INFORME LABORATORIO DE

MICROBIOLOGA
SESIN 1

MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ

CORREO: mery.lopez@unad.edu.co
TUTORA VIRTUAL

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

MAYO DEL 2014

PRACTICA 1.
NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir el

riesgo de transmisin de enfermedades infecciosas, las plagas de cuarentena, las
especies exticas invasoras, organismos vivos modificados. Cuando se trabaja en
laboratorio con microorganismos se deben poner en prctica varias normas de
bioseguridad para evitar accidentes y adquirir enfermedades.

OBJETIVO:

Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.

PROCEDIMIENTO:
A continuacin encuentra las normas de bioseguridad bsicas de cualquier
laboratorio y los cuidados que se deben tener al lavar material del vidrio. Por favor
realice una buena lectura pero principalmente ponga en prctica todas las
recomendaciones.

Normas generales de bioseguridad.

Mantener una actitud responsable, no se permite hacer bromas, jugar, correr
o gritar.
No se permite el ingreso de personas ajenas al laboratorio y/o que no porten
sus implementos de bioseguridad adecuados.
No se permitir el ingreso de personas bajo efectos de bebidas alcohlicas o
sustancias psicoactivas.
Para el ingreso a los laboratorios, prstamo de material o equipo se debe
presentar el carnet vigente.
Todas las superficies de trabajos se limpiaran y desinfectaran diariamente y
siempre que se produzca un derrame.
Usar bata de manga larga con puos, la cual debe estar completamente
cerrada.
Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos los
elementos de seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.

 Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas, manillas,
reloj o elementos que puedan entorpecer la manipulacin de los materiales o
equipos.
Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber o fumar en el
laboratorio.
Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias
qumicas o biolgicas utilizadas en el desarrollo de las prcticas.
No trabajar nunca solo en el laboratorio.
No pipetear sustancias con la boca.
Cuando en el desarrollo de las prcticas se utilice cido y agua en diluciones,
agregue el cido sobre el agua.
No devolver reactivos a los frascos, as no hayan sido utilizados.
Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente responsable
del laboratorio.
Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie
corra peligro de quemarse.
Los residuos y muestras de procedimientos de microbiologa que van a ser
incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivacin en
autoclave.
Como norma general no se podr verter ninguna sustancia peligrosa para el
medio ambiente por el desage.
Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesn, devolver los
elementos y materiales perfectamente limpios, asegrese de dejar cerrado el
gas, agua y lavarse las manos.
Para la eliminacin de los residuos se deben utilizar los recipientes
destinados para este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable
del laboratorio.
Cualquier accidente por pequeo que sea debe comunicarse al docente
responsable del laboratorio.

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS:

Bioseguridad
La bioseguridad es una doctrina de comportamiento encaminada a lograr actitudes
y conductas que disminuyen el riesgo del trabajador en cuanto a su salud, de
adquirir infecciones en el medio laborar. El conocimiento y la aplicacin adecuada
de estas normas como la utilizacin de bata, guantes, tapabocas, entre otros; As
como la importancia de estas normas antes, durante y despus de cada prctica es
un deber de cada estudiante en el laboratorio donde se est desenvolviendo. Estas
normas son la base de un buen control de calidad del producto o trabajo que se
est llevando a cabo. Se define como el conjunto de medidas preventivas,
destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de
agentes biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la prevencin de impactos nocivos.

CONCLUSIONES

En el laboratorio se debe conocer y ser consiente de cada una de las normas

de bioseguridad con el fin de evitar o prevenir accidentes.
Cuando estamos trabajando dentro del laboratorio, debemos tener las
prendas adecuadas para la labor que estamos realizando.
La higiene es un factor importante, del cual depende el buen desempeo de
las actividades que se realizan durante la prctica.
El conocimiento de soluciones para realizar limpieza antes y despus de la
prctica, nos concientiza del peligro que podemos correr si no lo hacemos de
la forma correcta.

