Dr.

Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Aparatul Golgi
(cum s devii din suspect, fascinant)
Definiia
Structura, ultrastructura
Funciile
Cooperarea RE-Golgi n biogeneza
i traficul intracelular al membranelor

Structuri celulare implicate n biogeneza

i traficul membranelor

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Evideniere la microscopul optic

1898
1906, Premiul Nobel pentru
fiziologie sau medicin;
motivaia juriului:
"in recognition of their work on the
structure of the nervous system"
Camillo Golgi (1843-1926)

Istoric

http://ucsdnews.ucsd.edu/archive/newsrel/health/03_22_Palade.asp

Preluat din:
Fraquhar MG, Palade GE. (1998)

The Golgi apparatus: 100 years of

progress and controversy.
Trends in Cell Biology, 8, 2-10

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Evideniere la microscopul optic

http://www.lifetechnologies.com/ro/en/home/technical-resources/research-tools/image-gallery/image-gallery-detail.altid.g000513.html

http://www.scbt.com/datasheet-19481-grasp65-c-20-antibody.html

http://hamamatsu.magnet.fsu.edu/galleries/digitalvideo/spinningdisk/ok473laser/OK-EGFP-Golgi.html

Ultrastructura complexului Golgi

http://www.sciencephoto.com/media/546891/enlarge

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Organizarea spaial a complexului Golgi

Elementele ultrastructurale ale RE:
1. Membran organizat n mozaic fluid
2. Stiv de cisterne delimitate de endomembran recurbate, definind dou fee cis/trans
3. Cisternele dilatate la periferie
i efilate ctre centru
4. Lumen cu grosime crescnd,
de la faa cis ctre faa trans
(sugereaz polaritate)
5. Microvezicule (~50nm)
6. Reea trans-golgi +
macrovezicule

Addendum:
Compartiment
intermediar ERGIC

Funciile complexului Golgi

1. Prelucrarea sfingolipidelor (sfingomielina,
glicolipidele);
2. Glicozilarea proteinelor (glicozilare terminal a
structurilor N-glicozidice, formarea structurilor Oglicozidice);
3. Producerea glicozaminoglicanilor (GAG);
4. Sulfatarea unor glucide (glicoproteine, GAG);
5. Fosforilarea manozei n enzimele lizosomale,
biogeneza lizozomilor;
6. Maturarea proteinelor;
7. Sortarea i transportul biomoleculelor la destinaia
final.
N.B. Succesiunea ordonat a proceselor biochimice
din aparatul Golgi
4

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Polarizarea ultrastructural/
biochimic a complexului golgian

Polarizarea biochimic a
complexului Golgi

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Modele asupra dinamicii golgiene

Dup: Storrie B, Pepperkok R, Nilsson T Trends in Cell Biology, 10, 385-391 (2000)

Prelucrri ale proteinelor biosintetizate

Tunderea structurilor N-glicozidice

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Structuri glucidice elaborate n

complexul Golgi
1. Glicozilarea termninal a structurilor N-glicozidice

2. Biosinteza structurilor O-glicozidice (de tip mucinic)

Etichetarea enzimelor lizozomale

Etap a biogenezei lizozomilor7

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Biogeneza lizozomilor

1. Etichetarea enzimelor lizozomale, n zona cis

2. Transportul dinspre faa cis, ctre faa trans, cu maturarea componentelor
3. Sortarea, nmugurirea i detaarea lizozomilor primari, n zona trans
4. Fuziunea cu endozomi trzii sau lizozomi secundari pre-existeni

Cooperarea RE Golgi n
biogeneza i traficul intracelular al
membranelor
Biogeneza membranelor
Traficul RE Golgi;
Traficul Golgi membran celular /
sistem endozomal;
Ciclul secretor

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Biogeneza membranelor
Proces complex cu implicarea multor structuri:
Ribosomul;
Reticulul endoplasmic;
Aparatul Golgi.

Presupune:
Biosinteza componentelor moleculare ale
membranelor;
Asamblarea corect a acestora la nivelul structurii;
Maturarea structurii la una funcional;
Transportul direcionat al noilor membrane la
destinaie.

Necesit un bine elaborat i controlat trafic de

membrane

Relaia funcional dintre reticulul

endoplasmic i complexul Golgi

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Traficul RE - Golgi
Sortarea

la nivelul elementelor tranziionale ale RE (COP II, Sar1);

Traficul ctre aparatul Golgi (ERGIC);
Sortarea la nivelul complexului Golgi (COP I, Arf1);
Returul la RE (reciclarea unor componente).

Concluzia: transportul RE Golgi

respect un mecanism tip suveic

Dovezi experimentale pentru

mecanismul tip suveic
1989: Brefeldina A
Inhibarea transportului antero-grad RE Golgi,
dependent de COP II

10

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Traficul Golgi destinaia final

= rolul reelei trans-Golgi (TGN) =
Golgi lizozom: sortarea prin M6P, segregarea
i vezicularea prin adaptine (AP1, AP3) i clatrin;

Golgi membrana apical: sortarea prin

mecanisme luminale i plute lipidice, transport
cooperativ prin dyneine (ruta microtubulilor, cap ) i
miozine (ruta actinei F);

Golgi membrana latero-bazal: sortarea prin

motive de aminoacizi, transport prin kinesine (ruta
microtubulilor, cap +);

Reglare: prin proteine G monomerice;

Direcionare: prin SNARE (v-SNARE i t-SNARE)

Direcionarea transportului vezicular

prin SNARE specifice

11

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Ciclul secretor
Biosinteza proteinelor de secreie (RE);
Prelucrarea (maturarea), sortarea i condensarea
n vezicule / vacuole de secreie (RE, apoi Golgi);
Screia (2 tipuri: (i) constitutiv, (ii) semnalizat).

Porozomul
Microdomeniu de
membran
Portalul universal al
secreiei celulare
Nanostructur n curs
de elucidare a
organizrii moleculare
Prin amabilitatea Dr. Bahnu Jena,
George E. Palade University Professor,
Department of Physiology,
Wayne State University
School of Medicine
Director,
NanoBioScience Institute,
Detroit, Michigan, USA

12

Dr. Mircea Leabu: Aparatul Golgi (curs pentru studenii de la medicin)

Rezumat
Aparatul Golgi singurul organit care a
captivat iniial prin suspiciune, ulterior prin
complexitate structural i funcional;
Prezint polaritate ultrastructural, dar i biochimic ntre cele dou fee i ntre cisterne;
Funcioneaz ca o plac turnant pentru
maturarea, sortarea i transportul direcionat
ctre locul final al componentelor lizozomale,
membranare sau de secreie.

13

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

APARATUL GOLGI
Organizarea cursului
Aspecte introductive
Considerente istorice
Ultrastructura aparatului Golgi
Funciile aparatului Golgi
- Consideraii generale asupra funciilor aparatului Golgi
- Prelucrarea i definitivarea structurilor glucidice N-glicozidice
- Biosinteza structurilor O-glicozidice
- Modele referitoare la dinamica structurilor golgiane
- Biogeneza lizosomilor
Cooperarea reticul endoplasmic Golgi n biogeneza i traficul intracelular al membranelor
- Traficul RE Golgi
- Traficul reea trans-Golgi locaie final
- Direcionarea transportului intermembranar
Ciclul secteror celular (calea secretorie celular)
Consideraii finale
Bibliografie

