Universidad de Santiago de Chile

Fisiologa Vegetal
Ingeniera en Biotecnologa

EFECTO DE DIFERENTES FITOHORMONAS EN

SEMILLAS Y PLANTAS.

Camila Baeza
Ximena Corts

Profesores:
Dr. Rodrigo A. Contreras
Dr. Hans khler
Ayudante:
Javiera Avils
Fecha: 11/11/2016

Introduccin
En vegetales podemos encontrar una gran diversidad de hormonas (fitohormonas) responsables de
procesos como la germinacin, el crecimiento, la floracin, entre otras. Se conocen cinco tipos principales
de fitohormonas: auxina, citocinina, etileno, cido abscsico y giberelina. (1)
Para estudiar el efecto de dichas fitohormonas, se realiz una serie de experimentos. Primero se evalu el
efecto del cido abscsico (ABA) en el proceso de germinacin. Tambin se compar la actividad amilasa de semillas, observando la participacin de giberelinas (GA) en la salida de la dormancia.
Adems, se evalu el efecto de auxinas (especficamente cido indolactico o IAA) y citocininas
(especficamente kinetina o K) en coleptilos de Triticum (trigo) e hipoctilos de brotes de Vigna radiata
(diente de dragn). Finalmente, se evalu el efecto del etileno en la abscisin foliar en plntulas de
Cestrum Parqui.
Para una mejor comprensin, es necesario conocer las funciones principales de las fitohormonas vistas en
esta experiencia:
Auxina, estimula el alargamiento celular; interviene en: fototropismo, geotropismo, dominancia apical y
diferenciacin celular.(2)
Citocinina, estimula la divisin y diferenciacin celular; revierte la dominancia apical; interviene en el
crecimiento del vstago y en el desarrollo del fruto. (2) (3)
Etileno, estimula el crecimiento lateral de las clulas, la maduracin del fruto, la senescencia de las hojas
y las flores y la abscisin foliar. Inhibe la salida de dormancia. (2) (3)
cido abscsico, estimula el cierre de los estomas; puede ser necesario para la abscisin y dormicin en
ciertas especies. Inhibe el crecimiento de las plntulas y la germinacin de semillas. (2) (3)
Giberelina, estimula el alargamiento del vstago, el crecimiento desmedido y la floracin en plantas
bienales; regula la produccin de enzimas hidrolticas en los granos. Interrumpe la dormicin. (2) (3)
Las frutas sufren una fase nica en el ciclo de vida de las plantas superiores, que abarca varias etapas
progresivas para su desarrollo, su maduracin y senescencia final, en la cual, dependiendo del incremento
masivo en la respiracin o la produccin de etileno, son clasificadas como climatricas y no climatricas.
(4)

Las fitohormonas son vitales para varios procesos en vegetales, sin embargo el exceso de estas
fitohormonas

pueden

afectar

el

correcto

desarrollo

de

semillas

plantas.

Objetivos
Objetivo general:

Evaluar el efecto de diferentes fitohormonas en semillas y plantas.

Objetivos especficos:

Comparar el efecto de cido abscsico sobre la germinacin en semillas de trigo cuando se est en

ausencia y presencia de esta fitohormona.

Evaluar el efecto de las giberelinas en la salida de la dormancia por la accin de la enzima -amilasa

contenida en el embrin de una semilla de trigo.

Observar el efecto del etileno en la abscisin foliar sobre plntulas de Cestrum Parqui.
Evaluar el efecto de cido indolactico y kinetina en el crecimiento de coleptilos e hipoctilos.

Materiales y mtodos

Participacin de ABA en la germinacin

Se sembraron 5 semillas de Triticum aestivum en una placa de agar considerada como control y 5 semillas
de la misma especie sometidas en una solucin de ABA 5 mg/mL en otra placa. Las semillas fueron
previamente desinfectadas y activadas en agua destilada. Se tom registro del porcentaje de germinacin
luego de una semana.
Participacin de giberelinas en la salida de dormancia
Se sembraron 5 semillas de Triticum aestivum previamente esterilizadas y activadas en agua, en una placa
de agar con almidn al 1% de forma vertical, y se incubaron durante 72 horas. Al trmino de esta
incubacin, las placas se revelaron con lugol y se midi el halo de actividad de la

-amilasa en torno

a la semilla.
Participacin de etileno en la abscisin foliar
Se trabaj con 2 plantas de Cestrum parqui las cuales fueron removidas del medio de cultivo, y se
contuvieron en algodones hmedos amarrados en las races para mantener las plantas hidratadas. A una de
ellas, se le agreg trozos de cscara de Musa paradisiaca (pltano) dentro del frasco de vidrio que la
contena, mientras que a la otra planta se le agreg trozos de Fragaria ananassa (frutilla).

