Conduct IV I Dad

COMPARACIN DE LA DENSIDAD DE BACTERIAS DESNITRIFICANTES
ENTRE BOSQUE INUNDADO Y MORICHAL EN LA RESERVA NATURAL

BOJONAWI
NATALIA JEANNETHE BORDA CALVO

YULY MILENA LARGO HIGUERA
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial para optar al ttulo de
Microbiloga Industrial
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Bogot D.C.
Febrero de 2009
NOTA DE ADVERTENCIA
Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946
La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus

alumnos en sus trabajos de tesis. Slo velar por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral catlica y por que la tesis no contengan
ataques personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el
anhelo de buscar la verdad y la justicia

BOJONAWI

APROBADO
_________________________
Amanda Varela, Ph. D
Directora
_______________________
_____________________
Mara Magdalena Gmez

Jurado
Joaqun Benavides
Jurado

BOJONAWI

APROBADO
___________________
_____________________
Ingrid Schuler, Ph. D

Decana Acadmica
Janeth Arias, MSc

Directora de Carrera
Agradezco a DIOS y dedico este trabajo a mis familiares, en especial

a mis padres, quienes no me dejaron desfallecer en el camino, quienes
con su constancia, paciencia, voz de aliento y apoyo incondicional
ayudaron a cumplir mi meta.
A Ronal e hijo por ser la ilusin ms grande de mi vida y a todos

aquellos que hoy comparten este sueo junto a mi.
Natalia Borda
Dedico el presente trabajo de grado a mis padres, Rogelio y Luva por la

inmensidad de su amor y el legado de perseverancia y valor al asumir
los retos de la vida; A mis hermanos Gloria Elcy, Cesar, Javier , A
Hernando especialmente por su ayuda incondicional y ejemplaridad de
vida, A toda mi familia, por ser el pilar fundamental de mi existir; A
Diego por su compaa, amor y aliento permanente.
A todos ellos la gratitud en mi corazn y de mi alma a Dios y la Virgen

Mara por su bendicin al lograr esta importante meta profesional.
Yuly Milena
AGRADECIMIENTOS
A la Fundacin Omacha y a la Pontificia Universidad Javeriana por el apoyo

econmico para el desarrollo del proyecto.
A la Dra. Amanda Varela, Ph.D., Docente e Investigadora de la Pontificia

Universidad Javeriana, por su colaboracin y apoyo en el trabajo de grado.
A la Dra. Sandra Baena, Ph.D., Docente e investigadora del Departamento

de Biologa, a Carolina, Luisa y dems miembros del laboratorio Unidad De
Saneamiento De Biotecnologa Ambiental (USBA), por el apoyo logstico
durante el desarrollo del trabajo.
A Mara Magdalena Gmez, Bacteriologa de la Universidad Metropolitana de

Barranquilla, por su paciencia, colaboracin y tiempo durante el desarrollo
del proyecto
A Mnica Cubillos, Biloga de la Pontificia Universidad Javeriana, quien con

sus conocimientos de estadstica nos gui para darle curso a nuestro
proyecto.
A Diego Alberto Senz, Microbilogo Industrial, de la Pontificia Universidad

Javeriana, por transmitirnos sus conocimientos y guiarnos en gran parte del
proyecto, adems por su colaboracin y ayuda desinteresada.
A nuestros compaeros de Laboratorio de Ecologa de Suelos y Hongos

Tropicales de la Facultad de Ciencias, por sus valiosos aportes y
comentarios en el proceso de desarrollo de este trabajo.
A todas las personas que nos acompaaron y ayudaron en la realizacin de

este trabajo.
TABLA DE CONTENIDOS
Pg
RESUMEN
ABSTRACT
1.
INTRODUCCIN
2.
MARCO TERICO
2.1
Regin de la Orinoqua
2.2
Humedales y bosques riparios
2.3
Ciclo del nitrgeno
18
3.
FORMULACION DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACION
29
3.1
Formulacin del problema
29
3.2
Preguntas de Investigacin
30
3.3
Justificacin
31
4.
OBJETIVOS
33
4.1
Objetivo general
33
4.2
Objetivos especficos
33
5.
MATERIALES Y MTODOS
34
5.1.
Diseo de investigacin
34
5.2.
Seleccin de coberturas vegetales
34
5.3
Mtodos
35
5.3.1.
Recoleccin de muestras
35
5.3.2.
Parmetros fisicoqumicos
37
5.3.3.
Densidad de bacterias desnitrificantes
39
5.4.
Anlisis de datos
42
6.
RESULTADOS
43
6.1
Densidad de bacterias desnitrificantes
43
6.2
Variables ambientales
44
6.3
Parmetros fisicoqumicos
44
6.4
Relacin entre la densidad de bacterias desnitrificantes y

parmetros fisicoqumicos
47
7.
DISCUSIN DE RESULTADOS
52
8.
CONCLUSIONES
63
9.
RECOMENDACIONES
64
10.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
65
11.
ANEXOS
77
LISTA DE TABLAS
Pg.
Tabla 1.
Valores de r2 y P de la prueba de Spearman,
las variables
ambientales,
parmetros
fisicoqumicos
entre
y la
densidad de bacterias desnitrificantes para los suelos de las

51
coberturas vegetales analizadas.
LISTA DE FIGURAS
Pg.
Figura 1.
Reserva Natural Bojonawi.
Figura 2A y 2B.
Coberturas vegetales. Morichales y Bosques
34
Riparios.
35
Figura 3.
Termmetro de mximas, mnimas y de suelo.
36
Figura 4A y 4B.
Medio en ebullicin y cambio de Fase.
40
Figura 5A y 5B.
Aumento de turbidez en medio de cultivo debido al

crecimiento microbiano y verificacin con reactivo
difenilamina.
Figura 6.
41
Promedio desviacin estndar de densidad de

bacterias desnitrificantes en suelos de morichales y
bosques riparios.
Figura 7.
43
Promedio desviacin estndar de pH en suelos de

morichales y bosques riparios.
Figura 8.
45
Promedio desviacin estndar de porcentaje de

humedad en suelos de morichales y bosques riparios. 45
Figura 9.
Porcentaje de arcilla, arena y limo en suelos de

Figura 10.
46
Promedio desviacin estndar de la distribucin de

agregados en suelos de morichales y bosques riparios. 47
10
Figura 11.
Correlacin entre pH densidad de bacterias

desnitrificantes para las coberturas vegetales
analizadas.
Figura 12.
48
Grficas de correlacin entre tamao de agregados y la

densidad de bacterias desnitrificantes para las coberturas
vegetales analizadas.
11
50
RESUMEN
En este estudio se realiz una comparacin de la densidad de bacterias

desnitrificantes entre bosque ripario y morichal en la Reserva Natural
Bojonawi y se estableci su relacin con algunas variables ambientales
(temperatura ambiental, temperatura del suelo y cobertura vegetal) y
fisicoqumicas (pH, porcentaje de humedad, textura, y distribucin de
agregados) del suelo. Se realiz un muestreo aleatorio simple, en poca de
lluvias (junio) del 2007. Para cada cobertura vegetal se escogieron cinco
sitios de muestreo y de cada uno se tomaron tres muestras de suelo. Para la
determinacin de la densidad de bacterias desnitrificantes se trabaj bajo
condiciones de anaerobiosis, usando un medio mineral basal con cloruro de
amonio como fuente de nitrgeno. Se encontr que la cantidad de bacterias
desnitrificantes fue mayor en los suelos bajo bosques riparios, pero dentro
del mismo orden de magnitud. Se determin que los parmetros
fisicoqumicos que tuvieron relacin con la densidad de estas bacterias
fueron el pH y la cantidad de agregados (600, 300, 54 y <54 m). Se
encontr una relacin directa entre la densidad de bacterias desnitrificantes y
el pH. De igual manera se determin que los suelos de textura arcillosa y
limosa favorecan la densidad de este grupo bacteriano. Los resultados
obtenidos demuestran que a pesar del pH cido del suelo hay una poblacin
de bacterias desnitrificantes aunque baja, que mantiene la desnitrificacin en
estos suelos, pero que sugiere una baja disponibilidad de nitrgeno en el
suelo. Se sugiere medir las concentraciones de varias formas de nitrgeno
en estos suelos y cuantificar la actividad enzimtica de este grupo, as como
de otros grupos de bacterias involucrados en otras fases del ciclo del
nitrgeno.
Palabras clave: bacterias desnitrificantes, bosques riparios, ciclo del nitrgeno,
morichales, suelo, variables fisicoqumicas.
12
ABSTRACT
This study was conducted to compare the density of denitrifying bacteria and
Morichal between riparian forest in the Natural Reserve Bojonawi and
established relationship with some environmental variables (temperature, soil
temperature and vegetation cover) and physicochemical (pH, percentage of
moisture, texture, and distribution of aggregates) from the soil. We performed
a simple random sampling, in the rainy season (June) 2007. For each cover
five sites were selected for sampling and each took three soil samples. To
determine the density of denitrifying bacteria were working under anaerobic
conditions using mineral basal half of ammonium chloride as a source of
nitrogen. It was found that the amount of denitrifying bacteria was higher in
soils under riparian forests, but in the same order of magnitude. It was
determined that the physicochemical parameters that were related to the
density of these bacteria were the pH and amount of aggregates (600, 300,
54 and <54 m). We found a direct relationship between the density of
denitrifying bacteria and pH. Similarly found that the soil texture and silty clay
favored bacterial density of this group. The results show that despite the soil
pH is a population of denitrifying bacteria, although low, which maintains the
denitrification in these soils, but that suggests a low availability of nitrogen in
the soil. It is suggested to measure the concentrations of various forms of
nitrogen in the soil and measure the enzyme activity of this group and other
groups of bacteria involved in other phases of the nitrogen cycle.
Key words: denitrifying bacteria, riparian forests, the nitrogen cycle,
morichales, soil physicochemical variables.
13
1. INTRODUCCIN
La presencia de nitratos y nitritos en el suelo se da de manera natural.
Grupos de bacterias edficos oxidan los iones amonio a nitrito y las bacterias
nitrificantes oxidan el nitrito a nitrato. El nitrato es fcilmente absorbido por
las races de las plantas y utilizado para formar molculas propias, que
contienen nitrgeno (protenas y cidos nucleicos). Existen un grupo de las
bacterias desnitrificantes que en condiciones anaerobias y de inundacin
convierten los nitratos del suelo en nitrgeno molecular que escapa a la
atmsfera, como parte del ciclo del nitrgeno. Estas bacterias son de gran
importancia ya que evitan la acumulacin de nitrato en el suelo y por ende la
contaminacin del medio ambiente.
En Orinoqua hay ecosistemas como los bosques riparios, los cuales son
refugio de numerosas especies de fauna y reguladores del ciclo estacional de
lluvia, que han sido deteriorados por tener una fuente de recursos naturales
de fcil acceso. Esta vegetacin ha sido objeto de transformaciones por la
frecuencia de quemas peridicas, caza indiscriminada y sobrepesca, entre
otros. Asimismo existen los morichales donde se encuentra la palma de
moriche, considerada por la comunidad como el rbol de la vida, sacando
provecho de esta para techar sus chozas, elaborar diferentes comidas y
brebajes a partir de los frutos y, fabricar hamacas y cestas de las fibras
obtenidas de las hojas.
Esta palma se encuentra dentro de una formacin vegetal con una gran
composicin florstica; tanto as, que puede dar la sensacin de un bosque
similar al de galera en un ambiente tpico de sabana, estas plantas tienen
caractersticas muy particulares, entre ellas, su permanente escorrenta,
ausencia total de transporte suspendido, leves magnitudes de pendientes y
aspecto limpio de sus aguas, con suelos grises oscuros y de alto contenido
orgnico, pero aunque su similitud es alta, se presume que la abundancia de
14
bacterias tiene un cambio significativo dependiendo de la regin, pues se

trata de ecosistemas diferentes, sin embargo esta variedad y densidad que
pueda existir es desconocida por las escasas investigaciones realizadas all.
Los bosques riparios y morichales de la Orinoquia se inundan peridicamente
y permanecen inundados durante siete meses al ao en poca de lluvias,
(entre abril y octubre), generando de esta manera condiciones fsicas,
qumicas y biolgicas particulares en el suelo. Esto afecta la densidad y
actividad de los microorganismos del suelo, y por ende el ciclaje de
nutrientes se da a diferentes tasas bajo inundacin y sin esta. Sin embargo la
dinmica natural de los cambios que sufre la estructura de las comunidades
microbianas por la inundacin es desconocida tanto para bosques como para
morichales y para poder recuperar los morichales a travs de la siembra de
palmas, un primer paso puede ser conocer cmo cambia la densidad de
bacterias asociadas al ciclo del nitrgeno, ya que es un elemento
fundamental en la nutricin vegetal. Es as como se podrn proponer
estrategias que favorezcan el establecimiento de palmas y rboles del
bosque con fines de recuperacin de estos dos sistemas.
15
2. MARCO TERICO
2.1. Regin de la Orinoqua
De acuerdo con Correa et al., (2006) en la regin de la Orinoqua se han
identificado cinco grandes subregiones o paisajes, que incluyen las zonas
transicionales de Amazona-Orinoqua, Andes-Orinoqua y las formaciones
del Escudo Guyans. La subregin andino-orinoquense, comprende las
partes alto, media y baja de la cordillera Oriental y se extiende desde la
Cordillera de los Picachos hasta el Parque Nacional Natural Tam, Incluye
formaciones vegetales de pramo, bosque alto-andino, andino y de
piedemonte o subandino (Peuela et al., 2002).
En la subregin de los Llanos Orientales, representada por el complejo de

sabanas tropicales, abarca desde los ros Arauca, Capanaparo y Meta en el
nororiente, hasta los ros Guayabero y Guaviare en el suroccidente (Correa
et al., 2006). Entre sus componentes ms importantes estn las planicies de
pantanales y desbordes, las sabanas planas y onduladas de la altillanura, y
las de desborde, la llanura elica y las zonas aluviales recientes (Castillo et
al., 2006).
Con respecto a la subregin del andn orinoquense se conoce que se

encuentra localizada en la margen izquierda del ro Orinoco, en la franja
comprendida entre Puerto Carreo y Puerto Inrida, con dominio de paisaje
de altillanura residual; se considera una zona de transicin entre la altillanura,
las selvas y las sabanas del Escudo Guyans (Correa et al., 2006). Por su
parte la subregin transicional Amazona-Orinoqua ubicada en la franja de
ecotonos entre selvas y sabanas; se extiende al sur del ro Vichada hasta el
ro Guaviare. La sierra de La Macarena, situada en el extremo sur occidental
de la Orinoqua, se caracteriza como un ncleo rocoso emparentado con el
Escudo
Guyans;
se
define
como
16
relieve
Insular
que
conecta
biogeogrficamente los Andes, la Amazona y la Orinoqua (Correa et al.,