Aspecte introductive
Aparatul Golgi, denumit i complexul Golgi este un organit celular delimitat de
endomembrane, structurat sub forma unei stive de cisterne recurbate, prezentnd polaritate
morfologic i biochimic, cu rol cheie n precesele de biogenez a membranelor, n
maturarea, sortarea i distribuirea de molecule i macromolecule att ctre locurile celulare
crora le sunt destinate ct i n calea secretorie. Face parte din sistemul de organite implicat
n traficul intracelular al membranelor, care ncepe cu reticulul endoplasmic i se termin la
membrana celular sau la componentele sistemului endosomal.
Termenul de polaritate este folosit n acest context pentru a sublinia existena unei
diferene ntre doi poli, dou extremiti n cazul aparatului Golgi, dou fee cis i trans.
Exist o multitudine de exemple de structuri polarizate de la molecule, la organite i chiar
celule n asamblul lor. De exemplu actina, dei este o protein globular, prezint un pol care
favorizeaz polimerizarea, denumit capt plus (+) i un pol care favorizeaz depolimerizarea
filamentului de actin capt minus (-). Enterocitul sau nefrocitul sunt dou exemple de
celule polarizate, ai cror poli apicali, prezentnd microvili, difer de cei latero-bazali, att
morfologic, ct i biochimic.
Organitul a fost pentru prima dat evideniat n 1898 de ctre Camilo Golgi, n
celulele Purkinje, prin impreganare argentic. Structura intracelular s-a dezvluit ca o
dantelrie esut sub form de co, n jurul nucleului. Golgi a denumit-o, pe baza morfologiei,
aparat reticular endocelular (endocellular reticular apparatus n conferina prilejuit de
decernarea Premiului Nobel), sau aparat reticular intern. n scurt timp, organitul a primit
denumirea de aparat Golgi, aa cum se numete (fr alternativ) i n momentul de fa. n
1906, Camilo Golgi a primit, mpreun cu Santiago Ramon y Cajal, Premiul Nobel pentru
fiziologie sau medicin. Motivaia juriului a fost: "in recognition of their work on the
structure of the nervous system". Unul din aspectele legate de structura sistemului nervos l
reprezenta descrierea aparatului reticular endocelular. Microscopia optic, prin varianta ei
microscopia de fluorescen, permite n momentul de fa att evidenierea, ct i studiul
complexului Golgi n celulele vii, prin procesele de trafic membranar n care el este
semnificativ implicat. La nivelul morfologiei evideniat prin microscopie optic, pe baza
identificrii unor componente biochimice specifice (lipidice sau proteice), aparatul Golgi
1

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

apare ca un organit complex mai mult sau mai puin elaborat (n funcie de tipul celular
investigat), cu o localizare n prfunzimea citoplasmei, de regul excentric fa de nucleu.

Considerente istorice
Din 1898, cand a fost descoperit, pn n 1954, cnd i-a fost pentru prima dat
descris ultrastructura n imagini de microscopie electronic, informaiile despre aparatul
Golgi nu au evoluat spectaculos. Dup descrierea sa ultrastructural, dei a existat
suspiciunea c aceast structurare ciudat poate fi artefactual, datele au nceput s se
acumuleze n favoarea existenei reale a acestui organit. ntre altele, menionm contribuia
colectivului de cercettori condus de G. E. Palade, care a evideniat implicarea complexului
Golgi n calea secretorie celular (numit i ciclu secretor celular; vezi mai jos la seciunea cu
acest nume). Suspiciunea a fost spulberat cnd, prin citochimie ultrastructural, s-a dovedit
c cisternele golgiene prezint polaritate biochimic. O asemenea distribuie ordonat i
selectiv a bagajului enzimatic ntre cisterne, evideniat nc din 1961, nu poate fi posibil
ntr-o structur artefactual. Astfel, structurile cis-golgiene (reeaua cis-golgian, cisternele
cis cele mai proximale) i numai ele, au proprietatea de a reduce ioni metalici (argint, osmiu);
cisternele cis distale, ctre cele mediene prezint reacie citochimic specific pentru
manozidaz golgian (diferit de manozidazele retuculului endoplasmic); cisternele mediene
i trans dau reacie citochimic specific nucleozid-difosfatazelor (cunoscute i sub
denumirea veche de tiamin-pirofosfataz); poriunile cele mai distale ale organitului,
cunoscute sub numele de reea trans-golgian, prezint reacie citochimic pentru fosfataza
acid, o enzim lizosomal. Parte dintre aceste distribuii vor fi motivate prin asocierea cu
aspectele legate de funciile organitului, pe masur ce vom detalia aspecte legate de rolul
acestuia (vezi la seciunea Funciile aparatului Golgi). Cu timpul datele referitoare la
organizarea molecular i funcionarea complexului Golgi au nceput a se acumula cu
respectarea unei curbe exponeniale. Aparatul Golgi a devenit din suspect, fascinant i el
reprezint una dintre structurile celulare ce suscit, prin dinamicitatea sa raportat la
meninerea polaritii bichimice, un acut interes n lumea biologilor celulari, n momentul de
fa.

Ultrastructura aparatului Golgi

Complexul Golgi este structurat, aa cum am menionat deja n definiia organitului,
ca o stiv de cisterne recurbate. Numrul cisternelor este variabil, diferind de la un tip de
celul la altul. Dispoziia i numrul cisternelor aparatului Golgi difer n funcie de tipul
celular i, implicit, de activitatea de sintez a proteinelor destinate ciclului secretor. n
celulele eukariote, aparatul Golgi este format din mai multe astfel de stive, unite prin tubuli
nreelai care formeaz o panglic n vecintatea nucleului, n zona pericentrozomal. Din
cele amintite n comentariile anterioare se desprinde ideea c aparatul Golgi este o structur
caracterizat ultrastructural prin polaritate morfologic, dar i prin polaritate biochimic.
Vom defini astfel, din punct de vedere morphologic, urmtoarele caracteristici
ultrastructurale:
o fa convex, numit i fa cis, orientat ctre cisterne ale reticulului
endoplasmic din care nmuguresc vezicule (reticul endoplasmic de tranziie);
(ii) o fa concav, numit i fa trans;
(iii) o reea trans-Golgi, un sistem de vezicule i/sau vacuole, tubuli nreelai i
fragmente de cisterne din care rezult (macro)vezicule ce vor fi trimise ctre
destinaiile lor finale. Aceast reea este n continuarea feei trans.
(iv) ntre RE de tranziie/tranziional i faa cis-golgian au fost evideniate
microvezicule cu diametrul mediu de 50 nm, care, n momentul de fa, sunt
dovedite a conflua (fr a prezenta o real independen) ntr-un sistem
veziculo-tubular
(compartiment
veziculo-tubular),
considerat
un
2
(i)

