PROTOCOLO DE INVESTIGACIN

INSTITUCIN

UNIVERSIDAD
POLITCNICA
DE QUINTANA ROO
TITULO DEL PROYECTO
OBTENCIN Y ANLISIS DE MADERA
TRANSPARENTE ALTAMENTE
ANISOTRPICA A PARTIR DE LA
ACTIVIDAD DELIGNIFICANTE DEL
HONGO GANODERMA APPLANATUM

Registro de proyectos 2016

NDICE
DESCRIPCIN DEL PROYECTO.....................................................................................3
RESUMEN........................................................................................................................ 3
INTRODUCCIN............................................................................................................... 4
ANTECEDENTES.............................................................................................................. 4
MARCO TERICO............................................................................................................. 5
Objetivos:........................................................................................................................ 6
Objetivo General:............................................................................................................ 6
Objetivos especficos....................................................................................................... 6
Objetivos docentes:......................................................................................................... 7
Metas.............................................................................................................................. 7
Impacto o beneficio en la solucin de un problema relacionado con el sector productivo
o la generacin del conocimiento cientfico o tecnolgico..............................................7
Materiales....................................................................................................................... 8
Muestra de hongo........................................................................................................... 9
Reactivos...................................................................................................................... 9
Metodologa.................................................................................................................... 9

Investigacin documental..........................................................................................9

Recoleccin de muestras........................................................................................10

Preparacin de Agar Sabouraud dextrosa..................................................................10

Aislamiento por medio de tejido................................................................................10

Preparacin de la madera.......................................................................................11

Preparacin de caldo soubaroud rico en malta...........................................................11

Inoculacin de la madera perforada..........................................................................11

Extraccin de lignina por medio de Ganoderma applanatum.........................................12

Remocin de hongo y micelio de las muestras de madera...........................................12

Extraccin de lignina por bao qumico posterior a extraccin de Ganoderma applanatum

12

Programa de actividades, calendarizacin....................................................................14

Productos entregables................................................................................................... 15
Vinculacin con el Sector Productivo.............................................................................15
Referencias................................................................................................................... 16
LUGAR(ES) EN DONDE SE VA A DESARROLLAR EL PROYECTO.......................................17
INFRAESTRUCTURA....................................................................................................... 17

Registro de proyectos 2016

OBTENCIN

ANLISIS

DE

MADERA

TRANSPARENTE

ALTAMENTE ANISOTRPICA A PARTIR DE LA ACTIVIDAD DELIGNIFICANTE

DEL HONGO GANODERMA APPLANATUM.

DESCRIPCIN DEL PROYECTO.

RESUMEN.
El estado de Quintana Roo posee una gran cantidad de selva la cual
representa parte importante de su superficie total, la madera obtenida se
comercializa en su mayora para tablas y tablones debido a sus
caractersticas

anatmicas,

propiedades

mecnicas

fsicas.

Su

resistencia, ligereza y carcter de material renovable constituyen las

principales cualidades de la madera para su uso estructural. Dichas
cualidades son debidas a la estructura jerrquica y las interacciones entre
celulosa, hemicelulosa y lignina que esta presenta, mientras que las dos
primeras son prcticamente incoloras la lignina posee una estructura
compleja con color oscuro [1]. Diversos procesos como el blanqueamiento
qumico permiten remover la lignina presente en la madera, conservando
las estructuras de celulosa y hemicelulosa, obteniendo as madera
transparente. Diversos organismos poseen la capacidad de degradar la
lignina [2], el hongo Ganoderma applanatum es capaz de degradar la
estructura de la lignina [3][4][5]. A partir de organismos como este en
conjunto con procesos qumicos que refuercen las propiedades fsicas del
material

(resistencia)

es

posible

obtener

compuestos

de

madera

transparente altamente anisotrpica la cual puede usarse en construcciones

teniendo como principal beneficio reduccin en costos de iluminacin,
ventilacin, mejora esttica y resistencia con respecto a materiales como el
vidrio.
3

Registro de proyectos 2016

INTRODUCCIN
La biotecnologa al da de hoy puede ser definida como toda aplicacin
tecnolgica que utilice sistemas biolgicos y organismos vivos o sus
derivados para la creacin o modificacin de productos o procesos para
usos especficos. Los principales logros de la biotecnologa pueden
resumirse en alimentos fermentados, antibiticos, tecnologa recombinante,
productos de inters industrial entre otros, pero la biotecnologa no se limita
a microorganismos o transgnicos si no que va ms all de eso pudiendo
ser:
-

Roja: aplicacin universal mdica

Verde: procesos y/o materiales agrcolas
Azul: productos del mar y acuicultura
Blanca: optimizacin y eficiencia en procesos industriales.

