Introduccin

En el Ecuador el cultivo del tomate de rbol es realizado principalmente por pequeos y medianos
productores que han incrementado en la ltima dcada la superficie cosechada de 1370 ha en
1993 a 3250 ha en 1997, en tanto que el censo del 2001 report que existen 4062 ha de cultivo. El
incremento en rea ha sido paulatino ao tras ao, no as los rendimientos que tienden a la baja
con 13, 8 y 5,5tn/ha en los aos sealados siendo las causas principales de las prdidas
problemas ocasionados principalmente por plagas. (MAG-PRSA, 1994; MAG-PRSA, 1998; INECMAG-SICA, 2002; citados por Len J. et al., 2004).
En Ecuador la presencia de la enfermedad mancha negra del tronco del tomate de rbol",
causada por el hongo Fusarium solani, se registr en 1988 en la provincia de Tungurahua. Sin
embargo, en el ao 2000 alcanz importancia econmica. La presencia de la enfermedad
Mancha negra del tronco o Pata de puerco se registra a partir de los aos 90 en la provincia de
Tungurahua.
En la actualidad est presente en las provincias de Imbabura, Pichincha, Tungurahua y Azuay, las
que cuentan con significativas superficies cultivadas. En Azuay y Tungurahua se han registrado
lotes aniquilados por el ataque de Fusarium solani.
Puede provocar la rotura del tronco o de la rama afectada, especialmente cuando el rbol posee
un nmero apreciable de frutos. Cuando ataca cerca del cuello, la enfermedad avanza hacia las
races, emanando un fuerte olor a descomposicin desagradable y provocando el marchitamiento
de la planta. Tambin se ha observado la presencia de manchas negras en el pice de plantas de
cuatro a cinco meses de edad. La enfermedad se disemina por el viento, las salpicaduras de las
gotas de lluvia o por factores indirectos como las labores culturales. El hongo ingresa a la planta
por las heridas causadas por insectos o herramientas. Al poco tiempo de su ingreso, el hongo
puede llegar a contaminar el cuello y el tallo de la planta. Todos los materiales cultivados
presentan susceptibilidad al ataque de la enfermedad. La variedad amarillo comn es menos
susceptible que las variedades amarillo gigante y mora.
La transformacin vegetal se define en sentido estricto como el proceso de cambio del fenotipo de
un organismo a travs de la introduccin de ADN forneo al genoma. En plantas esta tcnica ha
avanzado vertiginosamente, con el objeto de lograr mayor conveniencia y eficiencia, en un rango
de genotipos ms amplio y de caractersticas moleculares deseadas en las plantas transformadas.
La transformacin de plantas depende de la introduccin estable de los transgenes dentro del
genoma vegetal. Con el objeto de hacer ms fcil y eficiente la transferencia de ADN hacia clulas
o tejidos vegetales, se han desarrollado diferentes mtodos de transformacin gentica, que se
pueden dividir en dos clases de acuerdo con el mecanismo utilizado para la transferencia:
1. mtodos basados en la utilizacin de vectores biolgicos, como Agrobacterium
tumefaciens o virus vegetales
2. mtodos que consisten en la transferencia directa de ADN, como el de biobalstica. El
trmino biobalstica deriva de la conjuncin de biologa y balstica o balstica
biolgica.Este es un mtodo muy original ideado y refinado en la dcada de 1980 por un
grupo de investigadores de la Universidad de Cornell (EE.UU.), que permite introducir ADN
a virtualmente cualquier tipo de clula. En este procedimiento el ADN es introducido en las
clulas por medio de partculas microscpicas (micropartculas) aceleradas a velocidades
supersnicas, que atraviesan la pared y la membrana celular.
En la actualidad se utilizan tcnicas y herramientas que convergen en la ingeniera gentica y la
tecnologa del ADN recombinante, estas nos permiten modificar en un solo gen el patrimonio
gentico de una variedad de cultivo obtenida por tcnicas de mejora tradicionales, permitindonos
cambiar el fenotipo de un organismo a travs de incorporacin de un ADN forneo en su genoma.
Un guisante genmico clon DRRG49-c abarca un gen estructural DRRG, la expresin de que se
correlaciona con la expresin de la resistencia a las enfermedades, fue secuenciado y
caracterizado, el gen estructural DRRG es uno de una familia multignica, y existe un estimado de
cinco copias en el genoma de guisante.