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

compartiment intermediar ntre RE i Golgi. Acest compartiment este numit

prescurtat fie VTC (de la Vesicular Tubular Cluster), fie ERGIC (de la
Endoplasmic Reticulum-Golgi Intermediate Compartment). Prezena unui
asemenea compartiment face s se vorbeasc, de regul i de o reea cis-Golgi;
ntre reeaua trans-Golgi i sistemul endosomal se descrie de asemenea un sistem de
recirculare a unor vezicule de transport, denumit compartiment de reciclare endosomal.
n ceea ce privete stiva de cisterne, se opereaz cu noiunile: cisterne cis, cisterne
mediene i cisterne trans, dup cum acestea sunt aezate ctre faa cis-Golgi, n zona din
mijloc a stivei sau ctre faa trans-Golgi.
Morfologic, polaritatea se poate evidenia att ntre cisterne i nu numai datorit
recurbrii (cisternele cis au lumenul mai subire, cele trans mai gros), ct i n cadrul
cisternelor (mai efilate n zonele centrale i mai ngroate n zonele limitrofe). Pentru a ne
completa imaginea n spaiu a morfologiei complexului Golgi, este bine s specificm faptul
c cisternele trebuie vzute ca mbrcnd un sector de sfer, ca i cum ar forma un cu. Dei
corespondena dintre polaritatea morfologic i cea biochimic a fost dovedit ntre cisterne,
nu acelai lucru s-a ntmplat n ceea ce privete polaritatea din cadrul aceleiai cisterne. Nu
exist, n momentul de fa, dovezi cum c ntre zonele mediene ale cisternelor (mai subiri n
grosime) i zonele lor limitrofe (mai gonflate) ar exista diferene de molecularitate.
Dimpotriv, prin metode de refacere a fluorescenei dup foto-stingere (FRAP, de la
Fluorescence Recovery After Photo-bleaching), coroborate cu rezultate obinute prin
tehnici de pierdere a fluorescenei prin foto-stringere (FLIP, de la Fluorescence Loss In
Photo-bleaching) s-a evideniat c moleculele i/sau macromoleculele din cisternele
golgiene difuzeaz fr restricii n planul membranelor fiecrei cisterne. Metodele FLIP
presupun stingerea repetat a fluorescenei n aceeai zon micronic a unei structuri celulare
i observarea efectului asupra fluorescenei la nivelul ntregii structuri. Dac moleculele
difuzeaz fr restricii n membrana structurii, este de ateptat ca fluorescena la nivelul
acesteia s dispar complet dup stingeri repetate. Acest lucru a fost observat la nivelul
cisternelor golgiene.
Din punct de vedere al structurii biochimice, la nivelul aparatului Golgi se descriu
dou tipuri de proteine:
i) Structurale, cu rol n formarea matricei aparatului Golgi, responsabile de
organizarea lui tridimensional i poziionarea corect intracelular; din aceast
familie fac parte golgina i proteinele din familia GRASP (abreviere de la Golgi
Re-Assembly Stacking Protein). Experimental s-a demonstrat c proteinele din
familia GRASP sunt capabile s reasambleze n aproximativ 12 ore
panglica/aparatul Golgi, dup extragerea organitului din celul prin microdisecie
laser.
ii) Funcionale enzimele specifice aparatului Golgi, cu rol n definitivarea structurii
proteinelor i lipidelor glicozilate, enzime despre care vom discuta n seciunile
urmtoare

Funciile aparatului Golgi

Problema izolrii i purificrii cisternelor golgiene, n vederea studierii funciilor,
rmne nc o provocare pentru cercettori. Au existat ncercri dintre cele mai ingenioase,
ns marea problem o reprezint eficiena. ntruct complexul golgian reprezint o fraciune
membranar slab reprezentat n structura celulelor, toate metodele presupun consum de fore
i mijloace, care nu se justific sub aspectul randametelor. O metod cu mare grad de
specificitate a fost dezvoltat de colectivul lui G.E. Palade la sfritul deceniului nou al
secolului trecut, folosindu-se izolarea pe suporturi de polizaharide (utilizate i n tehnicile
cromatografice) conjugate cu anticorpi anti-proteine rezidente n membranele golgiene.
Legarea prin interaciuni de afinitate (antigen-anticorp) a permis depunerea prin centrifugare
a cisternelor adsorbite pe bile de Sepharose (sefaroz, un polimer de galactoz). Metoda nu a
3

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

avut ns impact n lumea cercettorilor, din motivele amintite mai sus: consum mare de efort
i resurse, care nu erau recompensate de rezultate. De aceea, au fost gsite alternative de
studiu, pentru a surmonta aceste dezavantaje.
Consideraii generale asupra funciilor aparatului Golgi
Ceea ce cunoatem n momentul de fa asupra funciilor complexului Golgi provine,
n general, din studii de citochimie ultrastructural i din folosirea de diverse ci de inhibare a
proceselor celulare care antreneaz acest organit.
S ncepem cu o enumerare a funciilor mai bine cunoscute ale acestui organit:
1. prelucrarea sfingolipidelor (biosinteza sfingomielinelor i glicolipidelor prin
modificarea ceramidelor produse n RE);
2. glicozilarea proteinelor (prelucrarea structurilor N-glicozidice continuarea
tunderii oligozaharidului introdus la arginin n RE i efectuarea glicozilrii
terminale; formarea n ntregime a structurilor O-glicozidice inserate pe serin sau
treonin);
3. producerea glicozaminoglicanilor cu asamblri ale proteoglicanilor membranari,
sau ai matricei extracelulare;
4. sulfatarea unor glucide (att din glicozaminoglicani, ct i din unele
glicoproteine); substratul de pe care sulfo-transferazele transfer sulfatul este 3fosfoadenozin-5-fosfosulfatul;
5. marcarea enzimelor lizosomale prin eticheta manozo-6-fosfat (M6P) i biogeneza
lizosomilor;
6. maturarea proteinelor (proces ce implic att modificri enumerate la punctele 2
5, ct i prelucrri proteolitice);
7. sortarea i transportul moleculelor i macromoleculelor la destinaia final n
celul, sau pentru secretarea (exocitarea) lor;
8. biogeneza i traficul intracelular al membranelor (proces care nu poate fi separat
de toate celelalte enumerate i care necesit un comentariu mai detaliat).
Dintre cele opt funcii enumerate, vom detalia doar o parte, astfel nct s nelegem
mai bine importana prezenei aparatului Golgi pentru economia celulei.
De menionat c toate aceste procese se petrec ntr-o succesiune ordonat de etape
bine controlate i reglate, pe msur ce substanele primite de la RE avanseaz prin aparatul
Golgi dinspre faa cis, ctre faa trans. Acest lucru este posibil prin meninerea polarizrii
biochimice a organitului, despre care am punctat mai sus unele detalii i pe care le putem
mbogi cu date referitoare la polaritatea enzimelor implicate n prelucrarea i definitivarea
structurii chimice a lanurilor N-glicozidice ale glicoproteinelor. Fenomenele legate de
formarea structurilor N-glicozidice din glicoproteine au fost unele dintre primele studiate i
sunt printre cele mai bine cunoscute procese ce se petrec n aparatul Golgi.
Enzimele implicate n prelucrarea, n diverse direcii, a structurilor N-glicozidice
prezint urmtoarea distribuie ntre cisterne:
(i)

n reeaua cis-Golgi este prezent enzima care produce precursorul etichetei

M6P a enzimelor lizosomale (o N-acetil-glucozaminil-fosfotransferaz; vezi mai
jos la Biogeneza lizosomilor detalii asupra procesului);
(ii) n cisternele cis-Golgi este localizat manozidaza I, care tunde anumite manoze
din oligozaharidul inserat pe asparagin n RE;
(iii) n cisternele mediene se afl manozidaza II, dar i N-acetil-glucozaminiltransferaza care ncepe glicozilarea terminal;
(iv) n cisternele trans se gsete galactozil-transferaza ce continu glicozilarea
terminal a structurilor N-glicozidice;
(v) n sfrit, n reeaua trans-Golgi sunt ntlnite sialil-transferazele care
definitiveaz glicozilarea terminal prin adugarea de acizi sialici.
4

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

Fig. 1. Exemplificarea procesului de O-glicozilare.

Legend: Monozaharidele (
)se gsesc n lumenul aparatului Golgi cuplate cu nucleozid-difosfai,
de pe care sunt transferate, de ctre o glicozil-transferaz, ctre lanul oligozaharidic n formare. n
urma acestui proces rezult nucleozid-difosfat, care este mai departe defosforilat la nucleozidmonofosfat, care este eliminat n citoplasm printr-un transportor specific.

