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HELIANA KARENINA BARONI SILVEIRA

RELATRIO DE ESTGIO SUPERVISIONADO EM BANCO DE SANGUE


VETERINRIO DE PEQUENOS ANIMAIS

CURITIBA
2011

HELIANA KARENINA BARONI SILVEIRA

RELATRIO DE ESTGIO SUPERVISIONADO EM BANCO DE SANGUE


VETERINRIO DE PEQUENOS ANIMAIS

Trabalho apresentado para concluso do


Curso de Medicina Veterinria da
Universidade Federal do Paran.
Supervisora: Prof.
Locatelli Dittrich

Dra.

Rosangela

Orientadora: Prof. Dra. Denise Tabacchi


Fantoni

CURITIBA
2011

Dedico este trabalho aos meus pais,


pelo incentivo, fora e carinho
que sempre me deram.

AGRADECIMENTOS

Aos meus pais, Joana Maria Baroni Silveira e Helio Miguel Silveira, que
sempre acreditaram em mim, me apoiando, dando suporte e amor.
Aos meus irmos Helio (Inho) e Marcia, s minhas primas, aos meus avs
(que no esto mais aqui) e outros familiares que sempre torceram por mim. Um
agradecimento especial ao meu tio Joo Marcos Baroni, um exemplo de amor e
dedicao profisso.
Aos amigos, que me ajudaram a passar por esta etapa, pela companhia,
pelas risadas, pelas (vrias) horas de estudo compartilhadas e pela ajuda em tantos
outros momentos. Especialmente: Alessandra, Bruna, Dani, Esther, Juliana, Kamila,
Luciane, Lusa, Martha, Natlia, Raquel, Suelen, Talita, Vanessa e Verena.
Aos professores, que fizeram parte deste caminho contribuindo para minha
formao pessoal e profissional.
Agradeo Prof. Dra. Denise Tabacchi Fantoni, pela oportunidade de
estgio, Dra. Simone Gonalves (Hemovet), Luciana Kinoshita pela ajuda e
disponibilidade, doutoranda Ludmila Rodrigues Moroz e s mestrandas Lilian
Tatibana e Karin D. Botteon, por tudo o que me ensinaram durante o meu estgio.
E finalmente, aos animais, grande motivo da escolha da minha profisso.

Muito Obrigada!

SUMRIO

LISTA DE FIGURAS....................................................................................................v
LISTA DE GRFICOS E TABELAS...........................................................................vi
LISTA DE ABREVEATURAS, SIGLAS E SMBOLOS..............................................vii
RESUMO....................................................................................................................viii
1. RELATRIO DE ESTGIO
1.1. Introduo..............................................................................................................9
1.2. Objetivos................................................................................................................9
1.3. Descrio do estgio
1.3.1. Estrutura e equipamentos......................................................................10
1.3.2. Atividades desenvolvidas......................................................................11
1.3.2.1. Coletas.....................................................................................12
1.3.2.2. Processamento........................................................................16
1.3.2.3. Exames....................................................................................21
1.3.2.4. Controle de qualidade..............................................................22
1.3.2.5. Acompanhamento de transfuses...........................................23
1.3.2.6. Utilizao dos hemocomponentes...........................................24
1.3.2.7. Projetos de pesquisa................................................................26
1.4. Discusso............................................................................................................26
1.5. Consideraes finais...........................................................................................27
2. Avaliao de TTPA, TP, protenas totais, fibrinognio e albumina em plasma
fresco congelado canino de acordo com diferentes perodos de estocagem...28
3. REFERNCIAS ADICIONAIS................................................................................39
4. ANEXOS
4.1. Ficha de acompanhamento de transfuses sanguneas.....................................40
4.2. Archives of Veterinary Science............................................................................41

iv

LISTA DE FIGURAS

Figura 1- Doao de sangue de co..........................................................................12


Figura 2- Gato doador de sangue..............................................................................13
Figura 3- Coleta de sangue em co...........................................................................15
Figura 4- Homogeneizador automtico......................................................................15
Figura

5-

Bolsas

de

sangue

total

em

centrfuga

para

separao

em

hemocomponentes.....................................................................................................17
Figura 6- Selador para separao de bolsas satlites...............................................17
Figura 7- Bolsa de concentrado de hemcias............................................................18
Figura 8- Bolsas de concentrado de plaquetas no agitador de plaquetas.................19
Figura 9- Extrator de plasma......................................................................................19
Figura 10- Plasma antes do congelamento................................................................20
Figura 11- Preparao de crioprecipitado..................................................................20
Figura 12- Hemcias em teste de reao cruzada maior negativo em microscopia
ptica..........................................................................................................................22

LISTA DE GRFICOS E TABELAS

Grfico 1- Proporo dos hemocomponentes utilizados no perodo de estgio......25


Grfico 2- Proporo de transfuses realizadas em ces e gatos............................25
Tabela 1- Proporo de atividades (em horas) realizadas durante o estgio na USP
(ago a set /2011)........................................................................................................11
Tabela 2- Parmetros avaliados durante a transfuso..............................................23
Tabela 3- Afeces dos animais avaliados durante a transfuso..............................24
Tabela 4- Total de hemocomponentes utilizados.......................................................25
Tabela 5- Avaliao de tempo de tromboplastina parcial ativada em bolsas de
plasma fresco congelado............................................................................................31
Tabela 6- Avaliao de tempo de protrombina em bolsas de plasma fresco
congelado...................................................................................................................32
Tabela 7- Avaliao de protena total em bolsas de plasma fresco congelado.........33
Tabela 8- Avaliao de fibrinognio em bolsas de plasma fresco congelado...........34
Tabela 9- Avaliao de albumina em bolsas de plasma fresco congelado................35

vi

LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS

ALT- alanina aminotransferase


CH- concentrado de hemcias
CP- concentrado de plaquetas
CPDA-1- citrato fosfato dextrose adenina
DP- desvio padro
F.A.- fosfatase alcalina
FMVZ- Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia
HOVET- hospital veterinrio
IRC- insuficincia renal crnica
mov/min- movimentos por minuto
mg- miligramas
ml- mililitros
PFC- plasma fresco congelado
PT- protena total
RPM- rotaes por minuto
ST- sangue total
TP- tempo de protrombina
TTPA- tempo de tromboplastina parcial ativada
USP- Universidade de So Paulo
l- microlitros

vii

RESUMO
O estgio supervisionado ocorreu no Banco de Sangue Veterinrio da
Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo, em
So Paulo- SP. O perodo foi de 01 de Agosto a 30 de Setembro de 2011,
totalizando 352 horas. Os objetivos do estgio foram o acompanhamento das
atividades de coleta de sangue dos animais doadores, processamento de
hemocomponentes, parte laboratorial do processo e acompanhamento de transfuso
sangunea de ces. Foram realizados dois projetos de pesquisa intitulados:
Reaes transfusionais na rotina de um hospital veterinrio e Avaliao de TTPA,
TP, protenas totais, fibrinognio e albumina em plasma fresco congelado canino de
acordo com diferentes perodos de estocagem exposto na segunda parte deste
trabalho.

viii

1. RELATRIO DE ESTGIO

1.1 Introduo
O estgio curricular supervisionado foi realizado no Laboratrio de
Hematologia e Banco de Sangue do Departamento de Cirurgia (VCI) da Faculdade
de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade de So Paulo (FMVZ/USP).
Ocorreu no perodo de 01 de Agosto a 30 de Setembro de 2011, totalizando 352
horas. Foi realizado sob a orientao da Prof Dra. Denise Tabacchi Fantoni. O local
escolhido para o estgio foi a FMVZ-USP pelo grande prestgio da instituio em
mbito nacional. Alm de ser referncia no pas, a USP possui um dos poucos
bancos

de

sangue

veterinrio

do

Brasil.

Possui

uma

rotina

de

coletas, processamento de exames e separao de hemocomponentes que mantm


o banco de sangue ativo e disponvel para o uso no prprio hospital da
Universidade.
O estgio neste local foi muito proveitoso para aprendizado na rea de
hemoterapia em pequenos animais e aprimoramento na rea de patologia clnica
animal.

1.2 Objetivos

1.2.1 Objetivo geral do estgio


Desenvolver conhecimento e prtica na rea de banco de sangue veterinrio
e medicina transfusional em pequenos animais.

1.2.2 Objetivos especficos do estgio


Acompanhar as etapas da cadeia produtiva de um banco de sangue, como
coletas de sangue em bolsas, processamento, armazenamento, aplicaes de
hemocomponentes e acompanhamento de transfuses sanguneas em ces e
gatos.

O estgio envolveu as seguintes atividades:


- coleta de sangue;
- processamento de hemocomponentes;

10

- realizao de exames (hemograma, bioqumicos, sorolgicos -snap 4Dx- e teste de


reao cruzada);
- acompanhamento de transfuses;
- discusso de casos.

