QUMICA, CALIDAD AMBIENTAL Y LABORATORIO

Programa de Ingeniera Ambiental

ESCUELA: CIENCIAS EXACTAS E INGENIERA

PLAN: IAM1- INGENIERA AMBIENTAL- VERSIN 1.
ASIGNATURA: QUIMICA Y CALIDAD AMBIENTAL
NOMBRE DE LA PRCTICA DE LABORATORIO: DETERMINACIN DE DQO y DBO5
1. OBJETIVOS DE LA PRCTICA

Determinar la demanda qumica de oxgeno (DQO) en una muestra de agua residual, como
parmetro indicador de la presencia de materia oxidable en la muestra.
Determinar la demanda bioqumica de oxgeno (DBO5) en una muestra de agua residual,
como parmetro indicador de la presencia de materia orgnica biodegradable en la
muestra.
Familiarizar al estudiante con las principales tcnicas de anlisis para establecer la calidad
del agua.
Mostrar al estudiante el uso de kits de marcas reconocidas para la realizacin de anlisis
de parmetros fsicoqumicos en aguas.
Comparar los valores obtenidos en los anlisis de muestras de agua con los establecidos en
la normativa colombiana vigente para aguas residuales.

2. MARCO TEORICO
La demanda qumica de oxgeno (DQO) mide la cantidad de materia susceptible de oxidacin
qumica contenida en el agua. Se utilizan agentes qumicos altamente oxidantes como el
dicromato de potasio o el permanganato de potasio en medio cido, para sustituir la actividad
oxidante de los microorganismos. La oxidacin con dicromato se prefiere en muchas ocasiones
debido a su mayor capacidad oxidante. Se considera que la materia orgnica presente en la
muestra se oxida en un porcentaje mayor al 95% bajo las condiciones del ensayo. Los compuestos
orgnicos voltiles pueden generar algunas interferencias, puesto que se encuentran
principalmente en la fase vapor y no entran en contacto con el agente oxidante que se encuentra
en la fase lquida. Cuando se adiciona sulfato de plata como catalizador (Ag2SO4) se puede
promover la oxidacin de los compuestos alifticos de cadena lineal.
Existen dos (2) mtodos para realizar la determinacin de DQO: el mtodo por reflujo abierto y el
mtodo por reflujo cerrado. En el mtodo por reflujo abierto, la mayor parte de la materia
orgnica resulta oxidada por una mezcla a ebullicin de los cidos crmico y sulfrico. Se somete a
reflujo una muestra en una solucin cida fuerte con un exceso del agente oxidante. El mtodo
por reflujo cerrado, se considera ms econmico y los compuestos orgnicos voltiles pueden ser
oxidados ms eficientemente debido al mayor tiempo de contacto con el agente oxidante. Luego
de la digestin, que usualmente se lleva a cabo a 150C durante 2 horas, se deja enfriar la muestra
Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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y se determina el consumo de oxgeno a 600 nm en el espectrofotmetro, es decir se realiza esta

determinacin por mtodo colorimtrico. Este es el mtodo que se va a emplear en esta prctica.
(Mtodo 5220-D, Standard Methods).
La demanda bioqumica de oxgeno (DBO) corresponde a la cantidad de oxgeno consumido para la
descomposicin bioqumica de la materia orgnica contenida en una muestra en condiciones
aerobias. La descomposicin bioqumica hace referencia a la accin de microorganismos que
oxidan la materia orgnica con el fin de obtener energa y as poder fabricar nuevas clulas.
Para la determinacin en el laboratorio de la DBO, esta degradacin de la materia orgnica se lleva
a cabo durante un intervalo de tiempo especfico a una temperatura controlada, en condiciones
de oscuridad. Durante una prueba de DBO5, se considera el oxgeno requerido para:
-

Oxidar la materia orgnica DBO del carbono: requerimiento de oxgeno del carbono
para oxidarse a CO2
Oxidar las formas reducidas del nitrgeno DBO del nitrgeno: proceso de nitrificacin
(oxidacin del amoniaco a nitritos y a nitratos).

Si no se quiere cuantificar la DBO del nitrgeno debe utilizarse un inhibidor de bacterias

nitrificantes, que son las responsables de la oxidacin del amoniaco. La manera ms comn de
determinacin de DBO es la prueba DBO5, donde el intervalo de tiempo estudiado es de 5 das. En
la prctica, se considera que al cabo de 20 das, la materia orgnica se descompone casi en su
totalidad. Se considera que al cabo de 5 das, entre el 70 80% de la materia orgnica ha sido
descompuesta. Durante estos 5 das, las muestras se incuban a 203C porque se considera una
temperatura normal a la cual los cuerpos de agua oxidan la materia orgnica y a un pH entre 6,5 y
7,5. La reaccin puede representarse tericamente as:
DBO del carbono:

Cn H aOb N c n a b 3 c O2 n CO2 a 3 c H 2O cNH 3

4
2
4
2
2
Los principales productos de degradacin son: CO2, NH3, H2O.
DBO del nitrgeno:

3 bacterias
NH 3 O2 HNO2 H 2O
2
bacterias
2 HNO2 1 O2 HNO3
2

1 2

NH 3 2O2 HNO3 H 2 O

Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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La velocidad de las reacciones est gobernada por la poblacin microbiana y por la temperatura.
Debido a que el crecimiento bacteriano requiere nutrientes tales como nitrgeno, fsforo y
metales traza, stos se aaden al agua de dilucin, la cual es tamponada con el fin de ajustar pH.
Principio: El mtodo consiste en llenar con muestra diluida un recipiente hermtico de volumen
conocido e incubarlo a la temperatura establecida durante 5 das. El oxgeno disuelto se mide
antes y despus de la incubacin y la DBO se calcula mediante la diferencia entre el OD final e
inicial. En esta prctica no se realizar inhibicin de la nitrificacin.

3.

EQUIPOS, INSTRUMENTOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Espectrofotmetro

Kit para anlisis de DQO de HACH por el mtodo 8000

Termoreactor a 150C
Gradilla
Incubadora controlada por termostato a 20C1
Oxmetro Oxi 3310, marca WTW
Botellas de incubacin Winkler de 300 mL (2 por grupo)
Soluciones que se deben preparar previamente al ensayo:

Atencin: Los siguientes procedimientos describen la preparacin de 1L de solucin. Realizar los

clculos pertinentes para preparar 100 mL de las soluciones 1 a 4.
1. Solucin tampn de fosfato: Disuelva 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de
Na2HPO47H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y diluya a
1 L. El pH de la solucin preparada debera ser de 7,20.1 sin ajustes adicionales. Si se
presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo.
2. Solucin de sulfato de magnesio: Disuelva 22,5 g de MgSO47H2O en agua destilada y
diluya a 1L. Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo.
3. Solucin de cloruro de calcio: Disuelva 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluya a 1L. Si se
presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo.
4. Solucin de cloruro de hierro (III): Disuelva 0,25 g de FeCl36H2O en agua destilada, diluya
a 1L .Si se presenta alguna seal de crecimiento biolgico, descarte este reactivo.
5. Una solucin cida y una bsica para ajuste de pH
Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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i. Solucin cida cido Sulfrico 1 N. En un vaso de precipitados coloque

alrededor de 500 mL de agua destilada y agregue muy lentamente y mientras agita,
28 mL de cido sulfrico concentrado; diluya a 1 L.
ii. Solucin bsica Hidrxido de Sodio 1 N. Disuelva 40 g de hidrxido de sodio en
agua destilada y diluya a 1 L.
6. Solucin de glucosa-cido glutmico: Seque a 103 C por 1 h glucosa (grado analtico) y
cido glutmico (grado analtico). Disuelva 150 mg de glucosa y 150 mg de cido glutmico
en agua destilada y diluya a 1 L. Preparar esta solucin inmediatamente antes de usarla.
7. Cepa: Bacteria Escherichia Coli preparada el da anterior en medio acuoso de glucosa y
cido glutmico (150 mg de cada reactivo por 1 L de solucin).
4. PROTOCOLOS: PROCEDIMIENTOS- MTODOS
4.1. Demanda Qumica de Oxgeno - DQO
Toma de muestras
El contenido orgnico de las muestras de agua puede degradarse rpidamente por accin de los
microorganismos mientras stas estn almacenadas. Es aconsejable realizar la determinacin de
DQO en el menor tiempo posible luego de la recoleccin de la muestra o refrigerarla hasta una
temperatura igual o inferior a 4C. Para una mejor preservacin de la muestra, ajustar el pH a un
valor inferior a 2 utilizando H2SO4 concentrado.
Nota: Revisar Anexo 1 para verificar conservacin de las muestras y tiempo mximo de
almacenamiento.

Los protocolos para la determinacin de DQO por espectrofotomera, son los protocolos
determinados por HACH , que se encuentran anexos a la presente gua.
4.2. Demanda Bioqumica de Oxgeno - DBO
Toma de muestras
El contenido orgnico de las muestras de agua puede degradarse rpidamente mientras stas
estn almacenadas. Es aconsejable realizar la determinacin de DBO en el menor tiempo posible
luego de la recoleccin de la muestra o refrigerarla hasta una temperatura igual o inferior a 4C. Se

Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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debe eliminar la entrada de luz con el fin de evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de
OD.
Nota: Revisar Anexo 1 para verificar conservacin de las muestras y tiempo mximo de
almacenamiento.

Preparacin del agua de dilucin (agua destilada + reactivos)

-

Preparar 2 L de agua de dilucin agregando 1 mL de cada una de las siguientes soluciones, por
cada litro de agua de dilucin a preparar: solucin tampn de fosfato, solucin de sulfato de
magnesio, solucin de cloruro de calcio, solucin de cloruro de hierro (III).
Agitar en una botella cerrada para saturar el agua con OD.
Preparar dos (2) botellas Winkler con esta agua de dilucin e incubarlas (medir OD antes y
despus de la incubacin). Los resultados obtenidos sern para todos los grupos de
laboratorio.