El problema de estudio es la alta incidencia de la mancha negra del tronco (F. solani) en tomate de
rbol (S. betaceum) en Ecuador debido a la falta de estudios y desarrollo de nuevas variedades de
tomate de rbol con resistencia frente al patgeno.
Objetivos:
Objetivo general:
Desarrollar un esquema de mejora gentica en Tomate de rbol (Solanum betaceum Cav.)
con tendencia a la resistencia al hongo Fusarium solani agente causal de la Mancha negra
del tronco, usando un gen DRRG proveniente de un guisante (Pisum sativum L.), mediante
tcnicas de transformacin por bombardeo con partculas biolistica.
Objetivos especficos:
Realizar un esquema de fitomejoramiento en Tomate de rbol (Solanum betaceum).
Obtener plantas de Tomate de rbol resistentes al hongo Fusarium solani.
Hiptesis
La hiptesis del presente proyecto busca desarrollar un esquema de fitomejoramiento del cual se
obtendr una variedad de tomate de rbol resistente a la mancha negra del tronco mediada por
tcnicas moleculares y de biotecnologa.
Revisin de literatura
Antecedentes
Existen dos teoras sobre el origen del tomate de rbol. En la primera teora
(Albornoz y Patio 2002), afirman que el origen se sita en la regin montaosa de
la Cordillera de los Andes, en los bosques de clima templado de Colombia, Ecuador,
Per, Bolivia y Chile.
Y la segunda teora sustentada por Lynn Bohs (2008), sita el origen en selvas y
bosques de montaa del sur de Bolivia y noroeste de Argentina conocidos como
Yungas, en base a los estudios de campo realizados, que demostraron las
relaciones morfolgicas y moleculares con los taxones bolivianos.
A pesar de que el tomate de rbol (Solanum betaceum) tiene caractersticas de suma importancia
para la agroindustria y tiene gran potencial en los mercados internacionales, ste no ha sido
investigado ni mejorado genticamente en los ltimos aos.
La planta de tomate de rbol es atacada por una serie de enfermedades provocadas
principalmente por hongos y virus que afectan a diferentes rganos, reduciendo el crecimiento, la
produccin, la calidad de la fruta e incluso su supervivencia (Velastegu& Fiallos, 1987; Velastegu
& Ball, 1991). Las condiciones ambientales donde se desarrolla el cultivo, el genotipo o cultivar
seleccionado y las prcticas fitotcnicas en general influirn en la incidencia, severidad y
distribucin de las enfermedades (Santilln, 2001; Len et al., 2004).
Para el control de estas enfermedades, los agricultores no disponen de alternativas
eficientes. El control qumico mediante aspersin de fungicidas en forma irracional,
es el nico medio que disponen y est influenciado por las casas comerciales de
agroqumicos. Los agricultores a pesar de las aplicaciones exageradas de productos
qumicos, usualmente experimentan prdidas de sus cultivos, especialmente por el
ataque de mancha negra, cuyo control est mal orientado. Hasta el ao 2000, esta enfermedad no
fue
de
importancia.
Se
ha
registrado
en
el
pas
que,
debido
a
la
presencia del fenmeno del Nio, se registran lotes completamente aniquilados en
2

las provincias de Azuay y Tungurahua. Este hecho permiti deducir que la

incidencia de la enfermedad depende de condiciones de clima lluvioso. Adems, se determin que
el
dao
no
pudo
ser
evitado
debido
a
que
el
control
realizado fue errado, al confundir esta epifitia con la enfermedad tizn tardo o
lancha por la similitud de los sntomas (Mora y Revelo, 2000).
Velastegu (1988), reporta como agente causal de esta enfermedad al hongo
Fusarium especie solani. Mora y Revelo (2000), de muestras de tejido enfermo de
tomate de rbol recolectadas en las provincias de Tungurahua e Imbabura al realizar
los diferentes aislamientos y efectuar las pruebas de patogcnicidad y postulados de
Koch, determinan tambin al hongo Fusarium solani como agente causal.
F. solani permanece en el suelo creciendo de forma saproftica sobre los residuos de plantas
hospedantes. Tambin en la en la zona radicular de plantas susceptibles el hongo puede
desarrollarse saprofticamente antes de invadir las races. La diseminacin de las esporas y del
micelio ocurre por el traslado de residuos infectados y al arrastre por el agua.
La clonacin y caracterizacin de un gen de respuesta resistencia a enfermedades en
guisante inducible por Fusarium solani.
Genes de respuesta de resistencia a la enfermedad (DRRG) de guisantes se expresan como el
tejido es expresin de resistencia raza-especfica o nonhost. Un guisante clon genmico DRRG49
c abarcando un DRRG gen estructural, la expresin de que se correlaciona con la expresin de la
resistencia a las enfermedades. El segmento genmico de 2,3 kb secuenciado abarc 986 bp 5' a
la gran iniciacin transcripcional del sitio, un marco de lectura abierto 474-bp interrumpido por un
intrn de ricos en 88 puntos de ebullicin y un segmento adicional 574-bp 3' desde el codn de
parada. Anlisis Southern blot indican que el gen estructural DRRG es uno de una familia, y
existen un estimado de cinco copias dentro del genoma de arveja. El producto del gene de
DRRG49 como una protena hay mayor acumulacin durante las interacciones husped-patgeno.
(NCBI 2016).
Transformacin gentica
En lo referente al mejoramiento vegetal, la tcnica del ADN recombinante ha sido
utilizada para la construccin de segmentos de .ADN que permitan introducir genes que le den a
la planta diferentes caractersticas como resistencia a enfermedades, stress abitico, tolerancia a
herbicidas o para aumentar su calidad nutricional a pesar de que los genes necesarios no se
encuentren dentro del pool de genes de la especie. Existen varias tcnicas que han sido utilizadas
para introducir estas nuevas construcciones genticas en plantas).
Transformacin por bombardeo con partculas (biolistica)
El bombardeo de partculas para la introduccin de ADN en las clulas fue introducido en 1987 por
Sanford y sus colaboradores con el nombre de biolistica biolistica biolgica (Rusell et al.,
1992). Este mtodo transforman clulas completas de un rgano o tejido a partir de un bombardeo
con micro proyectiles de oro o tungsteno (1,3m) estos estn recubiertos de nuestro ADN de
inters, estas partculas son aceleradas por cargas explosivas y descargas elctricas, expansin
de gases inertes a alta presin (helio), o aire comprimido (Christou y Yang, 1994).
En este procedimiento el ADN es introducido en las clulas por medio de partculas microscpicas
(micropartculas) aceleradas a velocidades supersnicas, que atraviesan la pared y la membrana
celular. Las partculas son aproximadamente esfricas (de 0.4 a 2.0 micrmetros de dimetro),
estn hechas de materiales densos como oro o tungsteno, y se recubren con el ADN que se
desea transferir a las plantas. Para que las micropartculas puedan atravesar las membranas
3

