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OBTENO DE ETANOL A PARTIR DE DERIVADOS DO PROCESSAMENTO DO

EUCALIPTO PARA PRODUO DE CELULOSE POR SACARIFICAO E


FERMENTAO SIMULTNEAS
1

Alice de Tassis Machado, 2 Teresa Cristina Zangirolami, 3 Wellington Sabino Adriano

Bolsista de Iniciao Cientfica FAPESP discente do curso de Engenharia Qumica Professora da Universidade
3
Federal de So Carlos, Departamento de Engenharia Qumica Ps-doutorando na Universidade Federal do Cear,
Departamento de Engenharia Qumica
1,2
3

Rodovia Washington Lus, km 235 - SP-310 - So Carlos - SP - Brasil CEP 13565-905


Avenida Humberto Monte S/N - Bloco 709, Pici, Fortaleza, CE Brasil CEP 60455-760
e-mail: teresacz@ufscar.br

RESUMO Neste trabalho, estudou-se a obteno de etanol a partir de derivados do processamento de eucalipto para produo de celulose. Foram empregadas como fonte de biomassa
polpa de celulose branqueada e serragem. Ambos derivados foram submetidos a dois tipos de
pr-tratamentos para remoo de hemicelulose e lignina. A remoo da hemicelulose foi realizada em duas condies: temperatura ambiente ou a 121C, condio na qual foram obtidos
os melhores resultados. Posteriormente, o material foi submetido hidrlise com hidrxido de
sdio para remoo de lignina, a 120C. O meio utilizado nos experimentos SSF (Simultaneous
Saccharification and Fermentation) consistia em extrato de levedura, sais, substratos obtidos
aps pr-tratamentos (5gms/L de meio) e enzimas celulolticas comerciais CELLUCLAST (30 e
60FPU/g de substrato) e NS50010 (20 e 40CBU/g de substrato). Os experimentos foram realizados a 37C e pH inicial 5, sob condies anaerbias. Para os ensaios SSF, a concentrao
de etanol obtida foi de aproximadamente 14g/L com a polpa de celulose (com 60 FPU/g substrato de Celluclast e 40CBU/g de substrato de NS50010) e 3g/L com a serragem (com 30FPU/g
substrato de Celluclast e 20CBU/g substrato de NS50010). Estes valores foram alcanados aps aproximadamente 20 horas de cultivo, devido baixa disponibilidade de glicose.

Palavras-Chave: eucalipto, etanol, SSF

INTRODUO
A biomassa de origem vegetal , atualmente, a nica fonte sustentvel de carbono orgnico. Assim, apenas os biocombustveis, ie, os
combustveis derivados de biomassa vegetal, so
considerados combustveis lquidos renovveis.
Alm disso, os biocombustveis geram significativamente menos emisses de gases causadores
do efeito estufa do que os combustveis fsseis
(HUBER et al., 2006).
O processo de produo de etanol a partir
de biomassa lignocelulsica basicamente composto por trs etapas (pr-tratamento, hidrlise e
fermentao). As etapas adicionais de tratamento
do material so requeridas devido natureza
recalcitrante dos materiais lignocelulsicos, que
possuem ligaes inter e intramoleculares que
fazem com que a hidrlise da celulose seja centenas de vezes mais difcil do que a hidrlise de
materiais amilceos,
No Brasil, os estudos da produo de etanol a partir da biomassa pela via enzimtica tm
se concentrado quase que exclusivamente na
utilizao do bagao de cana de acar como