BIBLIOGRAFA

Koneman, E. Diagnostico microbiolgico, Editorial mdico panamericana, 110

- 111.
bioseguridad
en
el
laboratorio
de
biologa:
Rescatado
http://depa.fquim.unam.mx/bacteriologia/20082/bioseguridad.pdf

de:

PRACTICA 2.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

OBJETIVO:

Aprender la preparacin y manipulacin de los medios de cultivo.

MATERIALES:

ELEMENTO

Vasos de precipitado

Mechero de alcohol

Matraz Erlenmeyer

Gradilla

IMAGEN

DESCRIPCIN
Son utensilios que permiten
calentar
sustancias
hasta
obtener precipitados.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.

Es un recipiente que permite

contener
sustancias
o
calentarlas.
Utensilio que sirve para colocar
tubos de ensayo. Este utensilio
facilita el manejo de los tubos
de ensayo.

Tubos de ensayo

Agitador

Caja de
Petri

Aza de
Siemba

El horno de
laboratorio

Estos recipientes sirven para

hacer experimentos o ensayos,
los hay en varias medidas y
aunque generalemnte son de
vidrio tambin los hay de
plstico.

Estn hechos de varilla de

vidrio y se utilizan para agitar o
mover sustancias, es decir,
facilitan la homogenizacin.

Es un recipiente de cristal o de
plstico , que consta de una
base circular, y las paredes son
de
una
altura
baja
aproximadamente de (1 cm), se
utiliza principalmente para el
cultivo de microorganismos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.

El horno de laboratorio es un
tipo de horno comnmente
usado
para
deshidratar
reactivos de laboratorio o secar
instrumentos.

PROCEDIMIENTO:
Revisar las etiquetas de los
,,,,,,,
recipientes
de
diferentes
medios de cultivo, anote el
nombre, la composicin y
forma de preparacin.

Pesar 6.5 gramos del agar deshidratado. Mida

325 mililitros de agua destilada con una
probeta. De esos 325 mililitros de agua
destilada coloque la mitad en un erlenmeyer
previamente lavado con agua destilada, para
eliminar residuos de otras sustancias.

Tapar la boca del erlenmeyer papel

aluminio. Si las normas de
preparacin no indican otra cosa, la
esterilizacin se lleva a cabo en
autoclave,
a
121
grados
centgrados, durante 15 minutos.
Esterilizado el medio deje enfriar
aproximadamente a 45C.

Proceda a servir el medio en

presencia del mechero y en cajas de
Petri, previamente esterilizadas.

Llevar la preparacin a disolver en la

plancha de calentamiento, agite
constantemente con ayuda de la
varilla de vidrio hasta que ebulla para
lograr la disolucin total del Agar.

Finalmente tenga en cuenta que para

preparar Agar inclinado en tubo, solo
cambia el momento en que se pone a
solidificar ya que los tubos deben
colocarse sobre una pipeta para lograr
que se forme el pico de agar inclinado.
Tome un medio de cultivo al azar y
realice los clculos para preparar
volmenes de 356 ml, 1567 ml, 131 ml
y 24 ml.

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS:

Medio de cultivo:
De manera general se denomina medio de cultivo a cualquier material que
presente una adecuada combinacin de nutrientes para permitir el crecimiento o el
incremento del nmero de clulas de una poblacin microbiana.
En los Laboratorios de Microbiologa se utiliza una gran variedad de medios de
cultivos para mantener las cepas, aislar o identificar microorganismos con varias
finalidades: determinar la existencia de contaminacin de alimentos, medicamentos
o cosmticos; diagnosticar alguna enfermedad, elaboracin de vacunas
bacterianas, etc.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. Segn su origen:
a) NATURALES: Son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: Son los medios que contienen una composicin qumica
definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.

