Universidad Nacional Autnoma de

Mxico
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Prctica 5 Extraccin y anlisis de lpidos en la
yema de huevo

Equipo 10
Grupo 2401
Laboratorio de Bioqumica Celular y de los
Tejidos I
Fecha de entrega: 28/Marzo/2016

Objetivos

Analizar las propiedades de los lpidos.

Extraer los lpidos de la yema de huevo.
Cuantificar fosfatos de lpidos fosforilados y no fosforilados.

Analizar la importancia biolgica de los lpidos presentes en la yema de huevo.

Resultados
Tabla 1. Datos curva estndar
# de Tubo

Blanco

Solucin problema de lpidos

(mL)
Solucin patrn de fosfatos (mL)
H2O destilada
Reactivo 1
Reactivo 2
Concentracin fsforo (mg)
Absorbancia a 640 nm

Lpidos

Acido (Fosforilados)
Bsico
(Fosforilados)
Acido (No
Fosforilados)
Bsico (No
Fosforilados)

Concentracin
(g)

L.F
acido
1

N.F
bsico
1

N.F
acido
1

L.F
basico
1

0.2

0.6

1.0

2.0

3.0

10
0.4
0.2
0.00

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

10
0.4
0.2

Absorbancia a
615nm

0
2
6
10
20
30
14,10526316

0
0,033
0,048
0,115
0,189
0,292
0,139

14,10526316

0,139

6,842105263

0,07

7,894736842

0,08

Curva Estandar Fosforo

0.35
0.3
f(x) = 0.01x + 0
R = 0.99

0.25

Absorbancia a 615nm
Linear (Absorbancia a
615nm)

0.2
Absorbancia

0.15

Linear (Absorbancia a
615nm)

0.14

0.1

Muestra problema

0.08
0.07

0.05
0
0

10

15

20

25

30

35

Concentracin (g)

Calculo para la concentracin de fosforo en lpidos fosforilados y no

fosforilados.
x= Concentracin de fosforo

x=

yb
m

Concentracin de
Lpidos
fosforo (g)
Acido (Fosforilados)
14,10526316
Bsico
(Fosforilados)
14,10526316
Acido (No
Fosforilados)
6,842105263
Bsico (No
Fosforilados)
7,894736842
Lpidos fosforilados en medio acido

0.1390.005
=14,10526316
0.0095

Absorbancia a
615nm
0,139
0,139
0,07
0,08

Lpidos fosforilados en medio bsico

0.1390.005
=14,10526316
0.0095
Lpidos no fosforilados en medio acido

0.070.005
=6,842105263
0.0095
Lpidos no fosforilados en medio bsico

0.080.005
=7,894736842
0.0095
Factor de correccin para la concentracin de lpidos en la yema de huevo
Lpidos fosforilados en medio acido

14,10526316 g
=0,282105263 g
50 ml
ml
Lpidos fosforilados en medio bsico

14,10526316 g
=0,282105263 g
50 ml
ml

Lpidos no fosforilados en medio acido

6,842105263 g
=0,136842105 g
50 ml
ml
Lpidos no fosforilados en medio bsico

7,894736842 g
=0,157894737 g
50 ml
ml
Porcentaje de fosfato en el fosfatomonopotsico

0.4394 g

( 10001 gmg )=439.4 mg

439.4 mg
=0.4394 mg
1000 ml
ml
Multiplicado por el factor de dilucin

0.4394 mg1
ml

10

=0.04394 mg
ml

Si el la masa de fosfatomonopotsico es de 136g y esto corresponde al 100%

entonces los 31g que pertenecientes al fosforo dentro de esta molcula
equivalen a:

136 g KH 2 P 04100

31 gP22.79
Si 0.04394mg/ml equivalen al 100% el 22.79% es:

0.04394 mg KH 2 PO 4100
ml

0.01 mg P22.79
ml

Multiplicando el valor obtenido por el volumen de las alcuotas se obtiene.

Volumen de
alcuota (ml)

0.2

Producto entre el
volumen y el
factor de
correccin.

