MARCO TEORICO

CROMATOGRAFIA
La cromatografa es una tcnica muy verstil que presenta distintas variantes. Esta
tcnica se puede realizar con dos objetivos diferentes que no son excluyentes:
Preparativo y Analtico. La cromatografa preparativa se realiza para separar los
componentes de una mezcla mientras que la cromatografa analtica tiene la finalidad de
identificar y cuantificar las distintas sustancias que la componen.
En toda cromatografa hay dos fases: Una mvil y otra estacionaria. La fase mvil se
mueve respecto de la estacionaria manteniendo un contacto ntimo con ella y arrastrando
a la muestra, cuyos componentes se distribuyen entre ambas fases, cumpliendo con la
ley del reparto.
Los componentes de la mezcla invierten un tiempo diferente en interactuar con cada una
de las fases, con lo que se produce la separacin y/o identificacin. Si un componente
est la mayor parte del tiempo en la fase mvil el producto se mueve rpidamente,
mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda
retenido y su salida es mucho ms lenta.
Clasificacin:
Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir atendiendo a distintos criterios.
Una clasificacin, segn est dispuesta la fase estacionaria, es:
A Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una superficie plana.
Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
B Cromatografa en columna: La fase estacionaria se sita dentro de una columna.
Segn el fluido empleado como fase mvil pueden ser:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos
Otros tipos de cromatografa son: Intercambio inico, afinidad, exclusin y otros.
Cromatografa de Papel
Es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar anlisis cualitativos ya es
sencilla de implementar y no requiere de equipamiento sofisticado. En esta tcnica la fase
estacionaria est constituida simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de una solucin de la
muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicacin. Luego el disolvente o
mezcla de disolventes empleada como fase mvil (eluente o eluyente) se hace ascender
por capilaridad. Para esto se coloca una porcin del papel en contacto con la fase mvil
dentro de un recipiente que la contiene (Cmara de desarrollo). Despus de unos
minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del papel,
se retira el papel y seca. Es importante que la cmara de desarrollo permanezca bien

tapada durante el proceso de ascenso capilar de la fase mvil (desarrollo

cromatogrfico), pues de lo contrario no se alcanza el equilibrio necesario entre el lquido
(fase mvil) y el vapor del lquido. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias
tienen color propio se debern ver manchas de distinto color separadas a lo largo del
papel. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
La cromatografa es un sistema de separacin dinmica, porque continuamente se
producen equilibrios entre los componentes de la mezcla a separar y las fases mvil y
estacionaria. El proceso de separacin se produce a causa de las interacciones entre los
componentes de la mezcla con la fase mvil y la fase estacionaria; lo cual causa la
distribucin de los componentes de la mezcla entre las dos fases. A este proceso se le
denomina particin de los componentes. Las interacciones mencionadas pueden tener su
origen en dos fenmenos:
1. La adsorcin: Que es un fenmeno de interaccin superficial por el cual tomos,
iones o molculas son retenidas en la superficie de un material. Puede ser de dos
tipos:
a Fisisorcin: Debida a fuerzas atractivas dbiles, generalmente fuerzas de
Van der Waals; es la forma ms simple de adsorcin.
b La Quimisorcin: Ocurre cuando se forma un enlace qumico
2. La resistencia: Es un fenmeno de retencin que incluye la penetracin de una
especie qumica en todo el volumen del material por lo cual se la considera como
un fenmeno msico y no superficial.
Cromatografa en Capa Fina
La cromatografa en capa fina (en ingls thin layer chromatography o TLC) es una tcnica
analtica rpida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica Orgnica. Entre
otras cosas permite:
Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar as, por
ejemplo, la efectividad de una etapa de purificacin.
Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser idnticas.
Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.
Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo desaparecen
los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber
cundo la reaccin ha acabado.
La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico o
aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lmina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o
varios disolventes mezclados (eluyente o fase mvil). A medida que la mezcla de
disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente, se produce un reparto
diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.
Determinacin Del Rf
La retencin se puede explicar en base a la competencia que se establece entre el soluto
a separar y la fase mvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase
estacionaria. As, las molculas de soluto se encuentran adsorbidas en la fase

