Barreras para la transmisin de DNA

mitocondrial masculino en el desarrollo del

espermatozoide.
Sumario
A travs de la filogenia eucariota, la descendencia usualmente hereda el
genoma mitocondrial de solo uno de los padres, en el caso de los animales, la
madre. Aunque mecanismos que eliminan las mitocondrias que deriven del
padre en el cigoto han sido buscados, la etapa del desarrollo en el cual la
transmisin paterna de DNA mitocondrial est restringida es desconocida en la
mayora de los animales. Aqu, mostramos que la mitocondria de
espermatozoides de Drosophila madura no tiene DNA, y descubrimos dos
procesos que eliminan DNA mitocondrial durante la espermatognesis. Al
visualizar nucleoides de DNA mitocondrial se revel su abrupta desaparicin de
espermtidas en el desarrollo en un proceso que requiere la nucleasa
mitocondrial: Endonucleasa G. En mutantes del gen de la endonucleasa G, los
nucleoides persistentes son eliminados de las espermtidas por un proceso de
remodelacin celular que recorta y da forma a las colas de las espermtidas.
Nuestros resultados muestran que el DNA mitocondrial es eliminado durante la
espermatognesis, de esta manera eliminando la capacidad del
espermatozoide de transmitir el genoma mitocondrial a la siguiente
generacin.
Introduccin
Aproximadamente todas las eucariotas examinadas hasta la fecha heredas el
DNA mitocondrial (mtDNA) desde un solo padre. Esta herencia uniparental, la
cual ha intrigado a genetistas desde la dcada de los 50, es el principio clave
usado en trazar linajes evolutivos y migracin de poblaciones, y es un atributo
fundamental de numerosas enfermedades hereditarias. Aunque el propsito de
esta herencia restringida es difcil de probar, una propuesta sugiere que esta
herencia uniparental existe como forma de frustrar la competicin entre
mtDNA, la cual podra comprometer el bienestar del organismo. Por ejemplo,
en Saccharomyces cerevisiae, en cual cada padre puede transmitir mtDNA,
varias mutaciones de mtDNA que confieren ventaja replicativa se esparcen a
toda la progenie en un solo cruce, a pesar que adems perjudica la respiracin
aerbica de la misma. Muchos modelos han sido propuestos para explicar la
base molecular de la herencia uniparental. En un modelo simple, la fusin de
gametos de tamao asimtrico crea un cigoto albergando casi nicamente el
genotipo de mtDNA del gameto de mayor tamao. Sin embargo, la herencia
uniparental tambin ocurre en el alga unicelular, Chlamydomonas reingardtii, a
pesar de que los gametos son de tamao simtrico. Adicionalmente, el mtDNA
paternal es confiablemente transmitido en mejillones azules del gnero
Mytilus, a pesar del relativamente pequeo tamao del gameto paterno. Es