2. Segn su estado fsico

a) LQUIDOS: Usualmente se denominan caldos ya que contienen los
nutrientes disueltos en agua. Permiten obtener suspensiones con un elevado
nmero de microorganismos. Ej. Caldo nutritivo.

b) SLIDOS: Se pueden preparar a partir de medios lquidos a los cuales se

les aaden agentes solidificantes como agar, gelatina o slica gel. Se utilizan
con frecuencia en el aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en
el laboratorio. Ej. Agar nutritivo.

ESTERILIZACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la destruccin total
de los microorganismos viables presentes en un determinado material. Este
procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacutico, ya que existen
muchos procesos que requieren la utilizacin de materiales estriles. Entre stos
podemos destacar:

La esterilizacin de equipos quirrgicos y otros materiales de uso mdico con

el propsito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.

El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas,

etc.) que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiologa.

La preparacin de medios de cultivo que sern empleados con diferentes

propsitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o
personal, anlisis microbiolgico de medicamentos, cosmticos, alimentos,
etc.)

CONCLUSIONES

Por medio de esta prctica, al investigar la teora y realizar la preparacin de

un medio de cultivo, se logr la elaboracin adecuada de los mismos, as
como la seleccin apropiada para el uso que se les dar posteriormente a los
medios del mtodo de esterilizacin que eliminara los restos microbianos
que pudiesen haber quedado en el medio de cultivo ya que si existe alguno
de estos, ya no sera adecuado para el uso que se le pudiera llegar a dar.
Tambin se observ que de acuerdo al tipo de bacteria que se requiera
sembrar, ser el tipo de medio de cultivo, esto, ya que cada bacteria requiere
cierto tipo de nutrientes para subsistir y formar sus colonias, adems de que
cierto tipo de medios de cultivo, nos pueden mostrar de acuerdo a su
composicin ciertas caractersticas que presentan determinado tipo de
bacterias, ya sea por su pH y que este sea indicado por los indicadores de
los medios o por que reaccione con ciertos componentes del medio creando
colores o formas.

BIBLIOGRAFA

Davis, Dulbecco, Eisen and Ginsberg. 1990. Microbiology. Fourth Edition. J.

B. Lippincott Company.
Ketchum Paul A. Microbiology. 1988. Concepts and Applications. John Wiley
and sons.
Madigan M.T, Martingo J. M. y Jack Parker. 2004. Dcima Edicin. Brock
Biologa de los Microorganismos Prentice Hall

Cultivo

de
los
microorganismos.
Recuperado
de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_
Tema_5_Cultivo.pdf

Prescott, L.; Harley, J.; Klein D. 1999. Microbi ologa. Cuarta edicin.
McGraw-Hill Interamenericana.

INFORME LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA
SESIN 2

MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ

CORREO: mery.lopez@unad.edu.co
TUTORA VIRTUAL

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

MAYO DEL 2014

PRACTICA 3.
MICROORGANISMOS DEL AMBIENTE

En esta prctica se va a demostrar la presencia de microorganismos en el ambiente

que nos rodea. Con este fin se toman muestras de diferentes sitios y se las siembra
en un medio de cultivo que contiene las sustancias nutritivas que las bacterias
necesitan para desarrollarse, se las lleva a incubar a la temperatura apropiada y se
las deja el tiempo necesario para que crezcan y se puedan observar las colonias a
simple vista y as determinar las caractersticas macroscpicas de esas colonias.

OBJETIVOS:
Explicar cmo se puede demostrar la presencia de microorganismos en
diferentes sitios.
Describir las caractersticas macroscpicas de las colonias bacterianas.

MATERIALES:
ELEMENTO

Vasos de precipitado

Mechero de alcohol

Matraz Erlenmeyer

Gradilla

IMAGEN

DESCRIPCIN
Son utensilios que permiten
calentar
sustancias
hasta
obtener precipitados.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.

Es un recipiente que permite

contener
sustancias
o
calentarlas.
Utensilio que sirve para colocar
tubos de ensayo. Este utensilio
facilita el manejo de los tubos
de ensayo.