2006; Peuela et al., 2002).
En cuanto a la geomorfologa y suelos de la Orinoqua, la megacuenca de
sedimentacin de dicho departamento comprende las reas sedimentadas
por ros provenientes de la cordillera Oriental. Esta sedimentacin acompa
al levantamiento de la cordillera formando diferentes paisajes de acuerdo con
las distintas fases, principalmente la tectnica, en las reas que recibieron los
sedimentos, entre los cuales se encuentra principalmente el relieve colinado,
el alomado estructural erosional, la altillanura estructural, las llanuras
aluviales, el piedemonte coluvio aluvial y la llanura elica (Correa et al.,
2006; Peuela et al., 2002).
En general, los suelos en la Orinoqua colombiana son de baja fertilidad. Son

escasos los que presentan condiciones favorables para la agricultura, los
cuales se ubican en el piedemonte de la cordillera Oriental y en las zonas
aluviales de los ros de origen andino. Los niveles de fertilidad disminuyen en
direccin oriental, con registros ms bajos en las reas de influencia del
Escudo Guyans. Se trata de suelos de ecosistemas frgiles, en los cuales
predomina la vocacin forestal y la medida de su riqueza est representada
en una gran diversidad (Correa et al., 2006).
Por ser suelos que permanecen la mayor parte del ao encharcados o

inundados, es decir que presentan condiciones de hidromorfismo, se
favorece el desarrollo de suelos gleisados de colores grises con moteos
pardo-amarillentos y rojizos en sus horizontes superficiales, provocados por
la escasa oxigenacin que soportan durante la poca seca (lvarez, 1965;
Peuela et al., 2002).
El clima de la Cuenca del Orinoco hace de la regin un rea tropical

parcialmente ecuatorial. Por lo tanto, la cuenca presenta un clima tropical
17
caracterizado por la uniformidad de la temperatura a lo largo del ao, estas

temperaturas tienen una amplitud anual muy escasa (unos 3 o menos),
aunque su amplitud diaria es mucho mayor y ronda en torno a los 10C.
Estas variaciones se deben principalmente al rgimen de las lluvias, siendo
la temperatura ms alta en las regiones con menor precipitacin. La
humedad relativa media anual en la Orinoqua presenta valores que oscilan
entre 60 y 90%, a excepcin de Puerto Carreo, donde los valores varan
entre el 50 y el 80% (Correa et al., 2006; lvarez, 1965; Peuela et al., 2002).
Por otro lado, la Orinoqua colombiana ocupa una extensa rea del pas
representada por una gran cantidad de ecosistemas y especies de fauna y
flora. Sin embargo su nivel de conocimiento es an muy incipiente y limitado.
A nivel internacional se considera esta rea como una ecorregin estratgica,
al mismo tiempo que se seala a la cuenca del Orinoco como una de las
cinco ms importantes y de prioridad para su conservacin a nivel global
(Caro y Trujillo, 2004). Bajo este contexto, en el entendimiento de la
complejidad de la biodiversidad ecosistmica de la cuenca de la Orinoqua se
incluye el agua como fundamento en la interaccin y modelacin de los
ecosistemas (Caro y Trujillo, 2004; COLCIENCIAS, 1994). Sin duda el
principal valor ecolgico de esta regin est representado por la oferta
hdrica que est compuesta por cinco grandes cuencas: las de los ros
Arauca, Guaviare, Meta, Tomo y Vichada. Esta extensa red fluvial sumada a
las caractersticas geomorfolgicas ha modelado a lo largo de los aos un
complejo de ambientes acuticos en los que sobresalen las sabanas
inundadas, los morichales, las lagunas, los caos y los bosques inundados,
entre otros (Caro y Trujillo, 2004). Estos ambientes a su vez constituyen el
soporte para el mantenimiento de una diversidad importante de especies de
fauna y flora, y la consolidacin de centros urbanos desde tiempos
precolombinos (Caro y Trujillo, 2004).
18
Los ecosistemas de la Orinoqua colombiana son tan nicos y especficos

que ni siquiera tienen similitud con los de la Orinoqua venezolana, y sus
sabanas tampoco son comparables con las africanas, a pesar de estar
localizadas ambas en el trpico (lvarez, 1965; Peuela et al., 2002). Las
sabanas de la Orinoqua colombiana, propias de un trpico hmedo en
formacin,
presentan
procesos
geoqumicos
no
finalizados
y,
por
consiguiente, no tienen el mismo tipo de evidencias podolgicas que las

sabanas ms antiguas del mundo, consolidadas como tales (Corts et al.,
1973). Estas sabanas son de gran fragilidad y estn influenciadas
drsticamente por todos los componentes del ecosistema, en especial por los
biticos y por los regmenes hidrolgicos, incluidos los desbordes de los ros
y las inundaciones a que estn sometidas. La Orinoqua inundable, al norte
del ro Meta, es la planicie terciaria que corresponde a los departamentos de
Arauca y Casanare. En esta parte los ros se explayan en invierno y causan
inundaciones cclicas (Peuela et al., 2002).
Estos ecosistemas tienen un comportamiento muy dinmico en el tiempo,
circunstancia que entendieron y manejaron muy bien las culturas
prehispnicas y, que an conservan las culturas actuales asentadas en estas
reas (lvarez, 1965). En tiempo seco, gran parte de las sabanas
orinoquenses presentan una vegetacin compuesta bsicamente por rizomas
y por especies que resisten la quema y los incendios, inducidos o naturales;
en ellas las matas de monte, los morichales, los raudales y los bosques de
galera cumplen una funcin esencial para el acceso al agua por parte de la
fauna y la poblacin humana (Cortes et al., 1973). En tiempos secos la
importancia de los ojos de agua, de los caos y, en general, de todas las
estructuras boscosas protectoras del agua es crucial para la supervivencia de
ciertos vertebrados que se protegen o encuentran un oasis en estos
pequeos cuerpos de agua durante las largas sequas (lvarez, 1965;
Peuela et al., 2002). En el momento en que llega la lluvia a la Orinoqua la
19
sabana tiene una cara diferente: no dominan ni las plantas que resisten las
quemas ni las especies animales que encuentran refugios en los ojos de
agua (lvarez, 1965; Peuela et al., 2002). En los tiempos de lluvia hay una
sabana inundada con desbordes, en donde los aspectos limnolgicos y las
dinmicas de los recursos hidrobiolgicos predominan frente a cualquier otro
componente del ecosistema. En esta gran poca de inundacin el
fitoplancton, el zooplancton y el perifiton son muy importantes para la
nutricin de otras especies y comunidades que resisten la abundancia y el
exceso de aguas, sean estas de tipo faunstico o florstico (lvarez, 1965).
En el pas, incluyen dos mbitos (por tipo de ecosistema, por origen y

funcionamiento), siete sistemas (de acuerdo con factores hidrolgicos,
geomorfolgicos, qumicos o biolgicos), cinco subsistemas (con base en
patrones de circulacin del agua), ocho clases (por fisonoma del humedal) y
ms de quince subclases (en razn a estructura y composicin de
comunidades o caractersticas biofsicas). De acuerdo con esta tipologa en
la Orinoqua colombiana se tienen siete complejos de humedales
continentales: ros Arauca, Meta y Guaviare (llanuras aluviales inundables en
invierno y madreviejas), ros Casanare, Vichada y Tomo (planos inundables y
una laguna permanente) y, ro Inrida (Correa et al., 2006; lvarez, 1965,
Peuela et al., 2002).
La Orinoqua inundable consta de tres paisajes: llanura aluvial de desborde,

llanura elica y zonas pantanosas (COLCIENCIAS, 1994). Las llanuras
aluviales tienen la topografa de las llanuras costeras de los ros, tienen
forma de conos, llamados conos de deyeccin, lo que significa que el lecho
del ro podra desplazarse con bastante facilidad, inundando zonas alejadas
del lecho principal actual (Bedient y Huber, 1948). Dichas zonas constituyen
zonas interesantes para el desarrollo del riego, debido a la topografa
20
favorable como para desviar agua del ro hacia cualquier punto de su zona
aluvial. Se trata entonces de zonas vulnerables (Bedient y Huber, 1948). Los
ros estn generalmente encauzados, protegiendo as las zonas agrcolas
tanto como las zonas urbanas (Bedient y Huber, 1948; COLCIENCAS, 1994;
Comerma y Luque, 2000). En cuanto a la llanura eolica, como su nombre lo
indica es una planicie afectada fuertemente por procesos elicos que se
manifiestan por la presencia de mdanos longitudinales orientados y en
menor escala por zonas cubiertas por mantos de arena redistribuidos y
planos (Comerma y Luque, 2000). Las zonas pantanosas son zonas de tierra
que por lo menos algunas veces estn cubiertas de agua, por lo general poco
profunda. Las tierras pantanosas pueden ser naturales o artificiales,
permanentes o temporales, y el agua en ellas puede ser esttica o en
movimiento, dulce, salobre o salada (Peuela et al., 2002; Comerma y
Luque, 2000). Los minerales y substancias nutritivas que acarrean los flujos
regulares enriquecen las tierras y costas pantanosas como los mangles y los
prados de hierbas marinas, uno de los ecosistemas ms productivos del
planeta (Comerma y Luque, 2000).
Aunque las zonas pantanosas cubren slo un 3% de la superficie del planeta,

son vitales para nuestro ambiente. Actan como esponjas que acumulan y
absorben el exceso de agua, la filtran y limpian cuando va saliendo (Peuela
et al., 2002; Comerma y Luque, 2000).
El aprovechamiento comunitario y social de la sabana, introducido y creado
por las comunidades humanas que habitan la Orinoqua y por la
trashumancia ligada a esos cambios climticos son elementos de crucial
importancia para la sostenibilidad de los ecosistemas en su dinmica
temporal, con unas pocas de verano en las que las sequas pueden durar
hasta siete meses y otras de humedad, que inundan gran parte del territorio
(Peuela et al., 2002; Cortes et al., 1973). El avance de la propiedad privada
21
sobre las tierras de estas sabanas podra introducir algunos ingredientes que
dificultaran la sostenibilidad de un medio como este (Peuela et al., 2002;
Cortes et al., 1973).
2.2. Humedales y Bosques riparios
Por medio de la Ley 357 de 1997, aprobatoria de la Convencin Ramsar, se

introduce en la legislacin nacional el concepto y la definicin de humedales
como las extensiones de marismas, pantanos y turberas, o superficies
cubiertas de aguas, sean estas de rgimen natural o artificial, permanentes o
temporales, estancadas o corrientes, dulces, salobres o saladas, incluidas las
extensiones de agua marina cuya profundidad en marea baja no excede de
seis metros (Ponce de Len., 2004; Castellanos, 2001). Los humedales son
ecosistemas de gran valor natural y cultural, constituidos por un cuerpo de
agua permanente o estacional de escasa profundidad, una franja a su
alrededor que puede cubrirse por inundaciones peridicas (ronda hidrulica)
y una franja de terreno no inundable, llamada zona de manejo y preservacin
ambiental. Estas reas (ronda hidrulica y zona de manejo y preservacin
ambiental) deben tener un tamao acorde con las caractersticas
ecosistmicas particulares. Estos ecosistemas estn asociados a las cubetas
y planos de desborde de los ros, razn por la cual su biota, los flujos de
nutrientes, materia y energa estn adaptados a las fluctuaciones y
comportamientos de sus sistemas hdricos asociados (Castellanos, 2001;
Cronk y Fennessy, 2001).
La dinmica y la situacin ambiental de los humedales se definen en relacin

con la dinmica de los asentamientos humanos que los circundan, en el
marco de procesos histricos complejos de configuracin sociocultural,
econmica y poltica del territorio (Castellanos, 2001). Los humedales son los
ecosistemas ms productivos del mundo. Su caracterstica determinante es
22
la disposicin constante o temporal de agua a lo largo de todo el ao. Esta

situacin favorece el desarrollo exitoso de una amplia diversidad de flora,
fauna y microorganismos que interactan en complejas relaciones para
mantener un equilibrio ecolgico de alta fragilidad (Castellanos, 2001). En
Colombia, factores como rgimen climtico, complejidad orognica y
ubicacin biogeogrfica se han combinado de forma excepcional para
permitir que el recurso hdrico sea abundante y modele el paisaje tropical
formando ros, estuarios, pantanos, cinagas y lagunas, entre otros
(Castellanos, 2001; Ponce de Len, 2001).
A nivel de Colombia, de acuerdo al concepto de humedal, se puede decir que

