crecer un medio con alta presin osmtica.

Los microorganismos Osmfilos necesitan una elevada presin
osmtica para poder desarrollarse.
Suelen ser microorganismos de vida libre, cercanos a las salinas.
Crecen en diluciones de elevada osmolaridad, es decir en ambientes
naturales con concentraciones altas de sales.
Presin osmtica es alta, por tanto necesitan poca agua para vivir.
Se caracterizan por desarrollarse a presin osmtica interior alta, a
diferencia de los halfilos que se desarrollan a presin osmtica
exterior alta.
Los rangos ptimos de crecimiento microbiano es a Aw=0.60-0.85,
entre los microorganismos altamente resistentes a baja Aw se
encuentran los osmfilos.
Entre los factores ambientales y crecimiento microbiano: los
microorganismos osmfilos viven en presencia de altos valores de
azcares.
Parmetros que afectan la supervivencia de los microorganismos:
cuando se produce agua y cidos orgnicos en alimentos, se aumenta
la Aw y reducen el pH. Ambos favorecen el crecimiento posterior de
las levaduras osmfilas, mientras que el pH disminuido acarrea la
hidrlisis de la sacarosa para producir ms azcar invertido.

f) Demostracin y recuento en el laboratorio

Control microbiolgico de los alimentos. Microorganismos osmfilos.
Recuento en placa por siembra profunda. NORMA TECNICA ECUATORIANA
NTE 1529-19.
El procedimiento se basa en la cuantificacin de la poblacin microbiana
presente en los alimentos slidos o lquidos, sembrando en profundidad o en
superficie. Se realizan diluciones logartmicas en base 10 para su
cuantificacin, las cuales se pueden relacionar con el recuento de
microorganismos multiplicado por el factor que es el inverso de la dilucin.

La cantidad de muestra va a depender del tipo de alimento y de los

parmetros que existan, sin olvidar que se guarde una relacin 1+ 9 o sea
parte del alimento y 9 partes de diluyente. Se informa el nmero de UFC/g o
ml de alimento.
Recuento de levaduras.
Las levaduras se pueden encontrar como carga normal de los alimentos con
bajo pH y Aw, alto contenido de slidos como sal o azcar y temperaturas
bajas de almacenamiento.
Para la determinacin de Levaduras: se preparan diluciones de igual forma
que para recuento en placa. El agar a necesitar es extracto de maltaoxitetraciclina (OGY) fundido a 45C en cada caja petri. Se incuba a 22C por
5 a 7 das, se selecciona las cajas entre 20 y 100 colonias y multiplicar por
el inverso de la dilucin.

g) Interpretacin de su hallazgo y abundancia

Las levaduras encontradas en el azcar son principalmente osmfilas, de
igual forma las bacterias osmfilas crecen en concentraciones elevadas de
azcar. Este tipo de microorganismos est presente y alteran alimentos
como caramelos, confituras, frutas deshidratadas, frutos Secos y copos de
cereales, etc. Por debajo de un valor de aw 0.60 ya no tienen lugar la
multiplicacin microbiana.
Los Xerfilos son organismos que se definen como aquellos que crecen ms
rpidamente bajo condiciones de relativa sequedad o capaces de
multiplicarse a aw inferiores a 0,85. Todos los microorganismos xerfilos
conocidos son mohos o levaduras, as mismo los microorganismos osmfilos
son aquellos que crecen en hbitats con altas presiones osmticas, este
trmino se aplica habitualmente a las levaduras tolerantes al azcar y es
sinnimo de xerfilo.

Hay especies de levaduras osmfilas que deterioran alimentos con un

porcentaje elevado de azcar, tales como mermelada, miel de abeja y
confituras. Las cuales son consideradas difciles de deteriorar por
microorganismos. Asimismo estas se alteran en consecuencia del
crecimiento de estas en la pelcula de la melaza con metabolismo
preferencial del componente de fructuosa de los azucares invertidos.

Muchas de las veces al producir agua y cidos orgnicos, que aumentan

la (Aw) y reducen el pH, favoreciendo el crecimiento posterior de las
levaduras osmfilas, mientras que el pH disminuido acarrea la hidrlisis
de la sacarosa para producir ms azcar invertido.

h) Gneros y especies prominentes

Saccharomyces cerevisiae.
Levadura de la cerveza. Este gnero se usa en la produccin de vino, pan y
cerveza.
Saccharomyces boulardii.
Con potencial probitico, tanto en los alimentos como en nutracuticos.
Saccharomyces bayanus.
Se emplea fundamentalmente en la elaboracin del vino as como de la
sidra, en concreto de los procesos de fermentacin alcohlica.
Debaryomyces.
Tolera elevadas concentraciones de sal, siendo capases de crecer en la
superficie de las salmueras de los quesos con altas concentraciones de sal
de orden 24 por cien.
Adems los microorganismos Osmofilos pueden ser:
Las especies sacarolticas las cuales utilizan azcares para formar cido
butrico, cido actico y alcoholes.
Halfilos que se aplica a los organismos que viven en medios con presencia
de gran cantidad de sales.

Bibliografa
Revista ciencia y desarrollo vida microscpica en mundos salados Marzoabril del 2013
http://www.cyd.conacyt.gob.mx/264/articulos/vidas-microscopicas-mundossalados.html

Wikipedia enciclopedia libre Halobacteria

https://es.wikipedia.org/wiki/Halobacteria
SAL COMN. EXAMEN DE BACTERIAS HALFILAS Instituto Ecuatoriano de
Normalizacin
http://www.normalizacion.gob.ec/wpcontent/uploads/downloads/2013/11/nte_inen_55.pdf
Slideshare Ecologa De Las Bacterias
http://es.slideshare.net/laboratorio_001/03-ecologiadelasbacterias
Wikipedia enciclopedia libre Staphylococcus
https://es.wikipedia.org/wiki/Staphylococcus

http://html.rincondelvago.com/microbiologia_2.html
sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/ciencia/v13_n1/pdf/a08v13n1.pdf
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S131525562004000100004
http://www.redalyc.org/pdf/579/57937307.pdf
http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?
option=com_content&view=article&id=250&Itemid=276
http://www.mybiolumix.com/rapid-microbiological-testing-of-osmophilic-yeast-withthe-biolumix-vial/
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC170063/