Tubos de ensayo

Agitador

Caja de
Petri

Aza de
Siemba

El horno de
laboratorio

Estos recipientes sirven para

hacer experimentos o ensayos,
los hay en varias medidas y
aunque generalemnte son de
vidrio tambin los hay de
plstico.

Estn hechos de varilla de

vidrio y se utilizan para agitar o
mover sustancias, es decir,
facilitan la homogenizacin.

Es un recipiente de cristal o de
plstico , que consta de una
base circular, y las paredes son
de
una
altura
baja
aproximadamente de (1 cm), se
utiliza principalmente para el
cultivo de microorganismos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.

El horno de laboratorio es un
tipo de horno comnmente
usado
para
deshidratar
reactivos de laboratorio o secar
instrumentos.

PROCEDIMIENTO:

Dejar una caja de Petri abierta

durante 30 minutos en el sitio
del laboratorio que desee.

Tocar con sus dedos la

superficie de una caja
de Petri.

Pasar un copito sobre la

superficie del mesn en el
cual
est
trabajando
y
siembre en una caja de Petri.

Pasar sus dedos por el

cabello y rasque suavemente
para que el producto que
salga caiga sobre la caja de
Petri.

Toser o estornudar sobre una

caja de Petri.

Introducir un copito en su odo

y siembre en una caja de
Petri.

Sembrar una muestra

tomndola del sitio
que desee.

Microorganismos del ambiente

Siembra de microorganismos presentes en la piel, computador y en una

herida.

TABLA DE RESULTADOS:

SITIO DE TOMA DE
LAS MUESTRAS

CANTIDAD DE
CRECIMIENTO

CARACTERSTICAS
DE LAS COLONIAS

Piel
.
Sedimentacin en la
base color marrn
oscuro

Expandido

Herida

Cantidad de colonias de
microorganismos:
Borde: redondeado
Forma: puntiforme
Elevacin: plano
convexa

381= blancas
192= Amarillas
Datos tomados
cuenta colonias

del

Computador
Borde: espiculado
Forma: rizoide
Elevacin: cncavo

100% de la caja Petri

Estornudo

Cantidad de colonias de
microorganismos:
Borde: redondeado
Forma: puntiforme
Elevacin: convexa

62= blancas
97= Amarillas
Datos tomados
cuenta colonias

del

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS:

Se marcaron las cajas de Petri con los siguientes datos; nombre del Agar,
grupo, y muestra. Una vez realizado esto se procedi a la siembra de la
muestras.

Las cuales fueron:

Frotes de piel
Frotes en computador
Frotes en una herida. Presente en el dedo ndice de un estudiante, en
los siguientes agares.

Agares utilizados:

Agar nutritivo 3.36 g.

PDA 4.7g.
Estrato de malta 4.26 g.

Las muestras una vez colocadas en los agares, se sometieron a un periodo

de incubacin de 15 das a una temperatura promedio de 37 grados Celsius.
Pasado este periodo, fueron retiradas en sus respectivas cajas, y posterior
revisin

COMPOSICIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS:

(Agar nutritivo, PDA, extracto de malta)

AGAR NUTRITIVO:
Frmula (en gramos por litro)
Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
3.0
Cloruro de sodio
8.0
Agar
15.0

Instrucciones
Suspender 31 g de polvo por litro
de agua destilada. Mezclar y
dejar reposar 5 minutos. Calentar
suavemente agitando y hervir 1 o
2 minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121C
durante 15 minutos.

pH final: 7.3 0.2

Fuente: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm

AGAR P.D.A:
Infusin de papa
200.0
Dextrosa
20.0
Agar bacteriolgico 15.0
PH: 5.6
Fuente:http://www.electronicsystems.com.mx/pdf/AGAR%20DEXTROSA%20
Y%20PAPA.pdf

ESTRACTO DE MALTA:
Extracto de Malta 10 g
Agar-Agar 15 g
Procedimiento:
Se pesan los ingredientes y se mezclan en el matraz con 1000 ml de agua
destilada. La suspension se calienta y agita hasta que queden totalmente
disueltos los ingredientes.
Fuente:https://lisergia.org/tutoriales/preparacion-de-medios-de-cultivossolidos-agares.34/

MEDIO DE CULTIVO SELECTIVO Y UN MEDIO DE CULTIVO NO SELECTIVO

Medio de cultivo selectivo:

Son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones fsicas
del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin
de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este
tipo de medio slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e
inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir
de poblaciones mixtas.