ANTECEDENTES
El hombre y la tecnologa han evolucionado de forma simultnea a lo largo
de la historia. La necesidad y bsqueda de dominar el medio le ha conferido
al ser humano la habilidad de descubrir y utilizar los materiales que la
naturaleza ha puesto a su alcance. Desde tiempos inmemorables la madera
ha sido utilizada como materia prima para la fabricacin de armas de guerra
y caza dado que es un recurso muy verstil ya que los distintos tipos de
madera difieren considerablemente en cuanto a color, resistencia,
flexibilidad, dureza entre otras. El hombre ha utilizado madera para sus
edificaciones desde que este se perfeccion en el manejo de la misma. La
explotacin

sin

criterios,

la

tala

desmedida,

la

mala

gestin

deforestaciones masivas han llevado al ser humano a establecer una serie

de normativas y leyes a fin de proteger este recurso el cual se ha visto
4

Registro de proyectos 2016

diezmado, por lo que es necesario contemplar la disponibilidad y
buen manejo de las estrategias de obtencin de la misma.
Quintana Roo cuenta con una amplia variedad de especies de
rboles maderables los cuales son utilizados en su mayor parte para la
construccin, la cual ha ido cambiando e innovndose en los ltimos aos,
buscando alternativas a materiales como el vidrio dadas sus condiciones de
resistencia y conduccin trmica debido al clima de la zona por lo que la
madera transparente es una alternativa prometedora e innovadora en
materia de construccin.
Esta investigacin no tiene antecedentes registrados en materia del uso de
hongos delignificantes para la produccin de compuestos de madera
transparente. Mediante el desarrollo de este trabajo, pretendemos contribuir
con la aportacin de los resultados obtenidos, para poder tener informacin
documentada

de

los

experimentos

desarrollados

con

Ganoderma

applanatum.

MARCO TERICO
El consumo energtico est en aumentando a la par del desarrollo
econmico en todo el mundo, por lo que es importante la bsqueda de
nuevas alternativas que reduzcan el consumo de energa elctrica. La
energa solar resulta atractiva debido a su naturaleza gratuita, inagotable y
limpia [6], por lo que el uso alternativo de energa solar puede reducir
costos en las edificaciones que utilizan energa elctrica, debido a que la
luz artificial puede ser remplazada parcial o totalmente por energa solar. La
madera al ser un material ortotrpico constituido principalmente por paredes
de celulosa y hemicelulosa unidas con lignina y por poseer mesoestructuras
que varan en funcin de sus tipos y diferencias geogrficas [1] ha sido
elegida desde tiempos inmemorables como uno de los materiales para
construccin por excelencia, esto debido a propiedades como baja
5

Registro de proyectos 2016

densidad,

elasticidad,

alta

resistencia,

alta

dureza,

baja

conductividad trmica entre otras La bsqueda de alternativas

sustentables

en

materia

de

construccin

han

llevado

investigadores de pases como Estados Unidos y China al desarrollo de

madera transparente la cual resuelva problemticas de tipo ambiental
adems de reducir costos de iluminacin, ventilacin, mejora esttica y
resistencia con respecto a materiales como el vidrio en cuanto a lo que en
construccin respecta.

Objetivos:
Objetivo General:
Seleccionar e implementar tcnicas de operaciones unitarias y de
procesos a fin de obtener madera transparente propia de
especmenes de rboles del estado de Quintana Roo a partir de la
actividad delignificante del hongo Ganoderma applanatum., con la
finalidad de estudiar sus propiedades y caractersticas.
Objetivos especficos

Obtencin del hongo Ganoderma applanatum

Aplicar tcnicas de microbiologa para la obtencin y siembra de

micelio del hongo Ganoderma applanatum

Disear experimentos para la delignificacin de madera propia de

especmenes de rboles del estado de Quintana Roo.

Implementar experimentos para la obtencin de

madera

transparente altamente anisotrpica propia de especmenes de

rboles del estado de Quintana Roo

Caracterizar las propiedades fsicas y qumicas del biomaterial

obtenido.
Caracterizacin de la morfologa y estructura del biomaterial
usando la tcnica de microscopa electrnica de barrido (SEM).

Registro de proyectos 2016

Objetivos docentes:
Contribuir a la preparacin y formacin de Ingenieros en
Biotecnologa a nivel de licenciatura en el programa educativo de
Ingeniera en Biotecnologa con las competencias para resolver
problemas reales, realizar investigacin y desarrollo tecnolgico, as
como de emplear tcnicas de caracterizacin fsica, qumica y
biolgica.

