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Marcadores

Bioqumicos en
Osteoporosis

Introduccin

La osteoporosis es una patologa que afecta a los


huesos y est provocada por la disminucin del
tejido que lo forma, tanto de las protenas que
constituyen su matriz o estructura como de las
sales minerales de calcio que contiene.

Como consecuencia de ello, el hueso es menos


resistente y ms frgil de lo normal, tiene menos
resistencia a las cadas y se rompe con relativa
facilidad tras un traumatismo, producindose
fracturas o microfracturas.[

Introduccin

La OMS la define en mujeres como una densidad


mineral sea menor o igual de 2,5 desviacin
estndar por debajo de la masa sea promedio de
personas sanas de 20 aos, medida por
densitometra sea

La densidad mineral de los huesos se mide


mediante la densitometra sea

Introduccin

Esta afeccin se produce sobre todo en mujeres,


amenorreicas o posmenopusicas debido a la
disminucin de la produccin de estrgenos por los
ovarios y otras carencias hormonales.

Otros factores que aumentan el riesgo de presentar


osteoporosis son la deficiencia de calcio y vitamina
D, el consumo de tabaco, alcohol y la vida
sedentaria. La prctica de ejercicio fsico y un
aporte extra de calcio antes y despus de la
menopausia favorecen el mantenimiento seo.

Laboratorio y Osteoporosis
Hemograma y VSG.
Bioqumica bsica con calcio y fsforo.
Opcional: hormonal,TSH,vitamina D,PTHi.

Marcadores de remodelado seo

Marcadores Bioqumicos

Son sustancias procedentes de la actividad metablica


del hueso,liberadas en el proceso de resorcin y
formacin sea.

Permiten analizar la actividad metablica sea (no


cantidad de MO).

Sin embargo,presentan gran variabilidad analtica y


biolgica,sobre todo en orina.

La insuficiencia renal puede modificar la concentracin


de la mayora de marcadores.

Marcadores Bioqumicos

Utilidad de los marcadores en la OP


postmenopusica:
Prediccin de la prdida de masa sea.

Prediccin del riesgo de desarrollar fracturas.


Prediccin de la respuesta al tratamiento
antirresortivo.

Marcadores Bioqumicos

Hasta hace algunos aos su uso estuvo


restringido a Enf. de Paget y Osteomalacia.

Es en la ltima dcada en que se le d mucha


importancia
al
uso
en
pacientes
con
OSTEOPOROSIS y cada vez se tiende mas a
buscar marcadores mas especificos y sensibles al
recambio seo.

IMPORTANTE...!!!!!!!
LOS

MARCADORES BIOQUIMICOS NO

PUEDEN SER USADOS PARA DIAGNOSTICO


DE OSTEOPOROSIS NI PARA PREDECIR LA
SEVERIDAD DE LA ENFERMEDAD.

TIPOS DE MARCADORES
RESORCION

: (Orina)

Hidroxiprolina (OH Pro)

Piridinolina (PD)
Deoxipiridinolina (DPN)

N-Telopptidos (uNTX)
C-Telopptidos (uCTX)

TIPOS DE MARCADORES
RESORCION

: (Orina)

Indice Calcio/Creatinina matinal


(uCa/Cr)
Glicsidos de Hidroxilisina.

TIPOS DE MARCADORES
RESORCION

: (Sangre)

Fosfatasa Acida tartrato resistente


(sTRAP).
Telopptidos del colgeno I (crosslaps).

HIDROXIPROLINA

La hidroxiprolina es el aminocido predominante del


colgeno.

El 10% de los aminocidos de la cadena alfa del colgeno


tipo 1 es la hidroxiprolina, de la que, cuando el hueso se
degrada, una parte pasa a circulacin y se elimina por orina.
Sin embargo, como la hidroxiprolina puede provenir del
colgeno no seo y adems parte de este aminocido se
metaboliza y reutiliza para la sntesis de otras protenas, no
es el marcador ideal para la determinacin de la
degradacin del tejido seo.

Este marcador refleja la degradacin del colgeno.