Medio de cultivo no selectivo:

Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos poco

existentes. Es el medio ms frecuentemente utilizado para mantener colonias
microbianas. Por ejemplo: agar comn o caldo comn.

CONCLUSIONES

La tincin simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para

que se vean las formas y las estructuras celulares bsicas.
Los microorganismos colocados en medios de cultivo slido, se multiplican
dando un crecimiento caracterstico.

Se demostr la presencia de microorganismos en el ambiente que nos

rodea. Con este fin se tomaron muestras de diferentes sitios y se les sembro
en un medio de cultivo que contiene las sustancias nutritivas que las
bacterias necesitan para desarrollarse y multiplicarse.

BIBLIOGRAFA

AGAR NUTRITIVO:
Fuente: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/nutritivoagar.htm

AGAR P.D.A:
Fuente:http://www.electronicsystems.com.mx/pdf/AGAR%20DEXTROSA%20
Y%20PAPA.pdf

ESTRACTO DE MALTA:
Fuente:https://lisergia.org/tutoriales/preparacion-de-medios-de-cultivossolidos-agares.34/

PRCTICA 4.
SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el
crecimiento de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de
Petri, que contiene un medio compuesto por las sustancias que necesitan los
microorganismos para crecer. A veces se aaden otras clases de sustancias; por
ejemplo, para impedir el crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el
cultivo. La siembra se puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos
de vidrio con gel, frascos con lquidos nutritivos para los microorganismos.

OBJETIVOS:
Determinar las condiciones necesarias para realizar la siembra de
microorganismos.
Reconocer los distintos sistemas de siembra y su utilidad.

MATERIALES:
ELEMENTO

Vasos de precipitado

Mechero de alcohol

Matraz Erlenmeyer

Gradilla

IMAGEN

DESCRIPCIN
Son utensilios que permiten
calentar
sustancias
hasta
obtener precipitados.
Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.

Es un recipiente que permite

contener
sustancias
o
calentarlas.
Utensilio que sirve para colocar
tubos de ensayo. Este utensilio
facilita el manejo de los tubos
de ensayo.

Tubos de ensayo

Agitador

Caja de
Petri

Aza de
Siemba

El horno de
laboratorio

Estos recipientes sirven para

hacer experimentos o ensayos,
los hay en varias medidas y
aunque generalemnte son de
vidrio tambin los hay de
plstico.

Estn hechos de varilla de

vidrio y se utilizan para agitar o
mover sustancias, es decir,
facilitan la homogenizacin.

Es un recipiente de cristal o de
plstico , que consta de una
base circular, y las paredes son
de
una
altura
baja
aproximadamente de (1 cm), se
utiliza principalmente para el
cultivo de microorganismos.
Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.

El horno de laboratorio es un
tipo de horno comnmente
usado
para
deshidratar
reactivos de laboratorio o secar
instrumentos.

PROCEDIMIENTO:

Siembra de medio slido

a medio lquido

Tomamos el tubo que

contiene la muestra a
sembrar, retire la tapa del
tubo, flamee la boca del
tubo. Introduzca el asa en
tubo sin tocar las paredes
y tome un poco de colonia
del
cultivo,
flamee
nuevamente la boca del
tubo, tpelo y djelo en
una gradilla.

Esterilizamos el asa en el
mechero
despus
de
usarla.