1.3 Descrio do estgio


A FMVZ-USP, localizada Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva, 87 em
So Paulo-SP foi inaugurada em 1981 e possui um Hospital Veterinrio que realiza
atendimento clnico e cirrgico de pequenos e grandes animais. O banco de sangue
desta instituio faz parte do Departamento de Cirurgia de Pequenos Animais (VCI),
e integrado ao servio de anestesia veterinria. Atende exclusivamente demanda
interna do hospital universitrio, no sendo realizada venda de hemocomponentes
para outras clnicas e hospitais. A rotina do banco de sangue mantida,
principalmente por ps-graduandos, sendo uma doutoranda e duas mestrandas,
alm de estagirios e alunos de iniciao cientfica.
Durante o perodo do estgio, foi possvel acompanhar a rotina do local,
participando de coletas de sangue de animais, processamento das bolsas de sangue
de co, realizao de exames bioqumicos e hemogramas dos animais doadores,
realizao de testes sorolgicos para Dirofilaria, Ehrlichia, Anaplasma e Borrelia
(com Snap 4dx para ces), triagem de possveis doadores (exames fsicos e
laboratoriais), tipagem sangunea de gatos, realizao de teste de compatibilidade
(reao cruzada) e acompanhamento de transfuses em ces.

1.3.1 Estrutura e equipamentos


O laboratrio de hematologia e banco de sangue possui uma sala prpria,
contendo

todos os equipamentos necessrios

para

processamento

de

hemocomponentes e seu armazenamento. Tambm possui aparelhos e materiais


para realizao de exames bioqumicos e hemogramas.
Possui um microscpio ptico (Nikon Eclipse E200), contador de clulas
diferencial (Evlab), um equipamento de hemograma composto por centrfuga (QBC
VetCentrifugue- Idexx) e pelo leitor (QBC VetAutoreader), microcentrfuga (Evlab),
centrfuga (TDL80-2BCenterbio), um equipamento para exames bioqumicos
(Reflotron Plus- Roche), uma centrfuga para bolsas de sangue (RC-3B Refrigerated
Centrifugue - Sorvall Instruments), uma geladeira 4C (Metalfrio), freezer (-20C) ,

11

coagulmetro (Coagutimer III- Inlab), agitador de plaquetas (PlaquetaMix- Fresenius


HemoCare), extrator de plasma (Fanem), balana de preciso (Marte), selador
(TermoClamp- Fresenius HemoCare), computador e impressora.
Neste laboratrio as bolsas so processadas e armazenadas, e os exames
so realizados (exceto sorologia para leishmaniose que feita no Centro de
Controle de Zoonoses de So Paulo). Alm destes equipamentos, existe o material
para coleta de sangue, que levado a campo, como o homogeneizador de bolsa
(HemoMix LT- Fresenius Hemocare).

1.3.2 Atividades desenvolvidas


Durante o estgio, foram desenvolvidas todas as atividades que envolvem a
obteno dos hemocomponentes, tais como: participao e realizao de coletas,
processamento de hemocomponentes, realizao dos hemogramas, exames
bioqumicos e testes sorolgicos, realizao de prova de compatibilidade (reao
cruzada), tipagem sangunea de gatos, acompanhamento da transfuso sangunea,
realizao de projeto de pesquisa (Avaliao de TTPA, TP, protenas totais,
fibrinognio e albumina em plasma fresco congelado de ces de acordo com
diferentes perodos de estocagem).

Tabela 1- Proporo de atividades (em horas) realizadas durante o estgio na USP


(ago a set /2011)
Atividades Desenvolvidas

Proporo de horas
aproximadas

Realizao de projeto de pesquisa

25%

Realizao de exames

20%

Acompanhamento de coletas

19%

Acompanhamento de transfuses

15%

Processamento de hemocomponentes

10%

Discusso de casos

7%

Acompanhamento de visitas de triagem

4%

12

1.3.2.1 Coletas
As coletas so realizadas geralmente a campo, com transporte oficial em
carro da FMVZ-USP, em canis ou gatis que foram pr-selecionados atravs de
triagem, onde so realizados hemograma, exame bioqumico, testes sorolgicos dos
possveis doadores (ces so testados para Leishmaniose, Erliquiose, Doena de
Lyme e Anaplasmose e gatos para FIV, FeLV e Micoplasmose). Caso os animais
estejam saudveis e apresentem caractersticas especficas para doao (peso,
idade e comportamento) se tornam doadores regulares.
A cada nova coleta, que feita no mnimo a cada trs meses, so realizados
novos testes sorolgicos, hemogramas e exames bioqumicos dos doadores.

Animais doadores
O co doador de sangue (Fig. 1) deve ter entre 2 e 8 anos de idade, estar
clinicamente saudvel, pesar mais de 27kg e ter temperamento dcil e de fcil
manejo, evitando necessidade de sedao. Nenhum co foi sedado para o
procedimento durante o perodo de estgio.

Figura 1- Doao de sangue de co. O animal permanece sobre a mesa sob


conteno fsica, o sangue flui por gravidade para a bolsa que se encontra prxima
ao cho. A coleta feita por puno da Veia Jugular.

O gato (Fig. 2), da mesma forma que o co, deve estar clinicamente saudvel,
negativo para as doenas pesquisadas. Deve ter mais de 2 anos de idade e pesar

13

mais de 4 kg. Em gatos, devido maior dificuldade de conteno, utiliza-se


Butorfanol (0,1 mg/kg) para auxiliar o manejo. Os gatos recebem soro fisiolgico
durante a coleta para evitar efeitos adversos coleta, devido ao volume retirado,
como formao de trombos e choque hipovolmico.

Figura 2- Gato doador de sangue. O animal recebe Butorfanol 15 minutos antes da


coleta, facilitando a conteno. O sangue flui por gravidade, por auxlio de seringa
ou por utilizao de cmara de vcuo. A coleta feita por puno da Veia Jugular.

Durante o estgio foram realizadas coletas em 6 canis, sendo 1 de Pastor


Branco (nmero de bolsas), 1 de Bernese, 1 de Braco Alemo, 1 de Rottweiler, 1 de
Boxer e 1 de raas diversas. Alm dos ces de canil, foram feitas coletas em um
stio, sendo ces de diversos proprietrios e de diferentes raas, 2 coletas internas,
em que o proprietrio levou seu animal ao banco de sangue para doao, sendo 1
Pitbull e 1 Setter Irlands. Em cada coleta de co realizada a campo, foram
coletadas no mnimo 3 bolsas e no mximo 9 bolsas. Em gatos foram realizadas 3
coletas, sendo uma em um gatil da raa Maine Coon, 2 coletas internas em gato
SRD.
No total, foram 12 coletas, sendo 9 de ces e 3 de gatos. Na coleta externa
de felino, no foi possvel coletar adequadamente, pois o animal estava excitado,
comprometendo a coleta e a qualidade da bolsa, portanto a bolsa foi descartada.

14

Volume coleta
O volume coletado ir depender do tamanho do animal, sendo considerados
11 ml/kg para ces e gatos. O valor mnimo para co de 300 ml de sangue total,
pois com um volume menor que este a proporo de CPDA-1 (anticoagulante
utilizado) fica acima do adequado, podendo causar intoxicao no animal
transfundido, uma vez que este anticoagulante seqestra clcio, podendo levar a
uma hipocalcemia no receptor.
Em gatos a bolsa preparada de forma estril com auxlio de um conector, e
a quantidade de anticoagulante dentro da bolsa calculado individualmente para o
volume que o animal est apto a doar.

Tcnicas de coleta
Tanto em ces, quanto em gatos, a coleta foi feita a partir de puno jugular,
precedida por anti-sepsia com clorexidine. A tricotomia indicada, porm como
grande parte dos doadores de animais de exposio, a pelagem mantida, e a
anti-sepsia feita com mais cuidado, no havendo problemas com contaminao. O
sangue flui diretamente para a bolsa, que ligada com a agulha de puno, no
havendo contato do sangue com o ar. O fluxo de sangue deve ser constantemente
avaliado e a bolsa deve ficar em movimento para homogeneizao do sangue com o
anticoagulante (movimento manual ou em homogeneizador automtico -Fig.4-).
O sangue flui por gravidade, portanto o animal permanece sobre a mesa de
atendimento e a bolsa fica prxima ao cho (Fig. 3). Outra tcnica para coleta de
sangue de gatos posicionar a bolsa dentro de uma cmara a vcuo, fazendo com
que a coleta seja mais rpida. Tambm foi realizada coleta por seringa, em que a
seringa conectada bolsa e ao escalpe em sistema fechado, permitindo a
transferncia do sangue para a bolsa sem contato com o ar. A coleta por seringa
convencional, seguida de transferncia para a bolsa, no utilizada no banco de
sangue, devido ao fato de no poder armazenar a bolsa, j que h contato do
sangue com o ambiente, portanto o risco de contaminao alto e por ter disponvel
equipamentos e aparelhos que permitem uma coleta mais eficiente e fcil, com
menos contaminao.
Os 35 ces coletados durante o estgio foram pela tcnica da gravidade e
nenhum animal foi sedado. Das 3 coletas de gatos observadas, 1 foi por gravidade,
1 por vcuo e 1 por seringa (tcnica assptica). Todos os animais sofreram sedao

15

e somente a coleta com o uso do vcuo no foi bem sucedida por agitao
excessiva do animal. Outros gatos foram selecionados para doao, porm devido a
comportamento ou dificuldade de puno, no doaram sangue.

