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Transferncia gnica em bactrias

Tipos de Elementos Genticos


Clulas Eucariticas

Clulas Procariticas

Vrios cromossomos
complexos com histonas

Cromossomo
nico e circular

Presena de ntrons

Raros ntrons

Mitocndrias/Cloroplastos

Plasmdios
Vrus
Transposons

Gentica de microorganismos
At o momento foi visto que a transferncia da
informao gentica ocorre no momento da diviso
celular (Replicao do DNA).
Entretanto...
Mecanismos de transferncia bacteriana:
Transformao
Conjugao
Transduo

Todos os trs mecanismos permitem a obteno de


material gentico do meio extracelular.
Esses mecanismos fornecem uma fonte adicional de
material gentico para a recombinao.

Princpio transformante (1928) Recordar viver

Caracterizao do princpio
Experimento clssico de Avery, MacLeod e McCarty
(1944) definiu o DNA como agente transformante.

Transformao bacteriana
Incorporao de segmentos de DNA exgeno ao
cromossomo de uma bactria
Aps a definio do
DNA como agente
transformante, a
transformao foi
demonstrada para
outros genes, como,
por exemplo,
resistncia a
antibiticos.
-Pssst! Ei garoto! Quer ser uma Superbactria? Coloca um desses
no seu genoma mesmo a penicilina no vai te ferir!

Processo de incorporao

Processo de incorporao

Processo de incorporao

Processo de incorporao

Consequncias da recombinao (DNA exgeno cromossomo)

Ledenberg e Tatum (1946)


Met (-)
Biotina (-)

Tre (-)
Leu (-)
Tiamina (-)

Linhagem A Linhagem B

A+B

A linhagem A e B precisam que


certos
nutrientes
sejam
adicionados ao meio para poder
crescerem (auxotrficos).
A mistura da linhagem A e B
resulta em uma linhagem
selvagem crescimento em meio
no-suplementado (prototrfico).

O surgimento dessa linhagem


selvagem a partir de duas
linhagens mutantes foi a primeira
evidncia de recombinao gnica
descrita.

Bernard Davis (1946)


Problema: surgiu mesmo um recombinante selvagem ou as
linhagens produziam nutrientes que se suplementavam ?
As duas linhagens foram separadas
por um filtro que permitia a troca de
nutrientes, mas no a passagem das
bactrias.
Aps um tempo de cultivo, Davis
testou o contedo de cada brao
para ver se foi gerada uma bactria
recombinante.
Para haver recombinao era
necessrio o contato fsico entre as
cepas. Evidncia de transferncia
gnica por Ledenberg e Tatum.

Conjugao bacteriana

Transferncia de segmentos de DNA de uma bactria


para outra por contato direto

Plasmdio
Molculas circulares de DNA
extracromossmico com tamanho
varivel de 1 kb a mais de 100 kb.
Pode existir uma cpia ou vrias
dezenas de cpias dependendo do
tamanho e regulao plasmidial.
Funcionam
como
unidades
genticas acessrias com genes, em
geral, associados a adaptao
bacteriana ao meio (Ex: resistncia a
antibiticos, produo de toxinas,
fertilidade).

Descoberta do fator de fertilidade (F)


Em 1953, William Hayes determinou que a transferncia
gnica no era recproca entre as bactrias:
Na transferncia gentica bacteriana, uma bactria
receptora recebe a informao gnica de uma
bactria doadora e passa a expressar esta nova
informao. No caso resistncia para estreptomicina.
Sistema macho-fmea?

Esta troca de informaes diferente da reproduo


sexuada, onde os parceiros doam material gentico
para a formao de um novo organismo, mas
dificilmente um dos doadores alterado.

Necessidade do contato fsico


William Hayes sugeriu que a habilidade doadora em si
um estado hereditrio imposto por um fator de
fertilidade (F).
As linhagens que podem doar so chamados F+
As linhagens receptoras so chamadas de F-

A linhagem F+ (doadora) passava o fator F para uma


linhagem F- (receptora), que se tornava, ento, uma
linhagem F+.