Distribuia glicozil-transferazelor, prezentat mai sus, justific i prezena nucleoziddifosfatazelor la nivelul cisternelor mediene i trans. Explicaia o constituie faptul c
glucidele sunt transferate pe lanul oligozaharidic n cretere de pe nucleozid-difosfo-glucide
(de ex: uridin-difosfogalactoza). Dup transfer, rmn n lumenul cisternelor golgiene
nucleozid-difosfai (de ex: uridin-difosfat). Acetia nu au transportori n membrane
cisternelor golgiene, care s-i transfere n citosol pentru refolosire (Fig. 1). Nucleozidmonofosfaii i fosfatul au ns transportorii corespunztori, astfel nct este necesar
scindarea nucleozid-difosfailor, pentru asigurarea reciclrii moleculelor. Ne achitm parial,
prin acest comentariu de promisiunea fcut n seciunea Considerente istorice, legat de
explicarea prezenei diferitelor enzime n diversele sectoare ultrastructurale ale complexului
Golgi.
Prelucrarea i definitivarea structurilor glucidice N-glicozidice
Analiznd polaritatea enzimatic putem deduce n ce const activitatea complexului
Golgi asupra structurilor N-glicozidice. Cunoatem c producerea acestora este iniiat n RE
sub forma unei structuri complexe oligozaharidice, triantenare format (considernd dinspre
asparagin spre captul liber) din 2 N-acetil-glucozamine, 9 manoze i 3 glucoze. Cunoatem
deasemnea c, dup inserarea pe asparagina aflat ntr-o secven consens (NXS/T),
structura ncepe s fie tuns chiar n RE (mai nti glucozele, apoi o manoz); i mai
5

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

cunoatem semnificaia funcional a tunderii primelor dou glucoze (asigurarea mpachetrii

corecte prin aciunea calnexinei, o aperon cu activitate de tip lectinic). Ei bine, dup
ajungerea n Golgi, celula este n msur s decid asupra destinului acestor glicoproteine.
Cele care sunt menite a deveni enzime lizosomale, sunt marcate la cel puin una dintre
manozele cu care ajunge aici, prin fosforilare la hidroxilul carbonului 6 (vezi mai jos detalii
ale fenomenelor, la Biogeneza lizosomilor). Cele care au alte destinaii vor fi prelucrate,
prin continuarea tunderii manozelor i, de regul, prin glicozilri terminale, pentru a deveni
structuri nalt manozilate, structuri hibride, sau structuri complexe (Fig. 2).
Structurile nalt manozilate sunt slab reprezentate n afara enzimelor lizosomale (unde
sunt modificate prin fosforilare). Structurile hibride conin nc un numr mai mare de
manoze (de cel puin cinci), dar i glicozilare terminal, de regul nedefinitivat pn la acizi
sialici. n sfrit, structurile complexe conin un miez trimanozidic (cu manoza legat de Nacetilglucozamina predecesoare, ca punct de ramificare) i, pe fiecare ramur iniiat de o
manoz, cel puin cte un lan de glicozilare terminal definitivat. Aceste structuri se
numesc biantenare. Structurile N-glicozidice complexe pot fi ns i triantenare (exemplul din
Fig. 2), sau, mai rar, tetra-antenare cnd ambele manoze distale ale miezului trimanozidic
conin cte dou lanuri de glicozilare terminal. Glicozilrile terminale implic aadar
tunderea de manoze i adugarea, pas cu pas (pe msura naintrii prin cisternele golgiene),
de N-acetilglucozamin, apoi de galactoz i, la sfrit, de acid sialic. Structurile complexe
pot conine i fucoz legat pe cea mai profound N-acetilglucozamin. Corespunztor
tipurilor de structuri glucidice numite mai sus definim i tipuri de glicoproteine: glicoproteine
nalt manozilate, glicoproteine hibride sau glicoproteine complexe.
Biosinteza structurilor O-glicozidice
Structurile O-glicozidice se produc n ntregime la nivelul cisternelor golgiene. Dei
nu exist date referitoare la distribuia glicoziltransferazelor implicate n aceste glicozilri i
dei lanurile oligozaharidice sunt mai puin elaborate (vezi Fig. 3 pentru cele mai simple
exemple) este probabil ca aceste enzime s respecte tot o aranjare polarizat ntre cisterne.

Fig. 2. Tipuri de structuri N-glicozidice definitivate n aparatul Golgi.

Fig. 3. Tipuri de structuri

O-glicozidice biosintetizate n complexul Golgi

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

Modele referitoare la dinamica structurilor golgiene

Explicarea meninerii polarizrii biochimice a cisternelor golgiene, n pofida micrii
anterograde a materialului prelucrat, a reprezentat i reprezint o provocare pentru
cercettorii din domeniu. Pentru nelegerea acestor mecanisme au fost elaborate dou
modele:
1. modelul transportului vesicular (model tip suveic);
2. modelul maturrii cisternelor.
Modelul transportului vezicular stipuleaz c transportul anterograd este fcut prin
microvezicule (diametru de ~50 nm) i presupune segregarea moleculelor a cror prelucrare
este terminat n microdomenii ale membranei cisternelor donoare, desprinderea lor sub
forma unor vezicule de transport, migrarea ctre cisterna urmtoare (acceptoare), fuzionarea
cu membrana acesteia i predarea moleculelor/macromoleculelor transportate n vederea
prelucrrii corespunztoare bagajului enzimatic al noii cisterne. Moleculele implicate n
aceste procese de transport selectiv, ca i cele care scap accidental n veziculele de transport
sunt apoi returnate printr-un transport vezicular retrograd, la cisterna donoare.
Modelul maturrii cisternelor presupune c transportul anterograd se face prin
naintarea ntregii cisterne dinspre faa cis ctre faa trans, pe msur ce procesele biochimice
avanseaz. Din cisternele maturate, n fiecare etap, proteinele rezidente sunt returnate la
cisternele anterioare printr-un transport vezicular.
Aadar, ambele modele presupun un transport vezicular retrograd, iar prezena unor
vezicule accesorii organitului ce conin molecule rezidente n cisternele golgiene este singura
realitate dovedit fr echivoc, n momentul de fa. n rest, controversa rmne actual, dei
fiecare model are dovezile, dar i contra-argumentele sale. Astfel, au fost evideniate vezicule
de transport (ce conin molecule ce sunt transportate i prelucrate la nivelul organitului) n
toat adncimea complexului Golgi, ceea ce reprezint un argument n favoarea modelului tip
suveic. Totodat, prin Golgi sunt transportate i agregate moleculare ce depesc diametrul
unor asemenea vezicule de transport, ceea ce favorizeaz modelul maturrii cisternelor.
Totui, modelul maturrii cisternelor nu poate justifica observaia c molecule ce i ncep
aventura golgian n acelai moment, parcurg cisternele cu viteze diferite, ajungnd n reeaua
trans-golgian defazat. Fr ndoial c eforturile care se fac pentru studierea transportului
membranar intracelular, transport care implic aparatul Golgi ntr-un mod semnificativ, vor
avea ca rezultat i soluionarea disputei pe marginea celor dou modele: modelul tip suveic,
respectiv modelul maturrii cisternelor. Nu putem exclude posibilitatea ca procesele
caracteristice celor dou modele s fie utilizate simultan de celul pentru rezolvarea traficului
intragolgian de substan.
Recent a fost propus un nou model, denumit modelul partiionrii rapide, care
presupune separarea (partiionarea) cisternelor golgiene n domenii care concentreaz
proteine cargo i domenii care concentreaz proteine structurale. Aceast separare pe domenii
este rezultatul existenei unor zone de membran cu compoziie lipidic diferit, n cadrul
fiecrei cisterne. Acest model a aprut ca urmare a unor observaii de cinetic proteic, fcute
n sisteme celulare n timp real, pe baza crora se stipuleaz c proteina glicozilat poate
prsi aparatul Golgi la orice nivel, din oricare cistern. Acest model contravine ns
polarizrii biochimice i funcionale ale aparatului Golgi, motiv pentru care este nc
contestat.
Biogeneza lizosomilor
Lizosomii reprezint organitul prin care celula i asigur moleculele fundamentale
att pe baza reciclrii acestora din unele componente intracelulare ct i prin preluri de
substan din afara celulei. Funcia lor se bazeaz pe bogatul coninut n hidrolaze acide, pe
care celula le produce i le direcioneaz corect printr-o colaborare nalt specializat dintre
RE i complexul Golgi care implic i un trafic adecvat, selectiv de membran. Acest proces
poart denumirea de biogenez lizosomal. El const n biosinteza proteinelor lizosomale
7

