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Tipos de espectrometra

ESPECTROMETRA DE ABSORCIN
La espectrometra de absorcin es una tcnica en la cual la energa de un haz
de luz se mide antes y despus de la interaccin con una muestra. Cuando se
realiza con lser de diodo ajustable, se la conoce como espectroscopia de
absorcin con lser de diodo ajustable. Tambin se combina a menudo con una
tcnica de modulacin, como la espectrometra de modulacin de longitud de
onda, y de vez en cuando con la espectrometra de modulacin de frecuencia a
fin de reducir el ruido en el sistema.

ESPECTROMETRA DE FLUORESCENCIA

La espectrometra de fluorescencia usa fotones de energa ms elevada para


excitar una muestra, que emitir entonces fotones de inferior energa.

Esta tcnica se ha hecho popular en aplicaciones bioqumicas y mdicas, y


puede ser usada con microscopa confocal, transferencia de energa entre
partculas fluorescentes, y visualizacin de la vida media de fluorescencia.

ESPECTROMETRA DE RAYOS X

Cuando los rayos X con suficiente frecuencia (energa) interaccionan con una
sustancia, los electrones de las capas interiores del tomo se excitan a
orbitales vacos externos, o bien son eliminados completamente, ionizndose el
tomo. El "agujero" de la capa interior se llena entonces con electrones de los
orbitales externos. La energa disponible en este proceso de excitacin se
emite como radiacin (fluorescencia) o quitar otros electrones menos
enlazados del tomo (efecto Auger). La absorcin o frecuencias de emisin
(energas) son caractersticas de cada tomo especfico. Adems, para un
tomo especfico se producen pequeas variaciones de frecuencia (energa)
que son caractersticas del enlace qumico. Con un aparato apropiado pueden
medirse estas frecuencias de rayos X caractersticas o energas de electrones
Auger. La absorcin de rayos X y la espectroscopia de emisin se usan en

qumica y ciencias de los materiales para determinar la composicin elemental


y el enlace qumico.

La cristalografa de rayos X es un proceso de dispersin. Los materiales


cristalinos dispersan rayos X en ngulos bien definidos. Si la longitud de onda
de los rayos X incidentes es conocida, se pueden calcular las distancias entre
planos de tomos dentro del cristal. Las intensidades de los rayos X
dispersados dan informacin sobre las posiciones atmicas y permiten calcular
la organizacin de los tomos dentro de la estructura cristalina.

ESPECTROMETRA DE LLAMA

Las muestras de solucin lquidas son aspiradas en un quemador o una


combinacin de nebulizador/quemador, desolvatadas, atomizadas, y a veces
excitadas a un estado electrnico de energa ms alta. El uso de una llama
durante el anlisis requiere combustible y oxidante, tpicamente en forma de
gases. Los gases combustibles comunes que se usan son el acetileno (etino) o
el hidrgeno. Los gases de oxidante suelen ser el oxgeno, el aire, o el xido
nitroso. Estos mtodos son a menudo capaces de analizar elementos metlicos
en partes por milln, billones, o posiblemente rangos ms bajos de
concentracin. Son necesarios detectores de luz para detectar la luz con
informacin que viene de la llama.

* Espectrometra de emisin atmica. Este mtodo usa la excitacin de la


llama; los tomos son excitados por el calor de la llama para emitir luz. Este
mtodo suele usar un quemador de consumo total con una salida de
incineracin redonda. Se utiliza una llama de temperatura ms alta que la
usada en la espectrometra de absorcin atmica para producir la excitacin de
tomos de analito. Ya que los tomos de analito estn excitados por el calor de
la llama, no es necesaria ninguna lmpara elemental especial. Puede usarse un
policromador de alta resolucin para producir una intensidad de emisin contra
el espectro de longitud de onda por encima de un rango de longitudes de onda
que muestran lneas de excitacin de elementos mltiples. O bien puede
usarse un monocromador en una longitud de onda determinada para
concentrarse en el anlisis de un solo elemento en una cierta lnea de emisin.
La espectrometra de emisin de plasma es una versin ms moderna de este
mtodo.

* Espectrometra de absorcin atmica (a menudo llamada AA). Este mtodo


usa un nebulizador pre-quemador (o cmara de nebulizacin) para crear una
niebla de la muestra, y un quemador en forma de ranura que da una llama de
longitud de ruta ms larga. La temperatura de la llama es lo bastante baja
como para no excitar los tomos de la muestra de su estado basal. El
nebulizador y la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra, pero la
excitacin de los tomos de analito se realiza mediante lmparas que brillan a
travs de la llama en varias longitudes de onda para cada tipo de analito. En la
absorcin atmica, la cantidad de luz absorbida despus de pasar por la llama
determina la cantidad de analito en la muestra. Suele usarse un horno de
grafito para calentar, desolvatar y atomizar la muestra con el fin de obtener
una mayor sensibilidad. El mtodo del horno de grafito tambin puede analizar
algn slido o muestras mezcladas. A causa de su buena sensibilidad y
selectividad, es un mtodo que todava se usa para el anlisis de ciertos
microelementos en muestras acuosas (y otros lquidos).

* Espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo usa un quemador con


una salida de incineracin redonda. La llama se usa para solvatar y atomizar la
muestra, y una lmpara emite luz a una longitud de onda especfica en la llama
para excitar los tomos de analito. Los tomos de ciertos elementos pueden
entonces fluorescer, emitiendo luz en diferentes direcciones. La intensidad de
esta luz fluorescente sirve para cuantificar la cantidad del elemento analizado
en la muestra. Tambin puede usarse un horno de grafito para la
espectrometra de fluorescencia atmica. Este mtodo no es tan comn como
el de absorcin atmica o el de emisin de plasma.

ESPECTROMETRA DE EMISIN DE PLASMA

Es similar a la emisin atmica por llama, y la ha sustituido en gran parte.

* Espectrometra de plasma de corriente contnua (DCP). Un plasma de


corriente contnua se crea por una descarga elctrica entre dos electrodos. Es
necesario un gas de apoyo al plasma, y el ms comn es el argn. Las
muestras pueden ser depositadas en uno de los electrodos.

* Espectrometra de emisin ptica por descarga luminiscente (GD-OES)

* Espectrometra de emisin plasma-atmica acoplada inductivamente (ICPAES)

* Espectrometra de ruptura inducida por lser (LIBS), tambin llamada


espectrometra de plasma inducida por lser (LABIOS)

* Espectrometra de plasma inducida por microondas(MIP)

ESPECTROMETRA DE CHISPA O ARCO

Se usa para el anlisis de elementos metlicos en muestras slidas. Para


materiales no conductores, se usa polvo de grafito para hacer conductora la
muestra. En los mtodos de espectroscopia de arco tradicionales se usa una
muestra slida que es destruida durante el anlisis. Un arco elctrico o chispa
se pasan por la muestra, calentndola a alta temperatura para excitar los
tomos. Los tomos de analito excitado emiten luz en varias longitudes de
onda que pueden ser detectadas mediante mtodos espectroscpicos
comunes. Ya que las condiciones que producen la emisin por arco no son
controladas cuantitativamente, el anlisis de los elementos es cualitativo. Hoy
da, las fuentes de chispa con descargas controladas bajo una atmsfera de
argn permiten que este mtodo pueda ser considerado eminentemente
cuantitativo, y su uso est muy extendido en los laboratorios de control de
produccin de fundiciones y aceras.

ESPECTROMETRA VISIBLE

Muchos tomos emiten o absorben la luz visible. A fin de obtener un espectro


lineal fino, los tomos deben estar en fase gaseosa. Esto significa que la
sustancia tiene que ser vaporizada. El espectro se estudia en absorcin o
emisin. La espectroscopia de absorcin visible a menudo se combina con la de
absorcin ultravioleta (espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser
poco comn al ser el ojo humano un indicador similar, todava se muestra til
para distinguir colores.

ESPECTROMETRA ULTRAVIOLETA

Todos los tomos absorben en la regin ultravioleta (UV) ya que estos fotones
son bastante energticos para excitar a los electrones externos. Si la
frecuencia es lo bastante alta, se produce la fotoionizacin. La espectrometra
UV tambin se usa para la cuantificacin de protenas y concentracin de ADN,
as como para la proporcin de protenas y ADN en una solucin. En las
protenas se encuentran generalmente varios aminocidos, como el triptfano,
que absorben la luz en el rango de 280nm. El ADN absorbe la luz en el rango
de 260nm. Por esta razn, la proporcin de absorbancia 260/280nm es un buen
indicador general de la pureza relativa de una solucin en trminos de estas
dos macromolculas. Tambin pueden hacerse estimaciones razonables de la
concentracin de ADN o protenas aplicando la ley de Beer.

ESPECTROMETRA INFRARROJA

La espectrometra infrarroja ofrece la posibilidad de medir tipos diferentes de


vibraciones en los enlaces atmicos a frecuencias diferentes. En qumica
orgnica, el anlisis de los espectros de absorcin infrarroja indica qu tipo de
enlaces estn presentes en la muestra.

ESPECTROMETRA RAMAN

La espectrometra Raman usa la dispersin inelstica de la luz para analizar


modos vibracionales y rotatorios de las molculas. Las "huellas digitales" que
resultan son una ayuda para el anlisis.

ESPECTROMETRA DE RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (RMN)

La espectrometra de resonancia magntica nuclear analiza las propiedades


magnticas de ciertos ncleos atmicos para determinar diferentes ambientes
locales electrnicos del hidrgeno, carbono, u otros tomos en un compuesto

orgnico u otro compuesto. Se usa para determinar la estructura del


compuesto.

ESPECTROMETRA DE FOTOEMISIN

La fotoemisin puede referirse a:


* Emisin de electrones a partir de la materia despus de la absorcin de
fotones energticos (efecto fotoelctrico).
* Emisin de fotones a partir de los semiconductores y metales cuando los
electrones que fluyen en el material pierden energa mediante deceleracin o
recombinacin.

ESPECTROMETRA MSSBAUER

La espectrometra de transmisin o conversin electrnica (CEMS) de


Mssbauer prueba las propiedades de los ncleos de istopos especficos en
ambientes atmicos diferentes, analizando la absorcin resonante de rayos
gamma de energa caracterstica, lo que se conoce como efecto de Mssbauer.

OTROS TIPOS DE ESPECTROMETRA

* Fotoacstica. Mide las ondas sonoras producidas por la absorcin de


radiacin.
* Fototermal. Mide el calor desarrollado por la absorcin de radiacin.
* De dicroismo circular.
* De actividad ptica Raman. Usa los efectos de la actividad ptica y la
dispersin para revelar informacin detallada sobre los centros quirales de las
molculas.
* De terahertzios. Usa longitudes de onda por encima de la espectrometra
infrarroja y por debajo de las microondas o medidas de onda milimtricas.

* De dispersin inelstica de neutrones, como la espectroscopia Raman pero


con neutrones en vez de fotones.
* De tnel de electrones inelsticos. Usa los cambios de corriente debidos a la
interaccin de vibraciones electrnicas inelsticas a energas especficas que
tambin pueden medir transiciones pticamente prohibidas.
* Auger. Se usa para estudiar superficies de materiales a microescala. A
menudo se usa en relacin con la microscopa de electrones.
* De cavidad en anillo.
* De transformacin de Fourier. La transformacin Fourier es un mtodo
eficiente para tratar datos de espectros obtenidos usando interfermetros. Casi
toda la espectrometra infrarroja (FTIR) y la resonancia magntica nuclear
(RMN) se realizan con la transformacin de Fourier.
* De tiempo resuelto. Se usa en situaciones donde las propiedades cambian
con el tiempo.
* Mecnica. Implica interacciones con vibraciones macroscpicas, como los
fotones. Un ejemplo es la espectrometra acstica, que implica ondas sonoras.
* De fuerza. Usa una tcnica analtica basada en AFM.
* Dielctrica.
* Infrarroja termal. Mide la radiacin termal emitida por materiales y
superficies, y se usa para determinar el tipo de enlaces presentes en una
muestra, as como su ambiente reticular. Estas tcnicas son muy usadas por los
qumicos orgnicos, mineralogistas y gelogos.
Mtodos espectromtricos

Segn la naturaleza de la excitacin medida

El tipo de espectrometra depende de la cantidad fsica medida. Normalmente,


la cantidad que se mide es una intensidad de energa absorbida o producida.
Se pueden distinguir estos tipos de espectrometra segn la naturaleza de la
excitacin:

* Electromagntica. Interacciones de la materia con radiacin electromagntica


como la luz.

* De electrones. Interacciones con haces de electrones. La espectroscopia


Auger implica inducir el efecto Auger con un haz de electrones. En este caso la
medida implica la energa cintica del electrn como variable.

* De masa. Interaccin de especies cargadas con campos magnticos y/o


elctricos, dando lugar a un espectro de masas. El trmino "espectroscopia de
masas" est anticuado, ya que la tcnica es principalmente una forma de
medida, aunque produzca realmente un espectro para la observacin. Este
espectro tiene la masa (m) como variable, pero la medida es esencialmente de
la energa cintica de la partcula.

* Acstica. Frecuencia de sonido.

* Dielctrica. Frecuencia de un campo elctrico externo.

* Mecnica. Frecuencia de un estrs mecnico externo, por ejemplo una torsin


aplicada a un trozo de material.

Segn el proceso de medida

La mayora de los mtodos espectroscpicos se diferencian en atmicos o


moleculares segn si se aplican a tomos o molculas. Junto con esta
diferencia, se pueden distinguir los siguientes tipos de espectrometra segn la
naturaleza de su interaccin:

* De absorcin. Usa el rango de los espectros electromagnticos en los cuales


una sustancia absorbe. Incluye la espectrometra de absorcin atmica y varias

tcnicas moleculares, como la espectrometra infrarroja y la resonancia


magntica nuclear (RMN).
* De emisin. Usa el rango de espectros electromagnticos en los cuales una
sustancia irradia (emite). La sustancia primero debe absorber la energa. Esta
energa puede ser de una variedad de fuentes, que determina el nombre de la
emisin subsiguiente, como la luminescencia. Las tcnicas de luminescencia
moleculares incluyen la espectrofluorimetra.