Esta passagem de informao era feita entre as


linhagens atravs de contato fsico (conjugao).

O processo de conjugao

O plasmdio F o responsvel pela maquinaria de sntese do pilus.

Replicao conjugativa

Linhagem Hfr
Descobriu-se um derivativo de uma linhagem F+.
Quando cruzada com uma linhagem F-, esta nova linhagem
produzia 1.000x mais recombinantes para um determinado
marcador gentico (exemplo: resistncia a antibitico).
Nos cruzamentos Hfr x F-, nenhuma F- tornou-se F+ ou Hfr.
Resultado contrastante com o anterior (F+ x F-). Ou seja, a
linhagem F- tornava-se resistente, mas no transmitia a
informao.

Como isso podia ocorrer?

Recombinao homloga (plasmdio cromossomo)

Integrao cromossomo-cromossomo
Linhagem Hfr

Integrao cromossomo-cromossomo
Por que uma linhagem F- ao receber a informao de
Hfr no se torna uma Hfr tambm?
Porque ocorrem quebras no DNA cromossmico antes
de todo o cromossomo bacteriano passar pelo poro para
a linhagem F- (existem raras excees).

Mapeamento cromossmico
Pode-se utilizar linhagens Hfr para determinar o mapa cromossmico.
Quanto mais perto um marcador (ou gene) do ponto de origem do fator
F, mas frequente vai ser sua passagem e integrao ao cromossomo da
linhagem receptora.
Leu+

Arg+

Met+

Arg+

Met+

Arg+

Met+
Met+
Met+

Marcador

Met+
Arg+
Leu+
His+

100%
60%
20%
4%

Mapeamento cromossmico

Mapeamento cromossmico

Mapeamento cromossmico

Mapeamento cromossmico
Alguns mapas cromossmicos muito detalhados de
bactrias foram obtidos a partir da combinao das
propriedades dos trs mecanismos de transferncia gnica
como tcnicas de mapeamento.
Em 1963, o mapa de E. coli j detalhava a posio de
aproximadamente 100 genes.
Em 1990, sabia-se a localizao de mais de 1.400 genes.
Em 1997, com o sequenciamento do genoma completo de
E. coli confirmou-se que o mapa cromossmico produzido
estava correto.

Outros fatores

Determinantes Genticos carreados por Plasmdios


Caracterstica
Exemplos de plasmdios
Fertilidade
F, R1, Col
Produo de bacteriocina
Resistncia a metais pesados

Col E1
R6

Produo de enterotoxina (ou fatores Ent


de virulncia)
Metabolismos de cnfora
Cam
Tumorignese em plantas

T1 (em Agrobacterium
tumefaciens)

Lederberg e Zinder (1951)


Descoberta de um novo tipo de transferncia
O filtro impedia o contato fsico
entre as bactrias Salmonella
typhimurium
(ausncia
de
recombinao).
Entretanto quando aumentavam
o poro do filtro observaram o
surgimento de recombinante
tipo selvagem.
O tamanho do poro tinha mais
ou menos o tamanho do fago
P22.

Bacterifagos

A maioria dos procariontes susceptvel aos bacterifagos


(comedores de bactrias).
So vrus que carreiam informao gentica (DNA ou RNA)
necessria para a sua replicao, circundado por uma capa
proteca.

Infeco por fagos

Transduo

Processo no qual um fragmento de


DNA de uma bactria incorporado no
cromossomo de uma bactria
receptora por intermdio de um fago

Integrao e exciso do DNA do bacterifago l


no genoma bacteriano (Recombinao Especfica)

GCTTTTTTATACTAA
CGAAAAAATATGATT

att B

GCTTTTTTATACTAA
CGAAAAAATATGATT

att P

TTTATAC TAA
GCTTTTTTATACTAA
ATT
CGAAA AAATATGATT

Resumindo