UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

FACULTAD DE AGRONOMA
LABORATORIOS

MICROBIOLOGA

PRACTICA

PRUEBA PARA LA CARACTERIZACIN de RHIZOBIUM

Profesor

Jairo Cuervo Andrade

Objetivo
Determinar por medio de pruebas bioqumicas algunas de las caractersticas de diferentes
cepas de Rhizobium.
Velocidad de crecimiento
Sembrar de igual manera sobre medio ELMARC como se hizo en la prctica anterior.
Incubar y observar los cultivos cada dos das durante 10 das. Anotar el tiempo en el que
se presenta un crecimiento franco; se consideran de crecimiento rpido, aquellas rizobias
que crecen entre 3 y 4 das, y de crecimiento lento las que crecen a los 7 a 10 das o ms.
3-4 das: crecimiento rpido Rh. phaseoli
Rh. leguminosarum
Rh. trifoli.
Rh. meliloti.
Rh. caupi (algunas)
7-10 das: crecimiento lento Rh. japonicum
Rh. caupi (algunas)
Produccin de cido o alcal
Para observar esta caracterstica se emplea el medio de Extracto de Levadura Manitol
Agar Bromotimol (ELMAB). Se siembra Rhizobium en el centro de la caja en forma
superficial una sola lnea o estriada en S; incubar 4 a 4 7 a 10 das y observar el
crecimiento y cambio en el medio. Se hacen tres observaciones en esta prueba: sin
cambio (indica neutralidad), azul (indica alcalinidad), amarillo (indica acidez). Los
resultados de esta prctica nos permiten agrupar a la rizobia como productora de alcal o
productora de cido o neutros.
Prueba de la leche tornasolada
Se siembran con ayuda de una asada, cepas de Rhizobium a evaluar, en tubos de ensayo
que contienen la leche tornasolada. Se incuba a 28C y se hacen observaciones
peridicas (2, 6 y 10 das). En este medio Rhizobium tiene poca actividad y los resultados
que se esperan sern:
a. sin cambios en el medio
b. ligeros cambios en el color del medio.
c. Ligero cambio en el color del medio con formacin de zona de suero.
d. Cambios muy violentos como cambio total de color, formacin de cogulos y
disolucin de los mismos nos indican que no son bacterias del gnero Rhizobium.
Crecimiento Glucosa Peptona Agar

En este medio Rhizobium se desarrolla mal y cuando se desarrolla produce ligeros

cambios en este medio; crecimientos muy rpidos y cambios fuertes en el color indican
contaminacin.
Crecimiento en diferentes concentraciones de NaCl
Se incubar una asada de las diferentes cepas en tubos de ensayo que contengan caldo
Extracto de Levadura Manitol a diferentes niveles de NaCl: 1.25%, 2.5% y 5%. El
crecimiento en este medio permitir conocer la habilidad de ciertas rizobias a sobrevivir a
diferentes concentraciones de sal.
Biofertilizantes
Se toma medio lquido de ELMAR (sin agar) y se le adiciona a la caja petri con rhizobium,
con un asa se desprende la bacteria y se aade la suspensin al frasco con medio
ELMAR. Dejar en agitacin y temperatura de 28C en un sheaker, por espacio de tres
das.
ELABORACIN DE MEDIOS
Azul de Bromotimol
Azul de Bromotimol
Etanol
Agua destilada

0.5 g
50 ml
50 ml

Adicionar 5 ml/lt de ELMA

Leche tornasolada
Racto Litmus Milk
Agua destilada
pH

100 g
1000 ml
7

CELM- ELMAR
K2HPO4
MgSO4.7H2O
NaCl
Manitol
Extracto levadura
Agua destilada
pH

0.5 g
0.2 g
0.1 g
10 g
0.5 g
1000 ml
7

Leche tornasolada, si se precipita el medio, no es rhizobium