estacionaria y a medida que se produce la elucin van siendo desplazadas por la fase
mvil. La retencin y la selectividad en la separacin dependen de los valores respectivos
de las constantes de los diferentes equilibrios qumicos que tienen lugar, que estn en
funcin de:
La polaridad del compuesto, determinada por el nmero y naturaleza de los
grupos funcionales presentes. Los solutos ms polares quedarn ms retenidos
puesto que se adsorben ms firmemente a los centros activos de la fase
estacionaria, mientras que los no polares se eluirn con mayor facilidad.
naturaleza del disolvente. As, para un mismo compuesto, un aumento en la
polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la placa.
La relacin entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen
de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas
condiciones cromatogrficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamao de la cubeta,
temperatura, etc.). Debido a que es prcticamente imposible reproducir exactamente las
condiciones experimentales, la comparacin de una muestra con otra debe realizarse
eluyendo ambas en la misma placa. Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresin:

Rf =

distanciarecorrida por el compuesto

distancia recorrida por el frente del solvente

Cromatografa de columna:
Este mtodo es utilizado para la separacin y purificacin de distintos
compuestos orgnicos que se encuentran tanto en estado lquido como
slido.
En este tipo de cromatografa la fase estacionaria, es decir, el absorbente se
coloca dentro de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para
controlar el paso de la sustancia al exterior de la columna. La fase
estacionaria se impregna con el eluyente o fase mvil, seguidamente la
mezcla organica que nos interesa separa la depositamos por la parte
superior de la fase estacionaria y as la fase mvil podr ir atravesando el
sistema. Los compuestos que se encuentran en la fase mvil poco a poco
saldrn de la columna cromatografica, y se recogen en fracciones. Las
fracciones menos polares son las que se retienen poco o nada en el
absorbente, sern las primeras en salir de la columna , en cambio las
sustancias ms polares quedaran retenida por ms tiempo en el absorbente
y a menudo es necesario el uso de varios disolventes con la finalidad de
incrementar su polaridad y ser arrastrados por estos. El tiempo que se
necesita para hacer fluir un componente en la columna se llama tiempo de retencin, este
tiempo varia de acuerdo al compuesto en las condiciones cromatogrficas. El absorbente
mayormente utilizado para la cromatografa de columna es el gel de slice. La
cromatografa en columna puede realizarse por gravedad o a media presin. Por lo
general la cromatografa a media presin produce mejores resultados que la
cromatografa por gravedad y adems la ser ms rpida es la ms utilizada.

CLCULOS EXPERIMENTALES Y RESULTADOS

Cromatografa de papel

Rf =
Rf =0.30

6.3c

1.9c

Cromatografa de capa fina

1.2
1.2c
3

Rf =

Rf3=0.4
cm

1.9
6.3

DISCUSIN DE RESULTADOS
Cromatografa de papel
Una vez iniciado el proceso cromatogrfico se pudo observar el desplazamiento de parte
de la solucin en forma vertical ascendente, esto debido a la propiedad de capilaridad
que posee y esto hace que se desplacen ascendentemente. La mancha mvil del soluto
en este caso pasa a ser el pigmento extrado obtiene un Rf el cual sirve como
identificador de pigmentos dependiendo de su valor.
La muestra en algunos casos debe permanecer a oscuras ya que la luz hace que se
produzcan diversas reacciones; se utiliz el cido clorhdrico debido que este degrada
las molculas grandes de la solucin.
El Rf obtenido de la cromatografa de papel realizada fue de 0.30.
Cromatografa de capa fina
Al finalizar el proceso de cromatografa se observ el desplazamiento de parte de la
solucin coloreado de manera vertical hacia arriba, en este caso a diferencia de la
cromatografa de papel el desplazamiento del soluto posee mayo coloracin y es mucho
ms notorio esto debido a que el material es capaz de poder adsorber mejor el soluto en
la capa fina dndole mayor visibilidad ya que se tiene como cromatofolio un material
adsorbente el cual da una cromatografa de mejor calidad.
Al igual que en la cromatografa de papel se halla el Rf para conocer el tipo de pigmento
hallado.
El Rf se el cromatograma fue de 0.4