* De dispersin. Mide la cantidad de luz que una sustancia dispersa en ciertas


longitudes de onda, ngulos de incidencia y ngulos de polarizacin. El proceso
de dispersin es mucho ms rpido que el proceso de absorcin/emisin. Una
de las aplicaciones ms tiles es la espectroscopia Raman.
Espectrmetros

Espectrmetro, espectrgrafo, espectroscopio


Espectrmetro
Un espectrmetro (tambin llamado espectroscopio o espectrgrafo) es un
instrumento ptico que se usa para medir las propiedades de la luz sobre una
porcin especfica del espectro electromagntico. Su utilidad es realizar anlisis
espectroscpicos para identificar materiales. La variable medida es
generalmente la intensidad de la luz, pero tambin podra ser, por ejemplo, el
estado de polarizacin. La variable independiente es, por lo general, la longitud
de onda de la luz, que suele expresarse como una fraccin de metro, aunque a
veces se expresa como una unidad directamente proporcional a la energa del
fotn, tales como el nmero de onda o los voltios de los electrones (que tiene
una relacin recproca a la longitud de onda).

Un espectrmetro se usa en espectroscopia para producir lneas espectrales y


medir sus longitudes de onda e intensidades. Son instrumentos que funcionan
en una amplia variedad de longitudes de onda, desde rayos gamma y rayos X
hasta el infrarrojo lejano. Si la regin de inters est restringida a un rango
cercano al espectro visible, el estudio se llama espectrofotometra.

En general, cada espectrmetro funcionar sobre una pequea porcin de este


rango total debido a las diferentes tcnicas usadas para medir las distintas
porciones del espectro. Por debajo de las frecuencias pticas (es decir, en el
rango de las microondas y radiofrecuencias), el analizador de espectro es un
dispositivo electrnico estrechamente relacionado.

Espectroscopios

Espectrmetros pticos
Comparacin de diferentes espectrmetros
basados en la difraccin: reflexin
ptica, refraccin ptica y fibra ptica.
Los espectroscopios se usan a menudo en astronoma y en algunas ramas de la
qumica. Los primeros aparatos de este tipo eran simplemente un prisma con
graduaciones que marcaban las longitudes de onda de la luz. Los
espectroscopios modernos, como los monocromadores, generalmente usan una
rejilla de difraccin, una hendidura mvil y una especie de fotodetector,
adems de estar automatizados y controlados por un ordenador. El
espectroscopio fue inventado por Gustav Robert Georg Kirchhoff y por Robert
Wilhelm Bunsen.

Cuando un material se calienta hasta la incandescencia emite una luz que es


caracterstica de la composicin atmica del material. Las frecuencias de luz
particulares dan lugar a bandas bruscamente definidas en la escala, que son
similares a huellas digitales. Por ejemplo, el elemento sodio tiene una doble
banda amarilla muy caracterstica, conocida como lneas D del sodio a
588.9950 y 589.5924 nanmetros, cuyo color ser familiar a quien haya visto
una lmpara de vapor de sodio de baja presin.

En el diseo del espectroscopio original, a principios del siglo XIX, la luz


entraba en una hendidura y una lente colimadora transformaba la luz en un
haz delgado de rayos paralelos. La luz pasaba entonces por un prisma (en
espectroscopios porttiles, por lo general un prisma Amici) que refractaba el
haz de luz en un espectro, debido a que las diferentes longitudes de onda eran

refractadas en cantidades diferentes por la dispersin. Esta imagen se vea


entonces a travs de un tubo con una escala que se transpona sobre la
imagen espectral, permitiendo su medida directa.

Con el desarrollo de la pelcula fotogrfica, se cre el espectrgrafo, que era


ms exacto. Estaba basado en el mismo principio que el espectroscopio, pero
tena una cmara en lugar del tubo de inspeccin. En aos recientes, la cmara
ha sido sustituida por circuitos electrnicos construidos alrededor del tubo
fotomultiplicador, permitiendo el anlisis espectrogrfico en tiempo real con
mucha ms exactitud. En los sistemas espectrogrficos tambin se usan series
de fotosensores en lugar de la pelcula.

Tal anlisis espectral, o espectroscopia, se ha convertido en un importante


instrumento cientfico para analizar la composicin de material desconocido, y
para estudiar fenmenos y teoras astronmicas. El espectrmetro mide
longitudes de onda.

Espectrgrafos

Esquema de un espectrmetro de rejilla


Esquema de un espectrmetro de rejilla
Un espectrgrafo es un instrumento que transforma una forma de onda de
dominio temporal entrante en un espectro de frecuencia, o generalmente en
una secuencia de tales espectros. Hay varias clases de mquinas a las que se
llama espectrgrafos, segn la naturaleza precisa de las ondas. Los primeros
espectrgrafos usaban papel fotogrfico como detector. La clasificacin
espectral de estrellas y el descubrimiento de la secuencia principal, la ley de
Hubble y la secuencia de Hubble, se hicieron con espectrgrafos que usaban
papel fotogrfico. El pigmento vegetal fitocromo fue descubierto con un
espectrgrafo que usaba plantas vivas como detectores. Los espectrgrafos
ms recientes usan detectores electrnicos, como cmaras CCDs que pueden
usarse tanto para luz visible como para luz ultravioleta. La eleccin exacta del
detector depende de las longitudes de onda de la luz que va a ser registrada.

El prximo Telescopio Espacial de James Webb contendr un espectrgrafo


cercano al infrarrojo (NIRSpec) y un espectrmetro en mitad del infrarrojo
(MIRI).

Un espectrgrafo de escala usa dos rejillas de difraccin, giradas 90 grados una


respecto a la otra y colocadas cerca. Por lo tanto, se usa un punto de entrada y
no una hendidura, mientras que un segundo chip CCD registra el espectro. Con
este pequeo chip se consigue un espectro muy fino, y tiene como ventaja que
la ptica colimadora no tiene que ser optimizada para coma o astigmatismo, ya
que la aberracin esfrica puede ser establecida a cero.

A veces al espectrgrafo se le llama policromador, como analoga de


monocromador.
Espectro electromagntico

Espectro electromagntico
Diagrama del espectro electromagntico (ampliar)
El espectro electromagntico (o simplemente espectro) es el rango de todas las
radiaciones electromagnricas posibles. El espectro de un objeto es la
distribucin caracterstica de la radiacin electromagntica de ese objeto.

El espectro electromagntico se extiende desde las bajas frecuencias usadas


para la radio moderna (extremo de la onda larga) hasta los rayos gamma
(extremo de la onda corta), que cubren longitudes de onda de entre miles de
kilmetros y la fraccin del tamao de un tomo.

Se piensa que el lmite de la longitud de onda corta est en las cercanas de la


longitud Planck, mientras que el lmite de la longitud de onda larga es el
tamao del universo mismo, aunque en principio el espectro sea infinito y
continuo.

Rango del espectro

El espectro cubre la energa de ondas electromagnticas que tienen longitudes


de onda diferentes. Las frecuencias de 30 Hz y ms bajas pueden ser
producidas por ciertas nebulosas estelares y son importantes para su estudio.
Se han descubierto frecuencias tan altas como 2.9 * 1027 Hz a partir de
fuentes astrofsicas.

La energa electromagntica en una longitud de onda particular (en el vaco)


tiene una frecuencia asociada f y una energa fotnica E. As, el espectro
electromagntico puede expresarse en trminos de cualquiera de estas tres
variables, que estn relacionadas mediante ecuaciones.

De este modo, las ondas electromagnticas de alta frecuencia tienen una


longitud de onda corta y energa alta; las ondas de frecuencia baja tienen una
longitud de onda larga y energa baja.

Siempre que las ondas de luz (y otras ondas electromagnticas) se encuentran


en un medio (materia), su longitud de onda se reduce. Las longitudes de onda
de la radiacin electromagntica, sin importar el medio por el que viajen, son,
por lo general, citadas en trminos de longitud de onda en el vaco, aunque no
siempre se declara explcitamente.

Generalmente, la radiacin electromagntica se clasifica por la longitud de


onda: ondas de radio, microondas, infrarroja y regin visible, que percibimos
como luz, rayos ultravioleta, rayos X y rayos gamma.

El comportamiento de la radiacin electromagntica depende de su longitud de


onda. Las frecuencias ms altas tienen longitudes de onda ms cortas, y las
frecuencias inferiores tienen longitudes de onda ms largas. Cuando la
radiacin electromagntica interacciona con tomos y molculas, su
comportamiento tambin depende de la cantidad de energa por cuanto que
transporta. La radiacin electromagntica puede dividirse en octavas (como las
ondas sonoras).

La espectroscopia puede descubrir una regin mucho ms amplia del espectro


que el rango visible de 400 nm a 700 nm. Un espectroscopio de laboratorio
comn puede descubrir longitudes de onda desde 2 nm a 2500 nm. Con este
tipo de aparatos puede obtenerse informacin detallada sobre las propiedades
fsicas de objetos, gases o incluso estrellas. La espectrometra se usa sobre
todo en astrofsica. Por ejemplo, muchos tomos de hidrgeno emiten ondas de
radio que tienen una longitud de onda de 21.12 cm.

Tipos de radiacin

Aunque el esquema de clasificacin suele ser preciso, en realidad existe algo


de trasposicin entre tipos vecinos de energa electromagntica. Por ejemplo,
las ondas de radio a 60 Hz pueden ser recibidas y estudiadas por astrnomos,
o pueden ser conducidas a lo largo de cables como energa elctrica. Tambin,
algunos rayos gamma de baja energa realmente tienen una longitud de onda
ms larga que algunos rayos X de gran energa. Esto es posible porque "rayo
gamma" es el nombre que se le da a los fotones generados en la
descomposicin nuclear u otros procesos nucleares y subnucleares, mientras
que los rayos X son generados por transiciones electrnicas que implican
electrones interiores muy energticos. Por lo tanto, la diferencia entre rayo
gamma y rayo X est relacionada con la fuente de radiacin ms que con la
longitud de onda de la radiacin. Generalmente, las transiciones nucleares son
mucho ms energticas que las transiciones electrnicas, as que los rayos
gamma suelen ser ms energticos que los rayos X. Sin embargo, hay
transiciones nucleares de baja energa (p.ej. la transicin nuclear de 14.4 keV
del Fe-57) que producen rayos gamma que son menos energticos que algunos
de los rayos X de mayor energa.

Radiofrecuencia

Las ondas de radio suelen ser utilizadas mediante antenas del tamao
apropiado (segn el principio de resonancia), con longitudes de onda en los
lmites de cientos de metros a aproximadamente un milmetro. Se usan para la
transmisin de datos, a travs de la modulacin. La televisin, los telfonos
mviles, las resonancias magnticas, o las redes inalmbricas y de radioaficionados, son algunos usos populares de las ondas de radio.

Las ondas de radio pueden transportar informacin variando la combinacin de


amplitud, frecuencia y fase de la onda dentro de una banda de frecuencia. El
uso del espectro de radio est regulado por muchos gobiernos mediante la
asignacin de frecuencias. Cuando la radiacin electromagntica impacta sobre
un conductor, se empareja con l y viaja a lo largo del mismo, induciendo una
corriente elctrica en la superficie de ese conductor mediante la excitacin de
los electrones del material de conduccin. Este efecto (el efecto piel) se usado
en las antenas. La radiacin electromagntica tambin puede hacer que ciertas
molculas absorban energa y se calienten, una caracterstica que se utiliza en
en los microondas.

Microondas

La frecuencia super alta (SHF) y la frecuencia extremadamente alta (EHF) de


las microondas son las siguientes en la escala de frecuencia. Las microondas
son ondas los suficientemente cortas como para emplear guas de ondas
metlicas tubulares de dimetro razonable. La energa de microondas se
produce con tubos klistrn y tubos magnetrn, y con diodos de estado slido
como los dispositivos Gunn e IMPATT. Las microondas son absorbidas por la
molculas que tienen un momento dipolar en lquidos. En un horno microondas,
este efecto se usa para calentar la comida. La radiacin de microondas de baja
intensidad se utiliza en Wi-Fi.

El horno microondas promedio, cuando est activo, est en un rango cercano y


bastante poderoso como para causar interferencia con campos
electromagnticos mal protegidos, como los que se encuentran en dispositivos
mdicos mviles y aparatos electrnicos baratos.

Rayos T

La radiacin de terahertzios (o Rayos T) es una regin del espectro situada


entre el infrarrojo lejano y las microondas. Hasta hace poco, este rango estaba
muy poco estudiado, ya que apenas haba fuentes para la energa microondas
en el extremo alto de la banda (ondas submilimtrica o tambin llamadas
ondas terahertzios). Sin embargo, estn apareciendo aplicaciones para mostrar

imgenes y comunicaciones. Los cientficos tambin buscan aplicar la


tecnologa de rayos T en las fuerzas armadas, donde podran usarse para
dirigirlas a las tropas enemigas, ya que las ondas de alta frecuencia
incapacitan los equipos electrnicos.

Radiacin infrarroja

La parte infrarroja del espectro electromagntico cubre el rango desde


aproximadamente los 300 GHz (1 mm) hasta los 400 THz (750 nm). Puede ser
dividida en tres partes:

* Infrarrojo lejano, desde 300 GHz (1 mm) hasta 30 THz (10 m). La parte
inferior de este rango tambin puede llamarse microondas. Esta radiacin es
absorbida por los llamados modos rotatorios en las molculas en fase gaseosa,
mediante movimientos moleculares en los lquidos, y mediante fotones en los
slidos. El agua en la atmsfera de la Tierra absorbe tan fuertemente esta
radiacin que confiere a la atmsfera efectividad opaca. Sin embargo, hay
ciertos rangos de longitudes de onda ("ventanas") dentro del rango opacao
que permiten la transmisin parcial, y pueden ser usados en astronoma. El
rango de longitud de onda de aproximadamente 200 m hasta unos pocos mm
suele llamarse "radiacin submilimtrica" en astronoma, reservando el
infrarrojo lejano para longitudes de onda por debajo de los 200 m.

* Infrarrojo medio, desde 30 a 120 THz (10 a 2.5 m). Los objetos calientes
(radiadores de cuerpo negro) pueden irradiar fuertemente en este rango. Se
absorbe por vibraciones moleculares, es decir, cuando los diferentes tomos en
una molcula vibran alrededor de sus posiciones de equilibrio. Este rango es
llamado, a veces, regin de huella digital, ya que el espectro de absorcin del
infrarrojo medio de cada compuesto es muy especfico.

* Infrarrojo cercano, desde 120 a 400 THz (2500 a 750 nm). Los procesos
fsicos que son relevantes para este rango son similares a los de la luz visible.

Radiacin visible (luz)

La frecuencia por encima del infrarrojo es la de la luz visible. Este es el rango


en el que el Sol y las estrellas similares a l emiten la mayor parte de su
radiacin. No es probablemente una coincidencia que el ojo humano sea
sensible a las longitudes de onda que el sol emite con ms fuerza. La luz visible
(y la luz cercana al infrarrojo) son absorbidas y emitidas por electrones en las
molculas y tomos que se mueven desde un nivel de energa a otro. La luz
que vemos con nuestros ojos es realmente una parte muy pequea del
espectro electromagntico. Un arco iris muestra la parte ptica (visible) del
espectro electromagntico; el infrarrojo (si pudiera verse) estara localizado
justo a continuacin del lado rojo del arco iris, mientras que el ultravioleta
estara tras el violeta.