celulares y llegar al ncleo de las clulas blanco, son impulsadas a gran velocidad por explosin
de plvora seca, liberacin de gas comprimido a alta presin (aire, helio, CO 2 o N2), o por una
descarga elctrica de una gota de agua. Una vez dentro del tejido vegetal el ADN se desprende de
las micropartculas debido a las modificaciones del entorno inico.
Si las partculas atraviesan las membranas y son atrapadas en el ncleo, el ADN puede integrarse
de forma estable en los cromosomas mediante un proceso de recombinacin al azar, lo que se
considera como transformacin estable. La transformacin estable ocurre a muy baja frecuencia,
por lo que es necesario utilizar un sistema de seleccin in vitro que permita distinguir clulas
transformadas y no transformadas.
En este mtodo de transformacin las construcciones genticas son ms simples e incluyen los
genes de inters y de seleccin con sus secuencias regulatorias respectivas. El ADN para ser
clonado es incluido en plsmidos que son transferidos completos durante el bombardeo a las
clulas, o bien de forma de molcula lineal (el plsmido cortado en un punto), a diferencia de los
plsmidos utilizados con Agrobacterium (plsmido ti desarmado). Tambin es muy comn que una
vez obtenida la construccin gentica dentro de un plsmido (en el cual se clona y se obtienen
muchas copias para trabajar), luego se la extrae del mismo para slo tener la secuencia con los
genes de inters y de seleccin (incluidas las secuencias regulatorias) y as reducir el fragmento
de ADN a transferir.
Biotecnologa y variabilidad.
La biotecnologa es una herramienta que en el corto y mediano plazo puede brindar a los
fitomejoradores el acceso a una formidable fuente de variabilidad. Ejemplo: Genes Bt de la
bacteria Bacillus thuringiensis var. Kurstaki que codifica la sntesis de protena con efecto
insecticida sobre algunas de las especies de lepidpteros. Otro caso es la incorporacin de los
genes de resistencia al herbicida glifosato en soya.
La introduccin de la construccin gentica se realiza principalmente a travs de dos mtodos: la
transformacin mediada por Agrobacterium tumefaciens y el bombardeo con micropartculas o
biobalstica. Hay otras alternativas, aunque de uso ms limitado, como la electroporacin, la
microinyeccin directa y el empleo de virus vegetales.
En muchas especies vegetales (especialmente en las dicotiledneas) es posible introducir genes a
travs de una bacteria del suelo, llamada Agrobacterium tumefaciens. Cuando esta bacteria
infecta a la planta, generalmente en la base del tallo, las clulas de la planta proliferan como un
tumor, denominado agalla de la corona. Las clulas de este tumor pueden crecer en cultivo y se
multiplican an en ausencia de hormonas. Durante la infeccin la bacteria transfiere un fragmento
de su plsmido (llamado plsmido Ti) a las clulas de la planta. Este fragmento se denomina ADNT y termina integrndose en algn lugar del cromosoma. Por ingeniera gentica se puede insertar
un gen de inters en la regin T del plsmido Ti. As, luego de la infeccin, el nuevo gen ser
tambin transferido a la clula vegetal e insertado en el genoma de la planta.
No todas las especies pueden ser transformadas usando A. tumefaciens. Especialmente para las
monocotiledneas se ha desarrollado un mtodo alternativo, denominado bombardeo con
micropartculas. En este mtodo, se recubren micropartculas de oro o de tungsteno con el ADN,
las cuales son aceleradas en un can gnico para adquirir suficiente velocidad y poder penetrar
en la clula.
Luego de la transformacin, las clulas que recibieron los genes de inters se seleccionan
empleando antibiticos o herbicidas en el medio de cultivo (adems de los genes de inters, se
introducen otros genes, denominados marcadores de seleccin que le confieren resistencia a las
4