Incube los tubos a 37C

por 24 horas.
Observamos el crecimiento
obtenido. Si no hay
crecimiento el caldo queda
transparente

Marcarmos correctamente
los tubos con el nmero
del grupo, sistema de
siembra utilizado y la
fecha.

Esterilizamos un asa recta

a la llama de un mechero y
djela enfriar.

Tomamos el tubo de caldo

nutritivo estril en el cual
va a colocar la muestra,
destpelo, flameando la
boca el tubo con el
mechero e introduzca el
asa
con
la
muestra
obtenida.

Realizamos movimientos
de rotacin con el asa para
emulsionar con el caldo las
paredes del tubo. Retire el
asa, flamee la boca del
tubo y tape.

Siembra de medio lquido a

slido

Se procede de la misma forma que

en la siembra anterior pero
utilizando el asa recta.

Los medios slidos contienen agar

en proporcin de 1.5 a 2.0% y se
emplean para obtener colonias
aisladas. Las placas de agar se
pueden inocular mediante varios
mtodos:
como
estras,
agotamiento y rejilla con el fin de
lograr un cultivo puro.

Se procede en la misma
forma que en la siembra
anterior pero con el asa de
argolla. Si la siembra es en
tubo se hace la puncin y
estra

Si es en caja se puede utilizar

diferentes sistemas como estra,
agotamiento, rejilla con el fin de
lograr un cultivo puro.

Siembra en profundidad

Se verti un poco de agar

nutritivo en la caja de Petri,
luego tapamos la caja;
realizamos
movimientos
suaves sobre el mesn, en el
sentido de las agujas del reloj,
luego al contrario, en forma
de L y L invertida, y por ltimo
en forma de 8.

Se envolvi las cajas de Petri

y los tubos con cinta de
enmascarar,
marcndolos
luego con el nmero de
grupo, la fecha. Luego se
incubo 37 c por 48 horas.

Se marc la caja de Petri

estril con el nmero del grupo,
la fecha y siembra en
profundidad.
Se
abre
ligeramente la caja de Petri
cerca del mechero.

Se abre un tubo con cultivo de

bacterias y con ayuda de una
pipeta de Pasteur plstica, se
transfiere 1 ml de ste cultivo
a la base de la caja de Petri
estril.

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS:

En el desarrollo de esta prctica se realiz la siembra de microorganismos. Un
medio de cultivo es un mtodo para la multiplicacin de clulas o microorganismos,
es empleado como un mtodo fundamental para el estudio de las bacterias con el
fin de investigar las caractersticas, el tiempo y la duracin adems de las formas de
reproduccin de cada clase de microorganismo. Esto se llev a cabo al cultivarlas
en un medio lquido o en la superficie de un medio solido de agar.

Sistemas de Siembra:
Antes de iniciar la siembra se deben cumplir determinadas condiciones:
Esterilizacin de los instrumentos de trabajo y de los medios de cultivo. Los
medios de cultivo se esterilizan con calor hmedo en la autoclave y los
materiales de vidrio se esterilizan con calor seco en el horno Pasteur. En el
caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el
momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al
rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
Que el inculo no se contamine, modifique o destruya para lo cual se utiliza
calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, la
pipeta y dems elementos antes y despus de su utilizacin.

Esterilizacin del rea de trabajo para evitar contaminaciones durante el

manejo del instrumental y de los medios de cultivo. Se utilizan la cmara de
flujo laminar. Si no se dispone de ella, se utiliza un mechero Bunsen que,
debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido vertical y hacia arriba,
es capaz de crear un ambiente semisteril en la zona inmediata alrededor y
debajo de la llama, de forma que los riesgos de contaminacin disminuyen
considerablemente.

Siembra de medio slido a medio lquido

Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra
utilizado y la fecha. Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y
trabaje siempre al lado de el. Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y
djela enfriar

CONCLUSIONES

Se determinaron las condiciones necesarias para realizar la siembra de

microorganismos
Se hizo el reconocimiento de los distintos sistemas de siembra y su utilidad.
Se hizo el procedimiento de cada una de las siembras segn los pasos
establecidos en la gua, de esta manera, se hizo la siembra segn las
condiciones de cada microorganismo.