fonte de biomassa (ADRIANO, 2008; PEUELLA


et al., 2007). Apesar da importncia inquestionvel do bagao, tanto pela quantidade gerada como pela disponibilidade nas regies j produtoras
de etanol, fundamental que a produo de etanol a partir de outras fontes de biomassa tambm
seja investigada. Essa necessidade se justifica
por vrias razes: i) melhor aproveitamento da
diversidade em resduos agroindustriais gerados
nas diferentes regies do Brasil; ii) minimizao
nos custos de transporte e distribuio do etanol,
que poderia ser produzido a partir dos resduos
disponveis in loco; iii) gerao de empregos e
crescimento da economia local em conseqncia
do desenvolvimento da nova atividade produtiva;
iv) reduo da dependncia de uma nica fonte
de energia alternativa; v) incremento do valor
agregado aos resduos e reduo do volume para
tratamento e disposio, vii) aproveitamento da
ociosidade das usinas no perodo de entressafra
da cana de acar; viii) minimizao do impacto
ambiental da colheita da cana-de-acar (emprego das queimadas), optando por culturas que no
adotam esta prtica.

VIII Congresso Brasileiro de Engenharia Qumica em Iniciao Cientfica


27 a 30 de julho de 2009
Uberlndia, Minas Gerais, Brasil

Desta forma, o presente estudo teve como objetivo estudar a obteno de hidrolisados a
partir da ao de celulases sobre a frao celulsica de subprodutos do processamento do eucalipto para produo de celulose e papel, concomitantemente com a fermentao do hidrolisado
obtido utilizando a levedura de panificao prensada (Saccharomyces cerevisiae) - processo de
sacarificao e fermentao simultneas (SSF).

MATERIAL E MTODOS
Enzimas
Foram utilizadas preparaes enzimticas
Celluclast 1.5 L e NS50010 (-glucosidase pura)
doadas pela Novozymes A/S (Bagsvaerd,
Denmark).
Meios de cultivo
Dois meios de cultivo foram empregados:
meio de ativao da levedura: 0,5 g/L de
(NH4)2HPO4, 0,25 g/L de MgSO4.7H2O, 1,0 g/L de
extrato de levedura e 10 g/L de glicose; meio dos
experimentos SSF: semelhante ao de ativao,
com substituio da glicose pelo substrato slido
na proporo de 5gms para 125 ml de volume
total. O pH foi ajustado a 5,0 para ambos. Todos
os meios foram esterilizados a 120 oC por 15
minutos
Microorganismo
Foi utilizado o microrganismo Saccharomyces cerevisiae na forma de levedura de panificao comercial prensada, da marca Fleischmann, comercializada em tabletes de 90 g embalados individualmente, dentro do prazo de validade.
Pr-tratamento
serragem

da

polpa

de

celulose

Os pr-tratamentos para polpa de celulose e serragem envolveram etapas de remoo de


hemicelulose e lignina. Para a remoo da hemicelulose, os pr-tratamentos foram iniciados pela
cominuio. Uma massa de aproximadamente
500g de serragem seca ou polpa foi triturada em
liquidificador e classificada em peneiras da srie
Tyler padro (PERRY AND GREEN, 1997), para
obteno de fragmentos com dimenses inferiores a 10 mm, os quais foram utilizados nas etapas
de hidrlise qumica para extrao de hemicelulose e de lignina. O material classificado foi submetido inicialmente extrao de hemicelulose por
hidrlise cida, sendo utilizados dois prtratamentos para comparao (PT1A e PT1B).
Em PT1A (adaptado de SASSNER et al, 2008),
50g de material seco permaneceu imerso em

