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Objetivos
Familiarizarse con la siembra de
hongos y bacterias y su observacin
macroscpica y microscpica.
B. Observar
montajes
de
placas,
tanto preparaciones en fresco como
coloreadas.
C. Realizar diferentes coloraciones para
identificar
tipos morfolgicos de hongos y
bacterias
D. Reconocer las diferentes formas
celulares microscpicas bacterianas y
de hongos.
ttradas,
estreptococos.
A.
1.
Introduccin
OBSERVACIN
MICROSCOPIO:
AL
La
estafilococos
Preparaciones
para
observar
morfologa bacteriana:
morfologa de los microorganismos
se puede examinar
siguiendo
dos
rutas:
observando
las
Form
a
Puntiforme Circular
Irregular
Rizoide
Filamentosa
Huso o Eje
Elevaci
n
Plana
Elevada
Convexa
Borde
Entero
Ondulado Lobulado
Filamentoso Enrollada
Crenada
Caractersticas
pticas: Opaco, no permite el paso de la luz. Translcido, permite el paso de la luz sin
dar una visibilidad completa de objetos vistos a travs de la colonia. Opalescentes, se
asemeja el color de un palo.
Iridiscente, exhibiendo los colores de arco iris. Mate, no satinado o brillante. Brillante,
brillante o no mate.
Consistencia: Cremosa, como mantequilla. Viscosa, se estira la colonia formando un
filamento mucoso una vez se
retira el asa de punta. Membranoso, crecimiento tipo membrana, delgada. Quebradizo,
crecimiento seco.
Textura: Homognea, granular o en suspensin membranosa
Pigmentacin o color: Blanco, ocre, amarillo claro, amarillo paja, amarillo profundo,
rosado, rojo, etc. El color depende mucho del medio de cultivo en el que se haya sembrado
el microorganismo ya que este responde a los
elementos del medio.
OBSERVACIN MACROSCPICA DE
LAS COLONIAS DE HONGOS:
Los
hongos
son
seres
vivos,
hetertrofos, carentes de clorofila,
descomponedores de materia orgnica
y formadores de esporas. Algunos se
reproducen sexual y asexualmente. Se
dividen en hongos macroscpicos y
microscpicos, los cuales se pueden
ver a simple vista como mohos y
levaduras.
La
mayora
de
los
hongos
estn
constituidos por finas fibras llamadas hifas,
que contienen un protoplasma, a menudo
divididas por tabiques llamados septos. En
cada hifa hay uno o dos ncleos y el
protoplasma se mueve a travs de un
diminuto poro que ostenta en el
2.
Materiales
Llevar siempre al laboratorio:
Bata blanca de laboratorio. Manga larga.
Gorro.
Guantes de nitrilo
Tapabocas
Marcador sharpie
Toallas de papel
Cinta de enmascarar
Material de laboratorio para esta
prctica:
Cajas de Petri con medios de cultivo (Agar
nutritivo y
PDA)
Asas de Inoculacin: recta y redonda
Solucin salina
Kit para tincin de gram
Lminas o portaobjetos
Laminillas o cubreobjetos
Pipetas pasteur
Papel de arroz
Microscopio
Mechero
Cultivos de hongos y bacterias
3. Procedimiento
El profesor proporcionar cultivos puros de
bacterias, levaduras y hongos.
Se practicar la tcnica de aislamiento por
estra o
agotamiento a partir de muestras de
bacterias y levaduras aisladas en
cultivo puro.
Tambin se har siembra por puncin de
hongos.
A parte se harn lminas para observar al
microscopio:
- De hongos y bacterias con azul de
lactofenol
- De bacterias para hacer tincin de gram
A. PARA BACTERIAS
1. Hacer la observacin macroscpica de
cada una de las cepas bacterianas segn el
cuadro: caractersticas macroscpicas de
las colonias bacterianas.
2. Hacer la observacin microscpica de
cada una de las
bacterias
as:
2.
superior a dos centmetros cuadrados,
Materiales
usando el asa o con la ayuda de otra
lmina.
6. Dejar que la preparacin se seque al aire
o Fijar con calor, fameando rpidamente
por tres veces seguidas a travs de la
llama del mechero: Tenga Cuidado de
No quemarse porque LA LMINA SE
CALIENTA.
7. Colorear segn protocolo para la tincin
de gram.
Tincin de Gram (slo para bacterias)
1. Preparar un frotis segn se indic en la
seccin anterior. Cubrir totalmente el frotis
con unas pocas gotas del colorante cristal
violeta, dejar un minuto.
2. Descartar en la rejilla con bandeja el
exceso de
colorante. Enjuagar con
agua.
3. Agregar algunas gotas del reactivo lugol
para cubrir la preparacin totalmente,
dejar por un minuto.
4. Descartar el exceso de lugol. Enjuagar con
agua.
5. Realizar la decoloracin con la mezcla
alcohol- acetona al 3%, por
30
segundos. Lavar inmediatamente con agua
suavemente.
Descripcin
macroscpica
Colonia borde,
forma, elevacin
Objetivo
empleado:
Tcnica de siembra por estra o
agotamiento
(para bacterias y levaduras)
en
forma
Hacer la observacin
microscpica as:
a. Esterilice el estilete o asa de
punta especial para hongos, y
luego djelo enfriar
una
Objetivo
empleado:10x o
40X la levadura observada con azul de
Dibuje
lactofenol y dibuje:
Nombre de levadura
Medio en la que est
sembrado Descripcin
macroscpica: Colonia
color, forma, textura
diferencial?,
cul de stas es ms apropiada para la
observacin de bacterias?
C. Qu otro tipo de tinciones existen?
Objetivo 10X o
40X
Tcnicas de siembra por puncin
(para hongos miceliales):
Con el asa recta esterilizada al mechero,
coger un
poco del hongo crecido en la caja de Petri
dada por el profesor (si es necesario
coger un pedazo pequeo de agar o
medio de cultivo con hongo); y pinchar
en el centro del medio de cultivo en la
caja de Petri que se va a inocular o en
donde
se
pondr
a
crecer
este
microorganismo.
Figura
3.
Siembra
por
de mohos
(Elaborado
por:
Laura
Afanador).
puncin
Condiciones de Incubacin
1. Incubar las cajas en forma Invertida a
25C- 28C
durante 5-7 das.
2. Recuerde Marcar Adecuadamente las
Cajas:
Grupo,
Fecha,
Cultivo,
Organismo Sembrado y Nombres de
ustedes.
Cuestionario:
A.
qu?
La fucsina es el ltimo colorante que se
adiciona en la coloracin de gram, por qu?
F.
Cul es el fundamento en la que se basa
la coloracin
de Gram?
G.
Indique la importancia ecolgica o una
caracterstica especfica de cada una de las
cepas con las que se trabaj: tanto de
bacterias como de hongos y levaduras.
E.