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Prctica medicin de biomasa algal

Paola Corts Garduo


paoco93@gmail.com
23 de septiembre de 2016
Introduccin
Las tecnologas en cuanto a produccin de Spirulina han avanzado bastante en
los ltimos 30 aos, resultando una mayor calidad de producto con menores
costos. Hay ms informacin disponible sobre su biologa, biotecnologa y
aplicaciones nutricionales, as como para la aplicacin de biocombustibles y
aplicacin sanitaria (Koru, 2012). Las microalgas, pueden ser una fuente de
compuestos bioactivos valiosos, por ejemplo, pigmentos, vitaminas u otros
complementos alimenticios, as como metabolitos secundarios con actividad
farmacolgica altamente selectiva (Huarachi et al., 2013).
Los mtodos para estimar el nmero de microorganismos pueden medir la
cantidad de clulas, la masa celular o la actividad celular. Los mtodos que
cuantifican la cantidad de clulas son tiles principalmente para enumerar
organismos como bacterias o levaduras, mientras los que miden la masa o
actividad celular pueden utilizarse para todos los microorganismos, incluidos los
hongos filamentosos, en los que es difcil cuantificar las clulas individuales. Una
cmara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la
suspensin a medir. El dispositivo presenta unas seales que determinan un
volumen conocido (por microlitros). Al contar bajo el microscopio el nmero de
partculas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de
partculas en la suspensin de origen. Existen distintas cmaras para el recuento
directo de microorganismos, para microscopios de campo claro, entre estas
tenemos, la cmara de Petroof-Hauser y cmara de Neubauer. Para el conteo de
clulas por la cmara de neubauer se realiza cuadro por cuadro y se hace un total.
Alrededor de cada cuadricula se observa que hay tres lneas que delimitan el
cuadro, que son fundamentales en el momento del conteo ya que definen cuales
clulas son contables o cuales estn fuera del campo de conteo. Las clulas que
no tocan la segunda lnea son contables, si la tocan o estn encima de ella no se
incluyen. Grficamente se puede apreciar la forma correcta de conteo. Las clulas
que tiene una X son las que no se deben contar (Gonzlez, 2010).

Objetivos
Lograr determinar biomasa algal a partir de 3 diferentes tcnicas:
espectrofotometra, conteo de clulas por cmara de Neubauer y por medio del
peso en fresco de biomasa.
Tener una comparacin precisa de produccin de biomasa de lago de Chapala
contra la produccin que se tienen en tanques controlados.
Metodologa
A partir de una muestra tomada del lago de Chapala se realiz el conteo de
clulas con ayuda de una cmara de Neubauer, un microscopio y un contador. Se
registraron los resultados obtenidos.
Con un matraz de fondo plano se tomaron 1000 mL de muestra de cada uno de
los nueve tanques, se pasaron los 1000 mL por una red micromtrica para
capturar la biomasa, se exprimi para obtener la biomasa lo ms seca posible y
con ayuda de una balanza se registr el peso de cada muestra.
Se tom una pequea muestra de cada uno de los nueve tanques y se ley la
absorbancia a 464 nm y 760 nm de cada uno a travs de un espectrofotmetro.
Se realiz una comparacin de los resultados obtenidos contrastando el peso de
la biomasa contra la absorbancia obtenida.
Resultados
Conteo cmara de Neubauer = 2996 x 10,000 = 29, 960,000 de clulas por mL.

Tanque
4
5
6
7
12
13
14
A1
A2

464 nm
0.980
0.578
0.606
0.024
0.748
0.094
0.642
0.374
0.726

760 nm
0.589
0.244
0.423
0.063
0.457
0.071
0.485
0.317
0.607

Peso (g)
2.0991
1.4473
0.7924
0.7470
2.9749
0.3389
1.5582
1.1987
1.3987

Tabla 1. Se muestran resultados obtenidos de los 9 tanques con espectrofotmetro y


bscula.

Discusin
Se logr comparar resultados de modo que correspondieron los datos obtenidos
por absorbancia con los del peso, pudindose observar (Fig. 1) que entre mayor
es la absorbancia mayor es el peso, aunque no es una generalidad. Por lo que si
se tiene un tanque en el que se le cosecha una cierta cantidad de mL, siempre es
bueno a su vez tomar las medidas de absorbancia para estar seguros que es apto
para cosecharse.
3.5
3
2.5
2

464 nm
760 nm

1.5

Peso (g)

1
0.5
0
4

12

13

14

A1

A2

Figura 1. Se muestra la relacin del peso con los datos de absorbancia, donde se observa
que el tanque 12 muestra mayores picos de absorbancia conforme al peso de biomasa.

Cuando se realiza una investigacin, dependiendo de sus requerimientos, se


escoge un mtodo para aplicarse. Si lo que se quiere es llevar un conteo de
microorganismos ms preciso dentro de una muestra, se emplea el conteo en
cmara de Neubauer, el cual nos permitir obtener la densidad a su vez de las
partculas de suspensin. Si lo que se requiere es obtener la cantidad de biomasa
por litro, se utiliza un cosechado con red y se exprime para obtener peso fresco. Si
lo que se necesita es saber la absorbancia de la muestra a cierta longitud de onda,
se utiliza la espectrofotometra, del mismo modo, para obtener resultados ms
precisos se pueden emplear dos o tres mtodos a la vez y hacer una relacin
entre ellos para tener menos margen de error. De acuerdo al resultado obtenido se
puede afirmar que la cmara de Neubauer permite hacer un recuento superficial
de las clulas de microalgas, sin embargo no permite distinguir las clulas viables

de las no viables, por lo que es importante aplicar las tcnicas que sean
necesarias para la investigacin.
Conclusin
El mtodo de conteo por cmara de Neubauer permite un anlisis cuantitativo de
las clulas en estudio, por medio del depsito de la alcuota en la superficie de la
cmara para ser observada en el microscopio. Este mtodo permite contabilizar
las clulas sin distincin de viabilidad, lo cual se convierte en una desventaja para
la aplicacin de este en el conteo de poblaciones con baja concentracin.
La aplicacin de diversas tcnicas para determinar biomasa algal favorece a
resultados ms precisos y as poder mejorar cosechas de microalgas a gran
escala.
Literatura citada
Gonzles, M.S. 2010. Tcnicas para medicin de biomasa. Universidad de Sucre.
Facultad de Ingeniera. Programa de Ingeniera Agroindustrial. Biotecnologa.
Bolivia. 12-16 pp.
Huarachi, R.O, Yapo, U.,Dueas, A., Soto, J.,Gonzlez, R. 2013. Produccin de
Spirulina platensis (Cyanophyta) en fotobioreactor tubular cnico bajo condiciones
de laboratorio. Laboratorio de Biologa Acutica, Departamento Acadmico de
Biologa, Universidad Nacional de San Agustn (UNSA), Per. 11(2). 217-227.
Koru, E. 2012. Earth food Spirulina(Arthrospira): Production and Quality Standarts.
Food
Additive.
El
Samragy
(Ed.)
InTech,
Available
from:
http://www.intechopen.com/books/food-additive/earth - food - spirulinaarthrospiraproduction - and qualitystandarts.