clulas que los llevan, de modo que las que clulas que no llevan estos genes marcadores,
mueren).
La caracterstica de ser totipotentes, les confiere la caracterstica de que una clula de cualquier
parte de la planta puede multiplicarse y generar la planta completa. Para eso las clulas deben
crecer en el medio de cultivo adecuado y en presencia de determinadas hormonas y factores
vegetales. El resultado es una planta que lleva el gen de inters en cada una de sus clulas.

Figura 1: obtencin de una planta transgnica (Adaptado de Basic Primer on Biotechnology, North
Dakota State University.).
Cultivo de clulas y tejidos vegetales
El paso siguiente es incorporar el nuevo gen, a travs de cruzamientos, en lneas de alto valor
comercial (lneas elite). De esta manera la nueva variedad tendr un rendimiento similar al de la
lnea elite, pero con un rasgo adicional (por ejemplo, resistencia a insectos)
Manejo de las poblaciones hbridas utilizando el mtodo pedigr o genealgico
El mtodo genealgico, conocido tambin como el mtodo pedigree, fue inicialmente propuesto
por Hjalman Nilsson. Aproximadamente en la misma poca, Louis de Vilmorin, citado por Allard,
usaba la seleccin individual de plantas como prueba de progenie, metodologa que di origen al
mtodo genealgico convencional.
La lnea mejorada no crea nuevos genotipos y su mejoramiento se limita al aislamiento del mejor
genotipo presente en la mezcla de la poblacin. Una vez que se prob la superioridad del genotipo
seleccionado, la poblacin debe ser incrementada, puesto el nombre y distribuida como un nuevo
cultivar.
Materiales y mtodos:
Ubicacin: Cayambe- Pichincha Otavalo Hacienda Lourdes Vallejos
Coordenadas geogrficas: 01403.48N 781539.84O
Elevacin: 2536 msnm
Fase de laboratorio:
5

El proyecto se llevara a cabo en los laboratorios de biotecnologa de la universidad central del

Ecuador, la seleccin de F1 hasta la F10 se realizara cada un ao y medio aproximadamente por
la fructificacin, seleccionados por marcadores moleculares que busquen el gen de inters
monitoreando el avance del ensayo.
Fase de campo:
La siembras del ensayo ocuparan un rea mxima de 1300 m2 hasta el 6to ao se realizara bajo
invernadero con condiciones controladas en un rea mxima de 1250 m2, luego de esto su rea
se reduce a 500 m2 durante 9 aos en campo monitoreando las caractersticas de inters como
son produccin y resistencia al patgeno descrito en el ensayo.
Informacin meteorolgica: temperatura normal promedio del 12, 8 C, contando como Mayo el
mes en el que se tiene las mayores precipitaciones, y el mes ms seco Junio con 24 y 60 mm, el
mes ms caluroso del ao con un promedio de 18,9 C y el ms frio de 7,6 C en Julio.
Laboratorio: temperatura ambiente de 27 C, y plantas cultivadas in vitro a una temperatura
promedio de 25 C.
Material vegetal:
Para las diferentes etapas usamos la variedad amarillo comn de tomate de rbol y la obtencin
del gen de inters inicialmente de un guisante con el gen DRRG ya descrito en la (NCBI), del cual
se obtiene un OGM, de tomate de rbol amarillo gigante, resultando una nueva variedad con el
gen de resistencia a fusarium presente en su genoma.
Obtencin del OGM:
La obtencin del OGM se realizara en tomate de rbol de la variedad amarillo gigante con un
guisante. En nuestro caso el gen DRRG proviene de un guisante (Pisum sativum L.), trabajar en
Ecuador con transgnicos no es viable, no obstante otros pases pueden beneficiarse de la
presente recopilacin de datos, la variedad de tomate de rbol propuesta es la amarillo comn que
presenta susceptibilidad al hongo. El tiempo en que se estima trabajar con alelos
correspondientes a los caracteres deseados y sustituirlos tiene 10 aos, si partimos de cero, en
este caso el gen est identificado y caracterizado en el National Center for Biotechnology
Information (NCBI), lo cual agilitara por mucho el inicio de la investigacin a 4 aos por pruebas
en laboratorio y campo. (Anexo 1)
Manejo de las poblaciones hbridas utilizando el mtodo pedigr o genealgico
El mtodo genealgico, conocido tambin como el mtodo pedigree, fue inicialmente propuesto
por Hjalman Nilsson. Aproximadamente en la misma poca, Louis de Vilmorin, citado por Allard,
usaba la seleccin individual de plantas como prueba de progenie, metodologa que di origen al
mtodo genealgico convencional.
La lnea mejorada no crea nuevos genotipos y su mejoramiento se limita al aislamiento del mejor
genotipo presente en la mezcla de la poblacin. Una vez que se prob la superioridad del genotipo
seleccionado, la poblacin debe ser incrementada, puesto el nombre y distribuida como un nuevo
cultivar.