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

(enzime, proteine ale membranei lizosomale) care implic mai nti activitatea RE, apoi pe
aceea a aparatului Golgi pentru maturarea, sortarea i direcionarea spre lizosomi a bagajului
molecular specific.
Dou sunt aspectele mai bine cunoscute asupra biogenezei lizosomilor i prezentndule pe acestea ne vom face o imagine clar asupra realitii biologice legate de acest proces:
(i) marcarea enzimelor lizosomale i
(ii) sortarea, segregarea moleculelor i nmugurirea, respectiv desprinderea
lizosomilor primari.
Ambele fenomene se petrec la nivelul aparatului Golgi.
Marcarea enzimelor lizosomale presupune formarea unei etichete (manozo6fosfat,
prescurtat M6P) i este un proces ce conine cel puin dou etape. n prima etap, care are loc
la nivelul reelei cis-Golgi, proteinele care sunt destinate a deveni enzime lizosomale i care
poart obligatoriu structuri oligozaharidice N-glicozidice sunt complexate de enzima Nacetil-glucozaminil-fosfotransferaz. Aceasta modific cel puin una dintre manoze la
hidroxilul carbonului 6, prin transferarea unei N-acetil-glucozamine mpreun cu un fosfat, de
pe substratul N-acetil-glucozaminil-difosfo-uridin. Se formeaz, n acest fel, un precursor al
etichetei finale M6P, care este, n acest moment, cpcit cu molecula de N-acetilglucozamin. Specificitatea interaciunii dintre viitoarea enzim lizosomal i N-acetilglucozaminil-fosfotransferaz este asigurat de un semnal conformaional pe care l
structureaz toi precursorii de enzime lizosomale (pe baza mpachetrii, asistat i de
calnexin, din reticulul endoplasmic). Semnalul conformaional reprezint o sum de
segmente din secvena primar a unei proteine, care n structurarea teriar a acesteia se
dispun alturi, formnd domeniul de interaciune cu partenerul. Aceste tipuri de semnale sunt
afectate, pierzndu-i funcia, atunci cnd structura teriar a proteinei este denaturant. Dup
transferul structurii fosfo-glucidice, complexul precursor de enzim lizosomal/N-acetilglucozaminil-fosfotransferaz se disociaz. Unde are loc etapa a doua a formrii etichetei
(eliminarea N-acetil-glucozaminei), adic prelucrarea ulterioar a etichetei la forma ei final,
ca i prelucrrile pe care enzimele lizosomale le sufer pentru a deveni funcionale sunt
aspecte aflate deocamdat n studiu. Cert este ns faptul c n reeaua trans-Golgi capacul de
N-acetil-glucozamin nu mai mascheaz eticheta M6P, care devine funcional i este folosit
n procesele de sortare, segregare i producere a lizosomilor primari. Dovedirea importanei
M6P n biogeneza lizosomilor s-a fcut prin folosirea culturilor de celule ce prezentau boala
incluziilor celulare (I-cell disease; I de la Inclusions). Aceste celule prezentau un defect
structural necunoscut, prin care enzimele n loc s fie direcionate la lizosomi, ajungeau s fie
exocitate. S-a constatat c aceste cellule, crescute n mediu suplimentat cu enzime lizosomale
din celule normale, i recptau funcia lizosomal. Analizndu-se diferenele din structura
chimic a enzimelor din cele dou tipuri de celule (normale, respectiv deficiente) s-a
constatat c singura diferen consta n prezena de manoze fosforilate la hidroxilul 6 n
enzimele celulelor normale.
Sortarea are la baz interaciunea M6P cu un receptor specific transmembranar
(receptorul la M6P). Acesta din urm este, la rndul su, folosit pentru segregarea i
aglomerarea componentelor lizosomale la nivelul unor structuri cu nveli de clatrin din
reeaua trans-Golgi. Acestea evagineaz din structurile trans-golgiene i se desprind,
pierzndu-i instantaneu nveliul de clatrin i devenind ceea ce numim lizosomi primari.
Specificitatea activitii clatrinei la acest nivel, prin comparaie cu i pentru difereniere de
activitatea sa din procesele de endocitoz mediat de receptori (vezi la Transportul
membranar), este dat de tipul de proteine accesorii (adaptine) implicate: n endocitoza
mediat de receptori opereaz adaptinele AP2 (AP de la Adaptor Protein), pe cnd n
biogeneza lizosomilor opereaz AP1/AP3.
n etapa urmtoare lizosomii primari fuzioneaz fie cu endosomi trzii, producnd
lizosomi secundari, fie cu lizosomi secundari preexisteni, pentru a le spori bagajul de enzime
cu componente proaspete. Biogeneza lizosomilor se sfrete cu procesele de reciclare a
8

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

componentelor membranare implicate n sortare, segregare, veziculare i transport direcionat

al lizosomilor primari.
Pentru a ncheia comentariile referitoare la biogeneza lizosomilor, punctm, odat n
plus, faptul c, la nivelul reelei trans-Golgi, enzimele lizosomale se prezint n stare
funcional, gata maturate. Acesta este motivul pentru care aici se poate evidenia o reacie
citochimic pentru fosfataza acid (o enzim lizosomal). n ciuda faptului c sunt
funcionale deja n reeaua trans-Golgi, enzimele lizosomale nu pot activa aici deoarece pHul n lumenul structurii, dei se plaseaz n domeniul acid, este cu cel puin o unitate mai
ridicat dect n lizosom.
Cooperarea reticul endoplasmic Golgi n biogeneza i traficul intracelular al
membranelor1
Din ce am discutat pn aici, rezult c, n tot ceea ce face, aparatul Golgi este
dependent de cooperarea cu RE. Dar aceast cooperare nu are semnificaie funcional numai
pentru complexul golgian, ci i pentru reticulul endoplasmic. Aa cum aparatul Golgi nu ar
avea ce face dac nu ar primi molecule i macromolecule spre prelucrare de la RE, la fel RE
nu i-ar vedea munca finalizat dac nu ar exista n avalul su cisternele golgiene cu
aspectele lor structurale i funcionale caracteristice. Pentru a completa imaginea
complexitii acestei cooperri RE Golgi, vom aborda cteva aspecte legate de biogeneza i
traficul intracelular al membranelor. Aceste aspecte sunt cu att mai importante cu ct
vizeaz structuri fr de care celulele nu ar putea exista: biomembranele.
Biogeneza membranelor este un proces deosebit de complex, care implic mai multe
organite. Le amintim doar pe cele care particip pentru tipurile de membrane ale organitelor
neautonome: ribosomul, RE i complexul Golgi. Practic biogeneza membranelor presupune:
(i)
(ii)
(iii)
(iv)

biosinteza componentelor moleculare ale membranelor;

asamblarea corect a acestora la nivelul structurii;
maturarea structurii la una funcional;
transportul direcionat al noilor membrane la destinaie.