La radiacin electromagntica con una longitud de onda entre


aproximadamente 400 nm y 700 nm es detectado por el ojo humano y
percibida como luz visible. A otras longitudes de onda, sobre todo al infrarrojo
cercano (ms largo de 700 nm) y al ultravioleta (ms corto que 400 nm)
tambin se les llama luz a veces, sobre todo cuando la visibilidad para los
humanos no es relevante.

Si la radiacin que tiene una frecuencia en la regin visible del espectro


electromagntico se refleja en un objeto, como por ejemplo un plato hondo de
fruta, y luego impacta en nuestros ojos, obtenemos una percepcin visual de la
escena. El sistema visual de nuestro cerebro procesa la multitud de frecuencias
reflejadas en diferentes sombras y matices, y a travs de este fenomeno
psicofsico que todava no se entiende completamente, es como percibiramos
los objetos.

En la mayor parte de las longitudes de onda, sin embargo, la informacin


transportada por la radiacin electromagntica no es directamente descubierta
por los sentidos humanos. Las fuentes naturales producen radiacin
electromagntica a travs del espectro, y nuestra tecnologa tambin puede
manipular un amplio rango de longitudes de onda. La fibra ptica transmite luz
que, aunque no es adecuada para la visin directa, puede transportar datos
que luego son traducidos en sonido o imagen. La codificacin usada en tales
datos es similar a lo que se usa con las ondas de radio.

Luz ultravioleta

La siguiente frecuencia en el espectro es el ultravioleta (o rayos UV), que es la


radiacin cuya longitud de onda es ms corta que el extremo violeta del
espectro visible.

Al ser muy energtica, la radiacin ultravioleta puede romper enlaces


qumicos, haciendo a las molculas excepcionalmente reactivas o ionizndolas,
lo que cambia su comportamiento. Las quemaduras solares, por ejemplo, estn
causadas por los efectos perjudiciales de la radiacin UV en las clulas de la
piel, y pueden causar incluso cncer de piel si la radiacin daa las molculas
de ADN complejas en las clulas (la radiacin UV es un mutgeno). El Sol emite
una gran cantidad de radiacin UV, lo que podra convertir rpidamente la
Tierra en un desierto estril si no fuera porque, en su mayor parte, es
absorbida por la capa de ozono de la atmsfera antes de alcanzar la superficie.

Rayos X

Despus del ultravioleta vienen los rayos X. Los rayos X duros tienen
longitudes de onda ms cortas que los rayos X suaves. Se usan generalmente
para ver a travs de algunos objetos, as como para la fsica de alta energa y
la astronoma. Las estrellas de neutrones y los discos de acrecin alrededor de
los agujeros negros emiten rayos X, lo que nos permite estudiarlos.

Los rayos X pasan por la mayor parte de sustancias, y esto los hace tiles en
medicina e industria. Tambin son emitidos por las estrellas, y especialmente
por algunos tipos de nebulosas. Un aparato de radiografa funciona disparando
un haz de electrones sobre un "objetivo". Si los electrones se disparan con
suficiente energa, se producen rayos X.

Rayos gamma

Despus de los rayos X duros vienen los rayos gamma. Son los fotones ms
energticos, y no se conoce el lmite ms bajo de su longitud de onda. Son
tiles a los astrnomos en el estudio de objetos o regiones de alta energa, y
son tiles para los fsicos gracias a su capacidad penetrante y su produccin de
radioistopos. La longitud de onda de los rayos gamma puede medirse con
gran exactitud por medio de dispersin Compton.

No hay ningn lmite exactamente definido entre las bandas del espectro
electromagntico. Algunos tipos de radiacin tienen una mezcla de las
propiedades de radiaciones que se encuentran en las dos regiones del
espectro. Por ejemplo, la luz roja se parece a la radiacin infrarroja en que
puede resonar algunos enlaces qumicos.
Espectrometra de absorcin

La espectrometra de absorcin se refiere a una variedad de tcnicas que


emplean la interaccin de la radiacin electromagntica con la materia. En la
espectrometra de absorcin, se compara la intensidad de un haz de luz
medida antes y despus de la interaccin con una muestra. Las palabras
transmisin y remisin se refieren a la direccin de viaje de los haces de luz
medidos antes y despus de la absorcin. Las descripciones experimentales
por lo general asumen que hay una nica direccin de incidencia de la luz
sobre la muestra, y que un plano perpendicular a esta direccin pasa por la
muestra. En la transmisin, la luz es dispersada desde la muestra hacia un
detector en el lado opuesto de la muestra. En la remisin, la luz es dispersada
desde la muestra hacia un detector en el mismo lado de la muestra.

La radiacin remitida puede estar formada por dos clases de radiacin:


reflexin especular (cuando el ngulo de reflexin es igual al ngulo del
frecuencia) y reflexin difusa (en todos los dems ngulos).

Otro descriptor asociado con la espectrometra de absorcin es la variedad de


longitudes de onda de radiacin que se usa en el haz de luz incidente. Por
ejemplo, se habla de espectrometra infrarroja o de microondas, que son a su
vez ejemplos de espectrometra de absorcin. Por otra parte, tambin se
encuentran referencias a otros rangos de longitud de onda, como la
espectrometra de rayos X, que por lo general denotan una espectrometra de
emisin. Este artculo trata principalmente de la espectrometra ultravioletavisible.

La espectrometra UV-visible se refiere a tcnicas donde se mide cunta luz de


una longitud de onda particular (color) es absorbida por una muestra. Ya que el
color a menudo puede correlacionarse con la presencia y/o la estructura de una
sustancia qumica particular, y ya que la absorbancia es una medida fcil y
barata de hacer, la espectrometra de absorbancia se usa ampliamente en
clculos cualitativos, cuantitativos y estructurales. Por ejemplo, el ADN absorbe
luz en el rango ultravioleta (por eso la luz del sol es peligrosa), y por tanto la
cantidad de ADN en una muestra puede ser determinarse midiendo la
absorbancia de la luz ultravioleta.

La relacin entre el color visible y el color de absorbancia es complicada; una


muestra que parece roja no absorbe en el rojo, sino que absorbe en otras
longitudes de onda (colores) de modo que la luz que pasa por la muestra se
enriquece en rojo.

La palabra "color" se usa para indicar que la espectrometra de absorbancia no


slo trata con la luz en rango visible (fotones con una longitud de onda de
aproximadamente 400 a 700 nanmetros), sino tambin con longitudes de
onda que estn fuera del rango de la visin humana (infrarrojo, ultravioleta,
rayos X). Sin embargo, los principios son bastante similares tanto para la luz
visible como para la no visible.

Tcnicamente, la espectrometra de absorcin se basa en la absorcin de


fotones por una o ms sustancias presentes en una muestra (que puede ser un
slido, lquido, o gas), y la promocin subsiguiente del electrn (o electrones)
desde un nivel de energa a otro en esa sustancia. La muestra puede ser una
sustancia pura, homognea o una mezcla compleja. La longitud de onda en la
cual el fotn incidente se absorbe es determinada por la diferencia en los
niveles de energa disponibles de las diferentes sustancias presentes en la
muestra. Esta es la selectividad de la espectrometra de absorbancia, la
capacidad de generar fuentes de fotones (luz) que son absorbidas slo por
algunos componentes en una muestra. Tpicamente, los rayos X se usan para
revelar la composicin qumica, mientras que las longitudes de onda cercanas
al ultravioleta y el infrarrojo se usa para distinguir las configuraciones de
diversos ismeros detalladamente. En la espectroscopia de absorcin, los
fotones absorbidos no son emitidos de nuevo (como en la fluorescencia) sino
que la energa que se transfiere al compuesto qumico en la absorbancia de un
fotn se pierde por medios no radiantes, como la transferencia de energa por
calor a otras molculas.

Aunque la intensidad relativa de las lneas de absorcin no vara con la


concentracin, a cualquier longitud de onda dada la absorbancia medida ( log
(I / I0)) es proporcional a la concentracin molar de las especies que absorben
y el grosor de la muestra por la que la luz pasa. Esto se conoce como ley de
Beer-Lambert. El grfico de la cantidad de radiacin absorbida respecto a la
longitud de onda para un compuesto particular se conoce como espectro de
absorcin. El espectro de absorcin normalizado es caracterstico para cada
compuesto particular, no cambia con la concentracin y es como la "huella
digital" qumica del compuesto. En las longitudes de onda correspondientes a
los niveles de energa resonantes de la muestra, se absorben algunos de los
fotones incidentes, lo que provoca una cada en la intensidad de transmisin
medida y una pendiente en el espectro. El espectro de absorcin puede
medirse usando un espectrmetro. Conociendo la forma del espectro, la
longitud de ruta ptica y la cantidad de radiacin absorbida, se puede
determinar la estructura y la concentracin del compuesto.

Los espectros de absorcin de luz visible pueden tomarse en cualquier material


que sea visiblemente claro. El poliestireno, el cuarzo, y las clulas de
borosilicato (Pyrex), son los materiales ms usados. La luz ultravioleta es
absorbida por la mayor parte de cristales y plsticos, por lo que se usan clulas
de cuarzo. El Si-O presente en el cristal y el cuarzo, y el C-C en el plstico
absorben la luz infrarroja. Los espectros de absorcin infrarrojos se realizan
generalmente con una delgada pelcula de la muestra sostenida entre platos
de cloruro de sodio. Otros mtodos implican suspender el compuesto en una
sustancia que no absorba en la regin de estudio. Las emulsiones de aceite
mineral (Nujol) y los cristales de bromuro de potasio suelen ser los ms
comunes. El NaCl y KBr, al ser inicos, no absorben el infrarrojo de forma
significativa, y el Nujol tiene un espectro infrarrojo relativamente sencillo.

Espectrometra como instrumento analtico

A menudo es de inters conocer no slo la composicin qumica de una


muestra dada, sino tambin las concentraciones relativas de varios
compuestos de una mezcla. Para hacer esto debe construirse una escala, o
curva de calibracin, usando varias concentraciones conocidas para cada
compuesto de inters. El grfico que resulta de la concentracin respecto a la
absorbancia se hace a mano o usando un software de ajuste de curvas
apropiado, que usa una frmula matemtica para determinar la concentracin

en la muestra. La repeticin de este proceso para cada compuesto en una


muestra da un modelo de varios espectros de absorcin que en conjunto
reproducen la absorcin observada. De esta manera es posible, por ejemplo,
medir la composicin qumica de los cometas sin tener muestras de ellos en la
Tierra.

Un ejemplo simple: un cianuro estndar a 200 partes por milln da una


absorbancia con un valor arbitrario de 1540. Una muestra desconocida da un
valor de 834. Ya que esta es una relacin lineal y pasa por el origen, el valor
desconocido se calcula fcilmente como 108 partes por milln. Con este
mtodo de proporcin no es necesario conocer los valores de los coeficientes
gobernantes, o cromforos, o la longitud de clula experimental.

En la prctica, el uso de una curva de calibracin, ms que un solo punto de


comparacin, reduce la incertidumbre en la medida final por exclusin de la
interferencia aleatoria (ruido) en la preparacin de los estndares.
spectrometra de fluorescencia

La espectrometra de fluorescencia (tambin llamada fluorometra o


espectrofluorimetra) es un tipo de espectroscopia electromagntica que
analiza la fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por
lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las molculas de ciertos
compuestos y provoca que emitan luz de una menor energa, generalmente luz
visible (aunque no necesariamente). Una tcnica complementaria es la
espectrometra de absorcin.

Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluormetros o


fluormetros.

TEORA DE LA FLUORESCENCIA

Las molculas tienen diferentes estados llamados niveles de energa. La


espectrometra de fluorescencia se refiere principalmente a estados
vibracionales y electrnicos. En general, las especies objeto de examen
tendrn un estado electrnico basal (un estado de baja energa) de inters, y
un estado electrnico excitado de mayor energa. Dentro de cada uno de estos
estados electrnicos hay diferentes estados vibracionales.

En la espectroscopia de fluorescencia, primero se excita la muestra mediante la


absorcin de un fotn de luz, desde su estado electrnico basal a uno de los
distintos estados vibracionales del estado electrnico excitado. Las colisiones
con otras molculas causan que la molcula excitada pierda energa
vibracional hasta que alcanza el estado vibracional ms bajo del estado
electrnico excitado.

La molcula desciende luego a uno de los distintos niveles de vibracin del


estado electrnico basal, emitiendo un fotn en el proceso. Como las molculas
pueden caer a cualquiera de los diferentes niveles de vibracin en el estado
basal, los fotones emitidos tendrn diferentes energas y, por lo tanto,
frecuencias. As pues, mediante el anlisis de las diferentes frecuencias de luz
emitida por espectrometra de fluorescencia, junto con sus intensidades
relativas, se puede determinar la estructura de los diferentes niveles de
vibracin.

En un experimento tpico, se miden las diferentes frecuencias de luz


fluorescente emitida por una muestra, manteniendo la luz de excitacin a una
longitud de onda constante. A esto se le llama espectro de emisin. Un
espectro de excitacin se mide mediante el registro de una serie de espectros
de emisin utilizando luz de diferentes longitudes de onda.

INSTRUMENTOS

En la espectrometra de fluorescencia se utilizan dos tipos generales de


instrumentos:

* Fluormetros de filtro. Utilizan filtros para aislar la luz incidente y la luz


fluorescente.
* Espectrofluormetros. Usan monocromadores de retculo de difraccin para
aislar la luz incidente y la luz fluorescente.

Ambos tipos de instrumentos utilizan el siguiente esquema. La luz de una


fuente de excitacin pasa a travs de un filtro o monocromador, e incide sobre
la muestra. Una parte de la luz incidente es absorbida por la muestra, y
algunas de las molculas de la muestra producen una fluorescencia. La luz
fluorescente es emitida en todas las direcciones. Parte de esta luz fluorescente
pasa a travs de un segundo filtro o monocromador y llega a un detector, el
cual muy a menudo se encuentra a 90 con respecto al haz de luz incidente
para minimizar el riesgo de que la luz incidente reflejada o transmitida llegue al
detector.