0.2 ml0.01 mg

Concentracin de
fosforo (mg)

Concentracin
de fosforo en
g

0.002

0.006

0.01

10

0.02

20

0.03

30

ml

0.6

0.60.01 mg
ml

10.01 mg
ml

20.01 mg
ml

30.01 mg
ml

Concentracin de

Absorbancia a

lpidos del patrn

(g)
615nm
x
0
2
6
10
20
30

y
0
0,033
0,048
0,115
0,189
0,292

y=mx +b

m=

b=

n xyxy
2
2
n x ( x )

y x 2xxy
n x 2 ( x )2

x=68

y=0,677
x 2=1440
xy= 14.044

x promedio=11,33333333
y promedio=0,112833333

m=

b=

6 ( 14.044 )0.67768
=9.518924303 x 1 03
2
6144068

0,67714406814.044
=4.952191235 x 1 03
2
61440(68)

Absorbancia (y)

y-y promedio
0
0,033
0,048
0,115

-0,112833333
-0,079833333
-0,064833333
0,002166667

( y ypromedio)

0,012731361
0,006373361
0,004203361
4,69444E-06

0,189
0,292

0,076166667
0,179166667

( y ypromedio)2= 0,06121483
y promedio=0,112833333

( y ypromedio)2
S=
n1

S=

0,06121483
=0.1106479402
61

CV =

S
0.1106479402
=
=0.9806316707
ypromedio 0,112833333

Calculo coeficiente de correlacin

r=

xy
xy

xy=

x=

y=

xi yi
xpromedioypromedio
n
x i 2
( xpromedio)2
n
yi 2
( ypromedio)2
n

x promedio=11,33333333

y promedio=0,112833333
x 2=1440
xy= 14.044

y 2=0.137603

0,005801361
0,032100694

xy=

y=

x=

r=

14.044
11,333333330,112833333=1.061888893
6

0.137603
(0,112833333)2 =0.1010072883
6
1440
2
( 11,33333333 ) =10.56198635
6

1.061888893
=0.9953613302
0.101007288310.56198635

r 2=0.9907441776

Anlisis de Resultados
La presente curva estndar se realiz con seis valores de absorbancia y concentracin
respectivamente, de los puntos generados por estos valores, solo dos puntos concuerdan con
la lnea de tendencia, a pesar de esto los dems puntos estn muy prximos a la lnea de
tendencia, por lo cual se pretende dar por buena esta curva, ya que lo observado es
2
respaldado por los clculos estadsticos, pues se obtiene un valor de r muy prximo a
uno, este fue de 0.9907 lo cual es un valor bastante aceptable, adems que los valores de
concentracin de la muestra problema caen dentro de la curva estndar.
Se obtuvieron cuatro valores, dos para los fosforilados uno en medio bsico y otro medio
acido, as como de los no fosforilados de los cuales al igual que en los fosforilados se tenan
bsicos y cidos. Para el caso de los fosforilados tanto acido como bsicos se obtuvo un
mismo valor de absorbancia (0.139), lo cual no indica que no necesariamente se debe tener
un determinado pH para realizar la lectura pues al parecer este no afecta en nada. Para el
caso de los no fosforilados lo ideal sera tener una absorbancia igual a cero pues no se
esperaba hallar lpidos fosforilados, debido a que durante la separacin de fosforilados y no
fosforilados, algunos lpidos fosforilados pudieron colarse con los no fosforilados,
apareciendo as como impurezas y por lo tanto hacindose presentes en la curva estndar. A
pesar de esto la concentracin de estos fue menor a la de los fosforilados. Tal vez se debi
esperar un poco ms durante el bao de hielo, para dar oportunidad a que la mayor cantidad
de lpidos fosforilados precipitaran y estos no se fueran junto con los no fosforilados al
decantar.

Conclusiones
Gracias a la oxidacin de la materia orgnica, seguida de la formacin del complejo
fosfomolibdato, se pudo cuantificar la cantidad de lpidos fosforilados y no fosforilados
contenidos en la yema de huevo, pues el color del complejo nos permiti medir la

absorbancia en cada muestra. Al extrapolar los datos obtenidos en las muestras problema
dentro de la curva estndar, fue posible conocer la concentracin real de lpidos en la
muestra.

Bibliografa
Aguilar-Santelises L, Garca-del Valle A, Corona-Ortega MT, et al. Antologa del
laboratorio de Bioqumica Celular y de los tejidos I (complemento). Material en CD e
impreso Mxico: FES Zaragoza; 2007.