el rea total de estos sistemas es de 20.252.500 ha., representadas por
lagos, pantanos y turberas, cinagas, llanuras y bosques inundados. En total
entre cinagas y otros cuerpos similares existen 5.622.750 ha., los cuales se
encuentran principalmente en los Departamentos de Bolvar y Magdalena.
Las lagunas representan cerca de 22.950 ha. y las sabanas inundables
cubren una superficie total aproximada de 9.255.475 ha., ubicadas en los
departamentos del Amazonas, Guaina y Guaviare. Los bosques inundables
representan aproximadamente 5.351.325 ha. y se localizan en la Orinoqua,
Amazona, Bajo Magdalena y en menor medida en la zona Pacfica.
(Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, 2004; Peuela et
al., 2002).
Cuando las condiciones ecolgicas de los ambientes acuticos no han
sufrido alteraciones drsticas e irreversibles se presenta en ellos una
compleja red trfica, producto de su desarrollo evolutivo a travs del tiempo y
el espacio. La base de tal red se apoya en la existencia de una composicin
florstica particular, situacin que resulta atractiva para diversos grupos de
fauna silvestre que aprovechan la oferta de refugio y concentracin constante
de alimento en la zona. Es muy probable que en cada uno de estos sistemas
23
se encuentre algn nivel de endemismo biolgico (organismos cuya

distribucin geogrfica es restringida) an sin descubrir, condicin que
aumentara significativamente la importancia de ecosistemas de humedales
(Castellanos, 2001; Cronk y Fennessy, 2001).
Al igual que en la regin Amaznica, en la Orinoqua colombiana el principal
tipo de humedal es el ribereo con sus vegas de inundacin. En ellos se
aprecia una compleja trama boscosa de galera y morichal, la cual en el
sector norte da paso a las selvas y sabanas inundables delimitadas por los
ros Arauca y Casanare. Su extensin cubre una superficie de 154.193 km2,
comprende sectores de los departamentos de Arauca, Casanare, Meta y
Vichada y est ubicada entre 5 y 2 latitud Norte y entre los 75 y los 67
longitud Oeste (Castellanos 2001, Cronk y Fennessy, 2001).
En cuanto a la clasificacin de los humedales existen dos grandes grupos, el
primer grupo son los humedales dulceacucolas y el segundo grupo son los
humedales salados o salobres (Cronk y Fennessy, 2001). A su vez los
dulceacucolas se dividen en naturales y artificiales. En los humedales
dulceacucolas naturales se encuentran, los fluviales o ribereos, los
lacustres y los palustres (Cronk y Fennessy, 2001). Los fluviales o ribereos
estn conformados por los ros, arroyos, cascadas y dems corrientes de
agua que existen de manera permanente, as como aquellos que se crean de
forma temporal o intermitente; los lacustres estn conformados por lagos y
lagunas de carcter temporal o permanente e incluso toda el rea de
influencia que ellos pueden alcanzar durante los perodos de inundaciones;
los palustres son ambientes comprendidos por manantiales, oasis, ojos de
agua, bosques pantanosos, cinagas, caos y pantanos permanentes o
estacionales. (Castellanos, 2001; Cronk y Fennessy, 2001). Los humedales
dulceacucolas artificiales son todo tipo de obra construida por el hombre,
cuyo fin sea almacenar o controlar el agua, entre estos estn los embalses,
represas y charcas. Dentro de esta categora tambin se han considerado las
24
tierras arables que se afectan por las inundaciones (Castellanos, 2001; Cronk
y Fennessy, 2001).
Por otro lado, los bosques riparios estn ubicados en el plano de inundacin
del ro, tanto en las partes bien drenadas como en las mal drenadas y
algunas transiciones entre estos (Urrego, 1994). Tambin son llamados
bosques inundados, los cuales son zonas boscosas sometidas a regmenes
de inundacin de ros y lagunas, con especies adaptadas a soportar
condiciones de agua por varios meses. Estos bosques, tambin llamados de
galera o de caada, estn ubicados en zonas aledaas a los cursos de
agua, desempean un papel importante en la preservacin del recurso
hdrico y estabilizacin de los cauces, como corredores de dispersin de la
biota y como albergues para la fauna en pocas secas (Ministerio de
Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, 2004). El rea calculada con este
tipo de cobertura es de 5.351.325 ha., equivalentes a 3,4% del rea del pas.
Su ubicacin los convierte en puntos vulnerables por su gran accesibilidad.
Entre los bosques representativos figuran los ubicados en el ro Caquet, la
cuenca baja del ro Meta, los ros Amazonas, Guaviare, Putumayo, Inrida, la
cuenca del ro Tomo-Tuparro, Apaporis, Vaups, Bita, baja Guajira y ro Pur
(Caro y Trujillo, 2004; Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo
Territorial, 2004).
Los bosques inundables abarcan extensas reas que son cubiertas por el
desborde de ros y quebradas de aguas blancas y negras, permitiendo de
esta forma intercambios entre el ambiente acutico y el terrestre. Una gran
cantidad de frutos y semillas producidas por estos bosques ribereos son
fuente de alimento importante para la fauna acutica (Naranjo et al., 1999;
Urrego, 1994). Durante los perodos de alto nivel de las aguas, los procesos
de descomposicin de la materia orgnica que queda sumergida permite la
liberacin de nutrientes que posteriormente son retenidos en el plano
inundable al descender el nivel de los ros (Urrego, 1994).
25
Por otra parte, los ros de aguas blancas estn cargados de gran cantidad de
materiales en suspensin y nutrientes que son aportados a la planicie aluvial
en pocas de desborde, enriqueciendo de esta forma los suelos en los que
se desarrollan los bosques afectados por la inundacin (Naranjo et al., 1999).
A causa del cambio del lmite tierra-agua causado por la fuerte fluctuacin en
el nivel de los ros, los ecosistemas inundables son altamente dinmicos y se
consideran como un intermedio entre sistemas cerrados y abiertos, que
reciben nutrientes del ro, transformndolos a travs de ciclos internos en
material orgnico y transfiriendo parte de ellos de nuevo al ro (Naranjo et al.,
1999; Urrego, 1994).
Las principales caractersticas fsicas de los bosques inundables que han
sido tenidas en cuenta en la mayora de estudios para su descripcin y
clasificacin son la frecuencia y duracin de la inundacin, el tipo de aguas
que los inunda (blancas, negras y mezcladas), pH, conductividad elctrica y
la cantidad de nutrientes y materia orgnica que contienen (Urrego, 1994).
Los bosques sujetos a inundacin ya sea por efecto de la elevacin en los
niveles del ro que alcanzan a cubrirlos por algunas semanas o meses, o por
malas condiciones de drenaje o por el efecto combinado de ambos, pueden
presentar importantes variaciones en su estructura tanto horizontal como
vertical (Urrego, 1994). Si a lo anterior se suma la naturaleza variada del tipo
de aguas que pueden inundarlos (blancas, negras y mezcladas) junto con las
diferencias fisiogrficas que se presentan, es de esperarse tambin una gran
gama de grupos estructurales (Urrego, 1994).
En estos bosques dominan especies como Campsiandra implexicaulis
Stergios, Simira rubescens Bremeck. Ex Steyerm., Symmeria paniculata
Benth. y Zygia cataractae L. Rico y en menor proporcin, Jacaranda spp. En
zonas de transicin entre el agua y el suelo, domina particularmente
Paspalum repens P.J. (Naranjo et al., 1999; Urrego, 1994).
26
En cuanto a los estudios realizados en este ecosistema, en la revisin

realizada no se encontr ningn antecedente donde se trabaje con el ciclo
del nitrgeno evidenciando la actividad de las bacterias desnitrificantes en los
bosques riparios. Sin embargo, conociendo que estos bosques se
caracterizan por retener parte del nitrgeno transportado por la escorrenta,
por ser excepcionalmente frtiles, y por la fluidez del agua a travs de una
zona riparia que facilita el reciclamiento de los nutrientes, un estudio en
Mxico plantea la importancia de describir las caractersticas de la estructura
y dinmica de las zonas ribereas, as como su papel en el funcionamiento y
equilibrio de las cuencas hidrolgicas. (Granados et al., 2006).
Por otra parte existen los morichales como formacin vegetal en la
Orinoqua. Estos son un conjunto de individuos de la palma moriche (Mauritia
flexuosa), la cual es su elemento florstico ms llamativo y determinante
teniendo en cuenta su localizacin geogrfica, sus condiciones ambientales,
composicin florstica y vegetacin (Ministerio de Ambiente, Vivienda y
Desarrollo Territorial, 2004). Tiene una amplsima distribucin geogrfica en
toda la Amrica Tropical, desde el pie de monte andino de Per y Colombia
hasta el Ocano Atlntico en Brasil, Venezuela y Trinidad (Aristeguieta,
1968).
Crecen en mrgenes de cuerpos de agua y en sectores inundables o

encharcados (Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial 2004,
Naranjo et al., 1999). En los terrenos plano-cncavos de la Orinoqua, se
acumulan las aguas lluvias, en torno a las cuales se forman apretados
cinturones de vegetacin llamados esteros y morichales (Bedient y Huber,
1948). Los morichales se instalan a lo largo de pequeos arroyos en
depresiones de la regin arenosa del llano. Estn formados claramente por
dos tipos principales de vegetacin: el primero es la sabana hmeda que lo
bordea, constituida por numerosas especies herbceas y arbustivas y con
27
una composicin florstica muy distinta del resto de las sabanas (Aristeguieta,
1968). El segundo tipo de vegetacin presente en el morichal es la
vegetacin alta, situada principalmente a lo largo del curso de agua. Esta
vegetacin est dominada en tamao y abundancia por la palma de moriche
(Aristeguieta, 1968). A medida que el curso de agua se hace ms profundo,
aparecen otros tipos de rboles y el predominio de la palmera se hace menos
notable, hasta confundirse y finalizar, frecuentemente en una selva de galera
(Aristeguieta, 1968).
El suelo del morichal es cido y rico en materia orgnica; es limoso,

pantanoso y anegadizo. Se puede decir que los moriches crecen casi
exclusivamente en lugares permanentemente anegados (Zea, 1997;
Aristeguieta, 1968). Las aguas del morichal son limpias, pues llegan no por
escorrentas, sino por infiltracin que se produce en las sabanas arenosas
adyacentes al morichal. El color del agua es el del t, causado por la
suspensin en el agua de sustancias hmicas. Las corrientes de agua son
tranquilas y limpias, filtradas en los arenales de los suelos de las sabanas
(Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial, 2004). A medida
que se desarrolla la corriente de agua del morichal, se convierte en un ro
cada vez ms anchuroso y el bosque ribereo se enriquece en variedad con
otras especies de rboles como el zarcillo, el guamo, el carricillo y muchas
otras especies (Zea, 1997; Daz granados, 2005; Rojas et al., 2001).
Son aparentemente homogneos y se caracterizan por tener una altura de 25
m y abundantes arbustos en el sotobosque. La corona est conformada por
11 a 14 hojas con raquis de 2,5 m de longitud. Racimos con ms de mil
frutos, cada uno de 5 a 7 cm de largo y 4, 5 a 5 cm de dimetro, color rojo
obscuro o vinotinto, con mesocarpio carnoso anaranjado o amarillo y semilla
color castao (Zea, 1997; Rojas et al., 2001).
28
Por lo mencionado anteriormente se denota la importancia que tienen dichos

ecosistemas en la regin de la Orinoqua colombiana y aunque a nivel
mundial se encuentren diferentes reportes acerca de la palma (Mauritia
flexuosa L.f), no hay antecedentes donde se reporten estudios sobre
bacterias edficas y mucho menos de las desnitrificantes existentes en estos
suelos. Al nivel mundial se han encontrado reportes en Brasil, Venezuela y
Colombia considerndola como la planta promisoria que puede mejorar la
calidad de vida de hombres y mujeres que habitan estas regiones (Castillo et
al., 2006).
En Per se han realizado investigaciones acerca de la diversidad forestal en

dicha palma; asimismo se han ejecutado estudios encaminados a la planta y
su cultivo, a las perspectivas de mejoramiento de sta, entre las que se
destacan
diversidad
gentica,
disponibilidad
de
recursos
genticos,
prioridades de investigacin y utilizacin y comercializacin de la misma

(Castillo et al., 2006; Barriga, 2004; Kahn y Meja, 1988), asimismo, en
Iquitos Per, se ha debatido mucho acerca de la comercializacin de frutos
de la palma del moriche (Mauritia flexuosa), en donde llama la atencin la
ubicacin de once mercados en la ciudad de Per donde la masa del fruto es
llevada al mercado por 21 y 30 vendedoras mujeres mayores de 40 aos que
tienen un promedio de cuatro hijos cuyas parejas por lo general no trabajan,
las comercializadoras de masa del fruto se dedican a estas actividades
desde hace veinte aos en promedio. Estas vendedoras ofrecen sus
productos durante todo el ao, lo que representa un consumo mensual de
3.720 sacos, cantidad para la que deben cortar aproximadamente 1,08
palmeras. De un solo saco de aguaje se obtienen en promedio 22 bolsas de
masa y 16 bandejas pequeas del fruto (Ruiz, 1993). En Colombia no existen
reportes acerca de estudios realizados respecto a la utilizacin de los frutos
de la palma.
29
De la misma manera, en Venezuela se realiz un estudio sobre los patrones

de cada de frutos en la palma Mauritia flexuosa en la regin suroriental del
Estado Gurico por un perodo de dos aos, encontrndose que la fenofase
de maduracin y cada de frutos coincide con los mximos de precipitacin y
ocurren en un lapso de tiempo corto (Ponce, 1998). De la misma manera Zea
(1997) reporta para Colombia que la fenologa foliar de la palma es constante
durante todo el ao, y que esto es atribuido a que M. flexuosa se adapta a
suelos saturados de agua, pudiendo eludir el estrs fisiolgico de falta de
agua que enfrentan otras plantas en el verano que las induce a alterar su
patrn de produccin de hojas. En cuanto a la fenologa reproductiva, esta
parece variar de acuerdo a la regin geogrfica.
En la Amazona colombiana se menciona que la floracin est determinada
por factores macroclimticos que afectan de manera equivalente a todas las
partes de la regin. Aunque no hay un consenso geogrfico en cuanto a las
fechas de floracin y fructificacin, varios estudios han reportado que ocurren
de manera sincrnica en periodos definidos del ao, tambin en que su
frecuencia es como mnimo anual y quiz en algunos casos bianuales (Zea,
1997).
Aparentemente el moriche no tiene enemigos naturales en su fase adulta,
pero una vez que ocurre la germinacin, las plntulas experimentan una alta
mortalidad causada por depredacin, accin de los herbvoros, pisoteo, cada
de material vegetal desde el dosel e inundaciones. Sin embargo Ponce
(1998) determin que la mortalidad en plntulas de moriche est asociada a
determinadas caractersticas del ambiente y los resultados muestran que las
muertes ms frecuentes son ocasionadas por depredacin, intensidad de
herbivora y la muerte accidental generada por el pisoteo de la fauna y cada
de hojas desde el dosel.
30
2.3. Ciclo del nitrgeno