500mL de cido sulfrico diludo 0,5 % (m/m) por


2 horas, sob agitao. Aps esse perodo, os
slidos foram lavados em abundncia com gua
destilada para remoo do excesso de cido,
secos a 50C, pesados e armazenados a 4 oC. No
pr-tratamento PT1B para remoo de hemicelulose (adaptado de CARVALHO et al., 2005), 225
mL de cido sulfrico 0,35 % foram misturados a
50 g de material seco na granulometria previamente definida. A mistura foi autoclavada a 121
o
C por 1hora e processada, aps este perodo, de
acordo com o mesmo procedimento descrito para
o pr-tratamento PT1A.
Para remoo da lignina na serragem foi
utilizado o processo de deslignificao alcalina
(PT2), conforme descrito em MARTINS (2007). O
tratamento foi aplicado a uma massa de 25 g do
material seco obtido aps a extrao de hemicelulose por PT1A e PT1B, o qual foi autoclavado a
120 C por 30 minutos, com 500 ml de soluo de
hidrxido de sdio a 4%. Por meio de uma filtrao, o hidrolisado foi separado do material recuperado, neutralizado com cido fosfrico e NaOH
e congelado para anlises posteriores de sua
composio. Os slidos foram recuperados por
uma nova filtrao, secos em estufa a 50 C e
armazenados a 4 C. O procedimento foi realizado em triplicata.
Todos os derivados obtidos nos prtratamentos descritos anteriormente foram submetidos a secagem em estufa a 50C e at umidade residual de 20% em massa, conforme recomendado por DOWE (2008) que recomenda
que a massa utilizada no experimento SSF no
seja totalmente seca, visando preservar a estrutura interna da celulose.
Ensaios SSF
Os experimentos SSF foram divididos em
trs etapas. A pr-sacarificao foi realizada em
frascos Duran de 250 mL contendo 100 mL do
meio para SSF, tendo como substrato slido 5 g
do material obtido ao final dos pr-tratamentos
PT1B e PT2 da polpa de celulose (Experimentos
A, B e E) ou da serragem (Experimentos C e D).
Os ensaios de pr-sacarificao foram iniciados
com a adio de 30 FPU de Celluclast 1.5 L /g
slido seco e 20 CBU de -glucosidase /g slido
o
seco e conduzidos a 50 C, sob agitao de 150
rpm, por 6 horas (ensaios A, B, C e D ). Para o
Experimento E foi empregada uma carga enzimtica mais elevada, de 60 FPU de Celluclast 1.5 L
/g slido seco e 40 CBU de -glucosidase /g slido seco com 5g de polpa de celulose como substrato. A ativao da levedura foi realizada em
erlenmeyer de 500 mL, contendo 100 mL do meio
de ativao, sob agitao de 150 rpm, com incubao a 30 oC por aproximadamente 90 minutos.
Os experimentos SSF foram iniciados transferindo-se 25 mL da suspenso ativada para ao contedo do frasco Duran ao final da reao de pr-

sacarificao, aps reduo da temperatura, de


forma a obter-se uma concentrao inicial de
levedura de aproximadamente 5gms/L. Aps a
inoculao, gs nitrognio foi utilizado para remoo do ar presente no frasco Duran, sendo o
mesmo incubado a 37C, sob agitao de 150
rpm e em condies anaerbias, por at 96 horas
para o estudo da SSF. Amostras retiradas de 8
em 8 horas foram inicialmente filtradas em papel
de filtro comum para remoo de material particulado. O filtrado obtido foi recolhido em eppendorf
e centrifugado. O sobrenadante foi guardado para
determinao de etanol e glicose, enquanto o
material depositado no fundo foi diludo para medida de densidade tica. A cada 24 horas de experimento, foram coletadas amostras de 1 ml
para anlise de viabilidade.
As principais caractersticas de cada ensaio SSF esto resumidas na Tabela 1, sendo os
ensaios A-B e C-D duplicatas realizadas nas
mesmas condies.
Tabela 1: Caractersticas principais dos
ensaios SSF realizados. PB polpa
branqueada, S- serragem.

A
e
B
C
e
D
E

Material

Quantidade de
substrato (g)

FPU
Celulase

CBU
glicosidase

PB

150

100

150

100

PB

300

200

RESULTADOS E DISCUSSES
Pr-tratamentos
Foram realizados 4 experimentos em triplicata, cujos resultados foram avaliados em termos
da massa perdida das amostras aps cada prtratamento (Tabela 2) e da composio dos hidrolisados obtidos (Tabela 3). Os dados apresentados nas Tabelas 2 e 3 so as mdias das triplicatas realizadas nos experimentos com o desvio
padro correspondente.
A Figura 1 ilustra as mudanas que ocorrem
nos materiais aps o pr-tratamento. Nas Figuras
1.b e c, amostras de material seco antes e aps
os pr-tratamentos podem ser comparadas. Visivelmente, a serragem de madeira perde cor em
conseqncia da remoo da lignina, um dos
principais responsveis pela colorao na madeira. Esta constatao confirmada pela Figura
1.a, a qual mostra a intensa cor escura adquirida
pelo hidrolisado resultante do pr-tratamento para
remoo de lignina da serragem. A colorao da
polpa branqueada no foi modificada por se tratar
de material j processado industrialmente.