Figura 3- Coleta de sangue em co.

Figura 4- Homogeneizador automtico para bolsas de concentrado de hemcias.

Bolsas de sangue
Para ces, so utilizadas bolsas de sangue de uso humano, que contm
anticoagulante (CPDA-1). Deve-se coletar no mnimo 300 ml de sangue total para
no haver alta concentrao do anticoagulante, com risco de intoxicao no animal
receptor. As bolsas utilizadas so qudruplas, sendo possvel dividir o volume total
coletado em mais de uma bolsa, que podero ser usadas em animais que

16

necessitem um volume de sangue pequeno. Para gatos, so utilizadas bolsas


peditricas onde o anticoagulante transferido de forma estril de uma bolsa
tradicional para a peditrica em quantidade previamente calculada de acordo com o
peso do doador e o volume que ele poder doar.

1.3.2.2 PROCESSAMENTO

Armazenamento das bolsas ps-coleta


Imediatamente aps a coleta as bolsas contendo sangue total so
armazenadas em uma caixa trmica. No devem permanecer luz nem serem
resfriadas. Ao serem processados, cada hemocomponente tem um armazenamento
especfico. O concentrado de hemcias e o sangue total em geladeira at 4C, o
concentrado de plaquetas em temperatura ambiente (20 a 25C) e constante
movimento, o plasma fresco congelado, o plasma congelado, crioprecipitado e
crioplasma pobre so armazenados em temperatura de 22C.

Separao de hemocomponentes
As bolsas so processadas no mesmo dia da coleta no prprio banco de
sangue. Somente as bolsas de ces so divididas em hemocomponentes, em gatos
ainda usado sangue total, porm h previso de iniciar o processamento destas
bolsas em breve.
o CONCENTRADO DE HEMCIAS (CH)
Para a obteno deste hemocomponente realizada uma centrifugao das
bolsas a 2500rpm por 7 minutos (Fig. 5). As hemcias iro se depositar ao fundo da
bolsa e o plasma permanecer como sobrenadante. A bolsa retirada da centrfuga e
colocada no extrator de plasma, onde por meio de uma leve compresso, o plasma
deslocado para uma bolsa satlite. As bolsas de plasma e de hemcias so
separadas com auxlio de um selador (Fig. 6). Na bolsa de concentrado de hemcias
deve permanecer aproximadamente 5cm do plasma, para o metabolismo das
clulas. Para determinar o volume da bolsa, primeiramente deve-se tarar a balana
com uma bolsa vazia, e ento pesar a bolsa de concentrado de hemcias. Esse
peso dado em gramas convertido a mililitros dividindo o valor por 1,08 (densidade
do concentrado de hemcias). O hematcrito da bolsa de CH feito e ento ela

17

pode ser acondicionada no refrigerador a 4C. O hematcrito padro destas bolsas


de 70%. O prazo de validade de 21 dias, porm em coletas em que houve
necessidade de mais de uma puno, a validade de somente 5 dias, devido
possibilidade de contaminao. Durante o estgio foram processados 23 CH (Fig. 7),
sendo que apenas o concentrado de hemcias de um animal foi descartado por
volume insuficiente.

Figura 5- Bolsas de sangue total em centrfuga para separao em


hemocomponentes.

Figura 6- Selador para separao de bolsas satlites.

18

Figura 7- Bolsa de concentrado de hemcias.


o CONCENTRADO DE PLAQUETAS (CP)
Para produzir concentrado de plaquetas utilizado o plasma que foi
previamente separado das hemcias. Este plasma deve ser avaliado quanto a sua
colorao e aspecto. importante saber detalhes sobre a coleta de sangue dos
animais, pois o plasma de animais que ficaram muito agitados ou nos quais foram
feitas duas punes venosas no ser utilizado para produo de concentrado de
plaquetas, uma vez que a ocorreu ativao das plaquetas. O plasma possvel de se
utilizar as plaquetas classificado quanto observao de turbilhonamento, de 1 a
5, sendo 5 timo. Para classificar o plasma, a bolsa deve ser colocada contra a luz,
agitar o plasma com os dedos e observar a formao de uma nuvem, que so as
plaquetas.
O plasma centrifugado a 3500 rpm por 15 minutos e separado por
gravidade, com auxilio de uma balana, at que o concentrado de plaquetas pese
entre 60 e 80 mg. O CP permanece em temperatura ambiente e em constante
movimentao (Fig. 8), tendo um prazo de 5 dias, pois a temperatura pode favorecer
o crescimento bacteriano. Essas bolsas devem ser avaliadas diariamente, quanto ao
turbilhonamento e turbidez. Uma bolsa no pode, nos 5 dias, cair 2 pontos da sua
classificao inicial, e nem apresentar turbidez. Se isso for observado, a bolsa
descartada.
Durante o estgio foram processadas 8 bolsas de CP.

19

Figura 8- Bolsas de concentrado de plaquetas no agitador de plaquetas.

o PLASMA FRESCO CONGELADO (PFC) E PLASMA CONGELADO


O plasma adquirido na separao do concentrado de hemcias (Fig. 9), e
para ser congelado deve aguardar meia hora aps a centrifugao (Fig. 10). Antes
de ser congelada, a bolsa pesada em balana, determina-se o volume, dividindo o
seu peso por 1,03 (densidade do plasma). A principal diferena entre o plasma
fresco congelado e o plasma congelado o tempo entre a coleta e o congelamento.
Se esse perodo for de at 4 horas, considerado plasma fresco congelado, caso
contrrio, considerado plasma fresco. A diferena entre as propriedades destes
hemocomponentes realizada pela presena de todos os fatores de coagulao,
inclusive os lbeis, como o V e VIII no PFC, que tambm rico em protenas
plasmticas.
Durante o estgio foram processadas 15 bolsas de PFC.

Figura 9- Extrator de plasma.

20

Figura 10- Plasma antes do congelamento.


o CRIOPRECIPITADO E CRIOPLASMA POBRE
O crioprecipitado obtido a partir do plasma fresco congelado. As bolsas de
PFC que estavam a -20C devem ser descongeladas a 4C, processo que demora
de 4 a 6 horas. Aps o descongelamento, as bolsas so centrifugadas a uma
temperatura de 0C por 15 minutos e extrado aproximadamente 90% do
sobrenadante (Fig. 11).
O crioprecipitado rico em fibrinognio, fator VIII, fator XIII. Foram
preparadas 4 bolsas de crioprecipitado no perodo do estgio.
O crioplasma pobre o produto separado do crioprecipitado. No banco de
sangue o crioplasma pobre descartado, pois ele pode ser substitudo pelo plasma
fresco congelado, estocado em grande quantidade. Foram produzidas 4 bolsas de
crioprecipitado.

Figura 11- Preparao de crioprecipitado.

21

o SANGUE TOTAL
No banco de sangue, somente sangue de felinos no separado em
hemocomponentes, sendo ento utilizado o sangue total. H projetos para em breve
iniciar o processamento de sangue de gatos. Foram somente 2 bolsas de sangue
total (felino).

1.3.2.3 EXAMES
So realizados hemogramas de todos os ces doadores e de outros ces do
proprietrio, como forma de recompensa, e de ces triados para serem futuros
doadores.
O hemograma feito no equipamento QBC VetAutoreader (IDEXX) que
fornece automaticamente hematcrito, nmero de leuccitos, nmero de plaquetas e
hemoglobina.
A realizao de contagem diferencial e avaliao morfolgica so feitas na
extenso sangunea corada com pantico rpido e em microscpio ptico. Foram
realizados 65 hemogramas.
Os exames bioqumicos so realizados no equipamento Reflotron Plus
(Roche), determinando creatinina, ALT e FA de animais que apresentaram alguma
alterao no exame fsico ou anamnese. Foram realizados 15 exames bioqumicos
no total.
Os testes imunolgicos, para Borreliose, Anaplasmose, Erliquiose e
Dirofilariose eram feitos atravs do Snap4Dx (Idexx) em 100% dos doadores e em
ces no doadores da propriedade que j apresentaram alguma destas afeces.
Houve 2 resultados positivos, em ces no doadores. Os testes para Leishmaniose
eram realizados em laboratrio externo, e no houve nenhum resultado positivo.
O teste de reao cruzada maior realizado com o objetivo de detectar
possveis anticorpos no plasma do receptor, contra algum componente das
hemcias do doador. Foram feitos 3 testes, pois normalmente realizado no
laboratrio de anlises clnicas do prprio hospital. No teste maior, utiliza-se soro do
animal receptor e hemcias do doador. O soro dividido em 3 tubos, em volume de
50 L. As hemcias so lavadas em soluo fisiolgica por 3 vezes. As hemcias
so suspendidas no soro em cada tubo, em volume de 50 L. Os tubos so
homogeneizados e acondicionados cada um a temperatura diferente (4C,

22

temperatura ambiente e 37C) por 30 minutos. Os tubos so homogeneizados e


observa-se se houve aglutinao macroscpica. A avaliao microscpica feita em
microscpio ptico em aumento de 20x ou 40x (Fig. 12). Para no haver resultado
falso positivo, j que aglutinao pode ser confundida com roulleaux eritrocitrio,
adicionada 1 gota de soluo fisiolgica na lmina. O teste menor executado da
mesma maneira que o teste maior, porm com hemcias do receptor e plasma do
doador.