Ambas fueron selladas y analizadas despus de una semana.

Participacin de auxinas y citoquininas en el crecimiento de coleoptilos e hipocotilos

Se cortaron 15 coleoptilos de 0,5 cm cada uno, a partir de Triticum aestivum (trigo) y tambin se cortaron
15 hipocotilos de 1 cm cada uno, a partir de brotes de Vigna radiata (diente de dragn). Se colocaron 3
grupos de 5 coleoptilos e hipocotilos en tres placas distintas. A una de las placas se le agreg 10 mL de
agua destilada (placa control), a otra se le agreg 10 ml de agua destilada + 100 l de una solucin de 0,1
mg/mL de IAA (efecto de auxinas) y a la placa restante se le agreg 10 ml de agua destilada + 100 l de
una solucin de 0,1 mg/mL de K (efecto de citocininas). Todas las placas fueron analizadas despus de
una semana.
Anlisis de datos
Los datos obtenidos en el crecimiento de coleptilos e hipoctilos en diferentes medios, fueron analizados
mediante el programa GraphPad Prism 6.

Para el anlisis de los datos se utiliz una prueba de

comparacin mltiple de t student con un intervalo de confianza del 95% (p valor < 0,05).

Resultados
Participacin de ABA en la germinacin

Figura 1. Semillas de Triticum aestivum A) en ausencia y B) en presencia de cido abscsico.

Las semillas de Triticum aestivum activadas en solucin con ABA, perdieron su forma pues estaban
hinchadas, el tejido se encontraba desintegrado y con tonalidad amarillenta. No se observ crecimiento en
ninguna de estas semillas. Por otro lado, cuatro de las cinco semillas que se encontraban en la placa
control germinaron, correspondiendo a un 80%, y presentaron crecimiento radicular y foliar. En aquella
semilla no germinada, no se observa ningn tipo de desarrollo.
Participacin de giberelinas en la salida de dormancia

Figura 2. Halos de actividad de la enzima

Se observan halos de actividad de la enzima

- amilasa. Placa revelada con lugol.

- amilasa en las placas, los cuales medan en promedio

1,9 cm con una desviacin estndar de 0,51. Adems, en aquellas semillas que tenan halo a su alrededor,
se observ crecimiento radicular y foliar.

Participacin de etileno en la abscisin foliar

Medio

Cantidad
de hojas
iniciales

Cantidad de
hojas finales

Cantidad
de hojas
cadas

Pltano

16

11

Frutilla

13

13

Tabla 1 y Figura 3. Estado inicial, cantidad de hojas

cadas y estado final (figura) del desarrollo de Cestrum parqui L. en medios con frutilla (ausencia de
etileno) y pltano (presencia de etileno).
Para el desarrollo de Cestrum parqui L. en el medio con pltano, luego de tres das, se observa que las
hojas de la parte baja del tallo se tornaron de color amarillo. Al cabo de una semana hubo abscisin de la
mayora de las hojas, lo que corresponde a un 68,75% de abscisin, y aquellas que permanecan unidas al
tallo presentaban tonos caf y amarillo. Para el desarrollo de Cestrum parqui L. en el medio con frutilla,
no se observa cambios en la tonalidad de las hojas, pero algunas se encontraban marchitas. No se observa
abscisin de hojas.
Participacin de auxinas y citoquininas en el crecimiento de coleoptilos e hipocotilos

Figura 4. Registro fotogrfico de coleptilos (ubicados en la parte superior) e hipoctilos (ubicados en la

parte inferior) en distintos medios: a IAA; b K; c Control.