Diversas fuentes de luz pueden ser utilizadas como fuentes de excitacin,


incluyendo el lser, fotodiodos y lmparas; arcos de xenn y lmparas de vapor
de mercurio. Un lser slo emite luz de alta irradiancia en un intervalo muy
estrecho de longitudes de onda, por lo general a 0,01 nm, lo que hace
innecesario el monocromador de excitacin o el filtro. La desventaja de este
mtodo es que la longitud de onda de un lser no se puede cambiar mucho.
Una lmpara de vapor de mercurio es una lmpara lineal, lo que significa que
emite luz cerca del pico de longitudes de onda. Por el contrario, un arco de
xenn tiene un espectro de emisin continuo con intensidad casi constante en
el rango de 300-800 nm, y una irradiancia suficiente para las mediciones hasta
justo por encima de 200 nm.

En los fluormetros pueden usarse filtros y/o monocromadores. Un


monocromador transmite luz de una longitud de onda y tolerancia ajustables.
El tipo ms comn de monocromador utiliza un retculo de difraccin; es decir,
la luz colimada entra en una rejilla y sale con un ngulo diferente dependiendo
de la longitud de onda. El monocromador puede entonces seleccionar qu
longitudes de onda transmite. Para permitir mediciones de anisotropa se
aaden dos filtros de polarizacin: uno despus del monocromador de
excitacin o filtro, y otro antes del monocromador de emisin o filtro.

Como se mencion antes, la fluorescencia se mide ms a menudo en un ngulo


de 90 en relacin a la luz de excitacin. Esta geometra se utiliza en lugar de

colocar el sensor en la lnea de la luz de excitacin en un ngulo de 180 a fin


de evitar la interferencia de la luz de excitacin transmitida. El monocromador
no es perfecto y transmitir la luz con otras longitudes de onda diferentes a las
establecidas. Un monocromador ideal slo transmite luz en el rango
especificado y tiene una transmisin independiente de la longitud de onda. Al
medir en un ngulo de 90, slo la luz dispersa por la muestra provoca luz. Esto
se traduce en una mejor relacin seal-ruido, y reduce el lmite de deteccin a
un factor de aproximadamente 10000, si se compara con la geometra de 180.
Por otra parte, la fluorescencia tambin puede ser medida desde la parte
delantera, procedimiento que se utiliza a menudo para las muestras turbias.

El detector puede ser de un solo canal o de mltiples canales. El detector de un


nico canal slo puede detectar la intensidad de una longitud de onda en cada
momento, mientras que el de mltiples canales detecta la intensidad en todas
las longitudes de onda simultneamente, con lo que el monocromador de
emisin o filtro es innecesario. Los diferentes tipos de detectores tienen sus
ventajas y desventajas.

El fluormetro ms verstil, con monocromadores dobles y una fuente de luz de


excitacin continua, puede registrar tanto un espectro de excitacin como un
espectro de fluorescencia. Al medir los espectros de fluorescencia, la longitud
de onda de la luz de excitacin se mantiene constante, de preferencia en una
longitud de onda de alta absorcin, y el monocromador de emisin escanea el
espectro. Para medir los espectros de excitacin, la longitud de onda que pasa
a travs del filtro o monocromador de emisin se mantiene constante y el
monocromador de excitacin va escaneando. El espectro de excitacin
generalmente es idntico al espectro de absorcin, ya que la intensidad de la
fluorescencia es proporcional a la absorcin.

ANLISIS DE LOS DATOS

A bajas concentraciones, la intensidad de fluorescencia es, por lo general,


proporcional a la concentracin del fluorforo.

A diferencia de la espectrometra visible o ultravioleta 'estndar', los espectros


independientes del dispositivo no son fciles de alcanzar. Son varios los
factores que influyen y distorsionan los espectros, y son necesarias

correcciones para lograr el espectro 'verdadero', es decir, independiente de la


mquina.

Los distintos tipos de distorsiones se pueden clasificar en relacin al


instrumento o a la muestra. En primer lugar, veamos las distorsiones derivadas
del instrumento. Como punto de partida, la intensidad de las fuentes de luz y
las caractersticas de la longitud de onda varan con el tiempo durante cada
experimento. Por otra parte, ninguna lmpara tiene una intensidad constante
en todas las frecuencias. Para corregir esto, se puede aplicar un haz separador
despus del filtro o monocromador de excitacin, para dirigir una porcin de
luz a un detector de referencia.

Adems, debe tenerse en cuenta el rendimiento de transmisin de los


monocromadores y los filtros, ya que tambin puede cambiar con el tiempo. La
eficacia de la transmisin del monocromador vara dependiendo de la longitud
de onda. Esta es la razn por la que debe colocarse un detector de referencia
despus del filtro o monocromador de excitacin. El porcentaje de
fluorescencia recogido por el detector tambin depende del sistema. Por otra
parte, la eficiencia cuntica del detector, es decir, el porcentaje de fotones
detectados, vara entre los diferentes detectores, segn la longitud de onda y
el tiempo.

La correccin de todos estos factores instrumentales para conseguir un


"estndar" del espectro es un proceso tedioso, que slo se aplica en la prctica
cuando es estrictamente necesario. Es el caso de las mediciones de
rendimiento cuntico o cuando se encuentra la longitud de onda con la mayor
intensidad de emisin, por ejemplo.

Como se mencion anteriormente, tambin surgen distorsiones de la muestra.


Por lo tanto, algunos aspectos de la muestra deben tenerse en cuenta tambin.
En primer lugar, la fotodescomposicin puede disminuir la intensidad de
fluorescencia con el tiempo. La dispersin de la luz tambin debe tenerse en
cuenta. Los tipos ms importantes de dispersin en este contexto son la
dispersin de Rayleigh y la de Raman. La luz dispersa por dispersin de
Rayleigh tiene la misma longitud de onda que la luz incidente, mientras que en
la dispersin Raman la luz cambia a longitudes de onda ms largas. La
dispersin de Raman es el resultado de un estado electrnico virtual inducido
por la luz de excitacin. A partir de este estado virtual, las molculas pueden

volver a un nivel vibracional distinto del estado basal. En los espectros de


fluorescencia siempre se observa una diferencia de nmero de onda constante
en relacin con la excitacin; por ejemplo, en el agua el pico aparece a un
nmero de onda 3600 cm-1 inferior a la luz de excitacin.

Otros aspectos a considerar son los efectos del filtro interior. Estos incluyen la
reabsorcin, que ocurre porque otra molcula o parte de una macromolcula
absorbe las longitudes de onda en la que el fluorforo emite radiacin. Si este
es el caso, una parte o la totalidad de los fotones emitidos por el fluorforo
pueden ser absorbidos de nuevo. Otro efecto del filtro interno se produce a
causa de las altas concentraciones de absorcin de las molculas, incluyendo
el fluorforo. El resultado es que la intensidad de excitacin de la luz no es
constante a lo largo de la solucin. Como resultado, slo un pequeo
porcentaje de la luz de excitacin llega a los fluorforos que son visibles para el
sistema de deteccin. Los efectos del filtro interior cambian el espectro y la
intensidad de la luz emitida y, por tanto, deben ser considerados al analizar el
espectro de emisin de luz fluorescente.

APLICACIONES

La espectrometra de fluorescencia se utiliza en anlisis bioqumicos, mdicos,


qumicos y de investigacin de compuestos orgnicos. Tambin se ha utilizado
para diferenciar los tumores malignos de piel de los benignos.

La fluorescencia tambin puede utilizarse para reorientar los fotones.

Fluorescencia del triptfano

Este tipo de fluorescencia es una prueba importante que puede ser usada para
estimar la naturaleza del microambiente del triptfano (un aminocido).
Cuando se realizan experimentos con desnaturalizantes, surfactantes u otras
molculas anfiflicas, el microambiente del triptfano puede cambiar. Por
ejemplo, si una protena que contiene un nico triptfano en su ncleo
"hidrofbico" se desnaturaliza con el aumento de temperatura, aparece un
cambio de color en el espectro de emisin del rojo. Esto se debe a la exposicin
del triptfano a un medio ambiente acuoso en contraposicin a una protena

hidrofbica interior. En contraste, la adicin de un tensioactivo a una protena


que contiene triptfano, que se encuentra expuesto al solvente acuoso,
causar un cambio al espectro azul de emisin si el triptfano est incrustado
en la vescula o micela de surfactante. Las protenas que carecen de triptfano
puede ser enlazadas a un fluorforo.

A 295 nm, el espectro de emisin del triptfano es dominante sobre la


fluorescencia ms dbil de la tirosina y fenilalanina.
Espectrometra de rayos X

La espectrometra de rayos X es un conjunto de tcnicas espectroscpicas para


la determinacin de la estructura electrnica de materiales mediante el uso de
excitacin por rayos X.

ESPECTROMETRA DE EMISIN POR RAYOS X

Karl Manne Georg Siegbahn de Uppsala, Suecia (Premio Nobel 1924), fue uno
de los pioneros en el desarrollo de rayos X espectrometra de emisin (tambin
llamado X-espectroscopa de fluorescencia de rayos). Midi las longitudes de
onda de los rayos X en muchos elementos de alta precisin, utilizando
electrones de alta energa como fuente de excitacin.

Los rayos X intensos y de longitud de onda sintonizable son tpicamente


generados con sincrotrones.

En un material, los rayos X pueden sufrir una prdida de energa en


comparacin con el haz de luz que entra. Esta prdida de energa del haz reemergente refleja una excitacin interna del sistema atmico, de forma
anloga a la conocida espectrometra Raman que se utiliza ampliamente en la
regin ptica.

En la regin de los rayos X hay suficiente energa para producir cambios en el


estado electrnico (transiciones entre orbitales, lo que contrasta con la regin
ptica, donde la prdida de energa es a menudo debida a los cambios en el
estado de rotacin o los grados de libertad vibracionales). Por ejemplo, en la
regin ultraligera de los rayos X (por debajo de aproximadamente 1 k eV), las
excitaciones de los campos cristalinos dan lugar a la prdida de energa.

Podemos pensar en el proceso fotn-dentro-fotn-fuera como un evento de


dispersin. Cuando la energa del rayo X corresponde a la energa de enlace de
un nivel electrnico bsico, este proceso de dispersin potencia su resonancia
en muchos rdenes de magnitud. Este tipo de espectrometra de emisin de
rayos X se conoce a menudo como dispersin inelstica resonante de rayos X
(RIXS).

Debido a la amplia separacin de energas orbitales de los niveles bsicos, es


posible seleccionar un determinado tomo de inters. As, se puede obtener
informacin valiosa sobre la estructura electrnica local de sistemas complejos,
y los clculos tericos son relativamente sencillos de realizar.

Instrumentos

Existen varios diseos eficientes para analizar un espectro de emisin de rayos


X en la regin de los rayos X ultra ligeros. La cifra de valor para estos
instrumentos es el rendimiento espectral, es decir, el producto de la intensidad
detectada y el poder de resolucin espectral. Por lo general, es posible cambiar
los parmetros dentro de un cierto rango, mientras se mantiene su producto
constante.

Espectrmetros de rejilla

Normalmente, los rayos X que emergen de una muestra deben pasar una
hendidura que define la fuente, y luego los elementos pticos (espejos y/o
rejillas) los dispersan por difraccin segn su longitud de onda y, por ltimo, se
coloca un detector en sus puntos focales.

Monturas de rejilla esfrica

Henry Augustus Rowland (1848-1901) desarroll un instrumento que permita


el uso de un solo elemento ptico que combina la difraccin y la concentracin:
una rejilla esfrica. La reflectividad de los rayos X es baja, independientemente
del material utilizado y, por tanto, la incidencia sobre la rejilla es necesaria.

Imaginemos un crculo con la mitad del radio R tangente al centro de la


superficie de la rejilla. Este pequeo crculo se llama crculo de Rowland. Si la
hendidura de entrada estn en cualquier parte de este crculo, un haz de luz
que pase por la hendidura y golpee la rejilla se dividir en un haz reflejado
especularmente, y en haces de todos los rdenes de difraccin, que van a
concentrarse en determinados puntos en el mismo crculo.

Monturas de hendidura plana

Los espectrmetros de hendidura plana son similares a los espectrmetros


pticos. En primer lugar necesita una ptica que convierta los rayos
divergentes emitidos por la fuente de rayos X en un haz paralelo. Esto puede
lograrse mediante la utilizacin de un espejo parablico. Los rayos paralelos
que salen de este espejo golpean una rejilla plana (con una distancia de ranura
constante) en el mismo ngulo, y son difractados en funcin de su longitud de
onda. Un segundo espejo parablico, a continuacin, recoge los rayos
difractados en un cierto ngulo y crea una imagen en un detector. Un espectro
dentro de un determinado rango de longitud de onda puede ser registrado
simultneamente usando un detector sensible de posicin bidimensional tal
como una placa fotomultiplicadora de microcanal o un chip CCD sensible a los
rayos X (tambin se pueden utilizar placas de pelcula fotogrfica).

Interfermetros

En lugar de utilizar el concepto de interferencia de haz mltiple que producen


las rejillas, se puede dejar simplemente que dos rayos interfieran. Registrando
la intensidad de dos de esos rayos co-lineales en algn punto fijo y cambiando

su fase relativa, se obtiene una intensidad del espectro en funcin de la


diferencia de longitud de ruta. Se puede demostrar que esto es equivalente a
una transformada de Fourier del espectro en funcin de la frecuencia. La mayor
frecuencia registrable de dicho espectro depende del tamao mnimo de paso
elegido en la exploracin y de la resolucin de frecuencia (es decir, cmo de
bien una cierta onda puede definirse en trminos de su frecuencia). Esta ltima
caracterstica permite un diseo mucho ms compacto para lograr alta
resolucin que para un espectrmetro de rejilla, porque las longitudes de onda
de los rayos X son pequeas en comparacin con las diferencias de longitud de
ruta alcanzables.
Espectrometra de absorcin atmica

En qumica analtica, la espectrometra de absorcin atmica es una tcnica


para determinar la concentracin de un elemento metlico determinado en una
muestra. Puede utilizarse para analizar la concentracin de ms de 62 metales
diferentes en una solucin.

Aunque la espectrometra de absorcin atmica data del siglo XIX, la forma


moderna fue desarrollada en gran medida durante la dcada de los 50 por un
equipo de qumicos de Australia, dirigidos por Alan Walsh.

PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASA

La tcnica hace uso de la espectrometra de absorcin para evaluar la


concentracin de un analito en una muestra. Se basa en gran medida en la ley
de Beer-Lambert.

En resumen, los electrones de los tomos en el atomizador pueden ser


promovidos a orbitales ms altos por un instante mediante la absorcin de una
cantidad de energa (es decir, luz de una determinada longitud de onda). Esta
cantidad de energa (o longitud de onda) se refiere especficamente a una

transicin de electrones en un elemento particular, y en general, cada longitud


de onda corresponde a un solo elemento.