El nitrgeno (N2) es un elemento indispensable para la vida ya que forma
parte de molculas tan importantes como las protenas y los cidos nucleicos
(Atlas y Bartha, 2002; Madigan et al., 2001). El ciclo del N se inicia con la
reduccin del nitrgeno atmosfrico (N ) a amonio (NH +), proceso al que se
2
denomina fijacin biolgica de N (Atlas y Bartha, 2002). Posteriormente, el

2
amonio se convierte en nitrato (NO -) mediante la nitrificacin y, el nitrato

3
puede transformarse de nuevo en amonio a travs de la amonificacin. El

amonio y el nitrato son asimilables por las plantas, que a su vez sirven para
la nutricin de animales. Finalmente, el nitrato se reduce a N mediante la
2
desnitrificacin, lo que completa el ciclo del N en la biosfera (Hill y Cardaci,

2004).
Las bacterias desnitrificantes son de gran importancia ya que evitan la
acumulacin de NO3- en el suelo y por ende la contaminacin del medio
ambiente. En los suelos, el movimiento de los nitratos es dependiente de la
cantidad de agua que se est infiltrando en el suelo y el contenido de
humedad de este depende de la precipitacin, porosidad y permeabilidad.
Durante los perodos lluviosos, incrementa el percolado de nitratos ya que los
niveles de humedad del suelo son altos y la tasa de evapotranspiracin es
reducida. As tambin, los nitratos pueden ser reducidos a nitrgeno gaseoso
por microorganismos mediante la desnitrificacin (Pacheco et al., 2002,
Coyne, 2000; Killman, 1994).
El proceso de desnitrificacin ocurre a partir de la formacin de compuestos
intermediarios como nitrito (NO2-), xido ntrico (NO) y xido nitroso (N2O). La
desnitrificacin se lleva a cabo en condiciones de baja tensin de oxgeno y
resulta en la produccin de energa (ATP), lo que permite a las clulas crecer
en condiciones de anoxia (Hill y Cardaci, 2004; Stevenson, 1999).
31
La reduccin secuencial del nitrato se lleva a cabo mediante la actuacin

consecutiva de las enzimas nitrato reductasa (Nar), nitrito reductasa (Nir),
xido
ntrico
reductasa
(Nor)
xido
nitroso
reductasa
(Nos),
respectivamente (Groffman y Crawford, 2003; Romero, 2003).

Las enzimas que transforman NO2 a NO son de dos tipos citocromo o una
protena con cobre, pero las enzimas que reducen NO y N2O son muy lbiles
y poco conocidas. Entre las bacterias que slo hacen la primera parte del
proceso
son
conocidas
Corynebacterium
nephridii,
Pseudomonas
aureofaciens y P. chlorophis (Romero, 2003). Entre muchas bacterias que

pueden llevar a cabo la desnitrificacin se encuentran los siguientes gneros:
Alcaligenes, la cual se encuentra comnmente en el suelo; Agrobacterium,
que es una de las especies patgenas de plantas; Azospirillum, que fija N en
forma asociada especialmente con pastos; Bacillus, donde alguna de sus
especies termfilas son desnitrificantes; Halobacterium, que para su
crecimiento requiere alta concentracin de sales; Rhizobium, fijadora de N en
simbiosis; Propionibacterium, fermentadora capaz de desnitrificar, entre otras
(Orozco, 1999; Hill y Cardaci, 2004).
Una gran cantidad de organismos pueden usar el nitrato producido por el
proceso anteriormente descrito como fuente de nitrgeno. Muchas bacterias
pueden usarlo tambin como aceptor de electrones en la respiracin
anaerobia de la materia orgnica, en un proceso de reduccin del nitrgeno
que finaliza con la liberacin a la atmsfera de N2 (o menos comnmente de
NO o N2O), proceso conocido como desnitrificacin (Atlas y Bartha, 2002;
Stevenson, 1999).
La enzima que inicia estas reacciones es la nitrato reductasa. Una enzima de
membrana que incluye Mo en su estructura y que se ve inhibida en presencia
de de O2 (Atlas y Bartha, 2002; Madigan et al., 2001). Esta enzima reduce el
nitrato a nitrito. Luego el nitrito contina un proceso de reduccin que lo
32
transforma en xido ntrico (nitrito reductasa), oxido nitroso (xido ntrico

reductasa) y finalmente nitrgeno gaseoso (xido nitroso reductasa), NO3-;
NO2-; NO; N2O; N2 (Romero, 2003).
Otras bacterias auttrofas usan el mismo nitrato como fuente de energa,
usando la acumulada en los enlaces N-O, pero sin aprovechar el oxgeno
que se libera (Atlas y Bartha, 2002; Madigan et al., 2001). La reaccin en
este caso es:
2NO3- + 5H2
N2 + 4H2O + 2OH-
As, con el retorno al N gaseoso se cierra el ciclo del nitrgeno (Groffman y

Crawford, 2003). Las verdaderas bacterias desnitrificantes realizan todo este
proceso;
sin
embargo
muchas
bacterias
anaerobias
facultativas
(Enterobacterias sobre todo) poseen nicamente la enzima nitrato reductasa

y slo son capaces de realizar la siguiente reaccin (Atlas y Bartha, 2002,
Madigan et al., 2001, Romero, 2003).
NO3- + 2H+
NO2- + H2O
A partir de aqu usan el nitrito como aceptor de electrones y al reducirse y

eliminar H2 del medio citoplasmtico favorece una reaccin fermentativa
propia de estas bacterias que transforman acetilfosfato en acetato (o
butirilfosfato en butirato), captando el Pi que se libera una molcula de ADP
para transformarse en ATP (Atlas y Bartha, 2002; Madigan et al., 2001;
Groffman y Crawford, 2003; Capone et al., 2006).
El proceso de desnitrificacin es mediado por una serie de bacterias de suelo

(del gnero Bacillus sp y Pseudomonas sp., generalmente). Las bacterias
toman las molculas de nitratos como aceptores de electrones para su propia
respiracin reemplazando al oxgeno. Algunas de estas bacterias son
33
anaerbias obligadas, es decir, proliferan slo en ausencia de oxgeno,

mientras que, la mayora son facultativas, es decir, respiran oxgeno y
cuando este se acaba toman compuestos oxidados que sirven como
aceptores de electrones, por ejemplo los nitratos y los reducen (Atlas y
Bartha, 2002; Hill y Cardaci, 2004; Capone et al., 2006). Una vez que estos
desaparecen o se consumen totalmente, las bacterias buscarn otros
compuestos como los xidos de hierro y de manganeso que los suceden en
la serie de potencial oxido-reduccin, para continuar el proceso. Por esta
razn, situaciones de anegamiento generan condiciones de dficit de
oxgeno, promoviendo entre otros procesos, la actividad bacteriana de
desnitrificacin (Burbano, 1982). La reaccin qumica involucrada es (Myrold,
2005; Goffman y Crawford, 2004; Capone et al., 2006):
NO3-
NO2-
NO
N2O (gas)
N2
Desde el punto de vista ambiental es deseable que se libere N2 ya que se

continuara el ciclo del N en el ecosistema. Sin embargo, muchas veces se
liberan xidos de N, que promueven el deterioro ambiental (Hill y Cardaci,
2004; Goffman y Crawford, 2004).
De las principales fuentes de prdida de N en los ecosistemas agrcolas y

contrario a la creencia que slo se presenta en condiciones de inundacin, la
desnitrificacin se puede presentar tambin en buenas condiciones de
aireacin, tanto en los microporos como en la rizsfera o con altas
aplicaciones superficiales de materia orgnica de fcil descomposicin
(Orozco, 1999).
La desnitrificacin puede ser de origen qumico, derivada del proceso de

oxidacin del N amoniacal o nitrificacin, cuando por alguna razn el pH del
suelo se vuelve alcalino por un plaguicida, enmienda u otra causa que
34
favorezca la acumulacin de N-N02- en el suelo, particularmente en presencia

de materia orgnica se produce el tipo de desnitrificacin qumica pasando el
N-NO2- y/o N-NO3- a N2, N2O y NO (Orozco, 1999; Rodrguez, 2006).
Este tipo de desnitrificacin es muy importante porque explica una forma de
prdida de N fertilizante en el proceso de nitrificacin (Orozco, 1999):
NH4+
NO2NO
NO3N2O gaseoso
N2 gaseoso
Cuando hay condiciones de aireacin adecuada ocurre la siguiente reaccin:

10<H> + 2H+ + 2NO3-
N2 + 6H2O + energia
Esta ltima es la va de respiracin de NO3- que es llevada a cabo por

bacterias especialmente en condiciones de pobre o nula aireacin (Orozco,
1999). Las bacterias que llevan a cabo el proceso son anaerobias facultativas
y no necesariamente tienen la capacidad de producir las cuatro enzimas
(Orozco, 1999; Walter, 1975).
El N desnitrificado representa una prdida econmica ya que se escapan

elementos esenciales que podran ser transformados en rendimiento,
tambin determina un dao ambiental, que no suele ser cuantificado (Atlas
y Bartha, 2002; Hill y Cardaci, 2004). Cuando el proceso de desnitrificacin
es incompleto (lo ms frecuente), es decir se liberan xidos de nitrgeno
(N2O), se provoca un dao ambiental ya que estos xidos poseen entre 200
y 300 veces ms capacidad de retener la radiacin trmica que el CO2 y se
lo considera un agente desestabilizante de la capa de ozono (Atlas y
Bartha, 2002; Hill y Cardaci, 2004). La desnitrificacin se puede considerar
una desventaja en muchos ambientes pobres en nitrgeno. Sin embargo,
35
en situaciones de alta carga de nitrgeno, la activacin de la desnitrificacin

podra ser un proceso de limpieza beneficioso (Marn et al., 2006).
Las bacterias pueden reducir NO3 y NO2- para dos fines: a NH3+ como
reduccin asimilatoria o como terminal de electrones en reemplazo del 02 en
la respiracin (Orozco, 1999). La primera es llevada a cabo por organismos
fotosintticos, inclusive la vegetacin y tambin por algunos microorganismos
como Aspergillus, Rhizobium, Neurospora, Enterobacter (Orozco, 1999; Hill y
Cardaci, 2004).
La reduccin desasimilatoria es otro tipo de respiracin en anaerobiosis

representada de la forma siguiente:
C6H12O6
10<H> 2H+ 2NO3-
<H> + CO2 + cidos y alcohol

N2O- + N2 + 6H2O + energia
Una gran cantidad de bacterias pueden hacer el proceso slo hasta NO2
llamadas nitrato reductoras, pero no son capaces de producir la nitrito
reduccin por ejemplo Azospirillum sp., bacteria fijadora de N2. Todas son
nitrato reductoras pero las hay Nir+ y Nir-, es decir nitrito reductoras positivas
o negativas y slo a estas ltimas se les dice que son desnitrificantes. Las Nir
negativas no son capaces de transformar NO2- a N2O pero s N2O a N2
La reduccin del N2O- a N2 es inhibida completamente por sulfuros SH- y
acetileno C2H2 y justamente los mtodos ms usados para su determinacin
hacen uso de esta propiedad. La mayora de bacterias desnitrificantes son
anaerobias facultativas, pueden cambiar el O2 por NO-3 y NO-2 como aceptor
de electrones y otras son facultativas obligadas como Propionibacterium y
36
otras como Azospirillum, arriba mencionadas y Rhizobium pueden hacer los

dos procesos contrarios, fijar el N del aire y/o desnitrificar el del suelo y
volverlo a la atmsfera. Cuando hay exceso de este como NO-3 se inhibe la
nitrogenasa. Otros como Rodopseudomonas pueden hacer tres procesos de
reduccin del C (fotosntesis), del N (fijacin) y tambin desnitrificacin
Las anteriores bacterias son heterotrficas, usan la materia orgnica

mediante su oxidacin para producir los electrones pero tambin las hay
quimiolitotrficas que usan el S, Fe+2 y H2 como fuente de energa. Tal es el
caso de Thiobacillus desnitrificans que es un oxidador de azufre (thio) pero
en condiciones de reduccin es desnitrificante. La reaccin es (Orozco, 1999;
Hill y Cardaci, 2004):
5S + 6KNO3 + 2H2O
3N2 + K2SO4 + 4KHSO4
Los factores que inciden directamente en las cantidades de N perdidas por