HIDROXIPROLINA
Limitaciones:

Es un marcador de resorcin sea bastante inespecfico (se encuentra


en gran proporcin en la fraccin C1q del complemento, en el colgeno
no seo, colgeno de la dieta y tambin proveniente de la ruptura de los
pptidos de extensin procolgeno que son productos de formacin
sea). El hecho de encontrarse en gran proporcin en la fraccin C1q
del complemento lleva a que en condiciones inflamatorias se puedan
hallar altos niveles de hidroxiprolina.

Otra desventaja es que el paciente debe seguir una dieta estricta 3 das
previos a la recoleccin de orina.

Adems es de escasa sensibilidad para el monitoreo de la osteoporosis


ya que gran parte se cataboliza en el hgado (slo el 10% de la
hidroxiprolina se excreta por orina por lo tanto la hidroxiprolina urinaria
representa slo un 10% del total del catabolismo del colgeno).

HIDROXIPROLINA

Utilidad: es til en la enfermedad de Paget.

Valor de referencia: 12 28 mg/ 24 horas o 1545 mg/24 hs.

Mtodo: colorimtrico. Se hidroliza la muestra


con HCl. Se oxida con cloramina T. Se realiza una
extraccin con tolueno y se ve desarrollo de color
con reactivo de Erlich (para dimetil
aminobenzaldehdo en medio cido).

Muestra: orina de 24 horas.

CROSS LINKS

La piridinolina y la deoxipiridinolina son aminocidos no


reducibles que unen entre s las fibras de colgeno
maduro. Se encuentran en la matriz del hueso y del
cartlago.
El colgeno tipo I, rico en aminocidos hidroxiprolina,
tiene una estructura de triple hlice, con fibras
conectadas por cross links (entrecruzamientos) entre
residuos de lisina e hidroxilisina que unen extremos
carboxi y amino terminales no helicoidales de una
molcula de colgeno; con una porcin helicoidal de
una molcula adyacente

CROSS LINKS

Piridinolina y Deoxipiridinolina (Cross-links): son


marcadores mas especificos, siendo DPD la mas
especfica de las dos.

La PYR/DPYR se encuentran en una relacin 3:1.

PD y DPD unen las prociones rectas a las


helicoidales N y C ( Telopeptidos ).

PD y DPD se liberan libres (40%) unidas a los


telopptidos (60%).

Se dosan en orina.

CROSS LINKS
Ventajas de la determinacin de DPYR frente a la de
hidroxiprolina:

No son metabolizados antes de excretarse, a diferencia de


la hidroxiprolina. Por ello es un parmetro mucho ms
sensible de la resorcin sea.

Es especfico de recambio seo. En cambio la


hidroxiprolina se encuentra en lugares extraseos.

La DPYR y PYR no se absorben o metabolizan de la dieta


por lo tanto no es necesaria una dieta previa a su dosaje.

CROSS LINKS

CROSS LINKS

Muestra: orina de 24 horas, orina de 12 horas o segunda


orina de la maana.

Mtodo: el mtodo de referencia es HPLC pero es poco


prctico. ELISA, RIA.

Valores de referencia:

DEOXIPIRIDINOLINA O LIBRE (RIA)


Mujer: 3 7 mM DPYR /mM creatinina
Hombre: 2.3-5.4 mM DPYR/mM creatinina

PIRIDINOLINA
Mujer: 4-19 nM/mM de creatinina
Hombre: 4-21 nM/mM de creatinina

CROSS LINKS
Utilidad :

Monitoreo de la terapia hormonal de reemplazo en mujeres post*menopasicas, siendo su principal utilidad en el monitoreo del control con
estrgenos.

La DPYR disminuye durante el tratamiento con antiresortivos. La DPYR


disminuye durante el tratamiento con antiresortivos, por lo tanto es til en el
monitoreo de la terapia ( la DPYR disminuye a los 3 meses de tratamiento con
10 mg/da de alendronato).

Como el proceso de resorcin sea es ms corto que el proceso de


formacin, los marcadores de resorcin responden ms rpidamente a
cambios en la remodelacin que los marcadores de formacin.