ntruct nu este obligatoriu ca toate aceste procese s se ntmple n succesiunea n

care au fost enumerate, ci, de regul, ele se ntreptrund, este de la sine neles c necesit un
bine elaborat, controlat i reglat trafic de membrane. Altfel spus, biogeneza i traficul
intracelular al membranelor formeaz un sistem integrativ de procese eseniale pentru
organizarea i funcionarea celulei. Dei, n cea mai mare parte, fenomenele se poteneaz
reciproc, fr o anumit secveniere rigid, cel puin biosinteza moleculelor i
macromoleculelor trebuie s se petreac, n principiu, naintea altor procese dintre cele patru
menionate mai sus. Chiar i pentru aceast etap a biosintezei, pentru unele componente
iniierea se petrece ntr-un compartiment celular, iar finalizarea n altul. Amintim cazul
sfingolipidelor ai cror precursori sunt produi n RE (ceramidele), n timp ce produii finali
(sfingomielinele, respectiv glicolipidele) sunt obinui n complexul Golgi.
Referitor la biosinteza componentelor moleculare ale membranelor avem deja
informaii din ceea ce am prezentat la RE ca i din ceea ce am abordat, pn acum, la aparatul
Golgi. La fel stau lucrurile i legat de asamblarea corect a (macro)moleculelor n cadrul
structurilor nou-formate (vezi detaliile, despre flipaze i cele asupra inserrii proteinelor
transmembranare n bistrat, de la Reticulul endoplasmic). Ct privete maturarea structurii
la una funcional ea presupune aducerea componentelor ei moleculare n stare funcional
prin maturare (vezi prelucrarea (glico)proteinelor la Reticulul endoplasmic ca i (mai sus)
Importana traficului intracellular al membranelor a fost recunoscut i prin acordarea Premiului Nobel pentru
fiziologie sau medicin n 2013. Cei trei laureai, James E. Rothman, Randy W. Schekman, Thomas C. Sdhof,
au avut contribuii semnificative n descifrarea mecanismelor care guverneaz traficul intracelular al
membranelor n celulele eucariote, aa cum se menioneaz i n motivaia juriului: "for their discoveries of
machinery regulating vesicle traffic, a major transport system in our cells".
1

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

prelucrarea sfingolipidelor i (glico)proteinelor n complexul Golgi. Rmne s mai discutm

traficul de membrane, n decursul cruia i prin care toate celelalte sunt posibile. n aceast
privin, vom aborda mai nti traficul dintre RE i Golgi, dup care traficul dintre reeaua
trans-Golgi i locul destinaiei finale a noilor membrane.
Traficul RE Golgi
Traficul de membrane, care asigur i transportul de substan ntre RE i aparatul
Golgi (vezi detaliile la Reticulul endoplasmic), implic mai multe procese:
(i)

Sortarea componentelor ce trebuie traficate la nivelul elementelor tranziionale

ale RE (cu participarea proteinelor de nveli COP II i proteinei G monomerice
Sar1, cu rol reglator);
(ii) Traficul anterograd ctre aparatul Golgi;
(iii) Sortarea nivelul complexului Golgi a componentelor ce trebuie returnate la RE
(cu participarea proteinelor de nveli COP I i proteinei G monomerice Arf1,
pentru reglare);
(iv) Returul la RE, prin trafic retrograd (reciclarea unor componente).

Referitor la acest transport este dovedit n prezent, fr controverse, c respect un

mecanism de tip suveic. Dac transportul anterograd nu a fost pus la ndoial, existena
transportului retrograd a fost subiect de disput pn n 1989. n acest an colectivul condus de
Jennifer Lippincott-Schwartz (de la NIH, adic National Institute of Health, Bethesda, USA)
a raportat observaia c, n celulele tratate cu brefeldin A (un metabolit fungic), complexul
Golgi se dezorganizeaz i dispare, iar enzimele sale se regsesc n structuri ale RE, inclusiv
n anvelopa nuclear. Prezena enzimelor golgiene n anvelopa nuclear s-a constituit ntr-o
dovad indubitabil c celelalte structuri pozitive la reacia citochimic (reacia
imunocitochimic pentru manozidaza golgian) aparin tot RE. Rezultatele nu pot fi explicate
dect acceptnd c brefeldina A blocheaz specific transportul anterograd i c, drept urmare,
aparatul Golgi se vars n RE datorit unui transport retrograd, de la Golgi ctre RE, care
nu este blocat de brefeldina A. Dei transportul RE Golgi n ambele direcii este acum
indiscutabil, mecanismele prin care acesta se face, ntr-una sau cealalt direcie, sunt departe
de a fi elucidate. Cert este c el implic:
(i)
(ii)
(iii)

structurile intermediare ERGIC/VTC;

proteine de nveli diferite;
regulatori (proteine G monomerice) specifici direciei.

Transportul RE Golgi implic, de asemenea, sortri pe baz de motive de aminoacizi (grupe

de doi, trei aminoacizi; vezi la Reticulul endoplasmic) i proteine motor specifice
microtubulilor (experimental a fost dovedit c dezorganizarea microtubulilor afecteaz
traficul).
Traficul membranar discutat mai sus rezolv aspectele legate de biogeneza
membranelor golgiene i iniiaz aspectele legate de biogeneza celorlalte tipuri de membrane
destinate sistemului endosomal i membranei celulare. Ce se ntmpl mai departe, pentru
aceste din urm membrane, punctm mai jos.
Traficul reea trans-Golgi locaie final
1. Traficul trans-Golgi lizosom, ne este deja familiar. Amintim c el presupune
sortri prin M6P, segregri prin receptorii la M6P, AP1/AP3 i clatrin, precum i transport
direcionat prin proteine transmembranare (vezi mai jos la Direcionarea transportului
intermembranar).
2. Traficul trans-Golgi membran celular implic o discuie mai nuanat.
Vom aborda mai nti traficul trans-Golgi membran celular n celulele
polarizate, cu cele dou componente ale sale:
10

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

(i)
(ii)

traficul trans-Golgi membran apical;

traficul trans-Golgi membran latero-bazal.

Traficul trans-Golgi membran apical se caracterizeaz prin urmtoarele

aspecte:
Mecanismele sortrii nu sunt pe deplin elucidate, dar exist rapoarte care propun
fenomene ce implic ectodomeniile proteinelor i chiar interaciuni de tip lectinic, ce
presupun participarea structurilor glucidice ale glicoproteinelor, sau glicolipidelor de pe faa
luminal a organitului. Pe de alt parte, este propus participarea structurilor de tip plut
lipidic (lipid raft), care sunt descrise preferenial pentru domeniile apicale ale membranei.
Transportul elementelor rezultate prin sortare implic un mecanism cooperativ, care
folosete iniial ruta microtubulilor, apoi ruta filamentelor de actin. Asemenea mecanisme au
fost dovedite n 1993, ntr-un articol publicat de K.R. Fath i D.R. Burgess n The Journal of
Cell Biology. Mecanismele au fost descrise pentru enterocite (celule intestinale absorbante) i
ele exploateaz organizarea specific a citoscheletului n aceste celule. n enterocite
microtubulii ce trec pe lng cisternele golgiene sunt orientai cu captul (-) ctre membrana
apical, strbtnd parial estura de filamente de actin (ce formeaz trama terminal, cu
aderarea la jonciunile tip zonula aderens) i terminndu-se n proximitatea filamentelor de
actin ce structureaz axul citoscheletal al microvililor. Folosind aceast structurare i
orientare, microveziculele ce transport componente nou sintetizate ale membranei apicale
(de fapt suprafee de membran produse de novo) folosesc iniial proteine motor din familia
dyneinelor, pentru a se deplasa ctre captul (-) al microtubulilor. Cnd ajung la filamentele
de actin ce strbat axul microvililor, trec la folosirea unei alte proteine motor, miozina I, cu
ajutorul careia se deplaseaz de-a lungul acestor filamente. Ajungnd la nivelul membranei
apicale de la baza microvililor, membrana veziculelor fuzioneaz cu membrana celular,
sporindu-i suprafaa. Mecanismul descris concord cu rezultate experimentale raportate de
alte colective, n care celule epiteliale intestinale au fost incubate cu nocodazol, sau
colchicin, substane care depolimerizeaz tubulina dezorganiznd microtubulii. Dup acest
tratament, eficiena transportului ctre membrana apical se reduce cu ~50%, iar veziculele
care pot ajunge aleatoriu la filamentele de actin ale tramei terminale, sunt direcionate la
membrana lateral, ctre care aceste filamente sunt orientate, conducnd la apariia nefireasc
de microvili la acest nivel.
Traficul trans-Golgi membran latero-bazal presupune sortri prin motive de
aminoacizi din endodomeniile proteinelor transmembranare. Transportul se face tot pe calea
microtubulilor, ns ctre captul (+), prin folosirea kinezinelor (alte proteine motor specifice
pentru microtubuli). Este astfel folosit orientarea diferit a microtubulilor, cu captul (+)
ctre membrana latero-bazal.
O meniune care trebuie fcut este referitoare la reglarea acestui trafic. Ei bine,
reglarea mecanismelor de selecie, sortare i veziculare n sisteme diferite de transport se face
prin proteine G monomerice. Diversitatea acestora (probabil c nc nu cunoatem toate
entitile moleculare din aceast super-familie de proteine) asigur o bun reglare a situaiilor
pe care celula le are de rezolvat. Fr ndoial, controlul i reglarea acestor mecanisme de
sortare i transport se vor dovedi mult mai complexe, pe masur ce cunoaterea noastr
asupra fenomenelor se va detalia.
Direcionarea transportului intermembranar
Specificitatea de direcionare a traficului membranar este asigurat de diversitatea
proteinelor din familia denumit prescurtat SNARE (vezi la Reticulul endoplasmic,
seciunea Sortarea i transportul ctre aparatul Golgi). Pentru fiecare membran int exist
o pereche specific v-SNARE/t-SNARE. Specificitatea acestei perechi asigur transportul
corect ctre membrana acceptoare. mperecherea corect atrage declanarea mecanismelor de
fuziune a membranelor. Procesul implic o serie de proteine accesorii care structureaz o
mainrie de fuziune, ce este activat dup legarea v-SNARE la t-SNARE.
11