Preparacin del agua de dilucin + cepa (agua destilada + reactivos + cepa)

-

Preparar dos (2) botellas Winkler con 2 mL de cepa y diluir hasta el volumen de la botella
Winkler. Incubarlas las botellas (medir OD antes y despus de la incubacin). Los resultados
obtenidos sern para todos los grupos de laboratorio.

Preparacin del control de glucosa-cido glutmico + cepa (solucin glucosa - cido glutmico +
cepa)
-

Preparar dos (2) botellas Winkler con 2 mL de cepa y diluir con una solucin al 2% de la
solucin de control patrn de glucosa cido glutmico y diluir hasta el volumen de la botella
Winkler. Incubar las botellas (medir OD antes y despus de la incubacin). Los resultados
obtenidos sern para todos los grupos de laboratorio.

Preparacin de la dilucin aproximada de la muestra

-

Agitar la botella que contenga la muestra para homogenizacin antes de tomar alcuotas de
muestra.
Cada grupo debe preparar una (1) botella Winkler tomando un volumen de muestra
determinado por la siguiente tabla, y completando el volumen de la botella (300 mL) con
agua de dilucin (agua destilada + reactivos).

Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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Fuente: Protocolo IDEAM

* Agua cruda: agua que no ha sido sometida a ningn tratamiento (antes de potabilizar)

Una vez el volumen de la muestra est determinado, agitarla para homogenizacin y servir en
un vaso de precipitado. Ajustar el pH entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico 1 N o hidrxido de
sodio 1 N. Dosificar estos reactivos gota a gota con una pipeta Pasteur y mezclar en cada
adicin para homogenizar la solucin.
En resumen:
Blanco
Contiene:
nicamente agua de dilucin (agua destilada + reactivos)

Duplicado

Contiene:
2 mL de cepa + agua de dilucin

Duplicado

Contiene:
2 mL de cepa + 6 mL de solucin patrn de glucosa-cido glutmico + agua
de dilucin

Duplicado

Contiene:
2 mL de cepa + muestra + agua de dilucin

Una por
grupo

Blanco + cepa

Control + cepa

Muestra +
cepa

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Procedimiento para la determinacin de oxgeno disuelto (OD)

Para la determinacin de OD, se recomienda llenar la botella Winkler hasta la mitad para evitar
prdida de la muestra cuando se introduce el electrodo.

Determinar OD inicial de cada

botella
Incubar a 20C durante 5 das

Determinar OD al cabo de 5 das de

incubacin
Determinar la DBO con la ecuacin [1]

Clculo de la DBO:

[1]

OD
DBO5 mg O2
L

OD

consumido

consumido

muestra

OD

consumido

cepa

Vm

OD t 0 OD t 5d

El oxgeno medido a los 5 das de la incubacin, recibe el nombre de oxgeno residual. V

corresponde al volumen de la botella Winkler y Vm corresponde al volumen de la muestra de
agua residual.

Validacin del mtodo:

-

El consumo de oxgeno en el blanco sin cepa debe ser <0,2 mg/L.

El consumo de oxgeno para agua de dilucin con cepa en buenas condiciones debe estar
entre 0,6 1,0 mg/L.
La DBO debe ser mayor a 2 mg/L y el OD residual debe ser mayor o igual a 1 mg/L.
La DBO del control (solucin de glucosa-cido glutmico) debe encontrarse en 19830 mg/L.

Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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5. PREGUNTAS

I.

Analice los valores de DBO y DQO comparados con otros estudios de aguas
residuales, con normas colombianas y con la composicin tpica de un agua
residual.

II.

Determine la relacin DBO/DQO de su muestra de agua residual y analice si la

muestra presenta una fraccin importante de material biodegradable o no.

III.

Para la eliminacin de materia orgnica en su muestra, un tratamiento biolgico

sera tcnicamente viable? Justifique su respuesta.

6. REFERENCIAS

Standard methods for the examination of wter ans wastewater. American Public Health
Association, American Water Works Association, Water Pollution Control Federation.
20ed., New York, 1998.
Calidad del agua (2002). Jairo Alberto Romero Rojas. 1 Edicin.
Ingeniera de aguas residuales. Metcalf & Eddy. Volumen 1. Tratamiento, vertido y
reutilizacin. 3 edicin.
Sawyer, C.N., McCarty, P.L., Parkin, G.F. (2003) Chemistry for environmental engineering
and science, 5th edition. McGraw Hill.

Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016

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Anexo 1. Conservacin de las muestras

A continuacin se presentan los requerimientos para la conservacin de las muestras:

Fuente: IDEAM, 2007. Instructivo para la toma de muestras de aguas residuales.

Elaborado por: Ing. Luisa Fernanda Gonzlez, ltima actualizacin Ing. Marie Jos Chry 04/2016