(a)

Mtodos analticos
As atividades em celulase e glucosidase dos preparados enzimticos Celluclast 1.5 L e NS50010 foram determinadas de
acordo com a metodologia empregada em ADRIANO, 2008. A concentrao de glicose foi determinada pelo mtodo enzimtico (NOCENTINI e
ZANGIROLAMI, 2007); a concentrao de etanol
foi quantificada por cromatografia lquida de alta
eficincia (CLAE), utilizando-se uma coluna Shodex KS-801 lonpak e gua Milli-Q como eluente,
nas seguintes condies: 80C e 1 mL/min, com
detector ndice de refrao. J a concentrao
celular CX (em gms/L) foi estimada a partir da
leitura da densidade tica a 610 nm utilizando-se
uma curva de calibrao (Eq. 1) e multiplicandose por fator de correo (11,7 para a madeira e
6,5 para a polpa), o qual foi introduzido para compensar a reteno de massa celular pelos slidos
durante o procedimento de filtrao.
CX (gms/L) = 0,4799 *ABS(610 nm)

(1)

(c)
(b)
Figura 1 (a) Aspecto da suspenso aps a
reao para remoo de lignina da serragem
(b) Serragem antes (esquerda) e depois
(direita) dos pr-tratamentos. (c) Polpa
branqueada antes (esquerda) e aps (direita)
os pr-tratamentos.
Tabela 2: Resultados de porcentagem em
massa perdida aps pr-tratamentos.
% em massa perdida nas amostras
aps tratamento
Tratamento Polpa branqueada
Serragem
1,7 0,6
2,0 1,1
PT1A
8,1 0,3
12,06 0,05
PT1B
0
32,0 0,1
PT1A+PT2
0
40,2 0,5
PT1B+PT2

A partir dos resultados apresentados na


Tabela 2 pode-se constatar que o tratamento
realizado com cido, temperatura ambiente
(PT1A) no to eficaz quanto aquele realizado a
altas temperaturas (PT1B). O objetivo deste estudo seria minimizar o gasto de energia no processo caso o resultado para o tratamento com e sem
aquecimento fossem semelhantes. O resultado
obtido comprova que, dentre os dois tratamentos,
o mais efetivo aquele com aquecimento a
120C. Outra constatao interessante que a
perda de massa ocorre em ambas as etapas de
pr-tratamento para a serragem, sendo mais significativa na etapa de hidrlise alcalina (PT2).
Como esperado, para a polpa branqueada no
houve perda de massa em PT2 visto que a mesma j no apresenta lignina. importante destacar que os resultados obtidos para os tratamentos
mostraram-se reprodutveis uma vez que os desvios foram baixos. O valor alto de desvio obtido no
tratamento PT1A deve-se ao baixo valor da massa perdida, gerando maiores erros de medida.
Amostras dos hidrolisados obtidos aps os
pr-tratamentos foram utilizadas para anlise de
acares. Os resultados obtidos encontram-se na
Tabela 3.
Tabela 3: Concentrao dos acares presentes nos hidrolisados obtidos aps prtratamentos
Concentrao (g/L)
Raf
Sac Glic Xil Ara
Material Trat.
1A
*
*
*
*
*
PB
1B
*
0,17 0,08 3,12
*
1A
*
*
*
*
*
1B
*
*
0,11 3,18 0,20
1A+2
*
*
*
*
*
S
1B+2 0,80
*
*
*
*
*No detectados PB: Polpa Branqueada; S:
Serragem; Raf: Rafinose; Sac: Sacarose; Glic:
Glicose; Xil: Xilose; Ara: Arabinose.
Conforme comentado na Tabela 2, verifica-se novamente que o tratamento PT1B realmente o mais eficiente em termos de remoo
de hemicelulose, produzindo um hidrolisado que
contm diversos acares. O mesmo comprovado para a polpa branqueada, cujo hidrolisado
do tratamento PT1B o nico que contm acares.
Cabe ressaltar que os resultados encontrados por CARVALHO (2005) tambm mostram
que a maior concentrao encontrada no hidrolisado seria de xilose, seguida de glicose e arabinose, demonstrando consistncia dos resultados
obtidos no presente trabalho. Este mesmo autor
obteve resultados de concentraes maiores de
xilose (24,32 g/L) , de glicose (1,53 g/L) e arabinose (0,53 g/L).