este proceso son la disponibilidad de nitratos, ya que a mayor contenido de
nitratos en el suelo, la magnitud de la prdida de N aumenta (Hill y Cardaci,
2004; Goffman y Crawford, 2004; Orozco, 1999). El contenido de oxgeno del
suelo, pues los poros del suelo pueden tener aire cuando este est seco, o
agua, cuando est saturado (Hill y Cardaci, 2004; Goffman y Crawford,
2004). Es el principal factor influyente ya que regula las condiciones de
xido-reduccin en el suelo. Con elevados contenidos hdricos mayores al
70-80% del agua til durante perodos prolongados son predisponentes a la
ocurrencia de desnitrificacin (Hill y Cardaci, 2004; Goffman y Crawford,
2004). El contenido de materia orgnica tambin, ya que est relacionado
con la abundancia de poblacin bacteriana del suelo y, la provisin de
energa a las bacterias (compuestos de carbono) para su supervivencia. La
mayor fertilidad por contenido de materia orgnica es una condicin
37
predisponente (Campbell et al., 2005). Asimismo, una vez que por lixiviacin
los nitratos se desplazan a capas ms profundas del suelo con menor
contenido de materia orgnica el proceso se hace ms lento por ausencia de
bacterias y de energa (Atlas y Bartha, 2002; Madigan et al., 2001). Si la
desnitrificacin es un proceso heterotrfico, la participacin antrpica por lo
tanto es influenciada por la aplicacin de fuentes de materia orgnica de fcil
acceso microbiano. La temperatura es ptima cuando es 25C y es limitante
por debajo de 5C y por encima de 37C. Esta afecta especialmente la
solubilidad y la difusin del O2 en agua. En cuanto a la textura del suelo, en
los suelos arcillosos se dan mayores prdidas por desnitrificacin, ya que en
estos tanto la actividad biolgica como la fertilidad qumica del suelo suelen
ser muy elevadas (Campbell et al., 2005; Walter, 1975). En general, suelos
ms arcillosos poseen mayores niveles de materia orgnica y por ende
mayor actividad microbiana (ms sustratos carbonados). El nivel de pH en el
suelo tambin es de gran importancia, pues una reaccin neutra o
ligeramente alcalina promueve la desnitrificacin por el efecto sobre la
actividad biolgica bacteriana del suelo (Rodrguez y Toro, 2006; Romero,
2003).
Siempre se ha sostenido que el rango de pH ptimo es de 6-8, pero slo es

limitada a pH inferior a 5. El grado de acidez afecta la relacin N2O, N2 de
los gases. En condiciones alcalinas se puede acumular el NO2- limitando la
desnitrificacin, pero por debajo de pH 5 se favorece la produccin de N2O
en vez de N2; es decir que de todos modos existe una desnitrificacin
aunque la reduccin no sea completa (Orozco, 1999). En el contenido de
humedad gobierna la difusin de O2, mientras los contenidos limiten esta
difusin habr una desnitrificacin potencial, pero el O2 es represivo de las
oxidoreductasas en especial a la Nir (reduccin de nitratos). El oxgeno se
convierte en limitante por encima de 0,5 ppm que es relativamente poco,
38
pues el agua a temperatura normal expuesta al aire puede contener entre 6

y 8 ppm (Orozco, 1999).
Existen algunas tcnicas para el aislamiento y diferenciacin de bacterias

desnitrificantes. Aunque no hay una metodologa totalmente aceptada para la
medicin de la desnitrificacin, se han logrado buenas aproximaciones
mediante la medicin del N2O liberado a una atmsfera libre de N2 e
inhibiendo la transformacin de N2O a N2. El problema es que ste puede
provenir de desnitrificacin pero tambin del proceso de nitrificacin (Orozco,
1999). El mtodo ms usado es el del bloqueo de la enzima que reduce N2O
mediante acetileno (C2H2); el N2O producido se mide por cromatografa de
gases. Tambin se pueden usar medios de cultivo especficos tales como
amonio, nitrito y nitrato, incubarlos a 37 C (Marn et al., 2006). Luego del
perodo de incubacin las transformaciones de las formas de nitrgeno se
deben verificar empleando el reactivo de Nessler (amonio), reactivo de
Griess y polvo de zinc y en algunos casos difenilamina (Guian y Nageswara,
1995).
Para la determinacin de la incidencia microbiana, se pueden hacer

aislamientos y cuantificacin de microbiota de la rizsfera. Se usa la tcnica
del Nmero Ms Probable (N.M.P) para llevar a cabo la cuantificacin de las
bacterias amonificantes, nitrificantes y desnitrificantes. Para esto se usan
medios selectivos de crecimiento para cada caso, una serie de diez
diluciones en las cuales se inoculan cinco tubos por cada dilucin. Despus
de haberlos inoculado con la muestra los cultivos deben ser incubados a
28C durante 7, 15 y 21 das para bacterias amonifi cantes, desnitrificantes y
nitrificantes, respectivamente (Guian y Nageswara, 1995; Paul y Clark,
1996).
39
La presencia de estas bacterias se identifica mediante el uso de pruebas

diagnsticas especficas (Miller y Keeney, 1982). Utilizando distintos mtodos
entre los cuales se conocen medios slidos, en placa o el mtodo del nmero
ms probable (N.M.P.). Sin embargo la tcnica ms comn es la de N.M.P.
Esta se aplica para determinar la densidad poblacional de un nmero
determinado de microorganismos de forma indirecta (Rodrguez y Toro,
2006). Es necesario tomar muestras de rizsfera y del suelo sin races.
Posteriormente estas muestras deben ser llevadas al laboratorio en donde se
realizan anlisis fisicoqumicos del suelo, los cuales son importantes debido a
que el suelo es un sistema dinmico en donde ocurren procesos fsicos,
qumicos y biolgicos que afectan su productividad. Estas pruebas se hacen
para determinar el tipo de suelo y de esta manera clasificar a los
constituyentes de ste segn su tamao de partcula (grava, arena, limo y
arcilla) y as establecer la abundancia de bacterias presentes en el suelo
(Guian y Nageswara, 1995).
El nitrgeno es el elemento ms abundante en los seres vivos, en los cuales
forma parte de compuestos de gran importancia ecolgica, Los contenidos de
nitrgeno en suelos son muy variables, dependiendo de la especie vegetal y
de las condiciones ecolgicas. Sin embargo son escasos los estudios
realizados en Colombia con relacin a las bacterias desnitrificantes y el
nitrgeno en suelos de morichales y bosques riparios. Por lo tanto la
aplicabilidad de estas bacterias en los suelos de estos ecosistemas es
desconocida. Aun as cabe mencionar la investigacin realizada por
Aristeguieta (1968), acerca de la transferencia de nitrgeno en todos los
compartimentos de Paspalum repens P. J. Bergius, en un ecosistema
boscoso en Puerto Carreo (Vichada, Colombia); la cual en el periodo de
expansin foliar, reporta que la absorcin de nitrgeno en esta planta,
predomina principalmente durante la segunda mitad del invierno y la
primavera, mientras que en verano la absorcin de nitrgeno es nula, por
40
ende los resultados sugieren que hay diferencia en la importancia de la

absorcin/retranslocacin en las especies.
41
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACION
3.1 FORMULACION DEL PROBLEMA

Los bosques riparios son refugio de numerosas especies de fauna y
reguladores del ciclo estacional de lluvia, que han sido deteriorados por
representar una fuente de recursos naturales de fcil acceso. Adems este
tipo de vegetacin ha sido objeto de transformacin por la frecuencia de
quemas peridicas, caza indiscriminada, sobrepesca, entre otros. Asimismo
en los morichales, los indgenas han sacado provecho de esta especie casi
en su totalidad, empleando las hojas para construir sus casas o como
materia prima en la elaboracin de utensilios, y los frutos como alimento y
bebida. Sin embargo el mal aprovechamiento de estos recursos ha
conllevado al deterioro de estos ecosistemas an teniendo conocimiento de
los grandes beneficios que proporcionan, puesto que estos son de gran
importancia hdrica, fuente de recursos y energa, de retencin de
sedimentos, proteccin, transporte, recreacin y turismo, entre otros.
Un primer paso para poder disear una estrategia de recuperacin de
morichales
y bosques
riparios, es
establecer la dinmica de los
microorganismos que participan en el ciclo del nitrgeno, puesto que estos

juegan un papel importante, iniciando con la reduccin del nitrgeno
atmosfrico (N ) a amonio (NH +). Posteriormente, este amonio se convierte
2
en nitrato (NO ) el cual puede transformarse de nuevo en amonio a travs de

3
la amonificacin; estos dos compuestos son asimilables por las plantas, que
a su vez sirven para la nutricin de animales; por ltimo el nitrato se reduce a
N mediante la desnitrificacin, completando as el ciclo del nitrgeno.
2
42
3.2 PREGUNTAS DE INVESTIGACIN
Existen diferencias entre los suelos de morichales y bosque riparios, en

cuanto a la densidad de bacterias desnitrificantes?
Existen diferencias en parmetros fisicoqumicos como el pH, humedad,

textura,
densidad
de
cobertura
vegetal,
temperatura
del
suelo,
temperatura ambiente y distribucin de agregados del suelo entre las dos

coberturas vegetales?
Existe relacin entre la densidad de bacterias desnitrificantes con los

parmetros fisicoqumicos medidos en el suelo, que determinen mayor
densidad de bacterias en alguna de las coberturas vegetales evaluadas?
43
3.3 JUSTIFICACION
Uno de los grupos importantes relacionados con procesos edficos como el
ciclaje de nutrientes son las bacterias desnitrificantes, que participan en el
reciclamiento y transformacin del nitrgeno. La mayora de los estudios
sobre los grupos de bacterias desnitrificantes se han realizado en varios tipos
de ecosistemas, pero no en ecosistemas de la Orinoqua, por lo que se
desconocen aspectos biolgicos y de dinmica poblacional de estos grupos.
Probablemente esto se debe a que por muchos aos se ha pensado que los
procesos de desnitrificacin en suelos juegan un papel insignificante en este
tipo de ecosistemas. Por esto es primordial el estudio de las bacterias
desnitrificantes, puesto que estas basan su actividad en el ciclaje del
nitrgeno en diferentes ambientes, llevndolo de la forma ms oxidada
nitratos (NO3-) a la ms reducida nitrgeno (N2), pues la acumulacin de NO3en el suelo suele ser txica. La importancia de estudiar estas bacterias en
bosques riparios y morichales se debe al uso indiscriminado de estos
ecosistemas por parte de la comunidad y el desconocimiento de la dinmica
de este grupo funcional microbiano para el entendimiento de aspectos
ecolgicos que luego puedan servir de base para aspectos ms aplicados
como la restauracin de estas coberturas vegetales. Por tanto es necesario
conocer la dinmica de estas bacterias desnitrificantes en los ecosistemas
mencionados. Asimismo en estas zonas se realizan quemas en la sabana,
que son incontrolables en muchas ocasiones y pueden afectar la dinmica
natural de estas bacterias. Por esto se requiere tener aproximaciones en
relacin con la participacin de los microorganismos en el ciclo del nitrgeno
en estos suelos, que es de suma importancia puesto que cuando este
compuesto se presenta en buena cantidad se asegura parcialmente un
ptimo estado de los suelos, un buen crecimiento de las plantas, entre otras
funciones. Es por esto que las bacterias que participan en este ciclo, entre
ellas las desnitrificantes, son de gran importancia en los procesos biolgicos
44
y demandan una serie de estudios que nos permitirn entender su

funcionamiento y aplicacin en los diferentes sistemas.
Los humedales (bosques riparios y morichales) juegan un papel fundamental
en el mantenimiento de la diversidad y la funcionalidad de los ecosistemas de
la regin. Por esto es importante realizar una primera aproximacin de tipo
comparativo teniendo en cuenta aspectos medibles en trminos de densidad
de bacterias desnitrificantes y su relacin con parmetros fisicoqumicos del
suelo, para comprender su funcionamiento y
planes para su manejo.
45
proponer
posteriormente
4. OBJETIVOS
4.1 Objetivo general
Comparar la densidad de bacterias desnitrificantes entre bosque ripario y

morichal de la Reserva Natural Bojonawi en poca de lluvias.
4.2 Objetivos especficos
Cuantificar la densidad relativa de bacterias desnitrificantes en suelo

de bosques inundados y morichales de algunas de las zonas de la
Reserva Natural Bojonawi.
Establecer si hay diferencias para algunas variables fsicas y qumicas

del suelo entre suelos de bosques inundados y morichal.
Determinar la relacin que existe entre la densidad de bacterias

desnitrificantes y algunas variables abiticas del suelo.
46
5. MATERIALES Y MTODOS
5.1 Diseo de investigacin

Este trabajo es de tipo investigativo. La unidad de respuesta es la muestra de
suelo de las coberturas vegetales, las cuales fueron tomadas en la Reserva
Natural Bojonawi (Vichada). Se llev a cabo un muestreo aleatorio simple.
5.2 Seleccin de coberturas vegetales

El muestreo se realiz en la Reserva Natural Bojonawi (Figura 1), propiedad
de la Fundacin OMACHA. La Reserva hace parte de la Red de ecosistemas
de la Sociedad Civil y, est ubicada a orillas del ro Orinoco, en las
inmediaciones de Puerto Carreo (Vichada). Tiene una extensin de cerca
de 7800 ha. Limita al este con el ro Orinoco, al norte con Cao Negro, al
oeste con Cao Verde y al sur, sabana abierta (Trujillo, 2001). Su clima es de
piso trmico clido, el promedio de temperatura anual de la regin es de 28
C, con lluvias abundantes entre los meses de Abril a Octubre y una
precipitacin media anual de 2176 mm (IDEAM, 2007).
Figura 1. Reserva Natural Bojonawi. Fuente: A. Varela, 2007.
47
5.3 MTODOS
5.3.1 Recoleccin de muestras
El muestreo se realiz en la Reserva Natural Bojonawi al comienzo de la

poca de lluvias en el mes de junio del 2007. En este periodo la cantidad de
precipitacin
fue de 224 mm, por encima de lo normal (IDEAM, 2007).
Dentro de esta Reserva se tomaron dos coberturas vegetales, las cuales

fueron: morichales y bosques riparios (Figura 2a y 2b). Para cada cobertura
se escogieron cinco
sitios de muestreo y de cada uno se tomaron tres
muestras para de esta manera obtener quince muestras por cada cobertura
vegetal.
(A)
(B)
Figura 2A y 2B. Coberturas vegetales. morichales y bosques riparios. Fuente: A. Varela,

2008.
Los cinco sitios de muestreo fueron: Cao Negro, Cao Verde, Agua Linda,
El Tesoro y Cao Danta para los morichales y, Bojonawi, San Jos, Isla
Chimborazo, Isla Santa Helena y Ventanas para bosques riparios. Para la
toma de muestras se utiliz un barreno y se recolect una cantidad
aproximada de 100 g de muestra, hasta una profundidad de 20 cm. Las
48
muestras se almacenaron en bolsas plsticas con cierre hermtico que se

conservaron a 4 C hasta su correspondiente anlisis en el laboratorio.
Se realiz una medicin de variables ambientales en campo. La temperatura
ambiental mxima y mnima para la cual se utiliz un termmetro de
mximas y mnimas, que fue colocado aproximadamente a una altura de 1 m
sobre el suelo por 10 minutos en cada uno de los puntos de muestreo y luego
se procedi a la lectura. Otra variable fue la temperatura del suelo donde se
utiliz un termmetro de suelos (Figura 3) el cual fue ubicado a una
profundidad de 20 cm en el sitio de muestreo aproximadamente por cinco
minutos y luego se procedi a la lectura.
Figura 3. Termmetro de mximas, mnimas y de suelo. Fuente: A. Varela, 2008.
Para la determinacin de cobertura vegetal se utiliz un densimetro,

midiendo la cantidad de recuadros no cubiertos por la vegetacin en los
cuatro puntos cardinales en el punto de muestreo. Se calcul el valor
promedio del nmero de recuadros vacos y para calcular el porcentaje de
cobertura vegetal se us la siguiente ecuacin:
C = ( X 1,04 ) 100
49
Donde C es el porcentaje de cobertura vegetal y X es el promedio de los

recuadros libres.
5.3.2 Parmetros fisicoqumicos
Para la medicin de parmetros fisicoqumicos del suelo se trabaj en el
Laboratorio de Ecologa de Suelos y Hongos Tropicales ubicado en Bogot,
en la Pontificia Universidad Javeriana, en donde se determin el pH,
porcentaje de humedad, distribucin de agregados y textura del suelo.
Para la medicin de pH se pesaron 10 g de muestra, se llevaron a un vso de
precipitado de 50 ml, se adicion 10 ml de agua destilada y se agit durante
5 minutos constantemente. Se dej reposar durante 15-20 minutos
aproximadamente y se obtuvo un sobrenadante en el cual se determin el
pH
con
un
potencimetro,
calibrado
previamente
con
soluciones
amortiguadoras de pH de 4,0 y 7,0 (Andrades, 1996; Black, 1973).