ms, mecanismos activos que previenen la transmisin paternal eliminan la

competicin ms efectivamente que efectos de dilucin. En animales (usa la
palabra metazoos), donde el mtDNA es generalmente heredado de la madre,
varias barreras activas han sido propuestas para limitar la herencia paternal.
En el pez japons medaka, Oryzias latipes, el mtDNA paternal desaparece en
las mitocondrias del espermatozoide despus de la fertilizacin, y en
embriones bovinos, las mitocondrias paternales son eliminadas durante las
primeras dos divisiones celulares del cigoto despus de la fertilizacin. Para
definir a un mayor nivel las barreras moleculares para la herencia paternal en
animales, seguimos el destino de mtDNA paternal en Drosophila Melanogaster,
un organismo modelo seguible experimentalmente donde mtDNA es heredado
maternalmente. Aqu nosotros identificamos y caracterizamos dos barreras en
el desarrollo para la transmisin de mtDNA paternal que actan antes de la
fertilizacin. En contraste con la barreras propuestas previametes. Estos
mecanismos, que remueven mtDNA de la mitocondria del espermio durante la
Figure 1. MtDNA paternal es excluido
de espermios maduros y embriones
fertilizados.
(A) La secuencia de nucletidos
eliminada en mt:ND2del1 (resaltado
amarillo, y el sitio de restriccin BgIII
(letra roja) que fue sealizada en la
generacin de mt:ND2del1. Flechas
muestran la porcin 3 de los primers
de PCR que se alinean al tipo natural
(mt:ND2), pero no al mtDNA mutante
(mt:ND2del1).
(B) Esquema de cruce y diseo
experimental.
(C) Genotipos PCR de las lineas
parentales que fueron cruzadas para
seguir mtDNA paternal naturalen (D) y
(E).
(D) MtDNA paternal medido por qPR
fue transferido a ovulos mutantes con
delecin
(mt:ND2del1).
(E) qPCR midiendo la cantidad de
mtDNA
(mt:ND2)
en
espermios
almacenados por hembras mt:ND2del1.
Cromosoma Y (triangulo rojo) y el
nmero de copias de mtDNA de
espermios
en
un
representativo
extracto de rgano de almacenaje de
espermios en relacin a las curvas
estndar (azul) son graficadas en una
base por hembra. En (D) y (E), las
curvas estndar fueron generadas
aadiendo 100-12500 copias de
mt:ND2 (crculos azules) o DNA de
cromosoma Y (tringulos azules) a
extractos control, y fueron graficados
en una base por embrin y por
hembra. El nmero de copias de
mtDNA por espermio estara dado por

espermatognesis, sugieren que el padre impone la herencia de parte de la

madre exclusivamente del mtDNA.
Resultados
MtDNA paternal es excluido de espermatozoides maduros y de
embriones fertilizados

Para inicialmente caracterizar la herencia de mtDNA en la D.

Melanogaster usamos PCR para seguir el mtDNA paternal. Previamente,
aislamos una lnea de moscas homoplasmicas saludables para una delecin de
9 pares de bases que elimin un sitio bgIII en el gen mt:ND2 del mtDNA
(mt:ND2del1). Los primers de PCR que terminaban dentro de la delecion
mt:ND2del1 amplificaron el estado natural pero no mt:ND2 del1 mtDNA. Para
cuantificar la cantidad de mtDNA transferido al ovulo, cruzamos machos
naturales con hembras mt:ND2del1 y usamos PCR cuantitativo (qPCR) para
medir la cantidad de mtDNA natural en los embriones de 0 a 2 horas de edad.
Sin embargo, incluso a pesar de que las grandes mitocondrias del espermio son
transferidos al ovulo, no detectamos mtDNA fuera de lo normal (seal obtenida
de embriones en donde ambos padres son mt:ND2 del1), y demostramos que hay
menos de un genoma paternal por ovulo (Figure 1D). A partir de este resultado,
concluimos que poco o nada de mtDNA es transferido al ovulo, o que es
rpidamente eliminado despus de la fertilizacin.
Si el mtDNA fue rpidamente eliminado del ovulo, entonces estara
todava presente en el espermio maduro. Hembras apareadas retienen cientos
de espermios maduros en rganos de almacenamiento de espermios. En
extractos mt:ND2del1 de espermios de rganos de retencin de espermios,
contamos el nmero de espermios con primers cromosoma-especificos Y y el
nmero de mtDNA paternal con primers mt:ND2-especificos. Nuestros
experimentos motraron mucho menos de un genoma mitocondrial por
espermio (Figura 1E). Por lo tanto, el genoma mitocondrial, u por ende la
capacidad del espermio de D. melanogaster para contribuir a la herencia de
mtDNA, es eliminada antes de la fertilizacin.
Nucleoides de mtDNA desaparecen en la elongacin final de las
espermatidas
Para seguir el destino del mtDNA durante la espermatognesis (figura 2A), se
marcaron testculos con PicoGreen (Figura 2)y otros colorantes fluorescentes de
unin a DNA (figura S2) los nucleoides de mtDNA aparecieron como puntos
lagrimales brillantes. Cuatro ciclos mitticos y dos meiticos con una
citocinesis incompleta produjo un quiste con 64 espermatidas que sufri
una extraordinaria transformacin fsica en estrecha sincrona a medida que
maduraba. En espermatidas en estado cebolla, la tincin Picogreen fue
restringida al ncleo y al neberkern que es una agregacin esfrica
especializada de la mitocondria (figura 2B). En promedio 261 nucleoides fueron
contados en cada neberkern. (figura 2G) .