A concentrao relativamente baixa de


acares nos hidrolisados dos pr-tratamentos da
serragem pode ser explicada pelo fato do material
no ter sido submetido ao processo de exploso a
vapor. Por isso, a ao dos pr-tratamentos fica
limitada, pois a penetrao na estrutura da madeira no acontece.
Hidrlise e Fermentao Simultneas
A Figura 2 compara imagens dos frascos
Duran onde foram realizados os experimentos
SSF com serragem e polpa branqueada, no incio
e ao final dos mesmos. As mudanas na aparncia das suspenses devido ao das enzimas
so visveis.

(a)

(b)

(c)

(d)

Figura 2: Frascos Duran contendo o material


submetido a SSF. (a) Serragem (incio) (b)
Serragem (final) (c) Polpa de celulose (incio)
(d) Polpa de celulose (final).
As Figuras 3 a,b, c, d e e, mostram o crescimento celular, as variaes na concentrao de
glicose e a formao de etanol durante os experimentos de hidrlise e fermentao simultneas.
A comparao dos dados dos experimentos A e B
e dos experimentos C e D evidenciam a reprodutibilidade dos ensaios realizados nas mesmas
condies experimentais. Os principais resultados
so discutidos a seguir. Os ensaios foram primeiramente realizados at 100 horas visando acompanhar o perfil da produo de etanol durante a

30

35
Concentrao (g/L)

etapa de sacarificao e fermentao simultneas. Aps constatarmos que a produo do lcool ocorria principalmente nas primeiras 20 horas, diminuiu-se o tempo de cultivo para 48 horas
(ltimo experimento).

30
25
20
15
10

Concentrao (g/L)

5
25

0
20

10

20

30

40

50

Tempo de reao (h)

15

Conc. Etanol (g/l )

10
5
0
0

20

40

60

80

100

Conc cel ul ar (g/l)

Conc gl icos e (g/L)

(e)
Figura 3: Resultados de concentrao celular,
de etanol e de glicose para cada um dos
experimentos (a) A, (b) B (c) C (d) D (e) E

Tempo de reao (h)


Conc. Eta nol (g/l)

Conc celula r (g/l )

Conc glicose (g/L)

(a)

Concentrao (g/L)

30
25
20
15
10
5
0
0

20

40

60

80

100

Tempo de reao (h)


Conc. Etanol (g/l )

Conc cel ul ar (g/l)

Conc gl icos e (g/L)

(b)
9
Concentrao (g/L)

8
7
6
5
4
3
2
1
0
0

20
Conc. Etanol (g/l )

40

60

Tempo de reao (h)


Conc cel ul ar (g/l)

80

100

Conc gl icos e (g/L)

(c)
8
Concentrao (g/L)