Procedimiento de la seleccin genealgica

A
o

Segregant
es

Semillas
(150)

1,5

3 plantas

4,5

500 plantas

9000
semillas
obtenidas de
60 frutos de
las 3 plantas
segregantes
1500000

375 plantas

1125000

7,5

200 plantas

600000

150 plantas

450000

10,
5

80 plantas

240000

12

30 plantas

90000

Mtodo de pedigr

Cruzamientos de 3 plantas de mi
var. Con genes de resistencia
DRRG con 3 plantas de la var.
Amarillo comn 20 frutos por
planta
Obtengo mi F1 a partir de mi Var.
Con genes de resistencia DRRG X
Var. Amarillo comn de las
semillas obtenidas siembro 500
plantas en el siguiente ciclo.
Estas 500 plantas son la cabeza
de
la
familia
y
por
autofecundacin obtengo mi F2,
luego procedo a obtener mi F3
De estas selecciono y resto del
total
y
mediante
aspectos
agronmicos y el criterio del
fitomejorador
en
este
caso
seleccionamos 375 plantas para
formar mi F4
De mis 375 por seleccin del
fitomejorador y menos el
siembro 200 plantas de las
cuales escojo 150 para obtener
mi F5 a partir de aqu las
condiciones sern medidas en
campo pues las anteriores son
desarrolladas bajo invernadero
De mis 150 plantas escojo 100 y
desecho 20 sembrando asi solo
80 plantas para mi F6
De estas sern escogidas 50 que
se auto fecundarn para obtener
mi F7
De las 50 plantas que escoji
deshecho 13 y de estas escojo 30
para
autofecundacin
seleccionando asi las lneas para
mi F8 en donde empezamos las
pruebas
preliminares
de
rendimiento
con
las
7

rea: dens.
Siembra 2,5
m entre
plantas e
hileras
15 m2

7,5 m2.

1250 m2

937,5 m2

500 m2

375 m2

200 m2

75 m2

13,
5

15 plantas

45000

15

10 plantas

30000

16,
5

8 plantas

24000

caractersticas ya insertadas de
resistencia a fusarium
De las 30 plantas selecciono 15
que se autofecundarn teniendo
en mi F8 15 de las cuales 10
plantas sern sembradas para mi
F9
En mi F9 selecciono 8 plantas
estas ltimas etapas de seleccin
desde F8 trata ya de ensayos y
pruebas
preliminares
de
rendimiento
Cumpliendo
todas
las
caractersticas deseadas puede
posiblemente proceder a su
comercializacin previo registro
de patente teniendo de estas
1200
semillas
que
pueden
empezarse a multiplicar con fines
comerciales.