Como la cantidad de energa que se pone en la llama es conocida, y la cantidad


restante en el otro lado (el detector) se puede medir, es posible, a partir de la
ley de Beer-Lambert, calcular cuntas de estas transiciones tienen lugar, y as
obtener una seal que es proporcional a la concentracin del elemento que se
mide.

INSTRUMENTOS

Para analizar los constituyentes atmicos de una muestra es necesario


atomizarla. La muestra debe ser iluminada por la luz. Finalmente, la luz es
transmitida y medida por un detector. Con el fin de reducir el efecto de emisin
del atomizador (por ejemplo, la radiacin de cuerpo negro) o del ambiente,
normalmente se usa un espectrmetro entre el atomizador y el detector.

Tipos de atomizadores

Para atomizar la muestra normalmente se usa una llama, pero tambin pueden
usarse otros atomizadores como el horno de grafito o los plasmas,
principalmente los plasmas de acoplamiento inductivo.

Cuando se usa una llama, se dispone de tal modo que pase a lo largo
lateralmente (10 cm) y no en profundidad. La altura de la llama sobre la cabeza
del quemador se puede controlar mediante un ajuste del flujo de mezcla de
combustible. Un haz de luz pasa a travs de esta llama en el lado ms largo del
eje (el eje lateral) e impacta en un detector.

Anlisis de los lquidos

Una muestra de lquido normalmente se convierte en gas atmico en tres


pasos:

1. Desolvacin. El lquido disolvente se evapora, y la muestra permanece seca.


2. Vaporizacin. La muestra slida se evapora a gas.
3. Atomizacin. Los compuestos que componen la muestra se dividen en
tomos libres.

Fuentes de luz

La fuente de luz elegida tiene una anchura espectral ms estrecha que la de


las transiciones atmicas.

* Lmparas de ctodo hueco. En su modo de funcionamiento convencional, la


luz es producida por una lmpara de ctodo hueco. En el interior de la lmpara
hay un ctodo cilndrico de metal que contiene el metal de excitacin, y un
nodo. Cuando un alto voltaje se aplica a travs del nodo y el ctodo, los
tomos de metal en el ctodo se excitan y producen luz con una determinada
longitud de onda. El tipo de tubo catdico hueco depende del metal que se
analiza. Para analizar la concentracin de cobre en un mineral, se utiliza un
tubo catdico de cobre, y as para cualquier otro metal que se analice.

* Lsers de diodo. La espectrometra de absorcin atmica tambin puede ser


llevada a cabo mediante lser, principalmente un lser de diodo, ya que sus
propiedades son apropiadas para la espectrometra de absorcin lser. La
tcnica se denomina espectrometra de absorcin atmica por lser de diodo
(DLAAS o DLAS), o bien, espectrometra de absorcin por modulacin de
longitud de onda.

MTODOS DE CORRECCIN DE FONDO

El estrecho ancho de banda de las lmparas catdicas huecas hace que sea
raro el solapamiento espectral. Es decir, es poco probable que una lnea de
absorcin de un elemento se solape con otra. La emisin molecular es mucho
ms amplia, por lo que es ms probable que algunas bandas de absorcin
molecular se superpongan con una lnea atmica. Esto puede resultar en una

absorcin artificialmente alta y un clculo exagerado de la concentracin en la


solucin. Se utilizan tres mtodos para corregir esto:

* Correccin de Zeeman. Se usa un campo magntico para dividir la lnea


atmica en dos bandas laterales. Estas bandas laterales estn lo
suficientemente cerca de la longitud de onda original como para solaparse con
las bandas moleculares, pero estn lo suficientemente lejos como para no
coincidir con las bandas atmicas. Se puede comparar la absorcin en
presencia y ausencia de un campo magntico, siendo la diferencia la absorcin
atmica de inters.

* Correccin de Smith-Hieftje (inventada por Stanley B. Smith y Gary M. Hieftje)


- La lmpara catdica hueca genera pulsos de alta corriente, provocando una
mayor poblacin de tomos y auto-absorcin durante los pulsos. Esta autoabsorcin provoca una ampliacin de la lnea y una reduccin de la intensidad
de la lnea a la longitud de onda original.

* Lmpara de correccin de deuterio. En este caso, se usa una fuente de


amplia emisin (una lmpara de deuterio), para medir la emisin de fondo. El
uso de una lmpara separada hace de este mtodo el menos exacto, pero su
relativa simplicidad (y el hecho de que es el ms antiguo de los tres) lo
convierte en el ms utilizado.
Espectrometra de emisin

La espectrometra de emisin es una tcnica espectroscpica que analiza las


longitudes de onda de los fotones emitidos por los tomos o molculas durante
su transicin desde un estado excitado a un estado de inferior energa. Cada
elemento emite un conjunto caracterstico de longitudes de onda discretas en
funcin de su estructura electrnica. Mediante la observacin de estas
longitudes de onda puede determinarse la composicin elemental de la
muestra. La espectrometra de emisin se desarroll a finales del siglo 19, y los
esfuerzos tericos para explicar los espectros de emisin atmica condujeron a
la mecnica cuntica.

Hay muchas maneras en que los tomos pueden ser llevados a un estado
excitado. El mtodo ms simple es calentar la muestra a una temperatura alta,
producindose las excitaciones debido a las colisiones entre tomos de la
muestra.

Este mtodo se utiliza en la espectrometra de emisin de llama, y fue tambin


el mtodo utilizado por Anders Jonas ngstrm cuando descubri el fenmeno
de las lneas de emisin discretas en 1850.

A pesar de que las lneas de emisin estn causadas por una transicin entre
estados energticos cuantizados, y pueden ser muy agudas a primera vista,
tienen una anchura finita; es decir, se componen de ms de una longitud de
onda de luz. Esta ampliacin de la lnea espectral tiene muchas causas
diferentes.

Las lneas de emisin en los gases calientes fueron descubiertas por ngstrm,
y la tcnica fue desarrollada por David Alter, Gustav Kirchhoff y Robert Bunsen.

La espectrometra de emisin suele llamarse a menudo espectrometra de


emisin ptica, debido a la naturaleza de la luz que se emite.

TCNICA EXPERIMENTAL EN LA ESPECTROMETRA DE EMISIN POR LLAMA

La solucin que contiene la sustancia que va a ser analizada se conduce al


quemador y se dispersa en la llama como un spray fino. El solvente se evapora
en primer lugar, dejando partculas slidas finamente divididas que se
desplazan a la regin ms caliente de la llama, donde se producen tomos e
iones gaseosos. Los electrones son entonces excitados, tal como se describi
ms arriba. Es comn usar un monocromador para permitir una deteccin fcil.

En un nivel simple, la espectrometra de emisin por llama se puede observar


utilizando slo un mechero Bunsen y muestras de metales. Por ejemplo, el

metal sodio colocado en la llama se iluminar de amarillo, el metal calcio de


rojo y el cobre crear una llama verde.

Hay cuatro etapas principales durante la espectrometra de emisin por llama:

1. Evaporacin: La muestra que contiene partculas metlicas se deshidrata por


el calor de la llama, y el disolvente se evapora.

2. Atomizacin: En esta etapa, los iones metlicos que se encontraban en el


disolvente se reducen a tomos de metal. Por ejemplo, Mg2 + (aq) + 2e Mg
(g). Los electrones en los tomos de metal absorben la energa del calor de la
llama y pasan a niveles ms altos de energa.

3. Excitacin: Los electrones en estado basal de los tomos de metal son ahora
capaces de absorber la energa del calor de la llama. El cuanto (cantidad) de
energa absorbido depende de las fuerzas electrostticas de atraccin entre los
electrones con carga negativa y el ncleo de carga positiva. Esto, a su vez,
depende del nmero de protones en el ncleo. Como los electrones absorben
energa, se desplazan a niveles ms altos de la energa y pasan a estado
excitado.

4. Emisin de radiacin: Los electrones en estado excitado son muy inestables


y se mueven hacia un estado basal con bastante rapidez. Cuando lo hacen,
emiten la energa que absorbieron. Para algunos metales, esta radiacin
corresponde a longitudes de onda de luz en la regin visible del espectro
electromagntico, y se observan como un color caracterstico del metal. Como
los electrones de diferentes niveles de energa son capaces de absorber luz, el
color de la llama ser una mezcla de todas las diferentes longitudes de onda
emitidas por los distintos electrones en el tomo de metal que se investiga.
Espectrometra ultravioleta-visible

La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la


espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza
la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el
infrarrojo (IR) cercano.
En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a
transiciones electrnicas.

Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que


trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la
espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado
excitado.

APLICACIONES

La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin


cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos
orgnicos muy conjugados.

Soluciones de iones metlicos de transicin

Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es


decir, absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de
metal se pueden excitar desde un estado electrnico a otro. El color de las
soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras
especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color de una
solucin diluida de sulfato de cobre es muy azul; agregando amonaco se
intensifica el color y cambia la longitud de onda de absorcin mxima.

Compuestos orgnicos

Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de


conjugacin, tambin absorben luz en las regiones del espectro
electromagntico visible o ultravioleta. Los disolventes para estas
determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles en agua,
o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los disolventes orgnicos
pueden tener una significativa absorcin de UV, por lo que no todos los
disolventes son adecuados para su uso en espectrometra UV. El etanol absorbe
muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La polaridad y el pH del
disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un compuesto orgnico.
La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y su coeficiente de
extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando disminuye la
polaridad de los disolventes.

Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores,


stos son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones
cuantitativas.

La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es


directamente proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la
espectrometra UV/VIS puede usarse para determinar la concentracin de una
solucin. Es necesario saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la
concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de
coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir
de una curva de calibracin.

El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la


Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da
una respuesta que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados
precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la
respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin.
La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un concentracin particular
se conoce como factor de respuesta.

LEY DE BEER-LAMBERT

La espectrometra UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa


para determinar las concentraciones de especies absorbentes en solucin,
usando la Ley de Beer-Lambert:

-Frmula Ley de Beer-Lambert

donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a una


determinada longitud de onda, I es la intensidad de transmisin, L la longitud
de ruta a travs de la muestra, y c la concentracin de las especies
absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, es una constante
conocida como absortividad molar o coeficiente de extincin. Esta constante es
una propiedad fundamental molecular en un solvente dado, a una temperatura
y presin particular, y tiene como unidades 1/M * cm o, a menudo, U/M * cm.

La absorbancia y extincin a veces son definidas en trminos de logaritmo


natural en lugar de logaritmo de base 10.

La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos compuestos,


pero no sirve como relacin universal para la concentracin y absorcin de
todas las sustancias. En molculas complejas de gran tamao, como los tintes
orgnicos (Xylenol Naranja o Rojo Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra
una relacin polinmica de segundo orden entre la absorcin y la
concentracin.

ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioleta-visible se llama


espectrofotmetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a travs de una
muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a travs de la
muestra (Io). La relacin I / Io se llama transmitancia, y se expresa
habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la
transmisin:

A = - log (%T)

Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz (a menudo


una bombilla incandescente para las longitudes de onda visibles, o una
lmpara de arco de deuterio en el ultravioleta), un soporte para la muestra,
una rejilla de difraccin o monocromador para separar las diferentes longitudes
de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo o un CCD.
Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo que
una sola longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de difraccin se
utilizan con CCDs, que recogen la luz de diferentes longitudes de onda en
pxeles.

Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz. En un instrumento de un


solo haz (como el Spectronic 20), toda la luz pasa a travs de la clula
muestra. La Io debe medirse retirando la muestra. Este fue el primer diseo, y
todava est en uso en la enseanza y laboratorios industriales.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a


la muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs
de la muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores
(fotodiodos), y el haz de referencia y el de la muestra se miden al mismo
tiempo. En otros instrumentos, los dos haces pasan a travs de un bloqueador
que impide el paso de un haz. El detector alterna entre la medida del haz de
muestra y la del haz de referencia.

Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la


absorbancia de los gases e incluso de los slidos tambin puede medirse. Las
muestras suelen ser colocadas en una clula transparente, conocida como
cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una anchura interior de 1
cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la Ley de BeerLambert. Tambin se pueden usar tubos de ensayo como cubetas en algunos
instrumentos. Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad,
aunque son comunes las de vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los
plsticos absorben en el UV, lo que limita su utilidad para longitudes de onda
visibles.

ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un grfico de absorbancia de


luz frente a una longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible.
Este espectro puede ser producido directamente con los espectrofotmetros
ms sofisticados, o bien pueden registrarse los datos de una sola longitud de
onda con los instrumentos ms simples. La longitud de onda se representa con
el smbolo . Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse
un grfico estndar del coeficiente de extincin () frente a la longitud de onda
(). Este grfico estndar sera efectivamente "la concentracin corregida" y,
por tanto, independiente de la concentracin. Para una sustancia determinada,
la longitud de onda en la cual se produce el mximo de absorbancia en el
espectro se llama max, y se pronuncia "lambda-max".

Las reglas de Woodward-Fieser son un conjunto de observaciones empricas


que pueden utilizarse para predecir max, la longitud de onda de la absorcin
UV-Vis, para compuestos orgnicos conjugados como dienos y cetonas.

Las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden correlacionarse con


los tipos de enlace en una determinada molcula, y son valiosos para
determinar los grupos funcionales dentro de la molcula. La absorcin UV-Vis
no es, sin embargo, una prueba especfica para ningn compuesto
determinado. La naturaleza del disolvente, el pH de la solucin, la temperatura,
la concentracin de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes
pueden influir en los espectros de absorcin de los compuestos, as como las
variaciones en la anchura de la hendidura (ancho de banda efectivo) en el
espectrofotmetro.
Espectrometra infrarroja

La espectrometra de infrarrojos (espectroscopia IV) es un tipo de


espectrometra de absorcin que utiliza la regin infrarroja del espectro
electromagntico. Como las dems tcnicas espectroscpicas, puede ser
utilizada para identificar un compuesto o investigar la composicin de una
muestra.

La espectrometra infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces qumicos


de las sustancias tienen frecuencias de vibracin especficas, que corresponden
a los niveles de energa de la molcula. Estas frecuencias dependen de la
forma de la superficie de energa potencial de la molcula, la geometra
molecular, las masas atmicas y, posiblemente, el acoplamiento vibracional.

Si la molcula recibe luz con la misma energa de esa vibracin, entonces la luz
ser absorbida si se dan ciertas condiciones.