Figura 12- Hemcias em teste de reao cruzada maior negativo em microscopia


ptica.

1.3.2.4 CONTROLE DE QUALIDADE


Para garantir a maior segurana possvel no uso dos hemocomponentes
produzidos no laboratrio, so realizadas algumas aes que testam a qualidade
das bolsas produzidas.
Para testar a inocuidade de bolsas de CH, que contm substrato com grande
possibilidade de contaminao, bolsas que passaram do prazo de validade e no
foram usadas so enviadas ao laboratrio de microbiologia, para realizao de
cultura. Nenhuma das 8 bolsas enviadas apresentou crescimento bacteriano.
Para CP, como j citado anteriormente, as bolsas so avaliadas diariamente,
durante os 5 dias que esto viveis, sendo qualquer alterao considerada negativa,
indicativo de contaminao e portanto no so mais utilizadas.
Para PFC no so realizados muitos testes de qualidade, portanto foi
desenvolvido um projeto de avaliao de parmetros de coagulao e quantidade de
protenas nessas bolsas, considerando o tempo de armazenamento da bolsa e
buscando possveis alteraes do tempo na qualidade e viabilidade da bolsa.

23

1.3.2.5 ACOMPANHAMENTO DE TRANSFUSES


As bolsas de sangue so utilizadas somente no Hovet-FMVZ/USP, pela
clnica e cirurgia. importante acompanhar as transfuses pelo risco de reao,
mesmo com o teste de reao cruzada no acusando incompatibilidade.
Existe um protocolo de acompanhamento de transfuses onde o animal
avaliado antes da transfuso, aps o incio da transfuso (primeiros 15 e 30 minutos)
e a cada meia hora at o final da transfuso (Anexo 1).
Os parmetros avaliados so: colorao de mucosas, frequncia cardaca,
frequncia respiratria, temperatura e comportamento.
Foram acompanhados 10 ces em transfuso de concentrado de hemcias.
As mdias dos parmetros at 150 minutos de transfuso esto relacionadas
na Tabela 2.

Tabela 2- Parmetros avaliados durante a transfuso.


Freqncia
cardaca (bpm)

Frequncia
respiratria
(mov/min)

Temperatura (C)

Inicial

122

31

37,5

Final

104

27

37,7

Dos 11 ces avaliados, todos estavam com as mucosas plidas e somente


um no apresentou as mucosas rseas ao final da transfuso.

24

Tabela 3- Afeces dos animais avaliados durante a transfuso.


Afeces

N de animais

Insuficincia renal

03

crnica (IRC)
lcera gstrica

02

(medicamentosa)
Pancreatite

02

Indefinidos

02

Reteno

01

placenta/anemia
hemoltica
Aplasia medular

01

Dos ces avaliados durante a transfuso, nenhum teve reao transfusional


aguda.
Em um animal houve reao transfusional tardia (hemlise 24 horas depois,
seguida de bito, no sendo confirmada se a transfuso foi determinante para o
bito).
Durante o estgio no foram acompanhadas as transfuses que ocorreram
em dias de coleta, em horrio em que estavam sendo feitos os hemogramas, em
projetos e em cirurgia.

1.3.2.6 UTILIZAO DE HEMOCOMPONENTES


O hemocomponente a ser utilizado escolha do clnico responsvel pelo
caso. A transfuso sangunea no realizada para tratamento de afeces, mas sim
para dar mais tempo para que o tratamento especfico tenha efeito.
No total utilizado pelo hospital no perodo de estgio, o concentrado de
hemcias foi o mais usado, sendo o concentrado de plaquetas o de menor uso.

25

Tabela 4- Total de hemocomponentes utilizados.


Hemocomponente

Nmero de bolsas

Concentrado de Hemcias

21

Plasma Fresco Congelado

12

Sangue Total

03

Concentrado de Plaquetas

02

TOTAL

38

Hemocomponentes (%)
7,89

5,26
CH

31,57

55,26

PFC
ST
CP

Grfico 1- Proporo dos hemocomponentes utilizados no perodo de estgio.

As transfuses foram mais frequentes em ces, sendo somente 3 gatos


transfundidos com sangue total. Isso ocorre pela dificuldade de obteno de bolsas
de sangue de gatos, e alta demanda, fazendo com que as bolsas no permaneam
em estoque. Outra situao que ocorre a coleta de sangue de um doador trazido
pelo proprietrio do animal debilitado, portanto o sangue j utilizado imediatamente
aps a coleta em um gato pr-determinado.

Transfuses (%)
13,15

Ces
86,84

Gatos

Grfico 2- Proporo de transfuses realizadas em ces e gatos.

26

A causa mais frequente para a transfuso sangunea foi IRC ou anemia


hemoltica, sendo utilizado o CH em ces com hematcrito menor de 15%. O CP foi
utilizado em hemorragias intensas e persistentes. O PFC teve maior uso em ces
com desidratao.

1.3.2.7 PROJETOS
Participao no projeto Avaliao de TTPA, TP, protenas totais,
fibrinognio e albumina em plasma fresco congelado de ces de acordo com
diferentes perodos de estocagem, apresentado na segunda parte deste trabalho.
Participao no projeto de levantamento de reaes transfusionais ocorridas
no Hospital Veterinrio da USP entre os anos de 2007 e 2010. Este projeto visou
avaliar todos os casos de reaes adversas relatadas durante as transfuses de
sangue realizadas neste perodo. Os casos em que houve relato de reao adversa
foram avaliados de acordo com dados contidos nas fichas dos animais, para
determinar se o episdio se tratava de reao transfusional ou no. As reaes
transfusionais

descritas

foram

classificadas

de

acordo

com

sua

origem,

caractersticas e sua provvel relao com a transfuso. A classificao entre


reaes imunolgicas ou no-imunolgicas, e como agudas e tardias. O trabalho
ainda est em andamento, portanto os dados no podem ser divulgados.

1.4 DISCUSSO
As atividades desenvolvidas na FMVZ-USP envolveram todas as reas
necessrias para o funcionamento de um banco de sangue, desde a coleta at a
utilizao dos hemocomponentes e seu controle de qualidade.
A rotina deste laboratrio menor que de um banco de sangue particular,
uma vez que o objetivo no a venda dos hemocomponentes para clnicas e
hospitais externos, mas para suprir a demanda interna da instituio e realizao de
pesquisas na rea de medicina transfusional.
A demanda maior para ces foi de concentrado de hemcias, seguido de
plasma fresco congelado. A procura por bolsas de sangue total para felinos
consideravelmente menor, uma vez que a utilizao deste recurso ainda no to
frequente (Griot-Wenk e Giger, 1995). Alm disso, a sua utilizao restrita, visto
que a disponibilidade das bolsas no frequente, a coleta dificultosa e as

27

restries por peso mnimo, comportamento adequado e aceitao do proprietrio a


oferecer o seu animal para um programa de doao limitam o nmero de doadores.
A seleo dos animais doadores essencial para que a transfuso seja
segura e eficiente (Green, 2002; Hohenhaus, 2004), portanto a existncia de um
canil ou gatil com doadores frequentes de extrema importncia para o
funcionamento de um banco de sangue, j que tais estabelecimentos j possuem
um controle sanitrio de doenas infecto-contagiosas, registro e histrico dos
animais doadores e animais acostumados com o procedimento da doao. Foi
observado que animais que esto doando sangue pela primeira vez geralmente
ficam mais agitados, porm a partir da segunda doao se mostram mais tranqilos,
tornando a coleta mais fcil e o produto com maior qualidade. A fidelizao do
proprietrio do canil com o banco de sangue tambm se mostra muito vantajosa,
pois em situaes de emergncia pode-se recorrer a tais canis ou gatis.
O estgio em um banco de sangue foi extremamente proveitoso, atingindo
todas as expectativas e por possibilitar a obteno de novos conhecimentos na rea
de hemoterapia veterinria.