37,5 m2

25 m2

20 m2

Definicin de variables:
Emergencia en condiciones in vitro:
Las semillas presentan valores promedios en cuanto a peso: 0.84 g/100 sem; longitud 0.41 mm;
ancho 0.35mm y espesor 1,98 mm, de forma redonda acorazonada, amarillas y con abundante
pubescencia. El tiempo de almacenamiento no afecta el inicio, ni el porcentaje de germinacin, se
consigue 93% y 95% para las semillas recin extradas. El inicio de la emergencia ocurri a los 13
das en el sustrato arena + fibra de coco; en Promix a los 19 y en el humus slido a los 21 das;
los porcentaje de emergencia fueron significativamente mayor en el humus solido (91%),seguido
de 73% en arena y fibra y coco y (55%) en Promix. La emergencia se caracteriz como epgea por
cuanto el hipoctilo se erecto por sobre el sustrato y a la plntula como criptocotilar por cuanto la
semilla y sus envolturas se levantaron al momento de la emergencia del hipoctilo.
Semillero:
El sustrato consiste en suelo franco arenoso obtenido de lotes no cultivados. El suelo es cernido
en zarandas de malla metlica y luego es colocado en varios semilleros, cuyas dimensiones son
120 cm de ancho, 120 cm de largo y 10 a 15 cm de profundidad (bajo nivel) por ser una zona
seca. Para esto se retira el suelo del semillero, es decir se construye una concavidad de 20 cm de
profundidad, la cual se llena con una capa de 10 cm de sustrato. No se incorpora materia
orgnica. El semillero se desinfecta con Terraclor 75 PM (P.C.N.B), en dosis de 5 g/1 litro de agua
con regadera, para prevenir el mal de almcigos (Rhizoctonia solani, Pythium sp, Sclerotium sp y
Sclerotinia sp) y con Furadan 10 G (carbofuran), en dosis de 10 g/1 m2, para controlar
nematodos. La semilla desinfectada se coloca al boleo en el semillero y se cubre con una capa
fina de suelo del mismo sustrato. Se aplica Captan 50 PM, en dosis de 5 g/1 litro de agua, luego
de cubrir la semilla y cuando la planta emerge del suelo.
Vigor:

Arbusto de 2 a 3 metros de altura con tallo recto, cilndrico de 5 a 12 cm de dimetro, las

ramificaciones (2 a 3) se inician a 1.2 o 1.8 m. La consistencia del tallo y ramas es
semileosa, frgil, con corazn suberificado (corchoso). La corteza es de color verde
grisceo. Sistema radicular superficial, poco profundo y muy ramificado. Con raz principal cuando
las plantas provienen de semilla, races secundaria y terciaria de color marfil y de consistencia
semileosa. El tamao del sistema radicular est en relacin con la corpulencia de la planta que
debe sostener y puede llegar hasta 40 cm de profundidad y 50 cm en sentido horizontal a partir
del tallo. Grandes, de 30 a 40 cm de largo y de 15 a 20 cm de ancho en plantas jvenes, y de 20 a
25 cm de largo y de 10 a 15 cm de ancho en plantas en produccin. Forma
acorazonada, alternas, sencillas y con el borde entero. El haz es lampio y de color verde oscuro.
El envs es de color verde ms claro y presenta pelos cortos y entrelazados. La nervadura
principal es prominente.

Rendimiento por rbol:

En cada grupo de ciclo se registrara el peso total de los frutos (sanos y enfermos) cosechados por
planta, expresado en gramos. Para la evaluacin se utiliza una balanza
tipo reloj Camry.
Color de la cscara de los frutos:
Se registr en base a la escala establecida por Biodiversity International (2013), donde los colores
posibles para esta variable fueron rojo, anaranjado y amarillo.
Slidos Solubles.
Para la determinacin de esta variable se utilizara el jugo de frutos de tomate de
rbol en madurez de consumo. Con el uso de un refractmetro manual DY - T20 se registra
los grados Brix presentes en un fruto/planta en todos los grupos. Esta evaluacin se realiza una
sola vez con frutos de las primeras cosechas.
Porcentaje de frutos infectados con Fusarium.
Se contabiliza el nmero de frutos que presentaron sntomas, as como el nmero de frutos
sanos y se calcula el porcentaje de incidencia de la enfermedad. El conteo de frutos se realizara
cada 15 das durante tres meses.
Severidad de Fusarium.
Se evala como porcentaje de tejido afectado por el patgeno calificando visualmente el rea
afectada que presentaron los frutos de cada una de las plantas, considerando a un fruto sano
como 0%y a uno sintomtico como 100% (Moral et al2008). Esta variable se registrara en diez
frutos enfermos (cosechados o cados) por planta.
Cronograma:

Fuente: elaboracin del autor

Presupuesto:
Al primer ao, paulatinamente el costo del OGM no es agregado.
Precio
Concepto
Unidad
Cantidad unitario
Total
Obtencin del OGM
1
1
60000
60000
1,- Preparacin de
suelo
Limpieza
Hora
90
1,25
112,5
Hoyado
Hora
180
1,25
225
Desinfeccin de suelo GENERAL
1
15
15
Alquiler del terreno
1300 m2
ao
1
2000
40000
2,- Siembra
hora
100
1,3
130
Plantas
4
0,55
2,2
Transporte de plantas y materiales de campo
80
3,- Fertilizacin
F. de desarrollo
qq
1
40
40
F. de floracin
qq
2
42
84
F. de fructificacin
qq
3
25
75
2
Mano de obra
hora
180
360
4,- Labores culturales
hora
Poda de direccin
(2/ao)
80
1,25
100
hora
Corona
(4/ao)
224
1,25
280
5,- Controles
10

fitosanitarios
Fumigacin de
(2/ao)gene
prevencin
ral
Mano de obra
jornal
Bombas de fumigar
pruebas de laboratorio AFLP`s
Extraccin ADN (Mtodo C-TAB)
Cuantificacin ADN (Florescencia)
Micro propagacin in
vitro
Prueba de
patogenicidad
CORRIDA AFLP (LI-COR 4300S)
Depreciacin de los
equipos
Global
Total / ao
Fuente: elaboracin del autor