Imagen
(a) Un resumen esquemtico del desarrollo post meiotico respresentado el nucleo
(verde), mitocondrias (rojas) y conos de inversin (morados).
(b) Espermtidas en estado de cebolla manchadas por DNA (PicoGreen: verde), y
las mitocondrias (mito-YFP: rojo). Cada ncleo (n) se empareja con una
estructura mitocondrial grande, la nebenkern (MT). (C-E) Elongacin de haces
de espermatidas manchadas de ADN (PicoGreen: verde) y actina (faloidina:
prpura).
(c) Manojo de la etapa de elongacin 560 um de longitud. Grupo de nucleos
normales de espermatidas (n), nucleo apical de espermatida desechada (n) y el
nucleo de una celula somatica que pertece a un quiste celular (n)forma
grandes focos de tincin. Nucleoides ADNmt (amplificados en el recuadro)
forman focos mucho ms pequeas a lo largo del haz de cola.
(d) (D y E) Dos manojos en etapa tarda de elongacin, 1,729 um (D) y 1,747 um (E)
de largo. Los nmeros indican la distancia (um) de la imagen desde la punta
basal del paquete. Las barras de escala son 10 um.(F) Densidad Nucleoide
(nmero de Nucleoides / um) a lo largo de las longitudes de cuatro haces de
espermatidas representativas (cada paquete es una lnea de distinto color)
indicada la longitud (um).(G) Nmero medio de Nucleoides por espermtidas
etapa de la cebolla (O), alargando espermtidas <1,700 mm (E1), espermticas
alargadas 1,700-1,800 mm (E2), y espermatidas elongadas > 1.800 mm (E3).

Las barras de error indican la desviacin estndar en por lo menos tres quistes.
Vase tambin la figura S2.

Cuando las espermatidas comenzaron a desarrollar colas, el neberkern en

forma de cebolla de cada espermatida se transforma en dos mitocondrias que
se alargan al lado del axonema microtubular en extensin. Los 64 axonemas y
su mitocondria asociada (128 en total) se alargan como un ramillete paralelo.
Las colas crecen enormemente largas, sobre 1,800 um, y las dos
mitocondrias de cada espermatida se extienden en toda la longitud de
cada cola. Los ramilletes elongan al ritmo de 0.7 um/min, y su longitud provee
una medida para el progreso del desarrollo. A lo que la elongacin progresa, los
nucleoides (promedio de 332 por espermatida: Figura 2G) se esparcen a lo
largo de la mitocondria en extensin (figura 2C), convirtindose casi uniforme a
lo que las colas se acercan a su longitud final (Figura 2F). Sin embargo, los
ramilletes que se extienden entre 1700 y 1800 um mostraron evidencia de
desaparicin de nucletidos a medio camino a lo largo de las colas, sin cambiar
su abundancia en el extremo apical (Figura 2D y 2F). Mas dramticamente, a
algunos ramilletes ms largos que 1750 mm (Figura 2E), y a todos los
ramilletes ms largos que 1800 mm les faltaban nucletidos a lo largo de toda
su longitud. Interpretamos esto como una ola de destruccin de mtDNA
que empieza basalmente y progresa hacia apical para completarse durante los
100 um finales de cada elongacin de espermatidas: lo que corresponde a un
periodo de alrededor de 70 min. El tiempo que eliminacin de nucleides fue
marcada por el reclutamiento de actina dentro de los conos perinucleares de
inversin (figura 2D y 2E) que contribuyen a la subsecuente etapa de
individualizacin. Concluimos que los nucleoides mitocondriales son eliminados
en coordinacin con la elogacion del espermatozoide en D. melanogaster.
Eliminacion de nucleoides de mtDNA durante la elongacin de
espermatidas requiere EndoG
Se
caracteriz el mecanismo que remueve mtDNA durante
la
espermatognesis. Dado que la mitocondrias son retenidas durante la
espermatognesis, los nucleoides son eliminados desde la mitocondria del
espermio. Se plante la hiptesis de que una nucleasa podra estar
involucrada, y buscamos identificarla genticamente. Una pantalla informtica
para las nucleasas candidatas identific cinco genes homlogos, incluyendo
la nucleasa mitocondrial, Endonuclasa G, que haba predicho seales que
tienen como objetivo la mitocondria. Cuatro de las EndoG homologas fueron
previamente descaracterizadas, las llamamos Testis-EndoG-Like (Tengl)
1-4 debido a su patrn especifico de expresin en la red de testis. Las
mutaciones eliminaron cuatro de los genes Tngl, pero incluso en los mutantes
cuadruples se eliminaron los nucleoides de las espermatidas en elongacin a
tiempo. Sin embargo, una mutacion en el arquetipo expresado como
ubiquitina de este grupo, EndoG, previno la eliminacin de nucloides al
tiempo que corresponda.