Para que una vibracin aparezca en el espectro infrarrojo, la molcula debe


someterse a un cambio en su momento dipolar durante la vibracin. En
particular, una aproximacin de Born-Oppenheimer y aproximaciones
armnicas; es decir, cuando el hamiltoniano molecular correspondiente al
estado electrnico estndar puede ser aproximado por un oscilador armnico
cuntico en las cercanas de la geometra molecular de equilibrio, las
frecuencias vibracionales de resonancia son determinadas por los modos
normales correspondientes a la superficie de energa potencial del estado
electrnico estndar. No obstante, las frecuencias de resonancia pueden estar,
en una primera aproximacin, en relacin con la longitud del enlace y las
masas de los tomos en cada extremo del mismo. Los enlaces pueden vibrar
de seis maneras: estiramiento simtrico, estiramiento asimtrico, tijeras,
rotacin, giro y wag.

Con el fin de hacer medidas en una muestra, se transmite un rayo monocromo


de luz infrarroja a travs de la muestra, y se registra la cantidad de energa
absorbida. Repitiendo esta operacin en un rango de longitudes de onda de
inters (por lo general, 4000-400 cm-1) se puede construir un grfico. Al
examinar el grfico de una sustancia, un usuario experimentado puede obtener
informacin sobre la misma.

Esta tcnica funciona casi exclusivamente en enlaces covalentes, y se usa


mucho en qumica, en especial en qumica orgnica. Se pueden generar
grficos bien resueltos con muestras de una sola sustancia de gran pureza. Sin
embargo, la tcnica se utiliza habitualmente para la identificacin de mezclas
complejas.

PREPARACIN DE LA MUESTRA

Las muestras lquidas pueden ser prensadas entre dos planchas de una sal de
alta pureza (como el cloruro de sodio). Estas placas deben ser transparentes a
la luz infrarroja para no introducir ninguna lnea en el espectro de la muestra.
Las placas obviamente son solubles en agua, por lo que la muestra, los
reactivos de lavado y el medio deben ser anhidros (es decir, sin agua).

Las muestras slidas se preparan mezclando una cierta cantidad de muestra


con una sal altamente purificada (por lo general bromuro de potasio). Esta
mezcla se tritura y se prensa con el fin de formar una pastilla por la que pueda
pasar la luz. La pastilla necesita ser prensada a altas presiones para asegurar
que sea translcida, pero esto no puede lograrse sin un equipo adecuado (por
ejemplo, una prensa hidrulica). Al igual que el cloruro de sodio, el bromuro de
potasio no absorbe la radiacin infrarroja, por lo que las nicas lneas
espectrales provendrn del analito.

MTODO TPICO

Un haz de luz infrarroja es generado y dividido en dos rayos. Uno pasa por la
muestra, y el otro por una referencia que suele ser la sustancia en la que est
disuelta o mezclada la muestra. Ambos haces se reflejan de vuelta al detector,
pero primero pasan a travs del separador, que alterna rpidamente cul de
los dos rayos entra en el detector. Las dos seales se comparan y, a
continuacin, se registran los datos.

Hay dos razones por las que se utiliza una referencia:

* Evita que las fluctuaciones de energa elctrica de la fuente afecten a los


resultados finales, ya que tanto la muestra como la referencia se ven afectadas
del mismo modo. Por esa misma razn, tambin impide la influencia de
variaciones sobre el resultado final, debido al hecho de que la fuente no
necesariamente emite la misma intensidad de luz para todas las longitudes de
onda

* Permite que los efectos del disolvente se anulen, porque la referencia es


normalmente la forma pura del disolvente en el que se encuentra.

USOS Y APLICACIONES

La espectrometra infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como


en la investigacin cientfica, porque es una tcnica rpida y fiable para
medidas, control de calidad y anlisis dinmicos. Los instrumentos actuales son
pequeos y pueden ser transportados, incluso para tomar medidas de campo.
Con los avances en tecnologa de filtrado computacional y la manipulacin de
los resultados, se pueden medir con precisin las muestras en una solucin (el
agua produce una banda larga de absorbancia en el rango de inters, lo que
dara un espectro ilegible sin dicho tratamiento computacional). Algunas
mquinas incluso dicen automticamente qu sustancia est siendo analizada
a travs de miles de espectros de referencia almacenados en la memoria.

Haciendo medidas a una frecuencia especfica a travs del tiempo, se pueden


seguir los cambios en la naturaleza o la cantidad de un enlace en particular, lo
que es especialmente til para medir el grado de polimerizacin en la
fabricacin de polmeros. Las mquinas modernas pueden medir en el rango de
inters con gran frecuencia, como 32 veces por segundo. Esto se puede hacer
mientras se toman medidas simultneas con otras tcnicas. As las
observaciones de reacciones qumicas son procesadas con mayor rapidez, y de
forma ms precisa y exacta.

ESPECTROMETRA DE INFRARROJOS POR TRANSFORMADA DE FOURIER

La espectrometra infrarroja por transformada de Fourier (FTIV) es una tcnica


de anlisis para obtener el espectro infrarrojo con mayor rapidez. En lugar de
registrar los datos variando la frecuencia de luz infrarroja monocromtica, se
gua la luz IV (con todas las longitudes de onda de pista utilizada) a travs de
un interfermetro. Despus de pasar por la muestra, la seal medida da el
interferograma. La realizacin de una transformada de Fourier de la seal
produce un espectro idntico al de la espectrometra infrarroja convencional
(dispersiva).

Los espectrofotmetros FTIV son ms baratos que los convencionales, porque


es ms simple construir un interfermetro que un monocromador. Adems, la
medida de un solo espectro es mucho ms rpida en esta tcnica, debido a que
la informacin de todas las frecuencias se toman al mismo tiempo. Esto
permite hacer mltiples lecturas de una sola muestra y obtener un promedio,
lo que aumenta la sensibilidad del anlisis. Debido a sus mltiples ventajas,
casi todos los modernos espectrofotmetros de infrarrojos son FTIV.
Espectrometra Raman

La espectrometra Raman es una tcnica espectroscpica utilizada en fsica de


la materia condensada y tambin en qumica para el estudio de los modos
vibracionales, rotacionales y otros de baja frecuencia en un sistema. Se basa
en la dispersin inelstica, o dispersin Raman, de la luz monocromtica, que
por lo general procede de un lser en el rango visible, infrarrojo cercano, o
ultravioleta cercano. La luz lser interacta con fonones u otras excitaciones en
el sistema, por lo que la energa de los fotones lser se desplaza hacia arriba o
hacia abajo.

Normalmente, la muestra se ilumina con un rayo lser. La luz del punto


iluminado se recoge con una lente y se enva a travs de un monocromador.
Las longitudes de onda cercanas a la lnea lser, debidas a la dispersin
elstica de Rayleigh, son filtradas, mientras que el resto de la luz recogida se
dispersa en un detector.

La dispersin Raman espontnea es generalmente muy dbil, y como resultado


la principal dificultad de la espectrometra Raman es separar la luz dbil
dispersada inelsticamente de la luz intensa lser por dispersin de Rayleigh.
Histricamente, los espectrmetros Raman utilizaban rejillas de difraccin
hologrfica y mltiples etapas de dispersin para lograr un alto grado de
rechazo lser. En el pasado, los detectores de eleccin para las configuraciones
de dispersin Raman eran los fotomultiplicadores, lo que daba lugar a largos
tiempos de adquisicin. Sin embargo, la instrumentacin moderna en casi todo
el mundo emplea filtros de muesca o borde para rechazar el lser, as como
espectrgrafos y detectores CCD.

Hay diferentes tipos avanzados de espectrometra Raman, como la de


superficie potenciada, la polarizada, la estimulada, la de transmisin, la
compensada espacialmente y la hper-Raman.

TEORA BSICA

El efecto Raman se produce cuando la luz incide sobre una molcula e


interacta con la nube de electrones de los tomos de esa molcula. El fotn
incidente excita uno de los electrones a un estado virtual. La molcula se
excita desde el estado basal a un estado de energa virtual, y se relaja a un
estado vibracional excitado, lo que genera la dispersin de Raman Stokes. Si la
molcula ya se encontraba en un estado elevado de energa vibracional, la
dispersin Raman se llama entonces dispersin Raman anti-Stokes.

Para que la molcula exhiba el efecto Raman es necesario un desplazamiento


en la polarizabilidad molecular, o cantidad de deformacin de la nube de
electrones con respecto a la coordenada vibracional. La cantidad del
desplazamiento de polarizabilidad determinar la intensidad de la dispersin
Raman, siempre que el desplazamiento Raman sea igual al nivel vibracional
que est involucrado.

HISTORIA

Aunque la dispersin inelstica de la luz la predijo Smekal en 1923, no fue


hasta 1928 cuando se observ en la prctica. El efecto Raman fue nombrado
despus de que uno de sus descubridores, el cientfico indio Sir CV Raman,
observara el efecto por medio de la luz del sol (en 1928, junto con KS Krishnan
e independientemente de Grigory Landsberg y Leonid Mandelstam). Raman
gan el Premio Nobel de Fsica en 1930 por este descubrimiento, realizado
utilizando la luz del sol, un filtro fotogrfico de banda estrecha para crear luz
monocromtica y un filtro "cruzado" para bloquear esta luz monocromtica.

Posteriormente, el arco de mercurio se convirti en la principal fuente de luz,


primero con deteccin fotogrfica y, a continuacin, con deteccin
espectrofotomtrica. En la actualidad, se utilizan lseres como fuentes de luz.

APLICACIONES

La espectrometra Raman se utiliza comnmente en qumica, ya que la


informacin vibracional es muy especfica para los enlaces qumicos de las
molculas. Por lo tanto, proporciona una huella dactilar de la molcula que
puede ser identificada. La regin de huella digital de las molculas orgnicas
est en el rango de 500-2000 cm -1. Otra forma de uso de la tcnica es el
estudio de cambios en las uniones qumicas, por ejemplo cuando un sustrato
se aade a una enzima.

Los analizadores de gases Raman tienen muchas aplicaciones prcticas. Por


ejemplo, se usan en medicina para el seguimiento en tiempo real de las
mezclas de gases respiratorios y la anestesia durante la ciruga.

En fsica del estado slido, la espectrometra Raman espontnea se utiliza para,


entre otras cosas, caracterizar los materiales, medir la temperatura, y
encontrar la orientacin cristalogrfica de una muestra.

Al igual que ocurre con molculas individuales, un material slido tiene modos
de fonn caractersticos que pueden ayudar a identificarlo. Adems, la
espectrometra Raman se puede utilizar para observar otras excitaciones de
baja frecuencia en los slidos, como plasmones, magnones, y excitaciones de
brecha en superconductores.

La seal Raman espontnea proporciona informacin sobre la poblacin de un


modo fonn determinado en el rango entre la intensidad Stokes (desplazada
hacia abajo) y anti-Stokes (desplazada hacia arriba).

La dispersin Raman mediante un cristal anisotrpico da informacin sobre la


orientacin del cristal. La polarizacin de la luz de dispersin Raman en

relacin con el cristal, y la polarizacin de la luz lser, pueden utilizarse para


conocer la orientacin del cristal, siempre que la estructura cristalina sea
conocida.

Las fibras activas Raman, como la aramida y el carbono, tienen modos


vibracionales que muestran un cambio en la frecuencia Raman con estrs
aplicado. Las fibras de polipropileno tambin exhiben cambios similares.

El modo de respiracin radial es una tcnica de uso habitual para evaluar el


dimetro de los nanotubos de carbono.

La espectrometra Raman compensada espacialmente (SORS), que es menos


sensible a las capas superficiales que la espectrometra Raman convencional,
se puede utilizar para descubrir la falsificacin de medicamentos sin necesidad
de abrir su embalaje interior, y para monitorizacin no invasiva de tejido
biolgico.

La espectrometra Raman se puede utilizar tambin para investigar la


composicin qumica de documentos histricos, como el Libro de Kells, y
contribuir al conocimiento de las condiciones sociales y econmicas en el
momento en que los documentos fueron producidos. Esto es especialmente til
porque la espectrometra Raman es una forma no invasiva que permite
preservar este tipo de materiales.

MICROESPECTROMETRA RAMAN

La espectrometra Raman ofrece varias ventajas para el anlisis microscpico.


Dado que se trata de una tcnica de dispersin, las muestras no necesitan ser
fijadas o seccionadas. Los espectros Raman pueden ser obtenidos a partir de
un volumen muy bajo (<1 m de dimetro); estos espectros permiten la
identificacin de especies presentes en ese volumen. El agua no interfiere de
manera apreciable. Por lo tanto, la espectroscopia Raman es adecuada para el
examen microscpico de minerales, materiales como cermica y polmeros, y
clulas y protenas. Un microscopio Raman consiste de un microscopio ptico
estndar con un lser de excitacin, un monocromador y un detector sensible

(como un dispositivo de carga acoplada (CCD), o un tubo fotomultiplicador


(PMT)).

En visualizacin directa, todo el campo de visin se examina por dispersin


sobre una pequea gama de nmeros de onda (turnos Raman). Por ejemplo, un
nmero de onda caracterstico para el colesterol podra ser utilizado para
registrar la distribucin de colesterol en un cultivo celular.

El otro enfoque es la visualizacin hiperespectral o las imgenes qumicas, en


las que miles de espectros Raman son adquiridos por todo el campo de visin.
Los datos pueden ser utilizados para generar imgenes que muestran la
ubicacin y la cantidad de distintos componentes. Tomando el ejemplo del
cultivo celular, una imagen hiperespectral podra mostrar la distribucin de
colesterol, as como de protenas, cidos nucleicos y cidos grasos. Las
tcnicas sofisticadas de procesamiento de imgenes y seales pueden
utilizarse para ignorar la presencia de agua, los medios de cultivo y otros
interferentes.

La microscopa Raman y, en particular, la microscopa confocal, disponen de


una resolucin espacial muy alta. Por ejemplo, las resoluciones laterales y de
profundidad son de 250 nm y 1,7 m, respectivamente, utilizando un
microespectrmetro confocal Raman con la lnea de 632,8 nm de un lser de
He-Ne con una abertura de 100 m de dimetro.

Dado que las lentes objetivo de los microscopios enfocan el rayo lser a varios
micrmetros de dimetro, el resultado del flujo de fotones es mucho mayor que
los que se logran en las configuraciones Raman convencionales. Esto tiene el
beneficio aadido de una mayor desactivacin de la fluorescencia. Sin
embargo, el alto flujo de fotones tambin puede causar la degradacin de la
muestra, y por esta razn algunas configuraciones requieren un sustrato que
conduzca trmicamente (lo que acta como un disipador de calor) a fin de
mitigar este proceso.

Mediante el uso de la microespectrometra Raman, se pueden medir los


espectros Raman, resueltos en vivo en el tiempo y el espacio, de regiones
microscpicas de la muestra. Como resultado de esto, puede eliminarse la
fluorescencia del agua, el medio y los intermediarios. En consecuencia, este

tipo de espectrometra es apropiada para examinar protenas, clulas y


rganos.