Metas

Obtener madera delignificada a partir de actividad del hongo Ganoderma

applanatum la cual conserve sus propiedades mecnicas y est viable para

la induccin de la resina epxica.

Obtener madera transparente por induccin de la resina epxica la cual
posea propiedades mecnicas, pticas y de conduccin trmica superiores

a las de la madera convencional.

Realizar la caracterizacin de las propiedades fsicas, mecnicas y pticas

del material obtenido.

Perfeccionar la tcnica de obtencin de madera transparente utilizando la
actividad de Ganoderma applanatum para la degradacin de la lignina.

Impacto o beneficio en la solucin de un problema relacionado con el sector

productivo o la generacin del conocimiento cientfico o tecnolgico.
Se propone un biomaterial obtenido a partir de un proceso meramente
biotecnolgico que puede ser implementado como alternativa al uso de
vidrio teniendo como beneficio reduccin en costos de iluminacin,
ventilacin, mejora esttica y resistencia el cual puede ser utilizado en
edificaciones del estado de Quintana Roo con lo que se impulsara la
arquitectura sustentable del estado.
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Registro de proyectos 2016

La generacin del conocimiento cientfico y tecnolgico se logra al
proponer, efectuar y evaluar procesos para la obtencin de
biomateriales utilizando materia prima propia del estado de
Quintana Roo haciendo uso de los conocimientos adquiridos durante la
carrera de Ingeniera en biotecnologa y aplicando el conocimiento
adquirido en otras partes del mundo con respecto al desarrollo de
compuestos de madera transparente.

Materiales

Muestras de maderas endmicas de las siguientes dimensiones:

1. 1 cm x 10 cm x 10 cm *
2. 2 cm x 10 cm x 10 cm *
3. 4 cm x 10 cm x 10 cm *
* en corte longitudinal y transversal
Bomba de vaco
Balanza analtica
1-3 vasos de precipitado de 1 litro
Bandeja de plstico de 20 20 cm o superior
Mufla
Desecador con gel de slice
1 termmetro
2 pinzas de acero inoxidable o aluminio
1 probeta de 1 litro
2 capsulas de porcelana
2 vidrios de reloj
2 cucharillas metlicas
Cuchillos
Bolsa trmica
Bolsa de gel termica
Cajas de petri de 100 x 15 y 60 x 15 mm
Asas micologicas
Guantes estriles
Tapa bocas
Estufa
Mechero de Bunsen

Registro de proyectos 2016

Muestra de hongo
Ganoderma applanatum
Reactivos
Agar SABOURAUD
Extracto de malta.
Agua destilada.
Agua potable.
Gentamicina
O en su defecto
Cloramfenicol
1.5 qrs de resina epxica 300/21, Aeromarine
O en su defecto

1 lt de metil-metacrilato (M55909-1L), Sigma-Aldrich

25 g de 2,2 Azobis (440914-25G), Sigma-Aldrich

Metodologa

Investigacin documental

1. Investigacin documental sobre los tipos de madera ms convenientes para

la

produccin

de

madera

transparente

altamente

anisotrpica,

contemplando rboles maderables del estado de Quintana Roo y la

disponibilidad de los mismos.

Recoleccin de muestras.

1. Toma de notas de las propiedades morfolgicas del estado, tamao, color,

etc. Anotar datos sobre la vegetacin que rodea el espcimen.
2. Toma de fotografas de los especmenes.
3. Remocin hongo para no cortar el estpite y la volva cuando este est
presente, adems de que dicha esptula debe contener una pequea

Registro de proyectos 2016

porcin de sustrato base del hongo, es necesario introducir la
cuchilla o esptula unos cuantos centmetros hacia abajo de la
base del rbol)
4. Recoleccin de especmenes jvenes y maduros en la mayor cantidad
posible (los especmenes removidos deben colocarse sobre papel aluminio
de manera que se puedan cerrar los extremos sin producir daos a las
muestras)
5. Traslado de los especmenes al laboratorio colocndolos dentro de una
bolsa trmica adecuada.

Preparacin de Agar Sabouraud dextrosa.

1. Suspensin de 65 g de medio deshidratado en litro de agua destilada.

2. Calentamiento con agitacin frecuente del medio de cultivo (dejar hervir
durante 1 minuto)
3. Esterilizacin a 121 C durante 15 minutos.
4. Distribucin y enfriamiento a temperatura ambiente

Aislamiento por medio de tejido de acuerdo a [7]

1. Corte del hongo de modo longitudinal.

2. Recoleccin de fragmentos de micelio o carne del hongo, colocndolos en
cajas Petri con medio de cultivo.
3. Incubacin de cajas Petri con los aislamientos entre 25-28 C por 48 horas.
4. Observacin de crecimiento micelial en forma algodonosa sobre la
superficie del medio. (Un color blanco o blanco amarillento indica que el
aislamiento se realiz correctamente)
5. Seleccin de cutivos con mejor apariencia para su posterior transferencia a
nuevas cajas con medio de cultivo.
6. Resiembra del micelio tomando con asas micolgica estril un fragmento
del mismo y colocndolo sobre el medio de cultivo con la nueva caja Petri.
7. Incubar entre 25-28 C.

