Objetivo

Aislar e identificar las caractersticas especficas de Enterococcus

faecalis

Introduccin
Los enterococos, particularmente Enterococcus faecalis y Enterococcus
faecium, forman parte de la flora normal del tracto gastrointestinal tanto
humano como animal y del tracto genitourinario femenino humano. En la
ltima dcada, estos organismos han adquirido cada vez ms
importancia como patgenos nosocomiales, a pesar de su baja
virulencia. El gnero Enterococcus tiene ciertas caractersticas que les
facilita la diseminacin entre los pacientes hospitalizados:
puede colonizar el tracto gastrointestinal de los trabajadores de la
salud y de los pacientes, proveyendo un reservorio continuo para la
diseminacin intrahospitalaria;
es resistente a varios antibacterianos de uso frecuente;
la resistencia antimicrobiana le permite su supervivencia en un medio
ambiente con alto uso de antibacterianos;
puede contaminar el medio ambiente hospitalario y sobrevivir en l
por perodos prolongados;
puede contaminar las manos de los trabajadores de la salud,
permaneciendo por ms tiempo si los empleados no cumplen con las
normas de lavado de manos. Estos factores hicieron que los enterococos
emergieran como uno de los patgenos nosocomiales ms importantes.
Los enterococos son cocos gram positivos, que se encuentran aislados,
de a pares, o formando cadenas cortas. Ellos pertenecieron,
clsicamente, a los Streptococcus grupo D de Lancefield; sin embargo, a
mediados de la dcada de 1980 fueron oficialmente clasificados en su
propio gnero. Son catalasa negativa, anaerobios facultativos, capaces
de crecer en condiciones un tanto extremas. Las caractersticas
bioqumicas sobresalientes incluyen: la habilidad de crecer en presencia
de NaCl al 6,5%, a temperaturas entre 10C y 45C, y hasta en un pH de
9,6. Tienen la capacidad de hidrolizar la esculina, crecer en presencia de
bilis al 40%, sobrevivir 30 min a 60C e hidrolizar la L-pirrolidonil -naftilamida (PYR); esta habilidad ha sido usada como parte de un test rpido

para deteccin de enterococos en el laboratorio. Las especies de

enterococos clnicamente importante son: E faecalis, E faecium, E
durans, E avium, E gallinarum, E casseliflavus, E raffinosus, E
malodoratus, E hirae, E mundtii, E solitarius, E pseudoavium.
Materiales y equipo
Mechero Fisher
Asa punta redonda
Portaobjetos
Bata, guantes y cubrebocas
Cajas petri
Cinta y marcador punto fino
Microscopio
Tubos de ensayo de 13 x 100 con
tapn de rosca

Reactivos y medios de cultivo:

Reactivos tincin Gram
Agar Samgre
Cultivo BHI
Agar BEM
Medio KF

Procedimiento.

Inocule una placa de agar de bilis esculina (BEM).

Inocule un tubo con medio KF en pico de flauta.

Incube por 24 horas a 37C.

Tome el centro de una colonia esculina positiva

e inocule un tubo de BHI que contenga un 7.5% de
NaCl. Incube a 37C por 24 horas.

Hacer tincin Gram

Agregar una gota de Cristal violeta y

esperar 1 min

Agregar una gota de Alcohol-Acetona y

esperar 20 segundos

Agregar una gota de Lugol y esperar 1

min

Agregar una gota de Safranina y

esperar 1 min

Realizar prueba catalasa.

Observaciones y resultados:

Primer da de observacin:
a) Caractersticas macroscpicas:

Tamao: puntiforme
Forma: redonda
Color: negro
Elevacin: plana
Consistencia: cremosa
Borde: liso
Superficie: lisa
Luz reflejante: brillante
Luz transmitida: mate
Fermentacin de esculina:
Positivo y evidenciado por el
viraje de color amarillento a
negro.

a) Caractersticas microscpicas:

Cocos en
cadena
corta

diplococo

Cocos Gram positivo con arreglos tales como pares o cadenas cortas (no
se distingue bien la imagen, ya que se tom una colonia muy pequea)

Prueba de Catalasa:

Prueba catalasa
negativa

Medio KF:
*Crecimiento en pico de
flauta.
*Formacin de cido
evidenciado por el viraje
de color prpura a
amarillo.

Segundo dia de observacin:

Caldo BHI salado:

Crecimiento no
confirmatorio ya
que el medio no
era el correcto.

NOTA: La prueba demostrativa de BHI salado ya haba sido retirada

cuando fuimos a observar.

Discusiones:
Las pruebas fueron positivas de una manera muy clara. En el caso de
agar BEM el crecimiento fue abundante y se evidenci la hidrlisis de

esculina en prcticamente toda la placa. En agar KF hubo crecimiento de

colonias de un rosa oscuro y la produccin de cidos por la fermentacin
de carbohidratos. El mayor inconveniente que presentamos fue al
momento de realizar un cultivo en caldo BHI salado puesto que el medio
no era el indicado.
Recomendaciones:
Es necesario que las prcticas de laboratorio se realicen
cuidadosamente desde el primer da en que se realiza la preparacin de
medios, esto facilita el trabajo y la identificacin de microorganismos.
Conclusiones:
Logramos conocer las tcnicas y medios utilizados para la identificacin
de Enterococcus. Podramos concluir la presencia de Enterococcus
Faecalis por las caractersticas selectivas de los medios utilizados, tanto
la hidrlisis de esculina como el crecimiento de colonias rosadas en KF
son tpicas de dicho microorganismo. Sera recomendable realizar ms
pruebas para su certera confirmacin.
Bibliografa:

Acosta-Gnass, S. (actualizado agosto de 2005) Enterococcus.

COdeINEP. Electrnico. Argenitina. Disponible en:
http://www.codeinep.org/control/Enterococcus.pdf [Accesado 24 de
febrero de 2016]
MacFaddin, J. (2003) Pruebas bioqumicas para la identificacin de
bacterias de importancia clnica. Tercera edicin. Buenos Aires.
Mdica Panamericana.