Para muestras biolgicas y mdicas, la microscopa Raman generalmente


utiliza lseres de infrarrojo cercano (diodos de 785 nm y 1064 nm). Esto reduce
el riesgo de daar la muestra mediante la aplicacin de alta potencia. Sin
embargo, la intensidad del Raman en infrarrojo cercano es baja (debido a la
dependencia -4 de la intensidad de dispersin Raman), y la mayora de
detectores requieren mucho tiempo de registro. En la actualidad se dispone de
detectores ms sensibles, por lo que esta tcnica es apropiada para uso
general. La microscopa Raman de muestras inorgnicas, tales como rocas,
cermicas y polmeros, puede utilizar una gama ms amplia de longitudes de
onda de excitacin.

ANLISIS RAMAN POLARIZADO

La polarizacin de la luz dispersada Raman tambin contiene informacin til.


Esta propiedad puede medirse utilizando un lser de excitacin polarizado y un
analizador de polarizacin. Los espectros adquiridos con el analizador, tanto en
perpendicular como en paralelo al plano de excitacin, pueden ser utilizados
para calcular el coeficiente de despolarizacin. El estudio de la tcnica es
pedaggicamente til en la enseanza de las conexiones entre la teora de
grupos, la simetra, la actividad Raman y los picos en el espectro Raman
correspondiente.

La informacin espectral que se deriva de este anlisis da una idea sobre la


orientacin molecular y la simetra vibracional. En esencia, permite al usuario
obtener valiosa informacin relativa a la forma molecular, por ejemplo, en
qumica sinttica o anlisis polimrfico. A menudo se utiliza para entender la
orientacin macromolecular en entratamados cristalinos, cristales lquidos o
muestras de polmeros.

VARIACIONES DE LA ESPECTROMETRA RAMAN

Se han desarrollado diversas variaciones de la espectrometra Raman. El


propsito habitual es aumentar la sensibilidad (por ejemplo, una mayor

superficie Raman), para mejorar la resolucin espacial (microscopa Raman), o


para adquirir informacin muy especfica (resonancia Raman).

* Espectrometra Raman de superficie mejorada (SERS). Normalmente se hace


en un coloide de plata o de oro, o en un sustrato que contiene plata u oro. Los
plasmones de superficie de plata y oro son excitados por el lser, lo que resulta
en un aumento en los campos elctricos que rodean el metal. Teniendo en
cuenta que las intensidades Raman son proporcionales a la intensidad del
campo elctrico, hay un gran aumento de la seal medida (de hasta 10 y 11).
Este efecto fue observado por Fleishman, pero prevaleci la explicacin
propuesta por Van Duyne en 1977.

* Hiper-Raman. Un efecto no lineal en el que los modos vibracionales


interactan con el segundo armnico del haz de excitacin. Para ello se
requiere una potencia muy alta, pero permite la observacin de los modos
vibracionales que son normalmente "silenciosos". A menudo se basa en una
potenciacin de tipo SERS para incrementar la sensibilidad.

* Espectrometra Raman de resonancia. La longitud de onda de excitacin es


equivalente a una transicin electrnica de la molcula o cristal, a fin de que
los modos vibracionales asociados con el estado electrnico excitado se vean
muy potenciados. Esto es til para el estudio de molculas grandes, como los
polipptidos, que pueden mostrar cientos de bandas en los espectros Raman
"convencionales". Tambin es til para asociar los modos normales con sus
cambios de frecuencia observados.

* Espectrometra Raman espontnea. Utilizada para estudiar la dependencia a


la temperatura de los espectros Raman de las molculas.

* Espectrometra Raman de pinzas pticas (OTRS). Se utiliza para estudiar


partculas individuales, e incluso procesos bioqumicos en clulas individuales
atrapadas por pinzas pticas.

* Espectrometra Raman estimulada. Un pulso de dos colores transfiere la


poblacin desde el estado basal a un estado excitado rovibracional, si la
diferencia de energa se corresponde a una transicin Raman permitida. Dos

fotones de ionizacin ultravioleta, aplicados despus de la transferencia de


poblacin (pero antes de la relajacin), permite registrar el espectro Raman
intra-molecular o inter-molecular de un gas o grupo molecular. Esta es una
tcnica til para observar la dinmica molecular.

* Espectrometra Raman compensada espacialmente (SORS). La dispersin


Raman se obtiene de regiones compensadas lateralmente fuera del punto lser
de excitacin, lo que disminuye significativamente las aportaciones de la capa
superficial en comparacin con la espectrometra Raman tradicional.

* Espectrometra Raman anti-Stokes coherente (CARS). Se utilizan dos rayos


lser para generar un haz de frecuencia anti-Stokes coherente, que puede ser
mejorada mediante resonancia.
Espectrometra de resonancia magntica nuclear

La espectrometra de resonancia magntica nuclear (RMN), ms comnmente


conocida como espectrometra RMN, es una tcnica que explota las
propiedades magnticas de ciertos ncleos. Las aplicaciones ms importantes
para su uso en qumica orgnica son la espectrometra RMN de protones y la de
carbono-13. En principio, la RMN es aplicable a cualquier ncleo que posea
espn.

Pueden obtenerse muchos tipos de informacin mediante un espectro RMN. Al


igual que se utiliza la espectrometra de infrarrojos para identificar grupos
funcionales, el anlisis de un espectro RMN unidimensional proporciona
informacin sobre el nmero y tipo de entidades qumicas en una molcula.

El impacto de la espectrometra RMN en las ciencias naturales ha sido


sustancial.

Puede utilizarse, entre otras cosas, para estudiar mezclas de analitos, para
comprender efectos dinmicos como el cambio en la temperatura y los
mecanismos de reaccin, y es una herramienta de valor incalculable para la
comprensin de la estructura y funcin de las protenas y los cidos nucleicos.
Este tipo de espectrometra se puede aplicar a una amplia variedad de
muestras, tanto en solucin como en estado slido.

TCNICAS BSICAS DE ESPECTROMETRA RMN

Cuando se sitan dentro de un campo magntico, los ncleos activos de RMN


(como el 1 H, o el 13 C) absorben a una frecuencia caracterstica del istopo.
La frecuencia de resonancia, la energa de la absorcin y la intensidad de la
seal son proporcionales a la fuerza del campo magntico. Por ejemplo, en un
campo magntico de 21 Tesla, los protones resuenan a 900 MHz. Es comn
referirse a un imn de 21 T como imn de 900 MHz, aunque distintos ncleos
resuenan a una frecuencia diferente en este campo.

En el campo magntico terrestre, los mismos ncleos resuenan en frecuencias


de audio. Este efecto se utiliza en los espectrmetros RMN y otros
instrumentos. Debido a que estos instrumentos son fciles de transportar y
baratos, a menudo se utilizan para la enseanza y el trabajo de campo.

Desplazamiento qumico

Dependiendo del entorno qumico local, los diferentes protones en una


molcula resuenan a frecuencias ligeramente diferentes. Dado que tanto este
desplazamiento como la frecuencia de resonancia fundamental son
directamente proporcionales a la fuerza del campo magntico, el
desplazamiento de frecuencia se convierte en un campo independiente de
valor adimensional conocido como desplazamiento qumico. El desplazamiento
qumico se reporta como una medida relativa de algunas frecuencias de
resonancia de referencia. (Para los ncleos 1 H, 13 C, y 29 Si, se usa como
referencia el tetrametilsilano o TMS.) Esta diferencia entre la frecuencia de la
seal y la frecuencia de la referencia se divide por la frecuencia de la seal de
referencia para obtener el desplazamiento qumico. Los desplazamientos de
frecuencia son muy pequeos en comparacin con la frecuencia RMN
fundamental. Un desplazamiento de frecuencia tpico podra ser de 100 Hz, en

comparacin con una frecuencia RMN fundamental de 100 MHz, por lo que el
desplazamiento qumico se expresa generalmente en partes por milln (ppm).

Mediante la comprensin de los diferentes entornos qumicos, el


desplazamiento qumico puede ser utilizado para obtener informacin
estructural sobre la molcula en una muestra. La conversin de los datos en
bruto a esta informacin se llama asignacin del espectro. Por ejemplo, para el
espectro 1H-RMN del etanol (CH3CH2OH), cabra esperar tres seales
especficas en tres desplazamientos qumicos especficos: uno para los grupos
CH3, uno para el grupo CH2 y otro para el grupo OH. Un grupo CH3 tpico tiene
un desplazamiento de alrededor de 1 ppm, un CH2 adjunto a un OH tiene un
desplazamiento de alrededor de 4 ppm y un OH tiene un desplazamiento en
torno a 2-3 ppm, dependiendo del disolvente utilizado.

A causa del movimiento molecular a temperatura ambiente, los tres protones


metilo alcanzan un promedio durante el curso del experimento RMN (que
normalmente requiere unos pocos milisegundos). Estos protones se degeneran
y forman un pico al mismo desplazamiento qumico.

La forma y el tamao de los picos son indicadores de la estructura qumica. En


el ejemplo anterior -el espectro de protones de etanol-, el pico de CH3 sera
tres veces ms grande que el OH. Del mismo modo, el pico de CH2 sera el
doble en tamao al pico de OH, pero slo 2/3 del tamao del pico de CH3.

El software de anlisis moderno permite analizar el tamao de los picos para


comprender cmo muchos protones dan lugar al pico. Esto se conoce como
integracin, un proceso matemtico que calcula el rea bajo un grfico (lo que,
en esencia, es un espectro). El analista debe integrar el pico y no medir su
altura, porque los picos tambin tienen anchura y, por ende, su tamao
depende de su rea y no de su altura. Sin embargo, cabe mencionar que el
nmero de protones, o cualquier otro ncleo observado, es slo proporcional a
la intensidad, o integral, de la seal RMN, en los experimentos RMN
unidimensionales ms simples. En experimentos ms elaborados, como los que
suelen utilizarse para obtener el espectro RMN del carbono-13, la integral de
las seales depende de la tasa de relajacin del ncleo, y de sus constantes de
acoplamiento escalar y dipolar. Muy a menudo, estos factores son poco
conocidos, por lo que la integral de la seal RMN es muy difcil de interpretar
en los experimentos ms complicados.

Acoplamiento-J

Parte de la informacin ms til para determinar la estructura en un espectro


RMN unidimensional proviene del acomplamiento-J o acoplamiento escalar (un
caso especial de acoplamiento espn-espn) entre los ncleos activos de RMN.
Este acoplamiento surge de la interaccin de los diferentes estados espn a
traves de los enlaces qumicos de una molcula, y resulta en la divisin de
seales RMN. Estos patrones de divisin pueden ser complejos o simples y, del
mismo modo, pueden ser interpretables o engaosos. Este acoplamiento
proporciona informacin detallada sobre la conectividad de los tomos en una
molcula.

El acoplamiento a ncleos equivalentes n (espn ) divide la seal en un


multiplete n + 1 con ratios de intensidad que siguen el tringulo de Pascal. El
acoplamiento a espines adicionales conducir a nuevas divisiones de cada uno
de los componentes del multiplete; por ejemplo, el acoplamiento a dos ncleos
diferentes de espn , con constantes de acoplamiento muy distintas,
conducir a un doblete de dobletes (abreviatura: dd). Hay que tener en cuenta
que el acoplamiento entre ncleos que son qumicamente equivalentes (es
decir, que tienen el mismo desplazamiento qumico) no tiene efecto de los
espectros RMN, y los acoplamientos entre ncleos que son distantes (por lo
general ms de 3 enlaces en molculas flexibles) suelen ser demasiado
pequeos para observar divisiones. Los acoplamientos de largo alcance, de
ms de tres enlaces, se observan a menudo en compuestos aromticos y
cclicos, conduciendo a patrones de divisin ms complejos.

Por ejemplo, en el espectro de protones para el etanol que se ha descrito


anteriormente, el grupo CH3 se divide en un triplete con una relacin de
intensidad de 1:2:1 mediante los dos protones CH2 vecinos. Del mismo modo,
el CH2 se divide en un cuarteto con una relacin de intensidad de 1:3:3:1
mediante los tres protones CH3 vecinos. En principio, los dos protones CH2
tambin se dividen de nuevo en un doblete para formar un doblete de
cuartetos mediante el protn hidroxilo, pero el intercambio intermolecular del
protn hidroxilo acdico a menudo resulta en una prdida de informacin del
acoplamiento.

El acoplamiento a cualquier ncleo de espn , tal como el fsforo-31 o el flor19, funciona de esta manera (aunque las magnitudes de las constantes de
acoplamiento pueden ser muy diferentes). Pero los patrones de divisin difieren
de los descritos anteriormente para los ncleos con espn superior a debido
a que el nmero cuntico de espn tiene ms de dos valores posibles. Por
ejemplo, para el acoplamiento al deuterio (un ncleo de espn 1) divide la seal
en un triplete 1:1:1, porque el espn 1 tiene tres estados de espn. Del mismo
modo, un ncleo de espn 3/2 divide una seal 1:1:1:1 en un cuarteto y as
sucesivamente.

El acoplamiento combinado con el desplazamiento qumico (y la integracin de


protones) nos dice no slo el entorno qumico de los ncleos, sino tambin el
nmero de ncleos activos RMN vecinos en la molcula. En los espectros ms
complejos, con mltiples picos en desplazamientos qumicos similares, o en el
espectro de ncleos distintos del hidrgeno, el acoplamiento es a menudo la
nica manera de distinguir ncleos diferentes.

Acoplamiento de segundo orden (o fuerte)

La descripcin anterior asume que la constante de acoplamiento es pequea


en comparacin con la diferencia en frecuencias RMN entre los espines
inequivalentes. Si la separacin del desplazamiento disminuye (o la fuerza del
acoplamiento aumenta), los patrones de intensidad del multiplete se
distorsionan, y luego se vuelven ms complejos y difciles de analizar
(especialmente si ms de dos espines estn involucrados). La intensificacin de
algunos picos en un multiplete se logra a expensas del resto, que a veces casi
desaparece en el ruido de fondo, aunque el rea integrada bajo los picos se
mantenga constante. En la mayora de RMN de alto campo, sin embargo, las
distorsiones suelen ser modestas y las distorsiones caractersticas (techo)
pueden ayudar a identificar los picos.

Los efectos de segundo orden disminuyen cuando la diferencia de frecuencia


entre multipletes aumenta, por lo que el espectro RMN de alto campo (es decir,
de alta frecuencia) muestra menos distorsin que los espectros de frecuencia
menor. Los primeros espectros a 60 MHz eran ms propensos a la distorsin
que los espectros de mquinas posteriores que operan en frecuencias de 200
MHz o superiores.