Para porcentaje de humedad se pesaron 5 g de muestra de suelo (peso
fresco) depositndola en una bolsa de papel debidamente pesada para luego
colocar en horno de secado a 80 C de temperatura d urante 48 horas, luego
de las cuales se volvi a pesar (Andrades, 1996). El porcentaje de humedad
se determin mediante la ecuacin:

H =

.100
Donde P es el peso fresco de la muestra de suelo en g, P es el peso

seco.
El mtodo a utilizar para obtener la textura del suelo es el de Bouyucos
(Norambuenza et al., 2002), el cual permiti determinar las fracciones de
50
limo, arena y arcilla. Se pesaron 25 g de suelo, se les agreg 5 ml de

solucin dispersante (tripolifosfato de sodio) y se adicionaron 60 ml de agua
destilada, se agitaron y se dejaron reposar durante 24 horas para que
actuara la solucin dispersante. Despus se mezclaron con agua hasta
completar 250 ml y se dispers la muestra con agitacin fuerte durante dos
minutos (agitador). La anterior mezcla se trasvas a una probeta e
inmediatamente se realiz la primera lectura de densidad (C1) (utilizando un
hidrmetro), la cual correspondi a la densidad de la suspensin de arcilla y
limo. Se dej en reposo una hora y se realiz la segunda lectura la cual
correspondi a la densidad de la suspensin de arcilla (C2) (Senz, 1999;
Norambuenza et al., 2002). Los porcentajes de arcilla, limo y arena se
obtuvieron a partir de las siguientes ecuaciones:
Ar+L = C1 x 2
Ar = C2 x 2
L = Ar+L - Ar
A = 100 - (Ar+ L)
Donde:
A= %de arena
Ar= % de arcilla
L= % de limo
Una vez se establecieron los porcentajes de arena, limo y arcilla se ubicaron

en el tringulo de textura para determinar la clase textural a la que
corresponde el suelo analizado (Senz, 1999, Norambuenza et al., 2002).
51
Para la distribucin de agregados se tomaron 100 g de peso seco de suelo a

analizar, se colocaron en la parte superior de la torre de tamices. Se utiliz el
agitador de tamices por cinco minutos a 800 rpm. La fraccin de suelo
encontrada en cada uno de los tamices se deposit en bolsas pequeas de
papel y luego fueron pesadas en la balanza analtica. Para la correlacin de
varios parmetros se asign un factor de peso a cada rango de tamao y
agregados.
5.3.3. Densidad de bacterias desnitrificantes
Se hizo la preparacin del medio de cultivo (mineral basal) (Anexo 1), el cual
tiene como fuente de nitrgeno NH4Cl; se preparo 1L de medio de cultivo
conservando las condiciones anaerobias, para lo cual fue necesario llevarlo a
ebullicin y realizar un intercambio de atmsfera con nitrgeno y luego un
cambio de fase N2:CO2 (80:20) (Figura 4a y 4b); esto se llev esterilizar por
15 min, 15 lb a 121 C, se inocularon las fuentes de carbono, el agente
reductor y el bicarbonato al medio de cultivo los cuales se adicionaron en
condiciones anaerbicas.
(A)
(B)
Figura 4A y 4B. Medio en ebullicin y cambio de Fase. Fuente: Autores, 2008.
52
Las poblaciones de bacterias desnitrificantes presentes en morichales y en

los bosques riparios se cuantificaron usando la tcnica de NMP. Para cada
serie se utilizaron tres tubos por dilucin siguiendo las tcnicas anaerobias
de Hungate (1969).
Con cada muestra de suelo se realizaron diluciones seriadas en base diez,

en la cual la primera dilucin se realiz en frascos de penicilina con solucin
salina al 0,85%, tomando 1 ml con jeringa estril para obtener un factor de
dilucin (1:10). A partir de la primera dilucin se realizaron diluciones
seriadas hasta 10-3. Posteriormente se sembr 1 ml de todas las diluciones
con las respectivas muestras y se incubaron a 28.8 C durante 15 das. El
resultado de NMP se report como Log 10NMP/g suelo.
Para la cuantificacin de la densidad de las bacterias desnitrificantes, los

criterios que se tuvieron en cuenta para identificar los tubos positivos fueron:
verificacin de control positivo (+) y negativo (-), turbidez en el medio (Figura
5a) y verificacin utilizando el reactivo de difenilamina (Figura 5b), donde la
aparicin del color blanco fue prueba positiva para bacterias desnitrificantes,
indicando la utilizacin del nitrato presente en el medio de cultivo como
aceptor final de electrones para su respiracin en condiciones limitadas de
oxgeno y la aparicin de color azul demostr la ausencia de dichas bacterias
(Guian y Nageswara, 1995).
53
(A)
(B)
Figura 5A y 5B. Aumento de turbidez en medios de cultivo debido al crecimiento microbiano

y verificacin con reactivo difenilamina. Fuente: Autores, 2008.
5.4 Anlisis de datos
Para el anlisis estadstico de la informacin se utiliz el programa Statistica

8.0. Se estableci la normalidad de los datos por medio de la prueba de
Shapiro Wilks y la homogeneidad de varianzas mediante la prueba de
Levene. Como los datos no presentaron una distribucin normal se utiliz la
prueba U de Mann-Whitney para establecer si existan diferencias
significativas entre los suelos de bosques riparios y morichales, con respecto
a las variables fisicoqumicas y ambientales evaluadas. Se realiz un anlisis
de correlacin para encontrar la relacin existente entre la densidad de
bacterias y los parmetros fisicoqumicos evaluados utilizando la prueba de
Spearman. Para las pruebas se us un nivel de significancia de 0,05.
54
6. RESULTADOS
Por medio de la prueba estadstica de Kruskall Wallis se determin que no

existan diferencias significativas entre los sitios de muestreo de cada una de
las coberturas evaluadas, con respecto a la densidad de bacterias
desnitrificantes. Por lo tanto los sitios eran verdaderas repeticiones de la
cobertura y los datos de cada uno de ellos pudieron usarse en conjunto para
determinar la diferencia entre coberturas.
6.1 Densidad de bacterias desnitrificantes.
Se encontraron diferencias significativas para la densidad de bacterias

desnitrificantes (U= 9,07E-6; P<0,05) obteniendo mayor densidad de este
grupo bacteriano en suelos de bosques riparios (Figura 6).
5
4,5
Log NMP/g Suelo
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
MORICHAL
BOSQUE RIPARIO
COBERTURAS VEGETALES
Figura 6. Promedio desviacin estndar de densidad de bacterias desnitrificantes en

suelos de morichales y bosques riparios.
Durante el periodo de muestreo en la Reserva Natural Bojonawi la

temperatura ambiental fluctu entre 22-30C con un promedio de 28,6C. La
precipitacin durante este mes fue similar a la de mayo y alrededor de los 25
mm.
55
6.2 Variables ambientales
En cuanto a la temperatura del suelo no se encontraron diferencias

significativas entre los sitios de muestreo (U=0,18;P>0,05). Las temperaturas
variaron entre 24,27 0,80 para morichales y entre 22,8 0,95 para bosques
riparios. As mismo, tampoco se encontraron diferencias entre las coberturas
vegetales para la temperatura ambiental (P=0,51; P >0,05).
La temperatura mxima fue de 33 C para morichales (El Tesoro), y la
mnima 26C para bosques riparios (en Bojonawi), co n una diferencia de
temperatura de 7C; sin embargo esta diferencia no fue significativa (P=0,51;
P >0,05).
En cuanto al porcentaje de cobertura vegetal no se evidenci diferencia entre

los dos tipos de suelos estudiados (U= 0,67; P>0,05) que alcanz un 84,5%
en bosques riparios, mientras que en morichales la densidad de cobertura
vegetal es de 82,9%.
6.3 Parmetros fisicoqumicos
Con relacin al pH los valores promedio de este variaron entre 4,23 para
morichal y 5,72 para bosques riparios, lo que clasifica estos suelos con
acidez fuerte y con acidez moderada, respectivamente (Figura 7),
determinando que el pH es mayor en bosques riparios (U=0,00; P<0,05).
56
pH
0
MORICHAL
BOSQUE RIPARIO
Figura 7. Promedio desviacin estndar de pH en suelos de morichales y bosques

riparios.
En cuanto al porcentaje de humedad (Figura 8) se encontraron diferencias

significativas (U= 0,01; P<0,05) entre suelos de bosques riparios (267,1) y
morichales (3918,2), obteniendo un porcentaje mayor en morichales (13%).
60
50
Humedad (%)
40
30
20
10
0
MORICHAL
BOSQUE RIPARIO
Coberturas Vegetales
Figura 8. Promedio desviacin estndar de porcentaje de humedad en suelos de

El anlisis de textura determinada por el mtodo de Boyoucos permiti

estimar el porcentaje que existe de arena, limo y arcilla para cada uno de los
suelos de bosques riparios y morichales (Figura 9), presentando un mayor
57
porcentaje de arena en morichales (U=0,02; P<0,05) y porcentajes mayores

de arcilla (P=0,007; P<0,05) y limo (U=0,11; P<0,05) los suelos de bosque
ripario. Estos fueron clasificados como franco arenoso para los suelos de
morichal y franco arcillosos limosos para bosques riparios.
Arena (%)
Limo (%)
Arcilla (%)
100
90
CLASE TEXTURAL (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Morichal
Bosque Ripario
COBERTURA VEGETAL
Figura 9. Porcentaje de arcilla, arena y limo en suelos de morichales y bosques riparios.
Se determinaron diferencias significativas entre las coberturas vegetales

evaluadas con respecto al tamao de agregados de 1,18 m (U=0,04;
P<0,05), 600 m (U=0,00; P<0,05), 300 m (U=0,00; P<0,05), 54 m (U =
0,03; P<0,05) y < 54 m (P=0,10; P<0,05), encontrando que el tamao de
agregados de 1,18, 600 y 300 m fue mayor en morichales, mientras que el
tamao de agregados 54 m y < 54 m fue mayor en bosques riparios
(Figura 10).
58
1,18um
600um
300um
54um
<54
70
DISTRIBUCION DE AGREGADOS (%)
60
50
40
30
20
10
0
MORICHAL
BOSQUE RIPARIO
Figura 10. Promedio desviacin estndar de la distribucin de agregados 1,18, 600, 300,
54 y <54 m, en suelos de morichales y bosques riparios.
6.4
Relacin entre la densidad de bacterias desnitrificantes y los

Por medio de la prueba de Spearman se logr determinar la relacin entre la

densidad de bacterias desnitrificantes y las variables ambientales y
parmetros fisicoqumicos en los suelos de bosques riparios (Tabla 1),
comprobando que los parmetros que presentaron relacin fuerte positiva
con la densidad de bacterias desnitrificantes fueron: el pH (r2= 0,67; P<0,05),
tamao de agregados 54 m ( r2=0,70;P<0,05) y <54 m (r2= 0,66; P<0,05)
(Figura 11), mientras que para el tamao de agregados de 1,18 m (r2= 0,47; P<0,05),600 m (r2= -0,58; P<0,05) y 300 m
(r2= -0,48; P<0,05) se
evidenci una relacin fuerte negativa (Figura 12).
Por otro lado, parmetros como temperatura ambiental, temperatura del

suelo, cobertura vegetal, porcentaje de humedad, porcentaje de arcilla,
porcentaje de limo, y porcentaje de arena no presentaron relacin con la
densidad de bacterias desnitrificantes (P >0,05 en todos los casos).
59
Densidad (log ufc/g celulas)
0
0
pH
Figura 11. Correlacin entre pH y densidad de bacterias desnitrificantes para las coberturas
vegetales analizadas.
60
5
Densidad (Log ufc/g celulas)
Densidad (Log UFC/s suelo)
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Tamao de agregados 1,18um (%)
10
12
Tamao de agregados 600um (%)
61
14
16
18
20
Densidad (log ufc/g celulas)
Densidad (log NMP/g suelo)
0
0
10
20
30
40
50
60
70
10
20
30
Tamao de agregados 300um (%)
40
50
60
70
80
T amao de agregados 54um (%)
Densidad (log NMP/g suelo)
0
0
10
15
20
25
30
35
40
T amao de agregados <54um (%)
Figura 12. Grficas de correlacin entre tamao de agregados 1,18 m (A), 600 m (B) ,300 m (C) ,54 m (D) y <54 m (E) y la densidad de bacterias desnitrificantes
para las coberturas vegetales analizadas.
62
Tabla 1. Valores de r y P de la prueba de Spearman, entre las variables
ambientales,
y la densidad de bacterias
desnitrificantes para los suelos de las coberturas vegetales analizadas