1.5 CONSIDERAES FINAIS


O estgio no banco de sangue da FMVZ-USP cumpriu com os objetivos
gerais e especficos propostos, tanto no aprendizado de uma rea na qual eu no
tinha experincia prtica, quanto no aprimoramento de tcnicas laboratoriais.
Durante o perodo de estgio pude perceber o quanto importante para um
grande hospital manter um banco de sangue, com doadores cadastrados. Tambm
foi observado que a rotina para manter um banco de sangue em funcionamento
envolve mais etapas que somente coleta, processamento e encaminhamento do
produto, mas principalmente garantir produtos com qualidade e segurana, que iro
cumprir seu objetivo na clnica.

28

2. Avaliao de TTPA, TP, protenas totais, fibrinognio e albumina em plasma


fresco congelado canino de acordo com diferentes perodos de estocagem
(Evaluation of APTT, TP, total proteins, fibrinogen and albumin in canine fresh frozen
plasma on different storage times)

Resumo
A utilizao do plasma fresco congelado na clnica de ces de grande valor no
tratamento de coagulopatias e deficincia protica. Para avaliao da qualidade de
bolsas de plasma fresco congelado foram determinados TTPA (tempo de
tromboplastina parcial ativada), TP (tempo de protrombina), protenas totais,
fibrinognio e albumina em bolsas estocadas por diferentes perodos: at trs
meses, 3-6 meses, 6-9 meses, 9-12 meses e mais de 12 meses. No houve
diferena nos parmetros de acordo com o tempo de armazenamento, sugerindo
que o prazo de validade determinado para seu estoque est de acordo com a
manuteno de sua viabilidade, podendo ser utilizada com segurana.
Palavras-chave: armazenamento; plasma congelado; qualidade; validade

ABSTRACT
The use of the fresh frozen plasma in small animal practice is of great value in the
treatment of coagulopatias and protein deficiency. For evaluation of the quality of
fresh frozen plasma in stock, APTT (activated partial thromboplastin time), TP
(prothrombin time), total proteins, fibrinogen and albumin were determined. The time
of stock was: up to 3 months, 3-6 months, 6-9 months, 9-12 months and more than
12 months. The results had shown that there is no difference in these parameters
with the storage time, suggesting that the period of validity determined for its supply
is in accordance with the maintenance of its viability, thus being able to be used with
security.
Key words: expiration date; frozen plasma; quality; storage;

Introduo
O plasma fresco congelado (PFC) comumente utilizado na clnica de ces
para tratar coagulopatias (Logan, 2001), como a deficincia de fator Von Willebrand,
hemofilia A (deficincia de fator VIII), intoxicao por raticidas e para reposio de
albumina (Stokol e Parry, 1998; Chiaramonte, 2004; Rozanski, 2004).

29

O controle de qualidade do PFC, segundo a RDC 153 (2004) deve avaliar


parmetros como TTPA (tempo de tromboplastina parcial ativada) e fator VIII, sendo
considerado adequado TTPA at 20% acima do valor de pool e o fator VIII com no
mnimo 0,7UI/mL, no existindo um valor determinado para a concentrao de
albumina e fibrinognio para este hemocomponente.
Em bancos de sangue, o PFC pode ficar armazenado por um ano, desde que
mantido abaixo de -20C (Feldman e Sink, 2007), entretanto, como seu uso menor
quando comparado ao de concentrado de hemcias, existe excedente na produo.
Isso permite que sejam realizadas pesquisas sem prejuzo do estoque. Sabe-se,
tambm, que o armazenamento do PFC por um perodo longo pode reduzir as
concentraes de fatores de coagulao e prejudicar parmetros de coagulao
(Wardrop e Brooks, 2001). Portanto, a avaliao deste hemocomponente estocado
por diferentes perodos de tempo necessria para avaliar o controle de qualidade
interno, podendo, inclusive, redefinir perodos de estocagem.
Este projeto visa avaliar a qualidade do PFC canino de acordo com faixa de
tempo de estocagem. Atravs destas anlises ser possvel avaliar se o tempo de
estocagem interfere com a qualidade deste hemocomponente, reavaliando sua
validade. Foram realizadas mensuraes de Tempo de protrombina (TP); Tempo de
tromboplastina parcial ativada (TTPa); Protenas totais (PT); Fibrinognio e
Albumina.

Material e mtodos
Foram determinados parmetros bioqumicos e de coagulao em 22 bolsas
de PFC de ces estocadas entre -22C e -30C, em diferentes perodos de
armazenamento.
As amostras foram avaliadas em duplicata, sendo divididas em 5 grupos:

at 3 meses da coleta;

3 a 6 meses;

6 a 9 meses;

9 a 12 meses;

mais de 12 meses (+3 meses)

30

As bolsas contendo PFC foram selecionadas aleatoriamente, descongeladas em


temperatura ambiente, abertas, separadas em alquotas e descartadas.
A determinao de protena total, fibrinognio e albumina foram feitas por uma
mesma pessoa, sem conhecimento do grupo ao qual a amostra pertence.
Para determinao do fibrinognio foi utilizada tcnica de precipitao, em que o
plasma aquecido a 57C por 3 minutos em banho-maria, centrifugado por 5
minutos e a leitura feita atravs de um refratmetro (Kaneko e Smith, 1967).
A determinao de TTPA foi feita em aparelho automtico (Coagutimer IIIInlab), onde 50L de plasma citratado so adicionados a 50L de reagente de
cefalina, contendo fosfolipdeos provenientes de extrato de crebro de coelho, que
atuam como substituto plaquetrio. So adicionados 50L de cloreto de clcio,
promovendo uma recalcificao do plasma e o tempo de coagulao cronometrado,
avaliando a via intrnseca da coagulao (Pacific Hemostasis).
Para determinao de TP foi utilizado aparelho automtico (Coagutimer IIIInlab), onde adicionam-se 50L de plasma citratado a 100L de tromboplastina
(extrato tecidual), e o tempo de formao de cogulo cronometrado, avaliando assim
a via extrnseca da coagulao (Pacific Hemostasis). Tanto a determinao de TTPA
quanto de TP foram realizadas a temperatura de 37C.
Para a determinao de albumina foi utilizada tcnica colorimtrica (Verde de
Bromocresol)

em

espectrofotmetro

semi-automtico

(BIOPLUS

200)

(Doumas,1971). A protena total foi determinada por refratometria (refratmetro


manual).
Os dados foram analisados estatisticamente atravs de testes de Tukey.

Resultados
Os resultados dos testes de TTPA esto apresentados na Tabela 5, de TP na
Tabela 6, de protena total na Tabela 7, de fibrinognio na Tabela 8 e de albumina
na Tabela 9.

31

Tabela 5- Avaliao de tempo de tromboplastina parcial ativada em segundos em


bolsas de plasma fresco congelado.
TTPA
(segundos)
1

At 3 m

3-6 m

6-9 m

9-12 m

20,45

11,55

21,5

17,3

mais de 12
meses
22,15

22,3

15,2

16,15

15,65

15,35

29,3

19,9

12,8

18,15

18,3

17,05

17,6

17,05

15,2

28,9

18,85

14,25

17,6

14,45

18,1

17,8

17,9

17,35

20,3

16,45

17,15

13,8

15,25

15,95

15,7

15,55

14,4

15,5

19,85

16,7

14,8

17,25

18,65

19,3

10

14,95

16,2

15,2

11

14,55

14,25

12

16,75

14,7

13

15,7

15,95

14

13,65

15,2

15

18,15

19,9

16

17,25

21,8

17

17,35

18

22,9

19

19,2

20

17,6

21

18,65

22

15,25

Mdia

17,96364 15,76111 16,86563 17,10625

DP

3,466616 2,582002 2,531516 2,171313 4,193715536

m = meses

18,615

32

Tabela 6- Avaliao de tempo de protrombina em segundos em bolsas de plasma


fresco congelado.
Bolsas

At 3 m

3-6 m

6-9 m

9-12 m

15,45

12,15

13,8

14,5

mais de 12
meses
17,45

15,2

13

10,25

13,8

11,3

27,15

18,5

8,25

7,9

12,35

9,3

11,05

8,5

18,4

15,65

13,8

11,05

14,5

19,6

7,6

9,35

8,35

14,1

12,2

8,05

12,65

9,05

10,5

9,1

8,35

11,1

12,25

9,9

12,35

9,65

10

10,3

10,9

9,3

11

10

7,45

12

12,3

8,9

13

10,55

9,85

14

9,2

9,4

15

11,95

11,7

16

11

12,4

17

10,25

18

10,75

19

8,95

20

9,15

21

16

22

9,6

Mdia

12,74318 10,62222

DP

4,224681 3,486771 1,956868 2,581482 3,654392334

m = meses

10,425

11,12143

12,275

33

Tabela 7- Avaliao de protena total em bolsas de plasma fresco congelado.