Crescimento celular: Os dados para crescimento celular so reprodutveis quando comparados com suas duplicadas porm houve significativa disperso nos dados de concentrao celular devido s dificuldades na metodologia proposta.
As concentraes celulares representadas na Figura 3 foram obtidas a partir da leitura
dos dados de densidade tica alimentados a uma
curva de calibrao. Porm, no resultado original
de leitura de densidade tica, baixos valores de
concentrao celular foram alcanados. Suspeitou-se que parte da levedura estava ficando retida
no material slido coletado durante a filtrao das
amostras retiradas dos experimentos SSF. Assim,
um experimento de verificao desta hiptese foi
realizado e indicou que aproximadamente 91% da
massa total de levedura presente na amostra
permanecia retida juntamente com o material
slido para a serragem e 85% para a polpa de
celulose. A partir desta informao, estimou-se
um fator de correo, multiplicando os valores de
concentrao celular por 11,7 para a madeira e
6,5 para a polpa. No entanto, importante ressaltar que como a consistncia da suspenso muda
muito ao longo dos experimentos devido ao
das enzimas, este fator de correo no constante. Por isso, os resultados apresentados na
Figura 3 so mais qualitativos do que quantitativos quanto concentrao celular presente.

6
5
4
3
2
1
0
0

20

40

60

80

Tempo de reao (h)


Conc. Etanol (g/l )

Conc cel ul ar (g/l)

(d)

Conc gl icos e (g/L)

100

Liberao e consumo de glicose: Os resultados apresentados na Figura 3 mostram claramente que as maiores concentraes de glicose
presentes no incio dos experimentos e originadas
na etapa de pr-sacarificao foram consumidas
em aproximadamente 10 horas de fermentao. A
partir deste ponto, as concentraes de glicose se
mantiveram em valores inferiores a 300 mg/L
para todos os experimentos, com exceo do
experimento E, no qual a menor concentrao
medida foi de 970 mg/L. Este resultado mostra
que a concentrao residual de glicose dependente da carga enzimtica utilizada, o que por sua
vez determina o stress devido limitao por

glicose ao qual as clulas so expostas. Na Tabela 4 esto relacionados as concentraes residuais mximas de glicose atingidas em cada um dos
experimentos.
Tabela 4: Concentraes residuais mximas
de glicose em cada experimento
Concentrao
residual de
Experimento glicose (g/L)
A
0,330
B
0,122
C
0,126
D
0,109
E
0,970
Produo de etanol: Em todos os ensaios
observou-se produo de etanol. Um fator importante a se destacar referente ao perfil de formao do produto. Em todos os ensaios pode-se
notar que a produo de etanol atinge um mximo, normalmente alcanado em torno de 20 horas de experimento. Este perodo coincide com a
exausto da glicose liberada durante a prsacarificao. Assim, o consumo da glicose acumulada durante a pr-sacarificao juntamente
com a glicose gradativamente liberada durante o
processo SSF leva maior produo de etanol e
ao crescimento mais acentuado. Aps esse perodo, a glicose presente no meio proveniente
apenas do processo SSF, no sendo suficiente
para manter o ritmo de crescimento anterior. Provavelmente nesta fase, a glicose disponvel no
suficiente nem para atender s necessidades de
manuteno celular. .
Comparando-se os experimentos realizados
em diferentes condies, houve maior produo
de etanol para o ensaio realizado com o dobro da
carga enzimtica. A produo ficou em torno de
14 g/L no experimento E, 11 g/L no experimento A
e 3 g/L no experimento C. Estes resultados permitem concluir que a liberao de glicose o fator
determinante da produo de etanol, j que com o
aumento da carga enzimtica, maior produo de
etanol foi alcanada.
Outra constatao importante sobre o
papel do pr-tratamento no processo de produo
de etanol via hidrlise enzimtica e fermentao
simultneas. A polpa de celulose, utilizada como
experimento controle, praticamente celulose
pura, com estrutura totalmente aberta (experimentos A e B) e por isso alcana-se uma produo de etanol 3 vezes superior a dos experimentos C e D, realizados com serragem.
Finalmente, deve-se levar em considerao que as concentraes de etanol podem estar
subestimadas, pois muito provvel que tenha
havido perda significativa de etanol por evaporao durante o experimento, j que os mesmos
foram realizados a 37C em reatores sem condensador e tiveram longa durao.