EndoGMBO750 es una alelo mutante de endoG creado por una insercin con
minos transposon en las secuencias codificantes para las protenas de EndoG
(Figura 3A). EndoGMBO750 fue viable y frtil como un homocigoto o cuando
trasheterocigotos con una gran delecion removia EndoG (EndoG MBO750/Df). RT-PCR
mostro que la insecion del transposon elimina transcritos de longitud total de
EndoG pero algunas secuencias 5 persistieron (Figura 3B). En grupos de
espermatidas mutantes de EndoG, los nucleoides fallaron al ser eliminados
de la porcin apical de los ramilles apicales del espermio durante la elongacin
de la espermatida (figura 3CD9) y persistieron durante la individualizacin de
las espermatidas (Figura 3D), un proceso de 10 horas siguiendo la elongacin
del espermio. Un control para verificar que la insercin de transposon
EndoGMBO750 causo la persistencia de los nucleoides, con precisin extrajimos el
transposon y observamos que los nucloides desaparecan como en el tipo
normal (Figura 3D). en un control adicional, suprimimos el fenotipo mutante
EndoGMBO750 expresando un transgen EndoG en la lnea germinal de los
mutantes EndoG (figura 3D).
Dado que la eliminacin de mtDNA dependiente de EndoG ocurre en el preciso
momento del desarrollo del espermio, planteamos la hiptesis que la activacin
de EndoG podra marcar el paso de la eliminacin de mtDNA. Una forma en la
cual Endo G podra ser activada es por la remocin de un inhibidor. D.
melanogaster codifica un inhibidor de EndoG (EndoGI), y una perdida de la
funcin en mutantes EndoGL ha sido caracterizada. Sin embargo, no
observamos eliminacin prematura de nucleoides en la elongacin de
espermatidas mutantes EndoGIe00915*(Figura 3E), sugiriendo que EndoGI no
regula
los
tiempos
de
eliminacin de
mtDNA.
Por
esta razn, la
regulacin del
proceso
de
eliminacin de
nucleoides
EndoGDependiente
con
ritmo
marcado por el
desarrollo sigue
en las sombras.
Figura
3.
Eliminacin
del
ADNmt
Nucleoide
durante
el
alargamiento de
la espermtide requiere EndoG

(A) Esquema que muestra la ubicacin aproximada de la insercin del transposn Minos
MB07150 (tringulo rojo) en relacin con los residuos catalticos de EndoG (oval amarillo).
(B)RT-PCR medicin cuantitativa de la abundancia de ARNm EndoG en las moscas macho
adultas. Las posiciones aproximadas de los tres conjuntos de primers utilizados para medir la
abundancia de las diferentes regiones del EndoG mRNA se diagrama en (A). Las barras de error
representan la desviacin estndar de tres extractos. (C-E) haz de espermtide manchadas de
ADN (verde), y la actina (prpura). (C) A finales de la etapa de elongacin Endo GMB07150 haz
mutante, 1.830 mm de largo. Los nmeros indican la distancia (mm) de la imagen desde la
punta basal del haz. (D) abultamiento qustico de haces de espermatidas del genotipo indicado
durante la individualizacin de la espermtide. Los nmeros indican el porcentaje de la longitud
del haz que la protuberancia qustica ha viajado. Ncleos raros de espermatides (N) sacrificados
durante el proceso de individualizacin. (E)Etapa de elongacin EndoGI haz mutante, 1.280 mm
de largo. Los nmeros indican la distancia (mm) de la imagen desde la punta basal del haz. Las
barras de escala
son de 10 mm.
Vase tambin la
Figura S3.