Bolsas

At 3 m

3-6 m

6-9 m

9-12 m

4,8

6,8

mais de
12 meses
3,4

5,4

5,6

5,4

5,4

5,2

5,9

5,8

6,6

5,5

5,6

6,8

6,2

5,9

6,2

5,8

5,9

6,6

5,8

6,4

5,8

6,1

6,2

5,2

6,6

5,9

6,2

5,6

10

7,8

5,8

6,2

11

5,8

12

5,5

5,6

13

5,8

5,7

14

5,8

6,3

15

5,9

5,7

16

5,6

6,1

17

5,4

18

19

20

6,2

21

6,1

22

Mdia

6,086364

DP

0,786369 0,423421 0,239046 0,837513 1,1027239

m= meses

5,875

5,9

6,414286

5,16

34

Tabela 8- Avaliao de fibrinognio (g/dL) em bolsas de plasma fresco congelado.


Bolsas

At 3 m

3-6 m

6-9 m

9-12 m

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

Mdia

1,409091

DP

1,05375

m= meses

1,625

1,933333 3,285714

1,30247 2,120198

2,21467

mais de 12
meses

2
1,414213562

35

Tabela 9- Avaliao de albumina em bolsas de plasma fresco congelado.


Bolsas

At 3 m

3-6 m

6-9 m

9-12 m

1,95

2,1

2,6

2,5

mais de 12
meses
1,55

1,9

2,3

2,85

2,6

1,9

2,1

2,7

2,7

3,3

2,5

2,5

2,45

2,6

2,5

2,55

2,7

2,6

2,4

2,6

2,8

2,1

1,9

2,7

2,65

2,8

2,9

2,4

2,3

2,6

2,7

2,6

2,6

2,5

2,15

2,6

2,7

2,4

10

2,6

2,9

3,1

11

1,7

2,7

12

2,8

2,8

13

2,7

2,5

14

2,6

15

2,8

2,3

16

2,5

2,7

17

2,7

18

2,6

19

2,2

20

2,6

21

2,4

22

1,6

Mdia

2,461364 2,555556 2,665625 2,557143

2,295

DP

0,326938 0,236438 0,227097 0,411733 0,484452727

m= meses

Os resultados de TTPA, TP, fibrinognio e albumina no tiveram diferena


estatstica (teste de Tukey). Resultados que estavam muito fora do padro do grupo
foram excludos para novos testes, no havendo diferena dos resultados anteriores.

36

A protena total (PT) apresentou diferena estatstica, porm sem significado, uma
vez que tal resultado indicaria um aumento da protena total aps um ano, o que no
ocorre.

Discusso
Em estudo realizado por Rizzo et al. (2008), foram avaliado TP e TTPA em
plasma canino congelado a -20C por um perodo entre 4 e 7 meses. O TTPa teve
alterao significativa, aumentando em mdia de 13,2 segundos para 15 segundos.
O TP, com o mesmo tempo de armazenamento, no teve alterao significativa.
Fibrinognio, TP e TTPA em plasma humano congelado a -20C e -70C
foram mensurados por Alesci et al. (2009). Este estudo mostrou que o TTPA em
plasma congelado a -20C sofre alterao significativa, sendo que quando
congelado a -70C as alteraes so sutis.

O TP tambm teve alteraes no

congelamento a -20C. O fibrinognio no se alterou com o congelamento.


Fibrinognio, TP e TTPA tambm foram mensurados por Iazbik et al. (2001)
em plasma fresco congelado canino armazenado por at 30 dias a 2C e a -30C.
Nenhum dos parmetros se alterou nos perodos avaliados, demonstrando que o
perodo de validade determinado est de acordo com a manuteno da qualidade da
bolsa, para os parmetros avaliados.
Um teste importante que no foi realizado a mensurao do fator VIII,
anteriormente comprovado que h diminuio de concentrao com o tempo, assim
como o fator de von Willebrand (Wardrop K. J. e Brooks M. B., 2001).
Deve-se considerar que os grupos no esto uniformes por diferena na
quantidade de bolsas estocadas com diferentes datas de armazenamento, uma vez
que quando so utilizadas, so escolhidas aleatoriamente ou em razo de seu
volume.
Alguns valores que esto fora do padro do grupo podem ser atribudos s
particularidades do animal doador. Valores muito abaixo do esperado tambm
podem ser causados por uma coleta de sangue traumtica, causando uma ativao
da coagulao, e assim ocorrendo consumo desses fatores.

Concluso
A determinao da viabilidade de uma bolsa de plasma fresco congelado
importante porque a sua utilizao ocorre especialmente em emergncias, portanto

37

a sua qualidade deve ser sempre avaliada. Para os parmetros avaliados, no existe
diferena na qualidade da bolsa de PFC com at 15 meses de armazenamento a
temperatura mnima de -18C. Com isso define-se que at este perodo a utilizao
de PFC vivel e de qualidade. A partir destes resultados tambm se determina que
o perodo de validade utilizado para este material correto e no causa prejuzo ao
produto. Sugere-se que a mensurao do fator VIII seja feita com PFC com o
mesmo tempo de estocagem para comparar os resultados.

38

Referncias
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storage as -20C and -70C on prothrombine time, aPTT and plasma fibrinogen
levels. Thrombosis Research, 124, p.121-126, 2009.
CHIARAMONTE, D. Blood-Component Therapy: Selection, Administration and
Monitoring. Clinical Techniques in Small Animal Practice, v.19, n.2, p.63-67,
2004.
DOUMAS, B.T., BIGGS, H.G., WATSON, W. Albumin standards and the
measurement of serum albumin with bromocresol green. Clinica Chimica Acta, v.
31, p. 87-96, 1971
FELDMAN, B. F.; SINK, C. A. Hemoterapia para o Clnico de Pequenos Animais.
So Paulo: Editora Roca, 2007. 104 p.
IAZBIK, C.; COUTO, G.; GRAY, T. L. et al. Effect of storage conditions on hemostatic
parameters of canine plasma obtained for transfusion. American Journal of
Veterinary Research, v. 62, n.5, p.734-735, 2001.
KANEKO, J.J.; SMITH, R. The estimation of plasma fibrinogen and its clinical
significance in the dog. The California Veterinarian, Sacramento, CA, v.21, n.8,
p.21-24, 1967.
LOGAN, J. C.; CALLAN, M. B.; DREW, K. et al. Clinical indications for use of fresh
frozen plasma in dogs: 74 dogs (October through December 1999). Journal of the
American Veterinary Medical Association, v.218, n.9, p.1449-1455, 2001.
RESOLUO-RDC N 153, DE 14 DE JUNHO DE 2004. Disponvel em <
http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/resolucao_153_2004.pdf> Acesso em:
15/11/2011.
RIZZO, F.; PAPASOULIOTIS, K.; CRAWFORD, E. et al. Measurement of
prothrombine time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT) on canine
citrated plasma samples following different storage conditions. Research in
Veterinary Science, 85, p.166-170, 2008.
ROZANSKI, E.; LAFORCADE, A. M. Transfusion Medicine in Veterinary Emergency
and Critical Care Medicine. Clinical Techniques in Small Animal Practice, v. 19, n.
2, p.83-87, 2004.
STOKOL, T.; PARRY, B. W. Efficacy of Fresh-Frozen Plasma and Cryoprecipitate in
Dogs with von Willebrands Disease or Hemophilia A. Journal of Veterinary Internal
Medicine, v.12, p.84-92, 1998.
WARDROP, K. J.; BROOKS, M. B. Stability of Hemostatic Proteins in Canine Fresh
Frozen Plasma Units. Veterinary Clinical Pathology, v.30, n.2, p.91-95, 2001.

39

3. Referncias adicionais
FACULDADE DE MEDICINA VETERINRIA E ZOOTECNIA DA UNIVERSIDADE
DE SO PAULO. Disponvel em: <http://www.fmvz.usp.br> Acesso em 27 de out. de
2011.
GRIOT-WENK, M. E.; GIGER, U. Feline transfusion medicine. Veterinary Clinics of
North America: Small Animal Practice, v.25, n.6, p.1305-1322, 1995
HOHENHAUS, A. E. Banco de sangue e clnica de transfuso. In: ETTINGER, S. e
FELDMAN, E. C. Tratado de Medicina Interna Veterinria. 5.ed. GuanabaraKoogan, 2004, Cap.79, p.367-375.