3
3
2

50
25
50
21

150
75
100
72,84
4011
25

0,6

100

100

600
31

221,25

221,25
46889,79

Impacto social econmico y ambiental:

La importancia social y econmica que tiene el tomate de rbol, por cobertura nacional, el cambio
tecnolgico en la obtencin de esta variedad mejorada genticamente y por hibridacin se
reflejara en altas tasas internas de retorno a la inversin teniendo como principales pases de
destino de exportacin Estados Unidos, Chile, y Espaa compitiendo con China y Mxico, el 58%
del acaparamiento de la exportacin es Estados Unidos donde nuestro producto tiene alta
aceptacin, esta fruta tambin se exporta a otros destinos como Francia, Rusia, Alemania, Suecia,
pero en cantidades menores y en los dos ltimos aos las exportaciones a estos pases han sido
pocos significativas. Por otro lado hay que entender que desde el punto de vista competitivo la
explotacin racional del tomate de rbol es posible debido a las condiciones que tiene el pas,
donde las zonas productoras tienen las condiciones agroclimticas ideales para el desarrollo del
cultivo al tratarse de que es uno de los pases del posible origen del tomate de rbol. No obstante
lo anterior la especie tiene muchos problemas relacionados con el manejo, ataque de
enfermedades, plagas, inadecuada nutricin e insuficiente manejo pos cosecha, al mejorar
algunos aspectos la produccin no se vera limitada por el ataque especifico del patgeno
Fusarium, atribuyndose los problemas a aquellos factores abiticos como el viento, la salinidad,
encharcamientos, etc. y biticos como plagas y enfermedades no relacionadas a la anterior
nombrada. La residualidad de productos qumicos seria reducida lo que le permitira un manejo
legal para exportacin ms ventajoso en comparacin a otros pases, la perspectiva de desarrollo
y exportacin masiva depende de la organizacin de productores, de una adecuada investigacin
de los problemas agronmicos para un manejo racional del cultivo, y polticas favorables respecto
a mecanismos de comercializacin externa.
El cultivo es altamente productivo, lo ms importante es que ha dado sustento y desarrollo
econmico a pequeos agricultores, quienes en poco espacio de terreno 0.5 - 1 ha, han recibido
buenos ingresos lo cual ha permitido un mejoramiento en su condicin de vida.
Hay mucho inters por el tomate de rbol en mercados europeos y Estados Unidos de Amrica,
pero las limitaciones en determinadas instancias son los volmenes requeridos, la residualidad por
pesticidas y los controles legales sanitarios para exportacin; pero la ventaja comparativa respecto
a otros pases radica en que las condiciones para el desarrollo del cultivo son naturales por su
origen, por tanto en tomate de rbol mejorado tiene una perspectiva de desarrollo y exportacin
masiva depende de la organizacin de productores, de una adecuada investigacin de los
11

problemas agronmicos para un manejo racional del cultivo, y polticas favorables respecto a
mecanismos de comercializacin externa. El cultivo es ms productivo durante los 3 primeros
aos, alcanza rendimientos entre 40.000-50.000 kg/ha/ao, el precio al interior del pas vara entre
U.S.$ 0.2-0.7/kg, pero a nivel externo dicho precio se incrementa en vanas veces, esperando con
el desarrollo de este mejoramiento en la planta obtener potenciales socioeconmicos altamente
rentables con un impacto ambiental mnimo en residualidad de qumicos. Este proceso de
produccin debe ser controlado por polticas llamadas mecanismos de seguridad que no existen
en el pas, se estima se desarrollen conforme la tecnologa avance.
Bibliografa