Modo
de
respaldo de ADNmt en la eliminacin asociados a la individualizacin
de la espermtide.
Si la destruccin de ADNmt durante la elongacin de esperma es la nica
barrera a la transmisin paterna, a continuacin, la mutacin de EndoG podra
permitir la transmisin paterna. Sin embargo, qPCR no pudo detectar ADNmt
paterna en huevos fertilizados por padres mutantes de EndoG o ADNmt en
EndoG mutante en espermatozoides maduros (Figura S1). Llegamos a la
conclusin de que la eliminacin del ADN mitocondrial, an retardada, todava
se produce durante el desarrollo del esperma EndoG mutante. A continuacin
seguimos Nucleoides de ADNmt en EndoG espermatozoides mutantes para
identificar un mecanismo de respaldo responsable de su eliminacin. En
contraste con espermtidas de tipo salvaje, nucleoides en EndoG mutantes
persistieron ms all del alargamiento de espermtidas a la etapa de
individualizacin. Durante la individualizacin de espermtidas, actina contiene
conos de inversin, que se forman inicialmente en torno a cada uno de los 64
ncleos de espermtidas, que se mueven apicalmente juntas. A medida que
viajan a lo largo del axonema, los conos invierten las colas de espermtidas en
la membrana, de esta manera se individualizan las espermtidas, mientras
se limpian las colas del citoplasma ajeno. Los conos eliminan estructuras tan
pequeas como ribosomas, y recortan la masa mitocondrial, produciendo
estructuras esfricas mitocondriales como residuos (Figura 4D) (Tokuyasu et
al., 1972a, 1972b). Los conos de inversin, junto con los residuos que se
acumulan, atraviesan la longitud de la cola de los espermatozoides en una
estructura denominada la protuberancia qustica (CB), en ltima instancia, la
produccin de una bolsa de residuos (WB) que se extruye desde el extremo
apical de las colas. En el EndoG mutante, observamos Nucleoides de ADNmt
por delante (Figura 4B00), pero no detrs (Figura 4B) del CB. Adems,
nucleoides de ADNmt se acumulan en el CB (Figura 4B0), como el CB es
atravesada en regiones de la cola con ADNmt residual (Figura 4C). Dadas las
capacidades establecidas del proceso de individualizacin, y nuestras

observaciones, proponemos un segundo mecanismo para eliminar el ADNmt de

las mitocondrias de esperma en el que el complejo de individualizacin que
pasa barre los Nucleoides restantes y los descarta en la bolsa de residuos. Este
segundo modo de eliminacin nucleoide ADNmt slo se hizo evidente una vez
que el modo de eliminacin dependiente de EndoG se ha visto comprometida
con el EndoG mutante(Figura 4E).
Espermatozoides
nucleasa