Preparacin de la madera

1. Corte de 3 maderas endmicas de 10 x 10 x 1 cm

10

Registro de proyectos 2016

2. Realizacin de agujeros de 4 mm de dimetro x 1 cm de
profundad de forma aleatoria diversos puntos de la madera.

Preparacin de caldo soubaroud rico en malta

1. Adicin de 1 gramo de agar soubaroud y un gramo de malta por cada

medio litro de agua.
2. Calentamiento de la mezcla hasta ebullicin induciendo agitacin constante
durante 5 minutos.
3. Enfriamiento de la mezcla hasta alcanzar los 17C (a fin de evitar la
desnaturalizacin del micelio)
4. Adicin de viruta de madera a la mezcla rica en malta y homogenizacin

Inoculacin de la madera perforada

1. Inoculacin del micelio tomando con asa micolgica estril un fragmento del
mismo y colocndolo sobre la madera perforada.
2. Adicin de mezcla rica en malta y viruta en cada uno de los orificios
inoculados anteriormente.

Extraccin de lignina por medio de Ganoderma applanatum.

1. Resguarde de las muestras inoculadas por 45 das en contenedores de
plstico con divisiones para cada hongo y con tapa de modo que
permita la entrada de aire y la humedad necesaria para el hongo.
2. Toma de notas de desarrollo del hongo 3 veces por semana.

Remocin de hongo y micelio de las muestras de madera

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Registro de proyectos 2016

Extraccin de lignina por bao qumico posterior a extraccin

de Ganoderma applanatum
Extraccin de lignina en la estructura de celulosa de los bloques
de madera mediante bao en 700 ml de solucin de H2O2 2.5M a
temperatura ambiente
durante 3, 8 y 12 horas, sin agitacin, tomando evidencia de la decoloracin
la madera cada hora.
Lavado de madera delignificada con agua destilada y etanol puro,
posteriormente en mezcla 1:1 de etanol y acetona y por ltimo con acetona
pura para deshidratar.
Pesaje de la madera delignificada a fin de calcular la densidad de la misma
mediante
=m/V

Donde: es la densidad; m es la masa y V el volumen de la muestra.

Estimacin de la masa de lignina removida mediante

ml = m M m h
Donde: ml es la masa de lignina, mM es la masa de la madera seca antes del
tratamiento y mh es la masa de la hemicelulosa obtenida por el tratamiento.
1. Las muestras se sumergirn en resina epxica Aeromarine 300/21 [7] (o
Metil-Metacrilato prepolimerizado, ambos de Sigma-Aldrich, en caso de no
tener acceso a la resina y se sometern a bomba de vaco a 20 5 Pa
durante 30 minutos, repitiendo el tratamiento de vaco 3 veces, para infiltrar
la matriz de hemicelulosa con polmero.
2. En caso de contar con tiempo para ello, se realizarn pruebas pticas de
dispersin y transparencia.
3. Evaluacin de los resultados y retroalimentacin para la definicin de las
condiciones y aplicaciones de las tcnicas antes mencionadas para
escalamiento a nivel industrial.

12

Registro de proyectos 2016

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Registro de proyectos 2016

Programa de actividades, calendarizacin

ESTANCIA II
No Actividad

Responsable de
la actividad

Dr. Jess Manuel

Ortega Rueda de
Len
M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez

Realizar Investigacin
documental sobre
rboles maderables de
Quintana Roo con las
caractersticas que ms
se adecen a nuestros
fines.
Realizar Investigacin
documental sobre usos,
aplicaciones y desecho
de lignina en solucin
acuosa.

Aplicar la metodologa
para obtencin de
Ganoderma
applanatum

Aplicar la metodologa
bsica de procesos
unitarios para la
obtencin del
biomaterial.