Evaluar la velocidad de recambio seo.

Evaluar el riesgo de fractura.

La DPYR aumenta en patologas que aumentan la resorcin sea.

NTX Y CTX

Los pequeos fragmentos de degradacin del


telopptido del colgeno tipo I son liberados al fluido
extracelular cuando el colgeno tipo I es degradado
por los osteoclastos durante la resorcin sea.

Estos fragmentos parecen ser especficos de hueso


ya que poseen el tipo de entrecruzamiento del
colgeno maduro tipo I de este origen, que no ocurre
en el colgeno tipo I de otras fuentes

NTX Y CTX

NTX y CTX
Mayormente

se miden en orina, pero


actualmente se miden en sangre tambien.

Por

tanto corregir de acuerdo a funcin renal.

Tienen
No

variacin diurna importante.

se alteran por la dieta.

NTX Y CTX
Muestra:
Mtodo:
Valor

Orina de 24 horas.

RIA, ELISA, quimioluminiscencia

de referencia:

Mujer premenopausica: 5-65 nM (bone


collagen equivalents)/mM de creatinina
Hombre: hasta 85 nM (BME)/mM de
creatinina

EXCRECION URINARIA DE CALCIO

Muestra: Se utiliza la relacin calcio/creatinina en


orina de ayuno, para descartar el calcio proveniente
de la dieta.

Valor de referencia:
Los valores deben ser menores de 0.11 mg
calcio/mg creatinina.

EXCRECION URINARIA DE CALCIO


Limitaciones:

De escasa sensibilidad.

Es afectado por la dieta (esto no ocurre en la orina


de ayuno)

Es afectado por la funcin renal ( calcio proveniente


de la reabsorcin renal)

Es afectado por el muestreo y por un exceso de


PTH y estradiol.

EXCRECION URINARIA DE CALCIO


Utilidad:
En enfermedad de Paget y en metstasis sea.
Valores en exceso indican prdida mineral sea.
Es til para diferenciar perdedoras lentas de masa sea de
perdedoras rpidas.
Tiene un alto valor predictivo negativo como indicador de
alto recambio seo.
No se encuentran bajos niveles de excrecin urinaria de
calcio en pacientes con alto recambio seo, excepto
cuando el esqueleto est pobremente mineralizado debido
a dficit de calcidiol y calcitriol o a aumento de PTH.

GLICOSIDOS DE HIDROXILISINA

Los glicsidos de hidroxilisina derivan del colgeno


tipo 1. La hidroxilisina deriva de la hidroxilacin
postranscripcional.
La forma monoglicosilada (galactosilhidroxilisina)
es la predominante en hueso, y la forma
diglicosilada (glucosil galactosil hidroxilisina) es la
predominante en piel.

Mtodo: HPLC

Muestra: Suero.

Utilidad: Es un marcador de resorcin sea.

FOSFATASA ACIDA

Es una enzima lisosomal.


Existen 5 isoenzimas en circulacin: sea, prosttica,
plaquetaria,eritrocitaria y proveniente del bazo.
La isoenzima sea se denomina TRAP: fosfatasa
cida tartrato resistente y deriva del osteoclasto.
La isoenzima sea juega un papel importante en el
proceso de resorcin.

FOSFATASA ACIDA
Desventajas:

Se han desarrollado inmunoensayos para la


isoenzima sea pero no se logr especificidad.

La enzima de la muestra es inestable a pH no


cido.

En los estados patolgicos se observan cambios


pequeos en su concentracin.

La isoenzima es liberada mayormente en el


microambiente seo y no a circulacin.

TIPOS DE MARCADORES
FORMACION:

(Sangre)

Fosfatasa Alcalina Especifica (FAO)


Fosfatasa Alcalina Total (FAL)

Osteocalcina (OC)
Propptidos del Colgeno tipo I (P1NP)
(P1CP )

FOSFATASA ALCALINA TOTAL

La FAL es una glicoprotena que se encuentra


unida a las membranas celulares. Tiene una vida
media en suero de 1-2 das por lo tanto su
variacin diurna es mnima.