EndoG

mutante

tienen

actividad

residual

de

A medida que seguimos el destino de la nucleoides de ADNmt en el EndoG

mutante, nos dimos cuenta de que los nucleoides no son totalmente estables.
Adems de la desaparicin de nucleoides de la regin basal (nuclear) de la cola
antes de la individualizacin, el nmero de nucleoides recogidos por el CB
nunca se acerc el nmero total de nucleoides por haz, aunque ninguno fue
dejado atrs (Figura 4C). La eliminacin residual de nucleolo en el EndoG
mutante podra ser debido a otras nucleasas, y / o a la actividad residual de la
protena EndoG MB07150. Para determinar si las cuatro protenas Tengl podran
proporcionar una actividad alternativa que contribuye a la eliminacin de
ADNmt, hicimos moscas mutantes para los cinco ortlogos EndoG y
examinamos la desaparicin de nucleoides de ADNmt. La cuantificacin de
Nucleoides mostr que los multiples hombres mutados se comportaron muy
similar a la mutante EndoG MB07150 (Figura 4C). Llegamos a la conclusin de que
las cuatro protenas Tengl, a lo sumo, hacen una contribucin menor a la
eliminacin residual de ADNmt en el EndoG mutante. Para probar si
EndoGMB07150 tiene actividad residual, se compar la severidad del fenotipo de
las moscas homocigticas para EndoGMB07150 (dos copias de EndoGMB07150) para el
fenotipo de las moscas transheterocigotas para EndoG MB07150 y una deficiencia
para el locus (una copia de EndoG MB07150). La deficiencia de transheterocigoto
mostr un pequeo incremento en el nmero de nucleoides acumulados en el
CB (Figura 4C). Este sostiene que EndoG MB07150 tiene actividad residual, una
parte del cual se pierde cuando se retira una copia del locus. Llegamos a la
conclusin de que la actividad EndoG residual es responsable de al menos
parte de la destruccin residual en nuestro ADNmt mutante. En la actualidad,
no est claro qu cantidad de la eliminacin residual de ADNmt es debido a la
actividad restante de EndoG MB07150 y cunto podra ser debido a la accin de
nucleasas adicionales, no identificadas. No obstante, EndoG claramente
contribuye a la desaparicin normalmente rpida y completa del ADNmt
Nucleoides.
Discusin:
Nuestros resultados demuestran que en D. melanogaster, la herencia paterna
de ADNmt est restringido por los mecanismos que eliminan ADNmt del
espermaozoide en desarollo. Adems de nuestros hallazgos, el ADNmt parece
ser removido de espermatozoides en desarrollo en otras especies. Por ejemplo,
el nmero de copias de ADNmt declina durante la espermatognesis humana
(Larsson et al., 1997), y la extremadamente baja abundancia de ADNmt (media

de 1,4 copias por espermatozoides) en el esperma altamente purificado

condujo a la sugerencia de que la mayora del esperma humano careca de
ADNmt (mayo -Panloup et al., 2003). El esperma de los ratones y los peces
medaka, Oryzias latipes, tambin tienen reducidos niveles de ADNmt
(Nishimura et al, 2006;.. Shitara et al, 2000; Hecht et al., 1984). Aunque no
est claro si el ADNmt se elimina de todos los espermatozoides de animales
tan eficientemente como se elimina en D. melanogaster, parece que otros
organismos tambin muestran una disminucin del desarrollo en el ADNmt en
la espermatognesis. Los mecanismos moleculares que eliminan el ADNmt de
los espermatozoides de humanos, ratones y peces medaka son actualmente
desconocidos. En C. reinhardtii, se ha propuesto una nucleasa para digerir ADN
mitocondrial para hacer cumplir la herencia uniparental del ADNmt, pero an
no se ha identificado (Aoyama et al., 2006). En la Arabidopsis thaliana (que
carece de un homlogo de EndoG), una nucleasa conservada en las
angiospermas elimina ADNmt dentro de la mitocondria durante el desarrollo
del polen (Matsushima et al., 2011). Nuestro trabajo involucra la nucleasa
mitocondrial conocidahasta ahora, EndoG, en la temprana eliminacion de
ADNmt durante la espermatognesis del D. melanogaster. Trabajo previo en C.
elegans mostr que el EndoG contribuy a la destruccin del ADN en cadveres
de apoptosis, y la enzima se cree que est almacenado con otras protenas
proapoptticos en el espacio intermembrana de la mitocondria (Li et al., 2001).
Sin embargo, estudios ms recientes cuestionaron el papel de EndoG en la
apoptosis, y argumentan que EndoG reside en la matriz mitocondrial, donde se
propone que participa en la replicacin del ADN mitocondrial, el procesamiento
mtRNA, y la biognesis mitocondrial (David et al, 2006;. Co TE' y Ruiz-Carrillo,
1993;. McDermottroe et al, 2011). Nuestros hallazgos sugieren una funcin
para EndoG en la eliminacin de ADNmt dentro de las mitocondrias, aunque
ser necesario trabajos futuros para comprender plenamente la totalidad y la
regulacin de esta funcin. Adems de la eliminacin de ADNmt dependiente
de EndoG, se encontr que un proceso de remodelacin celular que recorta y
da forma a los espermatozoides del D. melanogaster puede eliminar ADNmt
residual. En otras especies, el citoplasma se recorta de manera similar en el
desarrollo de espermatidas . En los mamferos, este descarte de recorte de al
menos algunas mitocondrias de cada espermatida en el cuerpo residual
(Breucker et al, 1985;.. Hecht et al, 1984), sugiere que la remodelacin celular
contribuye a los bajos niveles de ADNmt en el esperma de otros animales. La
mayora de las barreras a la transmisin de ADNmt paterno se han propuesto
anteriormente para actuar en, o despus de la formacin de cigoto. Por
ejemplo, simple dilucin de una pequea parte de ADNmt de la esperma por la
contribucin del gran huevo es la hiptesis para limitar pasivamente la
herencia de mtDNA paternal (Alberts et al., 1994). Adems, la destruccin
selectiva de las mitocondrias paternas se produce a principios de los cigotos de
varios animales (Sutovsky et al., 1999; Sato y Sato, 2011; Rawi et al., 2011).
Adems, los casos inusuales de transmisin de ADNmt paterno en cruces de
especies seala una restriccin en la herencia de ADNmt paternal despus de
la fecundacin (Kaneda et al, 1995;.. Kondo et al, 1990). Sin embargo, la
eliminacin eficaz del ADNmt durante la espermatognesis del D.