Figura 5. Grfico de crecimiento radial (A) y axial (B) de coleptilos e hipoctilos en un medio sin
presencia de hormonas (control), en presencia de cido indolactico (IAA) y de citoquininas (K). Datos
graficados y analizados en GraphPad Prism 6.
Para el anlisis de los datos se utiliz una prueba de comparacin mltiple de t student con un intervalo de
confianza del 95% (p valor < 0,05), obtenindose el efecto de las diferentes hormonas sobre los dos tipos
de crecimiento de las plntulas, valores tabulados a continuacin:
Tabla 2. P-valores de interacciones entre fitohormonas sobre el crecimiento axial y radial de coleptilos e
hipoctilos.
Hipoctilo
Crecimiento

Radial

Axial

Coleptilo

Relacin

P valor

Interaccin
Significativa

P valor

Interaccin
Significativa

Control vs.
IAA

0,0045

SI

Control vs.
K

0,0008

SI

IAA vs. K

0,0427

SI

Control vs.
IAA

0,0917

NO

0,0249

SI

Control vs.
K

0,0377*

SI

0,0305

SI

IAA vs. K

0,4226

NO

0,7177

NO

Discusin
En la Figura 1, se observa que slo hubo germinacin en la placa que no contena ABA, este resultado fue
el esperado, ya que en la introduccin se seal que ABA era responsable de la inhibicin de la
germinacin en semillas. El mecanismo de accin de ABA es inhibir la sntesis de enzimas dependientes
de GA al bloquear la transcripcin de los RNAm de -amilasa, prevaleciendo as la dormancia. Adems,
ABA induce los genes para la sntesis de VP1, protena que reprime la transcripcin de genes regulados
por GA. Tambin reprime a GA-MYB, que es un factor de transcripcin inducido por GA, actuando como
intermediario en la estimulacin de GA para la sntesis de -amilasa. (5)
Se pueden observar en la Figura 2 halos de inhibicin alrededor de la semilla, esto ocurre debido a que
durante las primeras etapas de germinacin, despus de la absorcin de agua, el embrin produce GAs
que se difunde por el endosperma amilceo hacia la capa de aleurona. Las GAs hacen que las clulas de la
aleurona sinteticen enzimas hidrolticas como las -amilasa, que produce la hidrlisis del almidn a
molculas mas pequeas como la glucosa.(2) La semilla fue incubada en agar, el cual contena almidn,
por lo tanto las enzimas liberadas por la aleurona hidrolizaron este almidn, y as al momento de revelar
con lugol, solo se ti la parte del agar que an contena almidn, ya que el lugol no reacciona con
azcares

simples

como

la

glucosa.(2)(6)

Los datos de la Tabla 1 muestran que solo hubo abscisin y senescencia foliar en la planta tratada con
cscara de pltano, esto se debe a la presencia de etileno en el frasco. El etileno es producido en la
mayora de los tejidos de plantas, existiendo dos sistemas distintivos de biosntesis, basados en la
naturaleza y cantidad del etileno producido durante el crecimiento y desarrollo de la planta y la fruta. En
el sistema 1 se produce etileno a niveles basales en frutos no climatricos como la frutilla, ya que la
maduracin es independiente del etileno; mientras que en el sistema 2 hay una produccin de etileno a
niveles mucho mayores durante la maduracin del fruto climatrico como lo es el pltano, ya que la
maduracin es dependiente del etileno. (4) Cuando comienza la senescencia foliar, el etileno acta
promoviendo la sntesis y liberacin de celulasa, enzima que desintegra las paredes de las clulas
vegetales, generando que el pecolo se desprenda del tallo, provocando la abscisin de la hoja.

(2)

De acuerdo a los datos indicados en la tabla 2 y graficados en la figura 5, se puede afirmar que existe un
efecto significativo del IAA y las K sobre el crecimiento axial tanto de los coleptilos como de los
hipoctilos, en comparacin al control, debido a que este ltimo contena muestras de largos ms grandes
que aquellas sometidas a la accin de las hormonas. Esta respuesta no es la esperada ya que el IAA y la K,
actan induciendo elongacin y citocinesis o divisin de las clulas, respectivamente, generando as
crecimiento del tallo en cuanto al largo. Esta inhibicin del crecimiento puede deberse a la presencia de
altas concentraciones de la hormona, en el caso de IAA, correspondiente a
de accin para ella est en el rango de