(morichales y bosques riparios)
Valor r2
-0,29
Valor P
0,12
pH
0,67
0,01
Temperatura del suelo (C )
-0,30
0,09
-0,01
0,92
0,26
0,15
0,11
0,53
-0,21
0,24
- 0,47
0,01
-0,58
0,00
-0,48
0,00
0,70
0,04
0,66
0,00
-0,05
0,78
Variable
Humedad (%)
Temperatura ambiente (C)

Arcilla (%)
Limo (%)
Arena (%)
Tamao de Agregados 1,18 m (%)
Tamao de Agregados 600 m (%)
Tamao de Agregados <54 m (%)
Cobertura Vegetal (%)
63
7. DISCUSIN DE RESULTADOS
Inicialmente los resultados microbiolgicos obtenidos mostraron diferencias

en la densidad de bacterias desnitrificantes entre las coberturas vegetales.
Los
suelos
de
morichal
presentaron
una
densidad
de
bacterias
desnitrificantes dos veces menor con relacin a los suelos de bosques

riparios. Estos valores estn dentro del mismo rango de magnitud para las
dos
coberturas,
estadsticamente
lo
que
muestra
significativas
entre
que
las
aunque
existan
densidades,
diferencias
estas
no
son
biolgicamente importantes, ya que esa variacin no altera el proceso de

desnitrificacin que estas bacterias realizan en el suelo y por tanto no afectan
las cantidades de nitratos all presentes.
A nivel mundial se han realizado estudios de bacterias desnitrificantes que
han demostrado su importancia en el suelo (Benavides et al., 2006 ; Marn et
al., 2006; Gmez, 2007; Karolien et al., 2001); sin embargo son pocas las
investigaciones realizadas en suelos de morichal y bosques riparios y ms
an, con respecto a estas bacterias; por tal motivo, dentro del presente
estudio fue necesario comparar las variables fsicas, qumicas (pH, textura,
distribucin de agregados, humedad) y biolgicas (densidad de bacterias
desnitrificantes) con otras coberturas vegetales.
Dentro de este contexto, el estudio de Gmez (2007) con suelos de la
ecorregin cafetera en poca de lluvias determin que la densidad promedio
de bacterias desnitrificantes fue de 0,53 0,03 Log10 NMP/g suelo en
algunos usos de suelo de la zona como pastizales, cafetales sin sombro,
bosque subandino, guaduales, plantaciones forestales y cebollales, teniendo
en cuenta que la precipitacin promedio anual de la zona era de 2000 mm.
En el presente estudio realizado en la Reserva Natural Bojonawi se
determin una densidad promedio de bacterias desnitrificantes de 2,99
0,08 Log10 NMP/g suelo, para las dos coberturas vegetales, siendo la
64
precipitacin similar a la precipitacin promedio anual de la ecorregin

cafetera, con un valor de 2176 mm. Aunque estos valores de precipitacin
son similares en la ecorregin cafetera y en la Reserva Natural del Bojonawi,
la densidad de bacterias desnitrificantes fue cinco veces mayor en los suelos
del presente estudio, quiz porque en los ecosistemas estudiados en la
Reserva Natural Bojonawi se presentan inundaciones peridicas durante el
ao (Rodrguez et al., 2006), que favorecen el crecimiento de estas bacterias
por las condiciones anaerbicas.
Un estudio realizado por Benavides et al. (2006) a partir de suelo de cebollal
en Tota (Boyac) expuesto al uso incontrolado de fertilizantes nitrogenados
(nitratos y amonio) permiti aislar, identificar y cuantificar la densidad de
bacterias desnitrificantes por medio de la
tcnica de recuento en placa,

4
obteniendo un recuento promedio de 6,3*10 UFC/g. Este recuento fue dos

veces mayor con relacin a los recuentos obtenidos para las bacterias
desnitrificantes en suelos de la Reserva Natural Bojonawi. Por un lado cabe
mencionar que la estimacin se hizo con tcnicas diferentes, lo que puede
influir en las densidades microbianas encontradas para cada uno de los
casos. Adicionalmente y de manera ms probable las caractersticas
fisicoqumicas de los suelos de cebollal, contribuyeron a obtener una mayor
densidad de bacterias desnitrificantes, puesto que estos suelos son ricos en
materia orgnica, nitratos y cuentan con un pH ptimo de
6,0 6,5
(Botanical, 2008).
En este
estudio fue posible cuantificar
la densidad de
bacterias
desnitrificantes. Sin embargo se puede decir que la densidad de bacterias de

la Reserva Natural Bojonawi (3,0 6,7 log10 NMP/g suelo) es baja con
respecto a un estudio realizado por Marn et al., (2006) quien cuantific
bacterias desnitrificantes en la interfase agua sedimento del lago
Maracaibo, Venezuela, obteniendo valores de 1,40 105 NMP/100ml en
65
agua y >1,60 106 NMP/100 g peso hmedo para sedimento, por medio de
la tcnica de tubos mltiples. Sabiendo que los suelos del estudio realizado
por Marn et al., (2006)
tienen valores de pH de 7,0 y una temperatura
promedio de 28,0C, es posible decir que fueron estos parmetros los que
favorecieron a las bacterias desnitrificantes, pues se sabe que este rango de
temperatura y las condiciones de neutralidad en cuanto a pH se refiere,
contribuyen a que haya una mayor densidad de bacterias desnitrificantes.
Con respecto a lo anterior se puede decir que aunque en la Reserva Natural

Bojonawi, no se encontraron valores de pH ptimos para el crecimiento de
bacterias desnitrificantes, se evidencia que an as, hay bacterias
desnitrificantes en rangos de pH inferiores a 7. Factores como el porcentaje
de materia orgnica y la disponibilidad de nitratos pueden influir
positivamente en la densidad de bacterias desnitrificantes (Lorente, 1995);
estos factores pueden favorecer a estas bacterias, puesto que la materia
orgnica sirve como fuente de energa por sus compuestos de carbono, y la
disponibilidad de nitratos en el suelo
favorecen a dichas bacterias. Sin
embargo estos no se consideraron dentro de la presente investigacin.

Con la informacin obtenida para las variables ambientales, se evidenci que
para bosques riparios y morichales no se encontraron diferencias con
respecto a la temperatura del suelo, la cobertura vegetal y la temperatura
ambiental.
Tanto la temperatura ambiental como la del suelo tienen estrecha relacin
con el clima, la cantidad y el tipo de cobertura. En las dos coberturas
vegetales evaluadas se encontraron valores similares y, aunque hay
diferencias en cuanto a la vegetacin se estableci que no existen
diferencias para estos parmetros ambientales.
66
Los bosques riparios presentan especies arbreas representadas por

Leguminosae, Lecythidaceae y otras familias (Veneklaas et al., 2005),
mientras que en morichales se da lugar a la vegetacin conspicua, dominada
por Mauritia flexuosa y otras familias (Vincelli, 1980), indicando que aunque
su conformacin en trminos de vegetacin es diferente, en porcentajes de
cobertura los valores son similares, posiblemente porque los rboles
presentes all, generan condiciones de sombra que ayudan a que el suelo
tenga una temperatura constante. Tal como lo demostraron (Cardona y
Sadeghian, 2005), quienes afirman que en las coberturas se crea un
microclima especial en los suelos bajo sombra, con una menor velocidad del
viento y mayor humedad relativa, entre otros aspectos que afectan la
temperatura del suelo; quizs por esto, es posible pensar que las coberturas
generaron condiciones climticas similares en el suelo.
La temperatura ambiental es un factor que tambin tiene relacin con la
cobertura vegetal, puesto que la vegetacin es la responsable de regular la
cantidad de agua en la atmsfera (Poveda et al., 2000). Posiblemente por
esto se obtuvieron valores similares entre morichales y bosques riparios, con
respecto a la temperatura ambiental.
Los resultados de los anlisis fisicoqumicos realizados en estos suelos
indicaron que entre los suelos de estas coberturas vegetales existen
diferencias. Estudios realizados por Garavito (1979) y Lpez (2005) indican
que los suelos inundados de morichales y bosques riparios, presentan un pH
menor a 7, hacindolos cidos, tal como se evidenci en este estudio, donde
los valores promedio en suelos de bosques riparios fueron cidos (alrededor
de 5).
En bosques riparios los valores de pH, porcentaje de arcilla, porcentaje de
limo y agregados de 54 y <54 m fueron mayores, mientras que el porcentaje
de humedad, distribucin de tamao de agregados (de 1,18, 600 y 300 m) y
porcentaje de arena fueron mayores para morichales.
67
Los suelos de bosques riparios son menos cidos con respecto a los de
morichal, pues se reportaron valores promedio de 5,7 para bosques y 4,2
para morichal. Esta acidez por lo general est asociada con suelos lixiviados,
procesos de nitrificacin, fermentacin y produccin de cidos, que se
presentan en estos suelos por descomposicin de material orgnico y
actividad biolgica (Geneva, 1994). Asimismo el pH de un suelo puede ser
afectado por la naturaleza qumica de la lluvia, prcticas de manejo del suelo
y las actividades de los organismos que habitan en este. Los suelos de
morichal son an ms cidos que los de bosques, tal como lo sugiere Baver
(1998) quien demostr que a mayor humedad se reduce la disponibilidad de
oxgeno y por tanto hay una disminucin de pH, lo cual se ve reflejado en
suelos de morichales que presentaron un 1,5% ms de humedad y una
acidez 1,35 unidades de pH mayor.
La proporcin de partculas en el suelo (arena, arcilla y limo) determinan las

caractersticas fsicas en cuanto al aire y agua que puede mantener el suelo
(Cepeda, 1991; Lpez, 1985). Los resultados obtenidos determinaron que en
suelos de morichales hay mayor porcentaje de arena, dando una textura
franco arenosa, mientras que en suelos de bosques riparios se present una
textura franco limosa arcillosa.
Los suelos arenosos tienen una buena aireacin, con baja retencin de agua
y son permeables, lo que promueve a la formacin de tamao de agregados
grandes, mientras que en suelos limosos y arcillosos se producen efectos
impermeables en el suelo y mala aireacin, conllevando a la formacin de
agregados ms pequeos. De acuerdo a lvarez (1965) la mayor parte del
ao los suelos de la Orinoqua permanecen encharcados o inundados,
presentando condiciones de hidromorfismo, favoreciendo el desarrollo de
suelos gleisados, prevaleciendo en suelos de morichales texturas franco
68
arenosas, mientras que en suelos de bosques riparios se caracterizan por

presentar texturas franco arcillosas. Este estudio corrobora lo obtenido en la
Reserva Natural Bojonawi donde se encontr que los suelos de morichales
fueron franco arenosos y los suelos de bosques riparios se clasificaron como
franco arcillosos, indicando que en los estudios realizados por lvarez
(1965), se obtuvo la misma clase textural que la determinada en la presente
investigacin.
En cuanto a la distribucin de agregados se encontr que en suelos de

morichal prevalecieron tamaos de agregados mayores, mientras que los
suelos de bosques riparios presentaron agregados menores o iguales a 54
m. Esta distribucin puede estar relacionada con la textura del suelo, dado
que los suelos arenosos presentes en morichal tendran una capacidad
limitada para retener agua, lo que posiblemente genera menos compactacin
en el suelo (Lorente 1995). Probablemente porque en esta cobertura
predomina un tamao de partculas grande. De la misma manera, factores
como la humedad y la materia orgnica son de gran importancia en la
formacin y distribucin de los agregados del suelo, ya que brindan el
soporte y las condiciones necesarias para el crecimiento de microorganismos
que producen sustancias ligantes como polisacridos de membrana y
algunos lpidos, que brindan al agregado caractersticas fsicas y qumicas
que determinan la estructura de un suelo Hoyos (1999). En suelos de
morichal la humedad es mayor con respecto a la de bosques riparios lo que
posiblemente favorece la formacin de agregados ms grandes en este
suelo.
Posiblemente los agregados de suelos de morichal tienen un mayor tamao,

debido a las altas cantidades de materia orgnica y a la humedad que
predominan en estos suelos, pues segn Burbano (1989), altos porcentajes
de materia orgnica y humedad favorecen la formacin de agregados.
69
Dentro de las variables analizadas en los suelos de la Reserva Natural