melanogaster nos impidi la evaluacin de la contribucin de los procesos

posteriores a cigticos en la eliminacin del ADNmt paterno. Adems, no
podamos pasar por alto los mecanismos del pre-cigoto, ya que el proceso de
individualizacin, que elimina el ADNmt, tambin se requiere para la
produccin de esperma. Es importante destacar que, si existen o no otras
barreras para la transmisin de ADNmt paterno, la eliminacin de ADNmt en
los espermatozoides en desarrollo elimina la potencial contribucin de
herencia mitocondrial paterna. Para concluir, nos gustara considerar por qu
los mecanismos podran haber evolucionado para eliminar ADNmt de los
espermatozoides. Dado que la herencia biparental de ADNmt es rara, es de
suponer que conlleva una desventaja. En consecuencia, un espermatozoide
que transmite su ADNmt pondra el cigoto resultante en desventaja, mientras
que un espermatozoide que elimin su ADNmt producira un cigoto ms xito.
La ventaja conferida a los espermatozoides sin ADNmt podra proporcionar un
impulso evolutivo que actuara ampliamente para promover la evolucin de los
mecanismos que actan en la espermatognesis para limitar las contribuciones
paternales de ADNmt a la progenie.

Figura 4. residual ADNmt nucleoides se eliminan de EndoG mutante esperma durante

espermtide individualizacin (A-A00, B00-B) Dos individualizar los paquetes de
esperma-cola manchadas de ADN (verde) y actina (prpura). EndoG MB07150 / (A-A00)
y EndoG MB07150 / Df (B-B00) Paquetes de las imgenes impresas por delante de la
protuberancia qustica (A00 y B00), el bulto qustica (A0 y B0), y detrs de la
protuberancia qustica (A y B ). Las puntas de flecha indican ejemplos de Nucleoides
ADNmt. Las barras de escala son de 10 mm. (C) Nmero de Nucleoides en
protuberancias qusticas en diferentes etapas de la individualizacin de los paquetes de
control y mutantes ENDOG. (D) focal seccin a travs de una protuberancia qustica de
tipo salvaje manchado por las mitocondrias (DJ-GFP: rojo) y actina (prpura). (E)
Esquema que muestra la eliminacin ADNmt a principios de tipo salvaje y finales de la
eliminacin del ADNmt en ENDOG espermtidas mutantes; ADN (verde), las
mitocondrias (rojo), y los conos de inversin (prpura).