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

Se consider c specificitatea interaciunii dintre partenerii coreci ai perechii vSNARE/t-SNARE mpiedic fuzionrile dintre vezicule i alte membrane la care pot ajunge
accidental. Acest punct de vedere pare totui a fi contrazis, cel puin n cazul experimentelor
amintite mai sus pentru transportul membranei apicale n enterocite. Acolo se dovedete c
mecanismul nu exceleaz n privina specificitii; altfel nu s-ar putea forma microvili la
nivelul membranei laterale. Exist totui explicaii, dar validitatea lor trebuie dovedit
experimental. O prim explicaie o poate constitui faptul c afectarea transportului direcionat
ctre membrana apical, poate induce apariia de t-SNARE specifice membranei apicale, n
membrana latero-bazal. Nu putem ns exclude nici posibilitatea existenei unor aspecte de
detaliu ale mecanismului direcionrii, care deocamdat ne scap i care este posibil s
nuaneze situaiile.
Abordarea experimental a rolului complexului Golgi n traficul intracelular al
membranelor prin folosirea proteinelor himerice obinute prin cuplarea proteinelor golgiene
rezidente cu protein fluorescent verde (GFP, de la Green Fluorescent Protein) ar putea
s aduc n viitor informaii detaliate asupra mecanismelor. GFP a fost extras dintr-o
meduz. Proteinele himerice se obin modificnd genele corespunztoare celor dou proteine
(proteina de studiat, respectiv GFP) prin cuplarea lor, pentru a obine o nou gen
corespunztoare unei proteine himerice. Cuplarea se poate face pentru adugarea polipeptidei
fluorescente fie la captul amino-terminal al proteinei de interes, fie la cel carboxi-terminal,
astfel nct himera s pstreze funcia i distribuia intracelular ale proteinei studiate.
Exprimarea proteinei himerice n celule se face dup transfecie. Transfecia este un
procedeu prin care gena modificat (nglobat ntr-o plasmid sau ntr-o structur viral
inactivat) este introdus n celula care se supune studiului. Adesea materialul genetic este
inserat n genom i se exprim, ducnd la obinerea de proteine cu funcie cunoscut marcate
fluorescent. Asemenea studii au fost deja realizate, pentru studiul mobilitii proteinelor la
nivelul membranelor cisternelor golgiene, ca si pentru studiul structurilor implicate n
transportul RE-Golgi, respectiv Golgi-membran celular. O dezvoltare interesant o
reprezint o reuit relativ recent a colectivului condus de J. Lippincott-Schwartz. Acesta a
reuit s obin mutante ale GFP, care devin fluorescente numai dup foto-activare. Aceast
reuit va uura urmrirea proteinei himerice fluorescente, fr a mai fi pericolul ca celula s
se suprancarce cu fluorescen prin producerea continu a himerei i fr s mai necesite
inhibitori ai sintezei proteice. Viitorul n studiul aparatului Golgi rmne interesant i pare a
deveni mai de succes.

Ciclul secretor celular (calea secretorie celular)

Celulele organismului produc alturi de (macro)molecule necesare folosinei interne
i unele a cror destinaie este aceea de a fi secretate (exocitate). Aceast proprietate a
celulelor, de a secreta componente biosintetizate, se poate manifesta permanent, sau periodic
i implic, bineneles, un trafic membranar.
Ciclul secretor se definete ca o succesiune de fenomene prin care se realizeaz:
(i)
(ii)

biosinteza moleculelor/macromoleculor de secreie;

prelucrarea (maturarea), sortarea, vezicularea i condensarea veziculelor/
vacuolelor de secreie;
(iii) secreia propriu-zis, care poate fi constitutiv (se produce de la sine) sau
semnalizat (stimulat).
Aspectele legate de primele dou etape din calea secretorie ne sunt familiare din tot ce
am discutat la reticulul endoplasmic i la aparatul Golgi, pn acum. La acestea trebuie
adugat c n multe cazuri maturarea presupune proteoliza unor pro- sau pre-pro-componente.
De exemplu, n cazul insulinei, maturarea presupune eliminare mai multor fragmente din
lanul polipeptidic iniial, unic. Pre-pro-insulina nseamn lanul ce conine peptida semnal
necesar translocrii prin membrane RE. Pro-insulina reprezint lanul proteic fr peptida
12

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

semnal, eliminat de semnal-peptidaz. Aadar, pre-pro-insulina ar fi preursorul inserat n