Controlar los
parmetros fsicos,
qumicos y
microbiolgicos para la
obtencin del
biomaterial.
Caracterizar el
biomaterial

Dr. Jess Manuel

Ortega Rueda de
Len
M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez
Dr. Jess Manuel
Ortega Rueda de
Len
M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez
Dr. Jess Manuel
Ortega Rueda de
Len
M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez
Dr. Jess Manuel
Ortega Rueda de
Len
M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez
Dr. Jess Manuel
Ortega Rueda de
Len

Periodo de
realizacin
(fecha inicio y
trmino)
12 horas

Justificacin

6 horas

Identificar los
ltimos
avances
referentes al
tema en
cuestin.
Obtener el
biomaterial a
partir de la
accin de
dicho hongo.

2 horas

Identificar los
ltimos
avances
referentes al
tema en
cuestin.

100

Procesar la
materia prima
para obtener el
biomaterial.

20

Obtener un
biomaterial con
caractersticas
deseables y
con variables
controlables.
Identificar las
propiedades
del biomaterial

40

14

Registro de proyectos 2016

M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez
6

Realizar informe de los

resultados que permitan
caracterizar el producto
con base a sus
propiedades fsicas,
qumicas y biolgicas.

Dr. Jess Manuel

Ortega Rueda de
Len
M. en C. Iris
Aurora Nava
Jimnez

30

producido
Presentar los
resultados
obtenidos a fin
de poder dar a
conocer el
trabajo
realizado
adems de
proponer
mejoras para
investigacione
s posteriores.

Productos entregables
1) Estancia II: Informe de su proyecto de actividades.
2) Presentacin de sus trabajos de estada en

congresos

nacionales y en la semana de la biotecnologa en la UPQROO.

Vinculacin con el Sector Productivo.

Por el momento este proyecto contempla estudios bsicos de biotecnologa
para su incorporacin posterior a sector productivo.

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Registro de proyectos 2016

Referencias
[1]

M. Zhu, J. Song, T. Li, A. Gong, Y. Wang, J. Dai, Y. Yao, W. Luo, D.

Henderson, and L. Hu, Highly Anisotropic, Highly Transparent Wood
Composites, Adv. Mater., pp. 51815187, 2016.

[2]

M. Asgher, A. Wahab, M. Bilal, and H. M. Nasir Iqbal, Lignocellulose

degradation and production of lignin modifying enzymes by
Schizophyllum commune IBL-06 in solid-state fermentation, Biocatal.
Agric. Biotechnol., vol. 6, pp. 195201, 2016.

[3]

J. P. Elissetche, A. Ferraz, J. Freer, R. Mendon??a, and J. Rodr??guez,

Thiobarbituric acid reactive substances, Fe3+ reduction and enzymatic
activities in cultures of Ganoderma australe growing on Drimys winteri
wood, FEMS Microbiol. Lett., vol. 260, no. 1, pp. 112118, 2006.

[4]

A. Pinkert, D. F. Goeke, K. N. Marsh, and S. Pang, Extracting wood lignin

without dissolving or degrading cellulose: investigations on the use of
food additive-derived ionic liquids, Green Chem., vol. 13, no. 11, p.
3124, 2011.

[5]

I. Dill and G. Kraepelin, Palo Podrido: Model for Extensive Delignification

of Wood by Ganoderma applanatum, Appl. Envir. Microbiol., vol. 52, no.
6, pp. 13051312, Dec. 1986.

[6]

Y. Li, Q. Fu, S. Yu, M. Yan, and L. Berglund, Optically Transparent Wood

from a Nanoporous Cellulosic Template: Combining Functional and
Structural Performance, Biomacromolecules, vol. 17, no. 4, pp. 1358
1364, 2016.

[7]

R. Gaitn-Hernndez, D. Salmones, R. Prez Merlo, and G. Mata, Manual

prctico del cultivo de setas: aislamiento, siembra y produccin. 2006.

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Registro de proyectos 2016

Lugar(es) en donde se va a desarrollar el proyecto

Las obtenciones de los biomateriales relacionados con este proyecto se
llevarn a cabo en el laboratorio de biotecnologa de la Universidad
Politcnica de Quintana Roo, Av. Arco Bicentenario, Mza. 11, Lote 111933, Sm. 255, Cancn, Quintana Roo, Mxico C.P. 77500. Por el momento
no se realizaran pruebas de campo

Infraestructura
El Laboratorio de biotecnologa de la Universidad Politcnica de Quintana
Roo no cuenta con equipos para hacer estudios de estructura y
morfologa, pero se gestionar la

colaboracin con el Instituto

Tecnolgico de Cancn, debido a que est cuenta con los equipos

requeridos para la realizacin de este proyecto de Investigacin.

Directora de Ingeniera en Biotecnologa

Profesor-Investigador Responsable
M. en C. Iris Aurora Nava Jimnez Dr. Jess Manuel Ortega Rueda de Len
Nombre y Firma
Nombre y Firma

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