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FACULDADE META
BIOMEDICINA
MICROBIOLOGIA CLINICA

RELATORIO DE AULA PRTICA


COLORAO DE GRAM

DOCENTE: ANDRE MENEZES


DISCENTE (S): ALESSANDRA REIS
LUCAS JANIARES

RIO BRANCO-AC

2016

SUMARIO

Introduo....................................................................................................... 3
Objetivo e materiais......................................................................................... 4
Procedimento experimental.............................................................................. 5
Resultado e discurso........................................................................................ 6
Concluso...........................................................................................................7
Referencia Bibliogrfica.....................................................................................8

INTRODUO

As coloraes das bactrias consistem em detectar qual o tipo de colorao se


gram negativo ou positivo que provem dos meios slidos e liquido. possvel tambm
classificar a forma das bactrias que so trs tipos: Cocos-clulas esfricas, Bacilos que
so clulas cilndricas forma de bastonetes e espirais que so clulas em formas
espiraladas. Com a ajuda da bacterioscopia que utilizado para visualizar
microscopicamente as bactrias. Que consiste da preparao de esfregao de materiais
em lmina em colorao especifica e aps visualizada em microscpio. A colorao de
Gram uma das principais tcnicas utilizadas para a visualizao microscpica da
forma e dos arranjos dos diferentes tipos de bactrias. Considerado um mtodo
diferencial, permite classificar as bactrias em Gram positivas ou Gram negativas, de
acordo com as propriedades tintoriais da clula bacteriana.

Objetivo
Executar a tcnica de colorao de gram e a preparao dos corantes de gram

Materiais

Ala de platina;
Lamina de vidro;
Placa de Petri com cultura de microrganismo em meio slido;
Cristal violeta a 1%
Lugol
Soluo diferencial
Fucsina bsica

Procedimento

Pegar uma lmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na


chama do bico de Bunsen;
Identificar o lado da lmina onde ser feito o esfregao;
Flambar a ala bacteriolgica deix-la esfriar e colocar na lmina uma
gota de
soluo salina fisiolgica;
Flambar a agulha bacteriolgica, deixar esfriar prximo a chama, abrir a
placa com a cultura teste e tocar a colnia escolhida para retirada da
amostra,
Esfregar o material com movimentos de rotao da ala bacteriolgica,
para se obter um esfregao de forma oval, bem fino e uniforme;
Deixar secar nas proximidades da chama;
Fixar o esfregao passando a lmina (lado oposto ao esfregao) 5 vezes
na chama do bico de Bunsen (rapidamente).

COLORAO
1)Cobrir toda a lmina com soluo cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;
2) Lavar rapidamente em gua corrente;
3) Cobrir todo esfregao com soluo de Iugol (mordente) por um minuto;
4) Lavar rapidamente em aguas corrente
5) Lavar uma ou duas vezes, raidamente, com soluo diferenciadora: lcool-acetona
6) Lavar rapidamente com agua
7) Cobrir com fucsina basica e aguardar 30 segundos;
8) Lavar a lmina em gua corrente
9) Secar a lamina tomando cuidado para no remover da lamina o esfregao

RESULTADOS E DISCURSOES
O resulta encontrado na visualizao no microscpio foi Bactria Gram- negetiva.
Quando se tem este resultado a colorao observada na cor azul.

CONCLUSO

Sabendo que a maioria das bactrias coram se por esse mtodo, por isso este
meio muito utilizado quando se chega uma amostra. Pelo mtodo ministrado em
laboratrio, de acordo com seus devidos procedimentos. As boas praticas de laboratrio
quando se trata de risco , est atentos a todos os procedimentos.

RESPOSTAS DO QUESTIONRIO

1- Complete a tabela seguinte, descrevendo o que ocorre na colorao de gram.

SOLUES
Cristal violeta
Lugol

lcool

Fucsina

BACTRIAS
Gram +
Coradas em violeta
Formao do complexo CVI no interior da clula, que
permanece violeta
Desidratao da parede
celular, diminuio da
porosidade e da
permeabilidade;
o
complexo CV-I no pode
sair
da
clula,
que permanece violeta

Gram Coradas em violeta


Formao do complexo CVI no interior da clula, que
permanece violeta
Extrao dos lipdeos da
parede celular, aumento da
porosidade; o complexo
CV-I removido da clula

A clula no afetada,
permanece violeta

A clula adquire o corante,


tornando-se vermelha

2- As gram positivas ficam roxas e as gram negativas ficam vermelhas. Ento


dependendo do tipo da amostra aps ser feito os procedimentos de colorao na grampositiva o processo de descolorao com lcool etlico, retm o corante, permanecendo
com a colorao conferida pelo corante primrio (roxo). De gram-negativas com parede
clula, composta predominante dos cidos graxos, perdem o complexo iodoparosonlina so incapazes de reter o violeta de genciano, assumindo a cor do corante de
fundo (vermelho). Bactrias gram-positivas ficam roxas pois no permitem a entrada do
agente diferenciado. Bacterias-gram negativas ficam vermelha pois permitem entrada
do agente diferenciador.
3- As Mycobacterium no se coram com gram, pois sua parede diferente da parede de
bactrias gram-positivas e gram-negativas. As paredes das microbactria so grossas
com grande quantidade de lipdeos- cidos meclico (60% da parede), tal estrutura em
paredes impermeveis.

5- um mtodo de colorao de bactrias desenvolvido pelo mdico dinamarqus Hans


Christian Joachim.
6- Gram-positivas: camada de peptideoglicana mais espessa e algumas tambm
possuem uma camada de cido externa camada de peptideoglicana. cido teioco
uma estrutura anti-gnica importante reconhecida pelo sistema imune. So encontrados
na camada externa da parede celular de gram+. Alguns polmeros de cidos teico
penetram atravs da camada de peptideoglicana, ligando-se covalente aos lipdeos da
membrana citoplasmtica, sendo agora denominada de cidos lipoproteica.
7- Precipitao do corante: simula cocos Gram-positivos. Uso de lminas que no
tenham sido pr-limpas ou desengorduradas. Espessura do esfregao: pode corar
irregularmente. Superaquecimento na fixao pelo calor: destruio da morfologia. A
descolorao insuficiente com lcool-acetona permite a reteno do cristal-violeta, o
que dificulta a observao de bactrias Gram-negativas. Por outro lado, esfregaos
obtidos de culturas velhas ou contendo numerosas bactrias mortas ou expostas ao
de antibiticos apresentam irregularidades na colorao. As bactrias Gram-positivas
perdem a capacidade de reter o cristal-violeta, apresentando-se Gram-negativas; as
Gram-negativas podem corarse mais fracamente pela safranina, podendo simular a
ocorrncia de infeces mistas (Grampositivas/ Gram-negativas). A discordncia de
resultado entre o esfregao corado pelo Gram e a cultura pode estar relacionada com a
coleta ou meios de transportes e conservantes inadequados. Um resultado positivo de
Gram com cultura negativa pode sugerir contaminao do corante, presena de agentes
antimicrobianos na amostra do paciente ou falha no crescimento de microrganismos
devido s condies utilizadas (atmosfera, ao seletiva dos meios de cultura, etc.).

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BIBLIOGRAFIA

Ribeiro, Mariangela Cagnoni, Microbiologia pratica, aplicaes de aprendizagem de


microbiologia bsica. 2 edio. So Paulo: Atheneu Rio.