membrana RE (care, de regul, nu exist ca atare, deoarece funcia semnal-peptidazei se
manifest ca fenomen co-traducere), iar pro-insulina (form cu existen real) este protein
solubil, liber n lumenul RE, respectiv n lumenul cisternelor golgiene. Insulina matur se
produce n granula de secreie prin eliminarea proteolitic a unei secvene din centrul lanului
polipeptidic, astfel nct cele dou subuniti ale moleculei de insulin rmn solidarizate, dar
prin dou puni disulfurice.
Adesea, coninutul vacuolelor de secreie sufer un proces de condensare, ce const n
eliminarea apei din lumen ctre citosol.
Ceea ce este necesar s mai adugm, pentru o mai bun stpnire a proceselor
celulare legate de secreie, vizeaz etapa secreiei propriu-zise. n ceea ce privete
fenomenele de direcionare a veziculelor/vacuolelor de secreie, n traficul lor ctre
membran, se consider c respect principiile deja prezentate.
Calea de secreie constitutiv opereaz n toate tipurile de celule. Se consider c ea
se petrece concomitent cu traficul noilor suprafee de membran necesare a nlocui
componente devenite nefuncionale sau a satisface nevoile de cretere a suprafeei de
membran din anumite fenomene de organizare/reorganizare a esuturilor ce nsoesc situaii
fiziologice sau patologice. Aceste fenomene necesit i organizri/reorganizri ale spaiilor
extracelulare, astfel nct este necesar secreia de componente ale matricei extracelulare, cel
puin. Fenomenele par a se desfura de la sine prin transport i fuziuni constitutive de
membrane, dei n momentul de fa se acumuleaz date ce indic faptul c n situaiile
patologice, fenomenele care n situaii normale corespund secreiei constitutive, necesit
amplificri care par a fi rezultatul unor fenomene de semnalizare n care capacitatea
integrinelor de a semnaliza bidirecional (dinspre exterior ctre celul, respectiv dinspre
celul ctre matricea extracelular) intervine activ.
Aadar, trebuie s fim circumspeci i s evitm tentaia de a ncerca trasarea de
granie ferme ntre cele dou ci de secreie.
Calea de secreie semnalizat este, de regul, specific celulelor specializate n
secreie (spre exemplu celule galandulare). Ea presupune exocitarea componentelor
accumulate n vezicule/vacuole de secreie, pe care celulele le stocheaz, pn la primirea
unui semnal (stimul). Acest stimul ntiineaz c organismul are nevoie de substanele
stocate n vederea secreiei ulterioare. Molecula mesager se leag de un receptor specific din
membrana celulei secretoare i declanaz mecanisme de semnalizare, al cror efect este
inducerea fuziunii membranei veziculelor/vacuolelor de secreie cu membrana celular i
exocitarea coninutului. n multe cazuri, fuziunea semnalizat a membranelor se datoreaz
creterii concentraiei de Ca2+ n citosol.
De menionat c, n unele situaii, completa maturare a moleculelor secretate se
petrece exact n momentul exocitozei. Acesta este, de exemplu, cazul colagenului tip I a crui
maturare final nseamn eliminarea, prin proteoliz, a unor fragmente din capetele proproteinei, eliminare care permite fibrilarea moleculei. Dac maturarea s-ar produce n celul,
colagenul ar forma fibre n structurile intracelulare, afectnd funcionarea acesteia i
inducnd situaii patologice.
n concluzie, ciclul secretor (numit mai frecvent cale secretorie) implic att
cooperarea dintre RE (la nivelul cruia se sintetizeaz componentele moleculare destinate
exportului) i aparatul Golgi (rspunztor, de regul, de finalizarea maturrii moleculelor de
secretat, de sortarea, condensarea i formarea vacuolelor de secreie), ct i traficul
membranar aferent acestor procese.
O remarc merit fcut asupra termenului de ciclu secretor, sau cale secretorie. Dac
ar fi s considerm c noiunea de ciclu implic reciclri ale unor componente, atunci mai
corect ar fi, n momentul de fa, termenul de cale secretorie. Aceasta deoarece nu exist
dovezi asupra reciclrii unor componente implicate n mecanismele celulare ce realizeaz
procesul. Mai mult, pentru secreia constitutiv exist dovezi c dinamica procesului implic
ajungerea veziculelor n imediata apropiere a membranei, unde, dup o ateptare de 15-30
13

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin

secunde, fuzioneaz rapid, iar componentele membranei veziculare se mprtie aproape

instantaneu n planul membranei. (Asemenea dovezi experimentale au fost obinute prin
folosirea himerelor proteice fluorescente, despre care am amintit mai sus.) Asta nseamn c
dac ar fi vorba de fenomene de reciclare, acestea ar trebui s se produc n alte circumstane,
ca nsoind alte procese celulare. Ct privete secreia semnalizat, datele acumulate n cel
mai recent deceniu arat c ataarea veziculelor de secreie la membrana celular are loc
tranzitoriu, la nivelul unor microdomenii de membran denumite porosomi, care faciliteaz
fuzionarea celor dou membrane i descrcarea produsului de secreie, decrcare care se face
mai mult sau mai puin complet.
n sfrit, merit s evideniem aici c pionierul desluirii cii secretorii este G.E.
Palade, care prin tehnici de autoradiografie, adaptate microscopiei electronice, a artat c
aminoacizii tritiai se regsesc la nivelul reticulului endoplasmic imediat dup administrarea
lor celulelor pancreatice acinare, apar la nivelul aparatului Golgi, 20 de minute mai trziu i
marcheaz vacuolele secretorii, sau materiale exocitate, dup 90 de minute de la administrare.

Consideraii finale
Putem rezuma n finalul prezentrii datelor eseniale cunoscute asupra complexului
Golgi c:
- este singurul organit care a captivat permanent comunitatea cercettorilor; mai nti prin
suspiciune, apoi prin complexitate structural i funcional;
- se prezint ca o stiv de cisterne recurbate, cu polaritate morfologic, dar i biochimic;
- primete materialul asupra cruia opereaz de la RE i funcioneaz ca o plac turnant
pentru maturarea, sortarea i direcionarea componentelor lizosomale, membranare, sau
de export ctre destinaia final;
- n tot ceea ce face este implicat un trafic intracelular permanent de membrane, pe care l
controleaz i regleaz prin mecanisme care sunt departe de a fi pe deplin elucidate;
- este un organit intens studiat n momentul de fa, pe celule vii, folosindu-se proteine
himerice fluorescente, exprimate dup transfecii cu gene inserate n plasmide.
Este de ateptat ca viitorul apropiat s aduc noi date legate de acest organit cu
implicaii semnificative asupra cunoaterii i nelegerii unor procese celulare eseniale n
descrierea celulei normale i n stabilirea limitelor de la care se poate defini patologia
celular. Se va putea astfel trece de la definirea patologicului prin simptomatologie clinic, la
definirea sa pe baza deviaiilor subtile de la ceea ce reprezint normalul la nivel fenomenelor
celulare i moleculare.

Bibliografie
Fraquhar MG, Palade GE. (1998) The Golgi apparatus: 100 years of progress and controversy. Trends Cell
Biol. 8, 2-10.
Leabu M. (2006) Membrane fusion in cells: Molecular machinery and mechanisms. J Cell Mol Med. 10, 423427.
Glick BS. (2000) Organization of the Golgi apparatus. Curr Opin Cell Biol. 12, 450-456.
Lippincott-Schwartz J, Roberts TH, Hirschberg K. (2000) Secretory protein trafficking and organelle
dynamics in living cells. Annu Rev Cell Dev Biol. 16, 557-589.
Bonifacio JS, Glick BS. (2004) The mechanism of vesicle budding and fusion. Cell. 116, 153-166.
Fath KR, Burgess DR. (1993) Golgi-derived vesicles from developing epithelial cells bind actin filaments and
possess myosin-I as a cytoplasmically oriented peripheral membrane protein. J Cell Biol. 120, 117-127.
Allan VJ, Thompson HM, McNiven MA. (2002) Motoring around the Golgi. Nature Cell Biol. 4, E236-E242.
Palade G. (1975) Intracellular aspects of the proces of protein synthesis. Science. 189, 347-358.
Nakano A. and Luini A (2010) Passage through the Golgi Curt Opin in Cell Biol. 2010, 22:471478

14

Dr. Mircea Leabu, Dr. Ana Maria Enciu Aparatul Golgi, curs pentru studenii la medicin
Nakamura N, Wei JH and Joachim Seemann J (2012) Modular organization of the mammalian Golgi
apparatus. Cell. Jun 13;133(6):1055-67. doi: 10.1016/j.cell.2008.04.044
Patterson GH, Hirschberg K, Polishchuk RS, Gerlich D, Phair RD, Lippincott-Schwartz J. (2008)
Transport through the Golgi apparatus by rapid partitioning within a two-phase membrane system. Curr. Opin
Cell Biol 24:467474.
Leabu M, Nicolson GL. (2014) Cell secretion and membrane fusion: highly significant phenomena in the life
of a cell. Discoveries. 2014 Jul-Sep; 2(3): e30. DOI: 10.15190/d.2014.22
Leabu M, Niculite CM. (2014) Porosome: a membrane microdomain acting as the universal secretory portal in
exocytosis. Discoveries. 2014 Jul-Sep; 2(3): e29. DOI: 10.15190/d.2014.21

15