Degradao da celulose pela ao enzimtica: A


Tabela 5 apresenta os resultados para a
massa restante de slidos (polpa de celulose
branqueada ou serragem) ao final de cada experimento. Considerando-se que a massa inicial em
todos os experimentos foi de aproximadamente 5
gms, possvel estimar a massa de material consumida. Os valores apresentados na
Tabela 5 confirmam de forma inquestionvel a ocorrncia da hidrlise da celulose e da
fermentao dos acares produzidos simultaneamente. Esta a nica explicao para o desaparecimento de at 91% da massa inicial de polpa e
de at 25 % da de serragem.
Tabela 5: Variao na massa de material slido
para os experimentos
Massa consumiEnsaio
Massa final (gms)
da (gms)
A

0,45

4,55

0,33

4,67

3,73

1,27

4,12

0,88

0,33

4,67

Verifica-se ainda que a massa consumida


de celulose nos reatores que continham polpa de
celulose (A, B e E) foi muito maior se comparada
massa de celulose presente na serragem consumida na reao. Conforme j mencionado anteriormente, a polpa branqueada um substrato
muito mais adequado ao das enzimas pelo
fato de apresentar uma celulose mais exposta.
Assim, a serragem, mesmo cominuda, apresenta
mais resistncia penetrao das enzimas para
hidrlise, dificultando a formao de glicose. Estes resultados mais uma vez reforam a importncia da etapa de exploso a vapor na preparao de resduos lignocelulsicos para a hidrlise
enzimtica.

CONCLUSES
O presente trabalho teve um carter exploratrio e considerando as condies experimentais
investigadas, as seguintes concluses preliminares podem ser extradas:
1) O pr-tratamento tem grande influncia no
desempenho do processo. Para as condies
empregadas, a remoo de hemicelulose por
hidrlise cida a quente, seguida por prtratamento alcalino para remoo de lignina apresentou os melhores resultados.
2) A reprodutibilidade observada nos experimentos realizados foi boa, garantindo confiabilidade
metodologia empregada;

3) Houve produo de etanol para todos os ensaios e a quantidade de enzima adicionada tem
influncia nos resultados;
4) Nos ensaios com polpa branqueada de celulose e maior carga de enzimas, atingiu-se a concentrao de 14 g/L de etanol em apenas 12 horas de cultivo. Esta produtividade superior aos
valores relatados na literatura.
5) A metodologia analtica proposta para a determinao da concentrao celular no apresentou
resultados satisfatrios pelo fato de haver reteno significativa de clulas na massa de polpa de
celulose ou serragem separada por filtrao.
6) Vrios resultados obtidos (concentrao de
acares nos hidrolisados, perda de massa durante os pr-tratamentos, produo de etanol e
massa consumida durante os experimentos SSF)
demonstraram que a serragem no foi efetivamente hidrolisada. Isso uma clara indicao da
necessidade de incluir uma etapa de exploso a
vapor no processo proposto, de forma que subprodutos como a serragem possam ser efetivamente convertidos em etanol
A partir das concluses preliminares,
possvel identificar alguns aspectos que requerem
estudos mais aprofundados para que seja possvel definir condies timas para o processo SSF
a partir de resduos da indstria de papel e celulose, tais como a definio do tempo necessrio
para a etapa de pr-sacarificao, a influncia da
temperatura adotada nos experimentos SSF na
produo de etanol e a utilizao de mtodos
indiretos (produo de CO2, por exemplo) para o
acompanhamento do crescimento celular.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ADRIANO, W. S. Preparao e Caracterizao de
Derivados de Enzimas Industriais em Quitosana. 2008. Tese (Doutorado em Engenharia
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PSE2009, 2009, Salvador-BA, Brazil.

AGRADECIMENTOS
FAPESP pela bolsa, NOVOZYMES
pelos preparados enzimticos, Aracruz Celulose
pela serragem e polpa de celulose e ao tcnico
Amadeus pelas anlises em HPLC.