40

4. Anexos
Anexo 1:
Ficha de acompanhamento de transfuses sanguneas:
FICHA DE ACOMPANHAMENTO DE TRANSFUSO
Nome do animal:

Raa:

Pronturio:

Data:

Idade:

Peso:

MV responsvel:

Setor de encaminhamento:

Hemocomponente:

Doador:

Hematcrito pr-transfusional:

Volume infundido:

Hematcrito ps-transfusional:
Afeco:
Hora

Mucosas

FC

FR

Atitude

Temp.
(C)

PA

Hct (%)/
Plasma
(cor)
x

15
30
60

90
120

150
180

210
240

24 horas

72 horas

7 dias

14 dias

21 dias

28 dias

Fonte: FMVZ-USP

Obs

41

Anexo 2

INSTRUO AOS AUTORES


O peridico ARCHIVES OF VETERINARY SCIENCE (AVS) publicado
trimestralmente, sob orientao do seu Corpo Editorial, com a finalidade de divulgar
artigos completos e de reviso relacionados cincia animal sobre os temas: clnica,
cirurgia e patologia veterinria; sanidade animal e medicina veterinria preventiva;
nutrio e alimentao animal; sistemas de produo animal e meio ambiente;
reproduo e melhoramento gentico animal; tecnologia de alimentos; economia e
sociologia rural e mtodos de investigao cientfica. A publicao dos artigos
cientficos depender da observncia das normas editoriais e dos pareceres dos
consultores ad hoc. Todos os pareceres tm carter sigiloso e imparcial, e os
conceitos e/ou patentes emitidos nos artigos, so de inteira responsabilidade dos
autores, eximindo-se o peridico de quaisquer danos autorais. A submisso de
artigos deve ser feita diretamente na pgina da revista (www.ser.ufpr.br/veterinary.).
Mais informaes so fornecidas na seo Informaes sobre a revista.
APRESENTAO DOS ARTIGOS
1. Digitao: O artigo com no mximo vinte e cinco pginas dever ser digitado em
folha com tamanho A4 210 x 297 mm, com margens laterais direita, esquerda,
superior e inferior de 2,5 cm. As pginas devero ser numeradas de forma
progressiva no canto superior direito. Dever ser utilizado fonte arial 12 em espao
duplo; em uma coluna. Tabelas e Figuras com legendas sero inseridas diretamente
no texto e no em folhas separadas.
2. Identificao dos autores e instituies (mximo 6 autores por artigo):Todos
os dados referentes a autores devem ser inseridos exclusivamente nos metadados
no momento da submisso online. No deve haver nenhuma identificao dos
autores no corpo do artigo enviado para a revista. Os autores devem inclusive
remover a identificao de autoria do arquivo e da opo Propriedades no Word,
garantindo desta forma o critrio de sigilo da revista.
3. Tabelas: Devem ser numeradas em algarismo arbico seguido de hfen. O ttulo
ser inserido na parte superior da tabela em caixa baixa (espao simples) com ponto
final. O recuo da segunda linha dever ocorrer sob a primeira letra do ttulo. (Ex.:
Tabela 1 Ttulo.). As abreviaes devem ser descritas em notas no rodap da
tabela. Estas sero referenciadas por nmeros sobrescritos (1,2,3). Quando couber,
os cabealhos das colunas devero possuir as unidades de medida. Tanto o ttulo
quanto as notas de rodap devem fazer parte da tabela, inseridos em "linhas de
tabela".
4. Figuras: Devem ser numeradas em algarismo arbico seguido de hfen. O ttulo
ser inserido na parte inferior da figura em caixa baixa (espao simples) com ponto
final. O recuo da segunda linha dever ocorrer sob a primeira letra do ttulo (Ex.:
Figura 1 Ttulo). As designaes das variveis X e Y devem ter iniciais maisculas
e unidades entre parnteses. So admitidas apenas figuras em preto-e-branco.

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Figuras coloridas tero as despesas de clicheria e impresso a cores pagas


pelo autor. Nesse caso dever ser solicitada ao Editor (via ofcio) a impresso a
cores.

NORMAS EDITORIAIS
Artigo completo - Dever ser indito, escrito em idioma portugus (nomenclatura
oficial) ou em ingls. O artigo cientfico dever conter os seguintes tpicos: Ttulo
(Portugus e Ingls); Resumo; Palavras-chave; Abstract; Key words; Introduo;
Material e Mtodos; Resultados; Discusso; Concluso; Agradecimento(s) (quando
houver); Nota informando aprovao por Comit de tica (quando houver);
Referncias.
Artigo de Reviso - Os artigos de reviso devero ser digitados seguindo a mesma
norma do artigo cientfico e conter os seguintes tpicos: Ttulo (Portugus e Ingls);
Resumo; Palavras-chave; Abstract; Key words; Introduo; Desenvolvimento;
Concluso; Agradecimento(s) (quando houver); Referencias. A publicao de
artigos de reviso fica condicionada relevncia do tema, mrito cientfico dos
autores e disponibilidade da Revista para publicao de artigos de Reviso.

ESTRUTURA DO ARTIGO
TTULO - em portugus, centralizado na pgina, e com letras maisculas. Logo
abaixo, ttulo em ingls, entre parntesis e centralizado na pgina, com letras
minsculas e itlicas. No deve ser precedido do termo ttulo.
RESUMO - no mximo 1800 caracteres incluindo os espaos, em lngua portuguesa.
As informaes devem ser precisas e sumarizar objetivos, material e mtodos,
resultados e concluses. O texto deve ser justificado e digitado em pargrafo nico e
espao duplo. Deve ser precedido do termo Resumo em caixa alta e negrito.
PALAVRAS-CHAVE inseridas abaixo do resumo. Mximo de cinco palavras em
letras minsculas, separadas por ponto-e-vrgula, em ordem alfabtica, retiradas
exclusivamente do artigo, no devem fazer parte do ttulo, e alinhado a esquerda.
No deve conter ponto final. Deve ser precedido do termo Palavras-chave em
caixa baixa e negrito.
ABSTRACT - deve ser redigido em ingls, refletindo fielmente o resumo e com no
mximo 1800 caracteres. O texto deve ser justificado e digitado em espao duplo,
em pargrafo nico. Deve ser precedido do termo Abstract em caixa alta e negrito.
KEY WORDS - inseridas abaixo do abstract. Mximo de cinco palavras em letras
minsculas, separadas por ponto-e-vrgula, em ordem alfabtica, retiradas
exclusivamente do artigo, no devem fazer parte do ttulo em ingls, e alinhado a
esquerda. No precisam ser tradues exatas das palavras-chave e no deve conter
ponto final. Deve ser precedido do termo Key words em caixa baixa e negrito.

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INTRODUO abrange tambm uma breve reviso de literatura e, ao final, os


objetivos. O texto dever iniciar sob a primeira letra da palavra Introduo (escrita
em caixa alta e negrito), com recuo da primeira linha do pargrafo a 1,0 cm da
margem esquerda.
MATERIAL E MTODOS - o autor dever ser preciso na descrio de novas
metodologias e adaptaes realizadas nas metodologias j consagradas na
experimentao animal. Fornecer referncia especfica original para todos os
procedimentos utilizados. No usar nomes comerciais de produtos. O texto dever
iniciar sob a primeira letra do termo Material e Mtodos (escrito em caixa alta e
negrito), com recuo da primeira linha do pargrafo a 1,0 cm da margem esquerda.
RESULTADOS (O item Resultados e o item Discusso podem ser apresentados
juntos, na forma RESULTADOS e DISCUSSO, ou em itens separados)
o texto dever iniciar sob a primeira letra da palavra Resultados (escrita em caixa
alta e negrito), com recuo da primeira linha do pargrafo a 1,0 cm da margem
esquerda. Smbolos e unidades devem ser listados conforme os exemplos: Usar
36%, e no 36 % (no usar espao entre o no e %); Usar 88 kg, e no 88Kg (com
espao entre o no e kg, que deve vir em minsculo); Usar 42 mL, e no 42 ml (litro
deve vir em L maisculo, conforme padronizao internacional); Usar 25oC, e no
25 oC (sem espao entre o no e oC ); Usar (P<0,05) e no (p < 0,05); Usar r2 = 0,89
e no r2=0,89; Nas tabelas inserir o valor da probabilidade como valor de P; Nas
tabelas e texto utilizar mdia desvio padro (15,0 0,5). Devem ser evitadas
abreviaes no-consagradas, como por exemplo: o T3 foi maior que o T4, que no
diferiu do T5 e do T6. Este tipo de redao muito cmodo para o autor, mas de
difcil compreenso para o leitor. Escreva os resultados e apresente suporte com
dados. No seja redundante incluindo os mesmos dados ou resultados em tabelas
ou figuras.
DISCUSSO - o texto dever iniciar sob a primeira letra da palavra Discusso
(escrita em caixa alta e negrito), com recuo da primeira linha do pargrafo a 1,0 cm
da margem esquerda. Apresente a sua interpretao dos seus dados. Mostre a
relao entre fatos ou generalizaes reveladas pelos seus resultados. Aponte
excees ou aspectos ainda no resolvidos. Mostre como os seus resultados ou
interpretaes concordam com trabalhos previamente publicados ou discordam
deles, mas apresente apenas trabalhos originais, evitando citaes de terceiros.
Discuta os aspectos tericos e/ou prticos do seu trabalho. Pequenas especulaes
podem ser interessantes, porm devem manter relao factual com os seus
resultados. Afirmaes tais como: "Atualmente ns estamos tentando resolver este
problema..." no so aceitas. Referncias a "dados no publicados" no so aceitas.
Conclua sua discusso com uma curta afirmao sobre a significncia dos seus
resultados.
CONCLUSES - preferencialmente redigir a concluso em pargrafo nico,
baseada nos objetivos. Devem se apresentar de forma clara e sem abreviaes. O
texto dever iniciar sob a primeira letra da palavra Concluso (escrita em caixa alta
e negrito), com recuo da primeira linha do pargrafo a 1,0 cm da margem
esquerda.