Transformacin gentica de tomate de rbol (Solanum betaceum) mediada por

Agrobaterium
tumefaciens.
Disponible
URL
en:
http://repositorio.usfq.edu.ec/handle/23000/793. (Consultado el 11/06/2016)
Generacin
de
Marcadores
Moleculares
en
tomate
de
rbol
(Solanum
beiaceum
Cav.
sin
Cypliomandra
betacea
Sendt.)
para
estudios de diversidad gentica de germoplasma ecuatoriano. Disponible URL en:
https://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/17205/1/D-90876.pdf. (Consultado
el 11/06/2016)
Mtodos de transformacin en plantas mediado por Agrobacterium tumefaciens y
bombardeo
de
partculas
biolstica.
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en:
http://www.univallecaicedonia.edu.co/web/investigacion/TransformacionYMejoramientoGen
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solani.
Dispnible
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https://www.google.com.ec/search?q=Elaboraci
%C3%B3n+de+una+planta+transg%C3%A9nica%3A+T
%C3%A9cnica+de+Biobal
%C3%ADstica&rlz=1C1RLNS_esEC692EC692&oq=Elaboraci
%C3%B3n+de+una+planta+transg%C3%A9nica%3A+T
%C3%A9cnica+de+Biobal
%C3%ADstica&aqs=chrome..69i57.807j0j4&sourceid=chrome&ie=UTF#q=el+c
uaderno+de+porque+biotecnologico++Elaboraci
%C3%B3n+de+una+planta+transg%C3%A9nica:+T%C3%A9cnica+de+Biobal
%C3%ADstica. (consultado el 12/06/2016)

12

13

Anexos
CAUSA

1. Uso indiscriminado e
inadecuado
de
fungicidas: una mala
rotacin
o
una
dosificacin
que
permanezca
durante
mucho tiempo, puede
generar
mutantes
resistentes
del
patgeno haciendo de
este poco o totalmente
inefectivo.
2. No existe monitoreo
constante
en
la
plantacin: este caso es
determinante ya que se
puede hacer un plan de
control del patgeno
para las plantas del
cultivo aledaas a las
infectadas
3. Estudio de suelo escaso
o inexistente: el suelo
puede tener el inoculo o
agregados
que
se
suministren durante los
cultivos anteriores al
cultivo de tomate de
rbol.

EFECTO

1. Resistencia
del
patgeno a fungicidas,
limitacin en la eficacia
y reduccin de la vida
til
del
producto,
destruccin de la fauna
del suelo.
2. No se detecta los focos
de
infeccin
del
patgeno, lo que le
permite
desarrollarse
con gran facilidad y
propagarse.
3. No se puede hacer un
plan de fertilizacin o
historial del suelo con
posible infeccin del
patgeno.
4. Inconscientemente
se
crea
microclimas
favorables que permiten
el
desarrollo
o
la
supervivencia
del
patgeno
5. Una
mala
nutricin
vegetal es determinante
para
diferentes
elementos
que
conforman la defensa
natural de la planta y su

Alta incidencia de Mancha

negra del tronco (Fusarium
solani) en Tomate de rbol
(Solanum betaceum C.)

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PRDIDAS, UBICACIN, FRECUENCIAS E INCIDENCIAS DE LOS PROBLEMAS DE ESTUDIO http://www.dicyt.com/noticias/presentan-unportainjertos-de-tomate-de-arbol-resistente-a-nematodos-y-fusarium

Problema

Prdida
Kg/ha o % de rendimiento

Ubicacin
(Imbabura y Pichincha)

Frecuencia de aparicin

% agricultores
afectados

Fusarium solani

100 % en el rendimiento
En el ao 2002, el rea
cultivada lleg a 4062
ha, con un rendimiento
promedio de 5,4 t/ha
En Azuay y Tungurahua
se han registrado lotes
aniquilados por el ataque
de Fusarium solani

Las siembras se
localizan principalmente
en las provincias de
Tungurahua, Imbabura,
Azuay, Pichincha,
Carchi, Bolvar, Cotopaxi
y Loja, entre altitudes
que van desde los 1800
hasta los 3200 metros.

Se presenta en zonas
hmedas y en pocas
con altas precipitaciones
con temperaturas de 11
a 15 C

100%

EVALUACIN DE POSIBLE SOLUCIONES

Posible
solucin
Obtener una
variedad de
tomate de
rbol resistente
a Fusarium
solani
mediante
balstica de un
gen de inters
tomada de
arveja

Probabilidad
Compatibilid
de que la
Rentabilidad
ad con el
tecnologa
sistema
funcione

Media

Intermedia

Alta ( Para
agricultores
y
comercializa
cin)

Contribuci
n a reducir
riesgos

Apoyo
institucional

Alta

Insumos y
financiamient
o

15

Factibilidad Factibilidad
de la
de realzar
prueba por experimento
agricultores
s

Alta

Alta

Decisin
Final

Experim.
Posible

FORMULACIN DEL PROBLEMA

Forma interrogativa

Cmo diseo un esquema de mejoramiento gentico en tomate de rbol (Solanum betaceum Cav.) a partir de genes de resistencia en arveja que
ayuden a reducir la incidencia de Fusarium solani mediados por el mtodo de transformacin por bombardeo con partculas?

Forma declarativa

Disear un esquema de mejoramiento gentico para tomate de rbol (Solanum betaceum Cav.) resistente a Fusarium solani a partir de un gen de
resistencia presente en arveja mediados por el mtodo de transformacin por bombardeo con partculas

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