En circulacin hay 4 isoenzimas de la FAL: en el


adulto heptica (60%), sea (40%) (FAO) ,
placentaria e intestinal.

La isoenzima sea es predominante en nios y


sobre todo en la pubertad.

Muestra : suero.

FOSFATASA ALCALINA TOTAL


Mtodo:

Hidrlisis enzimtica del para nitrofenilfosfato.

Espectrofotometra cintica 405 nm.

Recomendado por IFCC (30/3C), DGKC


(25C/37C).

Mtodo de Bessey Lowry optimizado - Sustrato:


paranitrofenilfosfato de sodio (PNPF).

FOSFATASA ALCALINA TOTAL

Valor de referencia:

IFCC, en UI/l a 30C


Adultos hombres < 60 aos 30-90 U/L

Adultos mujeres < 60 aos 30-80 U/L

FOSFATASA ALCALINA TOTAL


Nios (IFCC, en UI/L a 37C)

1-30 das H: 75-316 M: 48-406

1 Mes-1 ao H: 82-383 M: 124-341

1-3 aos H: 104-345 M: 108-317

4-6 aos H: 93-309 M: 96-297

7-9 aos H: 86-315 M: 69-325

10-12 aos H: 42-362 M: 51-332

13-15 aos H: 75-390 M: 50-162

16-18 aos H: 52-171 M: 47-119

FOSFATASA ALCALINA TOTAL


Utilidad de la FAL total:

Tiene dos aplicaciones clnicas muy tiles: en


enfermedad obstructiva heptica y en enfermedad
metablica sea, asociada a incremento de la
actividad osteoblstica, es considerada un
marcador bioqumico de recambio seo.

La medicin de FAL total es til cuando la cantidad


de FAO es excepcionalmente alta (como en la
enfermedad de Paget) y la concentracin de FAL
no sea no est aumentada y se encuentra estable.

FOSFATASA ALCALINA TOTAL

La FAL total no es til para el seguimiento de la


osteoporosis donde los cambios ocurren dentro
del rango de normalidad por ser un ensayo de
escasa sensibilidad y especificidad.

En el caso de la osteoporosis se aconseja la


utilizacin de FAO y no de FAL total.

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )

Es sintetizada por los osteoblastos maduros y sus


precursores.

La FAO es una enzima localizada en la


membrana de los osteoblastos que es liberada a
la circulacin.

La variabilidad biolgica y diurna de la FAO es la


mitad de la de deoxipiridinolina debido a que la
FAO tiene una vida media mayor (1 2 das) en
suero.

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )

Muestra: Suero.

Valores de referencia:
Mujeres postmenopusicas: 14.2-42.7 U/l
Mujeres premenopausia:11.6-29.6 U/l
Hombres:15-41.3 U/l

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )

Mtodo:
Inmunoensayo:
ELISA o IRMA: con anticuerpos monoclonales. Presenta una
reaccin cruzada de un 3-8% (dependiendo de la marca) con la
isoenzima heptica y de un 0.4% con la intestinal.
Por ello valores aumentados de la isoenzima heptica,
pueden afectar a los valores de la FAO. Esto se debe tambin a
que la isoenzima heptica es la predominante en adultos y la
sea en nios.
Adems como la FAO es aclarada por el hgado, puede
encontrarse elevada en enfermedades hepticas

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )
Espectrofotometra:

Tambin
se
puede
medir
por
espectrofotometra evaluando la actividad de fosfatasa alcalina
antes y despus de una precipitacin de la isoenzima sea con
lectina de germen de trigo.
Empleando una tcnica prolija, la reactividad cruzada con la
isoenzima heptica es del 5 %, aunque tiene menor sensibilidad
que el inmunoensayo.
La FAO es destruida por el calor a diferencia de las otras
isoenzimas, pero esta tcnica no es reproducible.

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )

La actividad de esta enzima aumenta con la edad


en adultos, especialmente en mujeres despus de
la menopausia.

Se encuentran valores aumentados:


Por deficiencia de estrgenos.
En el embarazo (en el segundo y tercer trimestre).
En pacientes con insuficiencia renal en
hemodilisis.