BIBLIOGRAFA

Siembra
y
cultivo
de
microorganismos:
Rescatado
de:
http://meplunesr.blogspot.com/2011/05/universidad-nacional-experimentalsimon.html
Medios
de
cultivo,
mtodos
de
siembra.
Rescatado
http://www.slideshare.net/tmfvidal/medios-de-cultivo-mtodos-de-siembra

de:

Siembra de medio slido a medio lquido. Rescatado de:

http://claudiazambrano.wordpress.com/2011/05/25/medios-de-cultivo-solidoy-liquido/

INFORME LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA
SESIN 3

FREDY DIAZ PEREZ

CDIGO: 13957473
GRUPO: 201504_4
ALEXANDER ANGARITA CRISTANCHO
CDIGO: 1048690149

MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ

CORREO: mery.lopez@unad.edu.co
TUTORA VIRTUAL

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

MAYO DEL 201

PRACTICA 5.
TCNICAS DE TINCIN
La observacin microscpica de las bacterias se facilita cuando han sido
coloreadas. Se acostumbra fijar las bacterias en la lmina portaobjetos para poder
teirlas con facilidad. La fijacin puede hacerse con solventes o con calor. En
cualquier caso se trata e deshidratar la clula y coagularla con protenas.
Las coloraciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante o
compuestas cuando se utilizan 2 ms colorantes. Tambin se puede hacer una
coloracin negativa en la cual se tie el fondo, adems de la bacteria, para poder
observar la cpsula.

OBJETIVOS
Preparar frotis de bacterias para observaciones microscpicas
Observar las bacterias teidas al microscopio y clasificarlas por su forma y su
reaccin a la coloracin de Gram.

MATERIALES

ELEMENTO

Laminilla

Mechero de alcohol

IMAGEN

DESCRIPCIN
Son
lminas
de
vidrio
rectangulares, donde se coloca
la muestra para poder verla al
microscopio,
existen
portaobjetos con cavidades
semiesfricas que pueden ser
de
distinto
dimetro
y
profundidad, se utilizan para
tcnicas de laboratorio en las
que se hacen observaciones en
vivo.

Un
encendedor,
tambin
llamado mechero o yesquero,
es un dispositivo pirotcnico
porttil usado para generar una
llama.

Gradilla

Cuenta colonias

Microscopio

Aza de
Siemba

Utensilio que sirve para colocar

tubos de ensayo. Este utensilio
facilita el manejo de los tubos
de ensayo.
Un contador de colonias es un
instrumento
utilizado
para
contar colonias de bacterias o
de otros microorganismos que
crecen en una placa de agar.

El
microscopio
es
un
instrumento de laboratorio el
cual nos permite ver objetos
que el ojo humano no puede
distinguir,
por
ser
estos
extremadamente pequeos.

Es
un
instrumento
de
laboratorio tipo pinza que
consta de una base que puede
estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que
puede
ser
de
nicromo,
tungsteno o platino que termina
o en un arito de 5 mm o en
punta.

PROCEDIMIENTO:

RESULTADOS:

MATERIAL

Cristal violeta
Lugol
Alcohol/acetona
safranina

Azul de metileno

IMAGEN

DESCRIPCION
Tincin de Gram:
Gram positiva

La tincin simple se
utiliza para destacar el
microorganismo
completo para que se
vean las formas y las
estructuras
celulares
bsicas.

ANALISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

En la quinta y ltima prctica realizada en laboratorio fue trabajada la tincin de

Gram en la cual primero se tom una muestra de una colonia que fue previamente
pasada por el cuenta colonias para poder tener las unidades formadoras de
colonias UFC; en este caso se dividi en dos partes teniendo como resultados
17/17, esto a su vez fue multiplicado por 2 y por
quedando de esta manera la
formula 17x2x
para as obtener el resultado de la UFC.
El segundo paso despus de ya tener un resultado de las colonias se hizo una
definicin macroscpica en el cual se determin que hubo un crecimiento visible de
poblacin de hongos, este a su vez tena las siguientes caractersticas:
Borde: espiculado.
Forma: irregular
Elevacin: plano convexa

Luego de estos pasos que fueron descritos con anterioridad se llev a cabo el paso
nmero tres que consista en la tincin de Gram; los pasos que fueron realizados
para lograr identificar la tincin fueron los siguientes:

Fijar la muestra de la colonia al calor.

Se aadi el cristal violeta y se dej 5 minutos sobre el hongo o la muestra
que fue tomada.
Se lav con agua para eliminar el exceso o la concentracin de colorante.
Despus de esto fue agregado lugol y lo dejamos actuar durante 5 minutos al
ambiente normal.
Nuevamente se lav con agua para eliminar el exceso o la concentracin de
colorante.
Despus de esto se agreg alcohol acetona y se dej actuar durante 5
minutos.

 Nuevamente se lav con agua para eliminar el exceso o la concentracin de

colorante.
Por ltimo fue agregada safranina y se llev a cabo el mismo procedimiento
durante 5 minutos.
se lav con agua para eliminar el exceso o la concentracin de colorante.
Se sec al aire libre y se observ en un microscopio aumentado a 100x
obteniendo como resultado una tincin de Gram positiva ya que fue
visualizada de color morado.

MATERIAL

Cristal
violeta

Lugol

Alcohol/acet
ona

IMAGEN

DESCRIPCION

El cristal violeta es el colorante

primario de la coloracin de
gram que se adhiere a la pared
celular
bacteriana,
las
bacterias
gram
positivas
absorben
este
colorante
porque
tienen
mayor
porcentaje de cido teicoico en
su estructura y por eso
adquieren un color violeta en el
microscopio.

Funciona como fijacin de la

preparacin, y tambin acta
sobre la pared de las bacterias
Gram (+) de tal manera que al
agregar
el
decolorante
(alcohol-cetona) no se destian
las bacterias que se tieron, al
agregar la Safranina, las
restantes bacterias se teirn,
siendo estas ltimas Gram (-).

La mezcla de alcohol-acetona
que se agrega, sirve para
realizar la decoloracin, ya que
en la misma es soluble el
complejo I2/cristal violeta. Los
organismos Gram positivos no
se decoloran, mientras que los
Gram negativos s lo hacen.

 Safranina

Es un colorante biolgico, de
contraste que se utiliza en la
Tincin
de
Gram
para
proporcionar un color violeta
ms intenso a las bacterias
Gram+ y tie de rosa a las
bacterias

CONCLUSIONES

Se dio a conocer las diferencias que existen entre la tincin simple y la

tincin de Gram.
Observamos las bacterias teidas al microscopio y clasificamos por su forma
y su reaccin a la coloracin de Gram en este caso fue Gram positiva.
Se realiz el procedimiento de Gram y de esta manera se determin las
caractersticas que present la muestra de hongo tomada.

BIBLIOGRAFA

Tcnicas
de
tincin.
Rescatado
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

de:

Tipos
de
tinciones.
Rescatado
de:
http://acuanatura.galeon.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetincio
n.pdf
Tincin y observacin de microorganismos - U.T.N. rescatado de:
http://www.google.com.co/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=4&ca
d=rja&uact=8&ved=0CDwQFjAD&url=http%3A%2F%2Fwww.frro.utn.edu.ar%
2Frepositorio%2Fcatedras%2Fquimica%2F5_anio%2Fbiotecnologia%2Fprac
tico4.pdf&ei=bMt_U9GeGrCvsQTq_oCwAw&usg=AFQjCNHzxGxKhL5je2_sN
2KkY9kZxn5KKQ&bvm=bv.67720277,d.cWc

ANEXOS