Bojonawi, se obtuvo que el pH y el tamao de agregados tuvieron relacin
con la densidad de bacterias desnitrificantes, las otras variables no se
encontraron relacionadas. Entonces, aunque las variables ambientales no
tienen relacin con la densidad de bacterias desnitrificantes, es posible
pensar que la temperatura favoreci las condiciones necesarias para
determinar el recuento obtenido de bacterias desnitrificantes presentes en el
suelo de estas coberturas vegetales (morichales y bosques riparios), pues la
temperatura ptima que favorece a estas bacterias es de 25C o superior
(Gonzlez y Vera, 2006) y la encontrada en este estudio fue en promedio de
25,81C.
En cuanto a los porcentajes de arena, limo y arcilla no tuvieron relacin con

la densidad de bacterias desnitrificantes. Sin embargo la textura puede estar
relacionada con la densidad de dichas bacterias, pues los suelos franco
arcillosos presentan mayor cantidad de microporos, los cuales almacenan y
retienen agua y oxgeno en el suelo (Malagn et al., 1995). Las bacterias
desnitrificantes se adaptan mejor a este tipo de suelos, puesto que estos
tienden a compactarse ms fcilmente, reduciendo la porosidad y limitando el
movimiento de agua y aire en el suelo (Morell y Hernndez, 2000), creando
condiciones de anaerobiosis que favorecen a las bacterias, pues a menor
porosidad hay mayor saturacin del suelo y por ende menos oxgeno.
Por el contrario los suelos arenosos de morichales no tienen la misma

capacidad de almacenar y retener agua, lo que posiblemente no favoreci el
desarrollo de bacterias desnitrificantes (Quiminet, 2001), ya que estos suelos
se caracterizan por la presencia de grandes partculas que generan mayores
espacios de aire, creando mayor tensin superficial de oxgeno, que no
favorece a estas bacterias.
70
Un factor que puede estar relacionado con la densidad de bacterias

desnitrificantes y la textura arcillosa predominante en suelos de bosques
riparios, es el drenaje lento del agua que caracteriza estos suelos, debido a
que los microporos restringen el flujo de esta, generando as zonas de
anaerobiosis que favorecen el crecimiento de microorganismos que sean
afines a estas condiciones (Madigan et al., 2001, Sylvia et al., 2005).
Por otra parte, en cuanto a la relacin entre las variables de estudio se

encontr una correlacin fuerte y directa entre los valores de pH y la
densidad de bacterias desnitrificantes (r2 =0,67, P<0,05). Esta correlacin
fuerte sugerira que el pH tiene influencia sobre la densidad de las
poblaciones bacterianas evaluadas, pues los aumentos de pH pueden
favorecer la actividad inicial de los microorganismos y por lo tanto los
procesos en los que participan (Chapman y Pratt, 1991).
Como es sabido, la concentracin de protones en el suelo est ligada a la

concentracin de cationes como AL+2, Mn+2, Ca+2 y Mo+2. Cuando baja el pH
se moviliza el AL+2 y MN+2, que resultan txicos para mucha poblaciones
microbianas (Rodrguez y Fraga 1999). Es quiz por esto que a pH muy
bajos la densidad de bacterias desnitrificantes se ve afectada; sin embargo,
Alexander (1980) afirma que es difcil definir rangos de pH en cuanto a la
densidad de bacterias desnitrificantes, debido a que muchas de estas
bacterias son sensibles a pH cidos, por lo que en suelos cidos existe una
poblacin escasa de estas, mientras que en otros suelos la cantidad de
bacterias desnitrificantes es alta con un pH de 4,7.
Con respecto a lo anterior se puede decir que aunque en los suelos de la

Reserva Natural Bojonawi no se encontraron valores de pH ptimos para el
crecimiento de bacterias desnitrificantes, se puede decir, que an as, hay
71
este tipo de bacterias en rangos de pH inferiores a 7. Factores como el

porcentaje de materia orgnica y la disponibilidad de nitratos pueden influir
positivamente en la densidad de bacterias desnitrificantes (Lorente, 1995),
favoreciendo a dichas bacterias.
Con relacin a la humedad los valores promedio hallados de este parmetro,

fueron mayores en suelos de morichal (39,0%) con respecto a los de
bosques (26,0%). Probablemente en suelos de morichal la humedad fue
mayor por las inundaciones prolongadas y de difcil control a los que se ven
sometidos los suelos de morichal (Hernndez y Snchez, 2006). Por otra
parte, la densidad de bacterias desnitrificantes no present una correlacin
positiva con la humedad posiblemente porque los suelos presentaron valores
de humedad inferiores al 60% y estas bacterias son favorecidas cuando la
humedad es mayor a ste valor (Gonzles y Vera, 2006). Es probable
entonces que estos valores de humedad afecten tambin la densidad de
bacterias desnitrificantes encontrada.
En cuanto a la distribucin de agregados se encontr una correlacin

negativa entre el tamao de agregados (600 y 300 m) y la densidad de
bacterias desnitrificantes, mientras que para el tamao de agregados de 54 y
<54 m la correlacin fue fuerte y positiva. Esto indica que a mayor tamao
de agregados hay menor densidad de bacterias desnitrificantes, mientras que
a menor tamao de agregados la densidad se vio favorecida. Posiblemente
estos agregados de menor tamao generan condiciones de anaerobiosis,
debido a que aqu los suelos son ms compactos y no permiten la entrada de
aire, lo que favorece a estas bacterias.
Aunque la densidad de bacterias desnitrificantes se ve favorecida por la

formacin de microagregados, cabe mencionar que los suelos de bosques
riparios, en donde predomina este tamao de agregados, pueden perder
72
agregacin por falta de compuestos ligantes propios de los microorganismos,

haciendo que su estructura pierda estabilidad (Senz, 1999). Contrario a lo
que sucede con partculas de mayor tamao (600 g y 300 g), en donde la
estructura es estable, posiblemente por la cantidad de materia orgnica
presente en suelos de morichal, pues segn Bossuyt et al., (2004), la
macroagregacin es el resultado del enriquecimiento con materia orgnica, la
cual constituye un ncleo alrededor del cual se adhieren las partculas
minerales.
Estos macroagregados generan alta porosidad favoreciendo que el

intercambio gaseoso sea ms activo y haya mayor cantidad de oxgeno
(Luters y Salazar, 2000). Esta caracterstica no favorece el desarrollo de
bacterias anaerobias o microorganismos microaeroflicos como las bacterias
desnitrificantes de los suelos de la Reserva Natural Bojonawi.
Con relacin a los microagregados, el tamao de partculas present una

correlacin fuerte y positiva, tal como lo presenta Hilleld (1982), indicando
que las bacterias desnitrificantes posiblemente pueden colonizar de forma
ms eficiente estos agregados al haber menor superficie y tensin de
oxgeno, favoreciendo la densidad de bacterias desnitrificantes. En suelos de
Colorado
Estados
Unidos,
donde
predominan
fundamentalmente
gramneas, autores como Karolien et al., (2001),reportaron que en

condiciones de humedad los suelos franco limosos presentaron densidad de
bacterias
desnitrificantes
(2,36
UFC/
suelo),
con
cantidad
de
microagregados (0,77 0,01).
Con respecto a lo anterior es posible decir que la densidad (4,05 0,81

UFC/g suelo) y los microagregados (42,66 0,04) encontrados en suelos de
bosques riparios son mayores en comparacin con los suelos de Colorado
(Estados Unidos), posiblemente porque en estos suelos, predomina la textura
73
arenosa, lo que facilita el movimiento de agua y aire, con alta capacidad de

intercambio de nutrientes y una elevada saturacin de bases (Bach, 2003).
Por otra parte se conoce que los suelos de morichales y bosques riparios
estn sometidos durante perodos prolongados a inundaciones (Zea, 1997),
por esto, es posible decir que en estas condiciones, los poros del suelo
sufren un proceso de saturacin que genera condiciones anoxignicas en el
suelo, lo cual favorece la existencia de cierta cantidad de bacterias
desnitrificantes, aunque las dems condiciones no sean favorables (pH, no
contaminacin con nitratos, entre otras).
Por medio de este estudio se evidenci la presencia de bacterias

desnitrificantes en suelos de morichales y bosques riparios asociadas al ciclo
del nitrgeno, importantes para la dinmica natural de dichos ecosistemas.
Sin embargo es necesario evaluar la actividad de dichas bacterias para poder
determinar si la desnitrificacin es llevada a cabo y a qu tasa, pues
posiblemente el proceso de desnitrificacin puede ser lento, liberando
nitratos txicos, lo que puede suceder ocasionalmente debido a la
disminucin de bacterias desnitrificantes, lo que lleva a la acumulacin de
nitratos y contaminantes nitrogenados, los cuales son arrastrados a aguas
subterrneas prximas a estos suelos por procesos de lixiviacin.
74
8. CONCLUSIONES
Se cuantific la densidad relativa de las bacterias desnitrificantes

encontrando que en suelos de bosques riparios la densidad de bacterias
desnitrificantes fue dos veces mayor con respecto a los suelos de morichal.
Se encontraron diferencias entre las variables fisicoqumicas, hallando que el

pH y el tamao de agregados 54 y <54 m del suelo fueron mayores en
bosques riparios, mientras que los tamao de agregados de 600 y 300 m
fueron mayores en morichales.
Se determin que a mayor cantidad de microagregados en el suelo (54 m y

<54 m) se present una mayor densidad de bacterias desnitrificantes.
Parmetros como el pH y tamao de agregados 54 y <54 m tuvieron un

efecto significativo sobre la densidad de bacterias desnitrificantes.
75
9. RECOMENDACIONES
Adems de estimar la densidad de bacterias desnitrificantes en las

coberturas de bosques riparios y morichales, es necesario realizar estudios
sobre actividad metablica (desnitrificante) determinando si el uso del suelo
tiene algn efecto sobre esta actividad,
debido a que la densidad de
bacterias no necesariamente determina la actividad desnitrificante que

pueden tener dichas bacterias en el suelo.
Establecer el comportamiento de la densidad de bacterias desnitrificantes

realizando muestreos en varias pocas del ao en suelos de bosques
riparios y morichales, y de esta manera instaurar la dinmica de dichas
bacterias con respecto a su actividad y densidad.
Es importante incluir en estudios posteriores variables como porcentaje de

materia orgnica y disponibilidad de nitratos en el suelo, ya que estos
permitiran realizar un anlisis ms completo en cuanto a la densidad de
bacterias desnitrificantes en el suelo.
Organizar un cepario para la conservacin, caracterizacin y aislamiento de

las bacterias desnitrificantes de estos suelos, con el fin de analizar aquellas
cepas que presenten mayor actividad, que podran ser utilizadas en procesos
de biorremediacin de suelos y efluentes contaminados con productos
nitrogenados.
76
10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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Pontificia Universidad Javeriana. Bogot, D.C., Colombia.185 p.
89
11. ANEXOS
Medio Mineral Basal (Mieczyslaw, 1993)
Etanol
1g
Acetato de Sodio
1g
NH4Cl
1g
NaCl
1g
MgSO4
CaCl2
0,03g
KNO3
2g
K2HPO4
5g
KH2PO4
1,5g
MgCl2
0,4g
Extracto de levadura
Elementos traza
0,2g
0,05g
1ml
Para un (1L) de medio

Esterilizar por 15 min 15 lb a 121 C.
90

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COMPARACIN DE LA DENSIDAD DE BACTERIAS DESNITRIFICANTES

ENTRE BOSQUE INUNDADO Y MORICHAL EN LA RESERVA NATURAL

NATALIA JEANNETHE BORDA CALVO

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946

La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus

COMPARACIN DE LA DENSIDAD DE BACTERIAS DESNITRIFICANTES

NATALIA JEANNETHE BORDA CALVO

Mara Magdalena Gmez

COMPARACIN DE LA DENSIDAD DE BACTERIAS DESNITRIFICANTES

NATALIA JEANNETHE BORDA CALVO

Ingrid Schuler, Ph. D

Janeth Arias, MSc

Agradezco a DIOS y dedico este trabajo a mis familiares, en especial

A Ronal e hijo por ser la ilusin ms grande de mi vida y a todos

Dedico el presente trabajo de grado a mis padres, Rogelio y Luva por la

A todos ellos la gratitud en mi corazn y de mi alma a Dios y la Virgen

A la Fundacin Omacha y a la Pontificia Universidad Javeriana por el apoyo

A la Dra. Amanda Varela, Ph.D., Docente e Investigadora de la Pontificia

A la Dra. Sandra Baena, Ph.D., Docente e investigadora del Departamento

A Mara Magdalena Gmez, Bacteriologa de la Universidad Metropolitana de

A Mnica Cubillos, Biloga de la Pontificia Universidad Javeriana, quien con

A Diego Alberto Senz, Microbilogo Industrial, de la Pontificia Universidad

A nuestros compaeros de Laboratorio de Ecologa de Suelos y Hongos

A todas las personas que nos acompaaron y ayudaron en la realizacin de

Humedales y bosques riparios

Ciclo del nitrgeno

FORMULACION DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACION

Formulacin del problema

Seleccin de coberturas vegetales

Densidad de bacterias desnitrificantes

Densidad de bacterias desnitrificantes

Relacin entre la densidad de bacterias desnitrificantes y

Valores de r2 y P de la prueba de Spearman,

densidad de bacterias desnitrificantes para los suelos de las

coberturas vegetales analizadas.

Reserva Natural Bojonawi.

Coberturas vegetales. Morichales y Bosques

Termmetro de mximas, mnimas y de suelo.

Medio en ebullicin y cambio de Fase.

Aumento de turbidez en medio de cultivo debido al

Promedio desviacin estndar de densidad de

Promedio desviacin estndar de pH en suelos de

Promedio desviacin estndar de porcentaje de

Porcentaje de arcilla, arena y limo en suelos de

Promedio desviacin estndar de la distribucin de

Correlacin entre pH densidad de bacterias

Grficas de correlacin entre tamao de agregados y la

En este estudio se realiz una comparacin de la densidad de bacterias

Key words: denitrifying bacteria, riparian forests, the nitrogen cycle,

morichales, soil physicochemical variables.

bacterias tiene un cambio significativo dependiendo de la regin, pues se

En la subregin de los Llanos Orientales, representada por el complejo de

Con respecto a la subregin del andn orinoquense se conoce que se

biogeogrficamente los Andes, la Amazona y la Orinoqua (Correa et al.,

En general, los suelos en la Orinoqua colombiana son de baja fertilidad. Son

Por ser suelos que permanecen la mayor parte del ao encharcados o

El clima de la Cuenca del Orinoco hace de la regin un rea tropical

caracterizado por la uniformidad de la temperatura a lo largo del ao, estas

Los ecosistemas de la Orinoqua colombiana son tan nicos y especficos

consiguiente, no tienen el mismo tipo de evidencias podolgicas que las

En el pas, incluyen dos mbitos (por tipo de ecosistema, por origen y

La Orinoqua inundable consta de tres paisajes: llanura aluvial de desborde,