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )
Utilidad:
La medicin de su actividad en suero es una medida
indirecta del proceso de formacin.
Evaluar la velocidad de remodelado seo ( es un
marcador sensible de velocidad de remodelacin
sea).

FOSFATASA ALCALINA
ESPECIFICA OSEA (BSAP )

Monitoreo del tratamiento con antiresortivos


(hormonas, bifosfonatos) en osteoporosis de mujeres
postmenopusicas. Por ejemplo durante el tratamiento
con 10 mg/da de alendronato, disminuye la FAO a
ms del 25% a los 6 meses de tratamiento.

Cuenta
con
todos
los
beneficios
de
las
determinaciones sricas: pequea variabilidad entre
sujetos y baja variabilidad metodolgica y biolgica.

OSTEOCALCINA

Es la protena no colgena ms abundante de la matriz


extracelular sea. Est localizada en tejido seo y dentina.
Constituye un 25% de las protenas de naturaleza no
colgena.

Se la denomina protena GLA o BGP, protena no colgena


especifica de tejido seo. Es sintetizada predominantemente
por los osteoblastos (odontoblastos tambin) e incorporada
en la matriz extracelular del hueso.
La produccin de osteocalcina depende de tres vitaminas:
VIT D,VIT K, y VIT C

OSTEOCALCINA

OSTEOCALCINA

La osteocalcina circulante tiene una corta vida


media (5 minutos) y es aclarada rpidamente por
los riones. Debido a esto, la concentracin de
osteocalcina en sangre refleja la sntesis de nueva
protena por lo tanto su medicin provee una idea
del metabolismo esqueltico.

Su concentracin representa la actividad de los


osteoblastos.

OSTEOCALCINA

Muestra:
Suero o plasma con EDTA o heparina

Mtodo: IRMA (utiliza dos anticuerpos monoclonales, uno


reconoce la regin 7-19 y el otro la regin 37-49),
RIA, quimioluminiscencia.

En los diferentes inmunoensayos se encuentra variacin


dependiendo del fragmento que dose y dependiendo de la
especie utilizada (humana, bovina) que tendrn diferentes
epitopes.
Los inmunoensayos que presentan mayor informacin clnica
son los que dosan dos fracciones a la vez: la osteocalcina intacta
y el fragmento largo medio N terminal. Estos ensayos son ms
robustos y ms sensibles.

OSTEOCALCINA

Valores de referencia: (Intacta)


Hombres: 11.1-32.2 ng/ml
Mujeres: 3.8-30 ng/ml
(N-MID fragment+N-terminal)
Hombres: 11-46 ng/ml
Mujeres:
Premenopausia: 12-41 ng/ml
Postmenopausia: 20-48 ng/ml

OSTEOCALCINA
Utilidad clnica:

Monitoreo de la terapia hormonal de reemplazo en pacientes postmenopasicas.

Monitoreo de la terapia en pacientes con osteoporosis tratadas.

Evaluacin de pacientes osteoporticas.

Marcador bioqumico especfico de formacin sea, capaz de predecir el


perfil histolgico, en pacientes con osteoporosis post menopasica. Es
una medida de la velocidad de formacin de hueso trabecular. Es
marcador de remodelacin sea cuando formacin y resorcin estn
acoplados. Es marcador de formacin cuando formacin y resorcin
estn desacoplados.

OSTEOCALCINA

Monitoreo del tratamiento en pacientes con enfermedad de Paget,


acromegalia y el hiperparatiroidismo primario y secundario.

Evaluacin de pacientes tratados con glucocorticoides por perodos


prolongados.
Los glucocorticoides suprimen la formacin osteoblstica, por lo tanto la
osteocalcina (marcador de formacin sea) disminuye durante el
tratamiento con glucocorticoides Se correlaciona con el crecimiento del
esqueleto, en la pubertad. Los glucocorticoides causan osteopenia a
travs de diversos mecanismos: inhibicin de funcin osteoblstica,
aumento del nmero de osteoclastos y disminucin de la absorcin
intestinal de calcio que produce aumento de PTH.

