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OBJETIVOS:
INTRODUCCIN
La vida depende de la existencia de catalizadores poderosos y especficos: las enzimas
(1) . Las enzimas son protenas catalizadoras, es decir; sustancias que, sin consumirse
en una reaccin, aumentan notablemente su velocidad. La funcin de las enzimas
consiste en disminuir la energa de activacin de una reaccin con el fin de incrementar
su velocidad de reaccin (2) . Cabe resaltar que su funcin est sometido a condiciones
muy definidas de pH, temperatura, concentracin de sustrato y cofactores. El equilibrio de
una reaccin no se ve afectado por la enzima.
La concentracin de sustrato a la que la velocidad de una reaccin es la mitad de la
velocidad mxima es la constante de Michaelis, Km,(figura 1) que es caracterstica para
cada enzima que acta sobre un sustrato determinado.
PROCEDIMIENTO:
MATERIALES Y MTODOS:
RESULTADOS:
Variacin A
405 nm
[S] (mM)
Vo
(mol/min)
1/[S]
1/Vo
10
0.044
0.00017246
1.4841x10-6
5798.4375
673772.727
-6
25
0.13
0.00107788
4.3851x10
927.75
228046.154
50
0.15
0.00431151
5.0597x10-6
231.9375
197640
0.00979989
-6
103.083333
140502.37
-5
57.984374
85189.6552
-5
1.7068x10
14.4960938
58588.9328
-5
3.62402344
40225.2374
75
0.211
100
200
400
0.348
0.01724603
0.506
0.0689841
0.737
0.27593641
7.1173x10
1.1739x10
2.486x10
GRFICA [2]
1800
1600
1400
1200
1000
1/Vo 800
600
400
200
0
1/V
Linear (1/V)
Linear (1/V)
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
1/[S]
PREGUNTAS:
- Velocidad vs. Concentracin de Sustrato (v vs [S]) Cmo se denomina
esta grfica? Qu tipo de curva es?
CUESTIONARIO
a) Cmo se interpreta y qu importancia tiene el valor Km?
El km se interpreta como la constante mi Michaelis. Esta constante puede variar
de una enzima a otra, cabe resaltar que puede ser para diferentes sustratos de
la misma enzima (1) .
Absorbancia (nm)
0.0938
0.779
2.503
0.995
Velocidad
0.01876
0.1558
0.5006
0.199
GRFICA [3]:
0.6
0.5
0.4
Velocidad 0.3
0.2
0.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Temperatura C
Grfica 3: Efecto
enzimtica
El eje y representa la temperatura en grados centgrados y el eje x la
velocidad medida en microlitros por minuto, se observa que adopta una
forma relativamente igual a una campana, donde el punto mx es a los 37
C con una absorbancia de 2.503. Cabe resaltar que al incrementar la
temperatura la absorcin disminuye considerablemente, tanto que a los 91
C llega a una absorbancia de 0.995 segn nuestros datos.
a) A qu temperatura tiene mayor actividad la enzima? Explique por qu
La enzima tiene mayor actividad enzimtica a la temperatura de 37 C, porque a esta
temperatura la enzima llega a un punto mximo, es decir la actividad cataltica llega a
la temperatura ptima .
C. EFECTO DE A VARIACIN DE pH
a) Grafique en un papel milimetrado Actividad Enzimtica vs. pH
pH
6
7
8
9
Absorbancia (nm)
0.187
0.167
0.227
0.655
Velocidad
0.0374
0.0334
0.0454
0.131
[FIGURA 4] :
0.14
0.12
0.1
0.08
Velocidad
0.06
0.04
0.02
0
5.5
6.5
7.5
8.5
9.5
pH
DISCUSIN:
CONCLUSINES:
La fosfatasa alcalina tiene una cintica de Michaelis Menten, hiprbola
rectangular. Las constante cataltica Km de la enzima segn nuestro resultados
fue de 0.43 M y la Vmax 0.013 mM/S-1 .
FUENTES BIBLIOGRFICAS:
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Nelson, David. Cox M. Nelson (2013) Lehninger - Principios de Bioquimica 6ta
edicin. 2013. p. 75188.
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Brcena Ruiz JA, Garca Alfonso C, Padilla Pea CA, Martnez Galisteo E, Dez
Dapena J. Caracterizacin cintica de la fosfatasa alcalina. 2013;113.
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Rodrguez JS, Surez ES, Basts RG, Muoz PP, Viets C. Por qu aumentan
las fosfatasas alcalinas? 2016;29(4):2415.
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