105 -

101 M, cuando el ptimo

106 M. Otro factor que pudo haber causado la

inhibicin del crecimiento, es la biosntesis de etileno inducida por IAA, ya que esta hormona gaseosa
inhibe el alargamiento del tallo en muchas especies. Por otro lado, se ha demostrado que no ocurre
divisin celular inducida por K sin IAA en el medio, por ello, no se espera crecimiento de coleptilos ni
hipoctilos en solucin con dicha hormona. (5) Para el caso del crecimiento radial de coleptilos no se
observ la variacin de grosor de las muestras, para los tres medios utilizados, por ende no se puede
determinar el efecto de las hormonas sobre este tejido vegetal. Una posible explicacin general para los
resultados obtenidos en esta parte de la experimentacin, podra ser la mala ejecucin del experimento,
referido al corte de coleptilos e hipoctilos, sumado a errores en las mediciones finales de estos trozos
de tallo. Por el contrario, para el crecimiento radial de hipoctilos inducido por IAA y K, se observan
diferencias significativas respecto del control, y entre las dos hormonas, teniendo un mayor efecto sobre
el ensanchamiento la K seguido del IAA. Lo anterior concuerda con la teora, que dice que a altas
concentraciones de IAA se induce mayor produccin de etileno, en este caso a nivel de las clulas del
hipoctilo, que promueve el crecimiento radial o engrosamiento del tallo. (7) Adems, en condiciones de
estrs sumado a que las muestras se incubaron en ausencia de luz, la produccin de esta hormona gaseosa
se increment, y en sinergia con las K se gener un aumento en el nmero de clulas del tallo, lo que se
traduce en engrosamiento de este.(8)
Con lo dicho anteriormente, podemos afirmar que las fitohormonas son vitales para varios procesos en
vegetales (como por ejemplo la presencia de GA para la salida de dormancia de la semilla), sin embargo
el exceso de fitohormonas pueden afectar el correcto desarrollo de semillas y plantas (como por ejemplo
el exceso de etileno, el cual provoca la abscisin y senescencia foliar).

Conclusin
-

Se logr determinar el efecto inhibitorio del cido abscsico sobre la germinacin de semillas de trigo,

mientras que en ausencia de esta fitohormona, la tasa de germinacin alcanz el 80%.

Se confirm el efecto inductor de las giberelinas en la salida de la dormancia de semillas de trigo, al

visualizar la actividad de la enzima -amilasa que alcanz halos de 1,9 cm en promedio.

Se observ el efecto del etileno en la senescencia foliar en plntulas de Cestrum parqui L, alcanzando un

68,75% de abscisin de sus hojas en 7 das.

Las auxinas y las citoquininas estn implicadas en procesos de divisin y elongacin celular. En este caso
no se pudo apreciar el efecto esperado de estas hormonas sobre el crecimiento radial y axial de coleptilos
e hipoctilos, debido a errores en la ejecucin del experimento y en la medicin final.

Referencias

1. Bocardo, Florez, Garca. 2004. Biologa 2. 1 Edicin. Editorial Umbral. (Guadalajara). Pp: 63.
2. Curtis, Barnes, Flores, Schnek. 2006. Invitacin a la Biologa. 6 Edicin. Editorial Mdica
Panamericana. (Madrid). Pp:599-607.
3. Contreras. Gua de trabajos prcticos 1-2016. Fisiologa Vegetal. Ingeniera en Biotecnologa. pp: 19-21.
4. Corpas E, Tapasco O. (2014). Hallazgos de la biosntesis del etilenos en frutas climatricas y de los
factores que afectan la ruta metablica. Alimentos Hoy Vol. 22, No 31: 47-49.
5. Taiz, Zeiger. 2006. Plant physiology, 3 Edicin. Sinauer Associates Inc. Publishers.(Sunderland). Pp:
502-509; 449-453; 545-547.
6. Sandoval. 2005. Tcnicas aplicadas al estudio de la anatoma vegetal. 1 Edicin. Editorial. (Mxico DF).
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7. Raven. 1992. Biologa de las plantas. 1 Edicin. Volumen 2. Editorial Revert. (Barcelona, Espaa). Pp:
486-487.
8. Alda. 2011. Regulacin de la fisiologa vegetal. (Zaragoza). Pp: 2-3