La osteocalcina disminuye a los 3 meses de tratamiento con 10 mg/da


de alendronato.

PEPTIDOS DE EXTENSION DEL


PROCOLAGENO 1 (P1NP Y P1CP)

El colgeno tipo I se sintetiza como un precursor,


procolgeno y contiene extensiones N y C terminal.
Estas extensiones o propptidos son clivados del
colgeno tipo I durante la formacin de la fibra y
van a circulacin.
Durante el procesamiento extracelular del colgeno
tipo I hay un clivaje de pptidos de extensin
aminoterminal y carboxiterminal antes de que el
colgeno se incorpore a la matriz sea.

PEPTIDOS DE EXTENSION DEL


PROCOLAGENO 1 (P1NP Y P1CP)

PEPTIDOS DE EXTENSION DEL


PROCOLAGENO 1 (P1NP Y P1CP)

El PINP muestra cambios ms dinmicos que el PICP en


respuesta a agentes que alteran el recambio seo.

El PINP detecta cambios en la enfermedad de Paget


mientras que el PICP no.

El PINP decrece su concentracin mayormente que el


PICP durante la terapia hormonal de reemplazo (42%
versus 20% luego de 12 meses de tratamiento). Lo mismo
ocurre en la metstasis sea de carcinoma de mama.

Los PINP correlacionan con los valores de osteocalcina y


FAO, sin embargo es menos sensible que estos ltimos.

PEPTIDOS DE EXTENSION DEL


PROCOLAGENO 1 (P1NP Y P1CP)

Muestra: suero.

Mtodo: RIA

Valor de referencia PINP:


19-84 ug/l en mujeres
20-76 ug/l en hombres

Valor de referencia PICP:


50-170 ug/l en mujeres
38-202 ug/l en hombres

PEPTIDOS DE EXTENSION DEL


PROCOLAGENO 1 (P1NP Y P1CP)

Limitaciones: Refleja la sntesis de colgeno tipo I


seo y de otros tejidos (por lo tanto tiene una cierta
inespecificidad), sin embargo el ms abundante es
el seo.
El antgeno detectado puede provenir tambin de la
degradacin del colgeno (y lo que se quiere
estudiar con este marcador es la formacin).

PEPTIDOS DE EXTENSION DEL


PROCOLAGENO 1 (P1NP Y P1CP)
Utilidad clnica:

En menopausia se incrementan en un 20 % que no se


correlaciona con la medicin de la prdida de hueso a
travs de la densitometra.

Monitoreo del efecto inhibidor de crecimiento durante la


terapia con esteroides.

Evaluar en estudio de osteoporosis, metstasis sea y


enfermedad de Paget.

Evaluar: es til para estudiar la formacin sea en pacientes


tratados con 1,25 dihidroxi vitamina D o en pacientes con
niveles anormales de vitamina D.

CONCLUSIONES

APLICACIONES CLINICAS

Entre los 20 y 40 aos el remodelado es ptimo por


tanto es el balance IDEAL.

Cualquier variacin > < : es anormal.

El reacambio seo acelerado como el que ocurre en la


menopausia y la perdida sea acelerada nos permiten
intevenir e iniciar el tratamiento rapidamente.

Podemos decidir quien


determinado tratamiento.

puede

beneficiarse

con

APLICACIONES CLINICAS

Desde que stos nos dan idea de recambio seo


no pueden indicarnos la droga de eleccin.

Si nos ayudan a monitorizar y ver cuan efectivo es


nuestro tratamiento.

En estudios clinicos bien controlados: Alendronato,


Risedronato, Calcitonina, TRE, Raloxifeno y
Tibolona : los Marcadores disminuyeron
importantemente.

APLICACIONES CLINICAS

Los marcadores
de recambio seo no son
diagnosticos de OSTEOPOROSIS y tienen pobre
correlacin con la DMO se modifican muy
tempranamente.

Monitorizarlos cada 3 6 meses nos ayudan a


seguir a nuestras pacientes con la droga correcta,
dosis correcta de tal manera que se consiga dar
calidad de vida a los pacientes.

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