Inequivalencia magntica

Pueden ocurrir efectos ms sutiles si los espines qumicamente equivalentes


(es decir, ncleos relacionados por simetra y con la misma frecuencia RMN)
tienen diferentes relaciones de acoplamiento respecto a los espines externos.
Los espines que son qumicamente equivalentes pero no son indistinguibles
(sobre la base de sus relaciones de acoplamiento) se denominan espines con
inequivalencia magntica. Por ejemplo, los sitios 4 H del 1,2-diclorobenceno se
dividen en dos pares qumicamente equivalentes por simetra, pero un
individuo miembro de uno de los pares tiene diferentes acoplamientos a los
espines que componen el otro par. La inequivalencia magntica puede dar
lugar a espectros muy complejos que slo pueden ser analizados mediante
modelado computacional. Estos efectos son ms comunes en los espectros
RMN de sistemas aromticos y otros no flexibles, mientras que el promedio
conformacional de los enlaces CC en molculas flexibles tiende a igualar los
acoplamientos entre protones en carbonos adyacentes, reduciendo los
problemas con la inequivalencia magntica.

ESPECTROMETRA DE CORRELACIN

La espectrometra de correlacin es uno de los diversos tipos de


espectrometra de resonancia magntica nuclear (RMN) bidimensional. Este
tipo de experimento RMN es mejor conocido por su acrnimo, COSY. Otros tipos
de espectrometra RMN bidimensional son la espectrometra-J, la de
intercambio (EXSY), la de efecto Overhauser nuclear (NOESY), la de correlacin
total (TOCSY), y experimentos de correlacin heteronuclear como el HSQC,
HMQC y HMBC. Los espectros bidimensionales RMN proporcionan ms
informacin acerca de una molcula que los espectros RMN unidimensionales,
y son especialmente tiles para determinar la estructura de la molcula, en
particular para molculas que son demasiado complicadas para la RMN
unidimensional. El primer experimento bidimensional, COSY, fue propuesto por
Jean Jeener, un profesor de la Universit Libre de Bruxelles, en 1971. Este
experimento fue posteriormente implementado por Walter P. Aue, Enrico
Bartholdi y Richard R. Ernst, que publicaron sus trabajos en 1976.

RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE ESTADO SLIDO

Una variedad de circunstancias fsicas impide que las molculas sean


estudiadas en solucin, ni tampoco mediante otras tcnicas espectroscpicas a
un nivel atmico. En los medios de fase slida, tales como cristales, polvos
microcristalinos, geles, soluciones anisotrpicas, etc, se da en particular el
acoplamiento dipolar y la anisotropa de desplazamiento qumico, que se
convierten en dominantes para el comportamiento de los sistemas de espn
nuclear. En la espectrometra RMN convencional en estado de solucin, estas
interacciones adicionales daran lugar a una ampliacin considerable de las
lneas espectrales. Diversas tcnicas permiten establecer condiciones de alta
resolucin, que pueden, al menos para los espectros de 13 C, ser comparables
a los espectros RMN en estado de solucin.

Dos conceptos importantes para la alta resolucin en la espectrometra RMN de


estado slido son la limitacin de la posible orientacin molecular mediante
orientacin de la muestra, y la reduccin de las interacciones magnticas
nucleares anisotrpicas mediante giro de la muestra. De este ltimo enfoque,
destaca el mtodo del giro rpido en torno al ngulo mgico, cuando el sistema
est compuesto por ncleos de espines 1/2. Una serie de tcnicas intermedias,
con muestras de alineamiento parcial o movilidad reducida, se estn utilizando
tambin en espectrometra RMN.

Las aplicaciones de la RMN de estado slido suelen utilizarse en


investigaciones sobre protenas de la membrana, fibrillas de protenas, todo
tipo de polmeros, anlisis en qumica inorgnica, y tambin otras ms
"exticas" como las hojas de plantas y las pilas de combustible.

ESPECTROMETRA RMN APLICADA A PROTENAS

Gran parte de la reciente innovacin dentro de la espectrometra RMN se ha


dado en el campo de estudio de las protenas, y se ha convertido en una
tcnica muy importante en la biologa estructural. Un objetivo comn de estas
investigaciones es obtener una alta resolucin de las estructuras
tridimensionales de las protenas, similar a lo que puede lograrse por
cristalografa de rayos X. En contraste con la cristalografa de rayos X, la RMN
se limita sobre todo a las protenas relativamente pequeas, de menos de 35
kDa, aunque los avances tcnicos permiten la resolucin de estructuras ms
grandes. La espectrometra RMN es a menudo la nica manera de obtener

informacin de alta resolucin, en todo o en parte, de protenas no


estructuradas.

Las protenas son varios rdenes de magnitud ms grandes que las pequeas
molculas orgnicas que se mencionaron anteriormente en este artculo, pero
la misma teora se aplica a la RMN. Debido al mayor nmero de elementos
presentes en la molcula, los espectros unidimensionales bsicos se ven
solapados con la superposicin de seales, hasta el punto de que el anlisis
resulta imposible. Por lo tanto, se realizan experimentos multidimensionales (2,
3 o 4D) para hacer frente a este problema. Para facilitar estos experimentos, es
conveniente marcar isotpicamente la protena con 13 C y 15 N, debido a que
los istopos 12 C predominantes de forma natural no son activos a la RMN,
mientras que el momento cuadrpolo nuclear del istopo 14 N predominante
de forma natural impide que se pueda obtener informacin de alta resolucin a
partir de este istopo de nitrgeno. El mtodo ms importante utilizado para la
determinacin de la estructura de las protenas utiliza experimentos NOE para
medir las distancias entre pares de tomos dentro de la molcula.
Posteriormente, las distancias obtenidas se utilizan para generar una
estructura 3D de la molcula usando un programa de ordenador.
Espectrometra Mossbauer

La espectrometra Mssbauer es un mtodo para determinar el grado de


oxidacin qumica y el entorno de los elementos qumicos. El efecto Mssbauer,
que se basa en este espectrmetro, le vali el Premio Nobel de Fsica a su
descubridor, Rudolf Ludwig Mssbauer. Esta tcnica es conocida sobre todo por
el estudio del hierro, pero tambin es aplicable a cualquier especie qumica
cuyo ncleo atmico presente un espn no nulo.

TEORA BSICA

La muestra se excita mediante una radiacin gamma (fotones) que vara la


energa de transicin nuclear. Para eso, se dispone una fuente de radiacin que
emite continuamente, y se desplaza la fuente mediante oscilaciones,
produciendo el efecto Doppler-Fizeau el cambio de energa.

Un detector se encuentra detrs de la muestra. Cuando la energa de radiacin


incidente se corresponde con la energa de transicin electrnica, la radiacin
se absorbe, y por lo tanto la intensidad recogida baja. As pues, esta es una
espectrometra de absorcin.

El espectro Mssbauer consta de un conjunto de multipletes cuya forma y


posicin (desplazamiento qumico) es caracterstico tanto del nmero de
oxidacin como de la naturaleza y la geometra de los vecinos ms cercanos al
elemento qumico estudiado.

APLICACIONES

* Corrosin acuosa. En la corrosin acuosa del hierro y el acero, se forman


diferentes fases de oxidacin. La espectrometra Mssbauer es parte del
estudio de estas fases.

* Espectrmetro a bordo de sondas espaciales. Este instrumento es parte del


equipo de las sondas Spirit, Opportunity y Beagle 2 enviadas a Marte en 2003.
Sus funciones son, entre otras:
a) Determinar la composicin y abundancia de minerales ricos en hierro para
posibles operaciones futuras.
b) Medir el magnetismo de diversos materiales marcianos (suelo, polvo, rocas).

* Corrimiento al rojo gravitacional. La relatividad general predice que la


frecuencia observada de una seal emitida a la superficie de una estrella
disminuye con la distancia al observador. Intuitivamente, es una traduccin del
hecho de que cualquier partcula, incluidos los fotones, pierden la energa para
salir de un campo gravitacional. Del mismo modo, una seal de frecuencia
emitida a la parte superior de una torre, ser captada en la parte inferior de la
torre de altura h con una frecuencia ' calculada segn la frmula,

donde g es la aceleracin de la gravedad terrestre y c la velocidad de la luz.


Para una altura de 10 metros, y ' se diferencian slo en 10 elevado a -15,
una diferencia muy difcil de medir. Histricamente, la primera evidencia de
este efecto tuvo lugar en 1960 por parte de RV Pound y GA Rebka al utilizar el
efecto Mossbauer descubierto un ao antes .

Anlisis de Aceites
El Anlisis de aceites consiste en la realizacin de tests fisico-qumicos en el aceite con el fin de determinar si
el lubricante se encuentra en condiciones de ser empleado, o si debe ser cambiado. es una de las tcnicas
simples, que mayor informacin proporciona al Administrador de Mantenimiento, con respecto a las
condiciones de operacin del equipo, sus niveles de contaminacin, degradacin y finalmente su desgaste y
vida til.
Muchos departamentos de mantenimiento tienen actualmente Programas de Anlisis de Aceite. Algunos
utilizando el laboratorio de su proveedor de lubricantes o contratando los servicios de laboratorio privados. En
muchos de los casos los resultados del anlisis, son recibidos semanas o meses despus de la toma de la
muestra y la informacin se vuelve irrelevante, ya que para ese momento, las condiciones del equipo ya son
diferentes, en muchos casos el aceite ya fue cambiado y en otros el equipo ya fall y fue reparado.
Objetivos del seguimiento analtico de los aceites:

Controlar el estado de la carga de aceite

Controlar el estado del equipo

Muestreo: Es importante que la muestra sea representativa, debe ser extrada del equipo en las condiciones
normales de operacin (con el aceite en circulacin y caliente) o inmediatamente despus de haber parado la
mquina. No deben tomarse muestras en fro. Debern tomarse las cantidades necesarias y etiquetarlas con
el mayor nmero posible de datos de su origen.
Anlisis del aceite:

Examen visual

Aspecto: Aceite claro y limpio. Aceite turbio. Fase de agua decantada. Aceite sucio. Aceite sucio con
partculas decantadas. Indeterminable

Color - olor: Mas oscuro implica oxidacin del aceite, mezcla, contaminacin. Mas claro puede
indicar mezcla, presencia de agua

Partculas en suspensin

Viscosidad: Es la resistencia del fluido al al flujo con respecto a la temperatura. La viscosidad


cinemtica se mide por el tiempo que un determinado volumen de aceite emplea en fluir a travs de
un tubo capilar a una temperatura determinada. Este tubo capilar se introduce con el aceite a
controlar en un bao a temperatura constante hasta que la temperatura se estabilice. En l hay unas
marcas calibradas que definen un volumen determinado, el cual multiplicado por el tiempo nos da la
viscosidad cinemtica en mm2/s ( cSt) a dicha temperatura. La viscosidad se da normalmente a dos
temperaturas (40C y 100C). El grado de viscosidad ISO se define como la viscosidad a 40C.
Cambios en la viscosidad:

Mayor - Menor

Oxidacin del lubricante-contaminacin con fuel

Espuma/cavitacin de la bomba- corte molecular

Emulsin con agua contaminacin con agua no emulsificada

Contaminacin con slidos refrigerante

Indice de acidez (T.A.N): (IP 177 / ASTM D664) - La cantidad de producto bsico, expresado en mg
KOH/g requeridos para neutralizar todos los componentes cidos presentes en 1g de la muestra

Para obtener una muestra representativa, las muestras se calientan a 65C para asegurar
que cualquier sedimento o depsito que pueda contener compuestos cidos se disuelva en
el aceite

La muestra se disuelve en una mezcla de propanol y tolueno y se introduce en el


potencimetro
con
una
solucin
de
KOH
Permite detectar la oxidacin del lubricante y el consumo de aditivos. Un aumento del
mismo es sntoma de oxidacin y una disminucin de consumo de aditivos.

Alcalinidad (T.B.N.) (IP 177 / ASTM D664). La cantidad de acido, expresada en el nmero
equivalente de mg KOH, requeridos para neutralizar todos los compuestos cidos presentes en 1g
de muestra

Para obtener una muestra representativa, las muestras se calientan a 65C para asegurar
que cualquier sedimento o depsito que pueda contener compuestos cidos se disuelva en
el aceite

La muestra se disuelve en una mezcla de propanol y tolueno y se introduce en el


potencimetro
con
una
solucin
de
HCl
Interpretacin: El TBN mide la reserva alcalina del lubricante, y mayormente se aplica a

lubricantes para motores. Si un lubricante contiene aditivos no alcalinos, no es muy til


determinar el TBN, ya que es probable que no haya. Si el TBN alcanza el 2.0 o disminuye
ms del 50% con respecto al punto de partida, se debe considerar un drenaje.
Entre las aplicaciones sugeridas se encuentran los motores alternativos, motores a gas
natural y compresores que usan lubricantes alcalinos.

Espectrometalografas: Cualquiera de las tcnicas usadas para detectar y cuantificar trazas de


elementos metlicos. Se realiza para medir partculas metlicas menores de 10 micras y nos brida
informacin sobre desgaste, contaminacin y aditivos

Anlisis infrarrojo: Es una forma de espectroscopia de absorcin restringida a la regin de longitud


de ondas espectrales infrarrojas que identifica y cuantifica los grupos funcionales orgnicos

Un haz de luz infrarroja atraviesa una muestra de aceite usado contenido en una celda de
cristal. El espectro de infrarrojo generado por la muestra se reproduce en un grfico

Cada tipo de aceite tiene un espectro caracterstico (como una huella digital) que permite
comparar el aceite nuevo con el usado

Las diferencias entre los espectros muestran algunos cambios de los componentes del
lubricante en servicio

Por ejemplo, puede medirse cuanto antidesgaste se ha consumido en un aceite hidrulico,


contenido en agua u oxidacin

Espectrometria de Emisin (I.C.P.):

La muesta se caliente y se lleva hasta un estado de plasma

Los elementos presentes emiten ciertas radiacones en el espectro visible y ultravioleta

La radiacin emitida es separada en diferentes longitudes de onda por difraccin

La intensidad de la radiacin es medida a diferentes longitudes de onda y esto permite


calcular las concentraciones de los diferentes elementos presentes en la muestra

Se pueden medir concentraciones desde 1 a 1000 ppm. Esta tcnica se utiliza para
determinar el nivel de aditivos (Ba,Ca,Mg,P,B), metales de desgaste (Fe,Cu,Pb,Ag,Al,Ni) y
contaminantes (Si,Na,K,Ba)