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AGRADECIMENTOS - os agradecimentos pelo apoio pesquisa sero includos


nesta seo. Seja breve nos seus agradecimentos. No deve haver agradecimento a
autores do trabalho. O texto dever iniciar sob a primeira letra da palavra
Agradecimento (escrita em caixa baixa).
NOTAS INFORMATIVAS - quando for o caso, antes das referncias, dever ser
includo pargrafo com informaes e nmero de protocolo de aprovao da
pesquisa pela Comisso de tica e ou Biossegurana. (quando a Comisso de tica
pertencer prpria instituio onde a pesquisa foi realizada, dever constar apenas
o nmero do protocolo).
REFERNCIAS - o texto dever iniciar sob a primeira letra da palavra Referncias
(escrita em caixa alta e negrito). Omitir a palavra bibliogrficas. Alinhada somente
esquerda. Usar como base as normas da Associao Brasileira de Normas Tcnicas
ABNT (NBR 10520 (NB 896) - 08/2002). Devem ser redigidas em pgina separada
e ordenadas alfabeticamente pelo(s) sobrenome(s) do(s) autor(es). Os destaques
devero ser em NEGRITO e os nomes cientficos, em ITLICO. NO ABREVIAR O
TTULO DOS PERIDICOS. Indica-se o(s) autor(es) com entrada pelo ltimo
sobrenome seguido do(s) prenome(s) abreviado (s), exceto para nomes de origem
espanhola, em que entram os dois ltimos sobrenomes. Mencionam-se os autores
separados por ponto e vrgula. Digit-las em espao simples e format-las segundo
as seguintes instrues: no menu FORMATAR, escolha a opo PARGRAFO...
ESPAAMENTO...ANTES...6 pts.Exemplo de como referenciar:
ARTIGOS DE PERIDICOS:
(citar os 3 primeiros autores seguido de "et al.")
JOCHLE, W.; LAMOND, D.R.; ANDERSEN, A.C. et al. Mestranol as an abortifacient
in the bitch. Theriogenology, v.4, n.1, p.1-9, 1975.
Livros e captulos de livro. Os elementos essenciais so: autor(es), ttulo e
subttulo (se houver), seguidos da expresso "In:", e da referncia completa como
um todo. No final da referncia, deve-se informar a paginao. Quando a editora no
identificada, deve-se indicar a expresso sine nomine, abreviada, entre colchetes
[s.n.]. Quando o editor e local no puderem ser indicados na publicao, utilizam-se
ambas as expresses, abreviadas, e entre colchetes [S.I.: s.n.].
REFERNCIA DE LIVROS (in totum):
BICHARD, S.J.; SHERDING, R.G. Small animal practice. Philadelphia : W.B.
Saunders, 1997. 1467 p.
REFERNCIA DE PARTES DE LIVROS: (Captulo com autoria)
SMITH, M. Anestrus, pseudopregnancy and cystic follicles. In: MORROW, D.A.
Current Therapy in Theriogenology. 2.ed. Philadelphia : W.B. Saunders, 1986,
Cap.x, p.585-586.
REFERNCIA DE PARTES DE LIVROS: (Captulo sem autoria)

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COCHRAN, W.C. The estimation of sample size. In____. Sampling techniques.


3.ed. New York : John Willey, 1977. Cap.4., p.72-90.
OBRAS DE RESPONSABILIDADE DE UMA ENTIDADE COLETIVA: A entidade
tida como autora e deve ser escrita por extenso, acompanhada por sua respectiva
abreviatura. No texto, citada somente a abreviatura correspondente. Quando a
editora a mesma instituio responsvel pela autoria e j tiver sido mencionada,
no indicada.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTRY - AOAC. Official
methods of analysis. 16.ed. Arlington: AOAC International, 1995. 1025p.
UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIOSA - UFV. Sistema de anlises estatsticas e
genticas - SAEG. Verso 8.0. Viosa, MG, 2000. 142p.
REFERNCIA DE TESE/DISSERTAO/MONOGRAFIA:
BACILA, M. Contribuio ao estudo do metabolismo glicdico em eritrcitos de
animais domsticos. 1989. Curitiba, 77f. Dissertao (Mestrado em Cincias
Veterinrias) - Curso de Ps-graduao em Cincias Veterinrias, Universidade
Federal do Paran.
REFERNCIA DE PUBLICAES EM CONGRESSOS:
KOZICKI, L.E.; SHIBATA, F.K. Perfil de progesterona em vacas leiteiras no perodo
do puerprio, determinado pelo radioimunoensaio (RIA). In: CONGRESSO
BRASILEIRO DE MEDICINA VETERINRIA, XXIV., 1996, Goinia. Anais... Goinia:
Sociedade Goiana de Veterinria, 1996, p. 106-107.
RESTLE, J.; SOUZA, E.V.T.; NUCCI, E.P.D. et al. Performance of cattle and buffalo
fed with different sources of roughage. In: WORLD BUFFALO CONGRESS, 4., 1994,
So Paulo. Proceedings... So Paulo: Associao Brasileira dos Criadores de
Bfalos, 1994. p.301-303.
REFERNCIA DE ARTIGOS DE PERIDICOS ELETRNICOS:Quando se tratar
de obras consultadas on-line, so essenciais as informaes sobre o endereo
eletrnico, apresentado entre os sinais < >, precedido da expresso Disponvel em:
xx/xx/xxxxe a data de acesso do documento, precedida da expresso Acesso em:
xx/xx/xxxx.
PRADA, F.; MENDONA Jr., C. X.; CARCIOFI, A. C. [1998]. Concentrao de cobre
e molibdnio em algumas plantas forrageiras do Estado do Mato Grosso do Sul.
Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, v.35, n.6, 1998.
Disponvel em: http://www.scielo.br/ Acesso em: 05/09/2000.
MELLER, Suzana Pinheiro Machado. A comunicao cientfica e o movimento de
acesso livre ao conhecimento. Cincia da Informao, Braslia, v. 35, n. 2, 2006.
Disponvel em: <http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S010019652006000200004&lng=pt&nrm=iso>. Acesso em: 13/05/2007.

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REBOLLAR, P.G.; BLAS, C. [2002]. Digestin de la soja integral em ruminantes.


Disponvel em: http://www.ussoymeal.org/ruminant_s.pdf. Acesso em: 12/10/2002.
SILVA, R.N.; OLIVEIRA, R. [1996]. Os limites pedaggicos do paradigma da
qualidade total na educao. In: CONGRESSO DE INICIAO CIENTFICA DA
URPe, 4., 1996, Recife. Anais eletrnico...Recife: Universidade Federal do
Pernambuco, 1996. Disponvel em: http://www.propesq.ufpe.br/anais/anais.htm>
Acesso em: 21/01/1997.
CITAO DE TRABALHOS PUBLICADOS EM CD ROM:Na citao de material
bibliogrfico publicado em CD ROM, o autor deve proceder como o exemplo abaixo:

EUCLIDES, V.P.B.; MACEDO, M.C.M.; OLIVEIRA, M.P. Avaliao de cultivares de


Panicum maximum em pastejo. In: REUNIO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA
DE ZOOTECNIA, 36., 1999, Porto Alegre. Anais... So Paulo: Gmosis, 1999, 17par.
CD-ROM. Forragicultura. Avaliao com animais. FOR-020.
INSTITUTO BRASILEIRO DE INFORMAO EM CINCIA E TECNOLOGIA. Bases
de dados em Cincia e Tecnologia. Braslia, n. 1, 1996. CD-ROM.
E.mail Autor, < e-mail do autor. Assunto, Data de postagem, e-mail pessoal, (data
da leitura)
Web Site Autor [se conhecido], Ttulo(ttulo principal, se aplicvel), ltima data da
reviso [se conhecida], < URL (data que foi acessado)
FTPAutor [se conhecido] Ttulo do documento(Data da publicao) [se disponvel],
Endereo FTP (data que foi acessado)
CITAES NO TEXTO: As citaes no texto devero ser feitas em caixa baixa.
Quando se tratar de dois autores, ambos devem ser citados, seguido apenas do ano
da publicao; trs ou mais autores, citar o sobrenome do primeiro autor seguido de
et al. obedecendo aos exemplos abaixo:
Silva e Oliveira (1999)
Schmidt et al. (1999)
(Silva et al., 2000)
Archives of Veterinary Science
Setor de Cincias Agrrias
Curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias
Rua dos Funcionrios, 1540 80035-050 - Curitiba - Paran Brasil

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(Disponvel em <http://ojs.c3sl.ufpr.br/ojs2/index.php/veterinary/about/submissions> Acesso
em: 01/11/2011)

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