EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DE Escherichia coli EXPUESTA A

DIFERENTES LONGITUDES DE ONDA DEL ESPECTRO VISIBLE Y

ULTRAVIOLETA.
Gutirrez Vctor Adolfo1, Vergel Arias Camila1
1

Facultad de odontologa, programa de odontologa, Universidad Antonio Nario.

2016

RESUMEN:
Escherichia coli es un microorganismo patgeno el cual podra generar brotes de gran
importancia en la humanidad por tal motivo se hace necesario buscar nuevas alternativas de
control para este microorganismo. En la presente investigacin se quiso evaluar el efecto
sobre el crecimiento producto de la irradiacin de diferentes longitudes de onda del
espectro visible (verde, azul y roja) junto con la luz ultravioleta, para ello se realizo un
experimento en donde E. coli fue irradiada con las longitudes de onda antes nombradas,
llevando a incubacin a temperatura ambiente durante 24 horas en medio BHI, la medida
de crecimiento se obtuvo mediante espectrofotometra cada 2 horas, los resultados arrojaron
que las longitudes de ondas del color azul arrojadas por el espectro visible y las longitudes
de onda del espectro ultravioleta, resultan tener un efecto negativo sobre el crecimiento de
E. coli, esto comparado con el crecimiento obtenidos en los dems tratamiento
Palabras clave: Escherichia coli, luz ultravioleta, espectrofotometra, crecimiento.
estimula la retina de nuestros ojos. En
este
INTRODUCCIN:
sentido, nos estamos refiriendo la luz
Escherichia coli es el microorganismo
visible, es un pequeo espectro de la
ndice ideal para la deteccin de
enorme gama de frecuencias de la
contaminaciones recientes. Fue descrita
radiacin electromagntica. Esta regin
por primera vez en 1885 por Theodore
de la luz visible se compone de un
Von Escherich bacterilogo alemn, quin
espectro de longitudes de onda que van
la denomin Bacterium coli. sta y otras
desde aproximadamente 700 nanmetros
bacterias son necesarias para el
(nm) a aproximadamente 400 nm [3].
funcionamiento correcto del proceso
Otro tipo de radiacin es la luz
digestivo [1]. Es un bacilo que reacciona
ultravioleta (UV) que es la porcin del
negativamente a la tincin Gram (Gram
espectro electromagntico entre la luz
negativo) es anaerobio facultativo, es
visible y los rayos X, con una longitud de
mvil por flagelos peritricos (que rodean
onda de 100 a 400 nm. Las fuentes de
su cuerpo), no forma esporas, es capaz de
radiacin UV incluyen el sol, rayos lser,
fermentar la glucosa y la lactosa [2].
las camas de bronceado, y numerosos
instrumentos mdicos tales como equipos
Normalmente, cuando utilizamos el
dentales de polimerizacin [4].
trmino "luz", nos estamos refiriendo a un
tipo de onda electromagntica que
El enfoque tradicional para destruir las
bacterias
son
principalmente
los

antibiticos que no son muy eficiente

debido al desarrollo de especies
resistentes. Adems, la penetracin
limitada de medicamentos en biopelculas
bacterianas muestras resultados en la
reduccin de la susceptibilidad a este tipo
de tratamiento. Obviamente, hay una
creciente
necesidad
de
enfoques
innovadores que conduzcan a la
erradicacin de las bacterias. Un rea de
inters implica el uso de tecnologas de
tratamiento basados en la luz, en la
irradiacin UV es bien conocido el papel
foto destructor para las bacterias y otros
microbios [5].
Recientemente hay varios informes sobre
el efecto bactericida de la luz visible, la
mayora de ellos estudiados en la parte
azul (400-500nm) que sera responsable
de matar a varios patgenos, Feursteinet
et al., mostraron que la banda ancha de
luz de color azul en 400-500nm ejercen
un efecto fototxico en P. gingivalis y F.
nucleatum [6]. Tambin Henry et al.,
demostraron las influencias de la
irradiacin con lser de argn (488 a 514
nm) las cuales ejercen un efecto
fototxico
en Porphyromonas y Prevotellaspp., que
son bacterias anaerbicas Gram negativas
que producen porfirinas [7].
Maclean et al. , Demostraron que una
matriz LED de 405 nm tiene un efecto
fototxico en una variedad de bacterias,
incluyendo
bacterias
Grampositivas: S. aureus
MRSA,
S.
epidermidis,
S.
pyogenes,
C.
perfringens ; Bacterias
gramnegativas: A. baumannii, P. aeruginosa,
E. coli, P. vulgaris y K. pneumoniae [8].
Chukuka y Guffey encontraron un efecto
de destruccin significativa de S. aureus a
470 nm [9,10], Tambin las especies de
bacterias entricas y Helicobacter

pylori se encontr que eran sensibles a la

iluminacin de luz visible [11,12].
La produccin de especies reactivas del
oxgeno (ROS) en luz azul (400-500 nm)
se encontr que era superior a la de rojo
(500-800 nm). Dentro de la gama azul, la
luz de 415 nm induce ms ROS que a 455
nm, esto se correlaciona con los
resultados obtenidos en la reduccin del
recuento de colonias de S. aureus y E.
coli despus de la iluminacin utilizando
intensidades iguales de estas dos
longitudes de onda. En fluencias bajas,
415 y 455 nm mejora proliferacin de S.
aureus pero reduccin de la viabilidad de
E. coli [13], Esto no es sorprendente ya
que un efecto estimulante de la luz visible
bajo la irradiacin de energa en diversas
clulas se ha demostrado en gran medida
el aumento de proliferacin de manera in
vitro [14,15].
Hay pocos trabajos que explorar el
mecanismo del efecto bactericida ejercida
por la luz visible. Algunos creen que la
luz azul ejerce efectos similares en el
ADN como la luz ultravioleta [16], siendo
absorbido en el doble enlace dentro de las
bases pirimidinas del ADN tales como la
timina y citosina [17].
La exposicin prolongada a la radiacin
UV puede alterar el material gentico de
una clula, dando lugar a mutaciones
desfavorables e incluso la muerte celular.
Tpicamente, a ms corta es la longitud de
onda UV, mayor es el dao a un
organismo [18]. Desde un punto de vista
molecular, la muerte celular podra ser
debido a la fusin de las bases de timina
que se encuentra junto a la otra [19]. Este
nuevo enlace entre dos de las mismas
bases
nitrogenadas
repercute
negativamente en la estructura y la forma
global de la molcula de ADN,
posteriormente alterar el material gentico

de la clula. Estas clulas son incapaces

de reproducirse ya que la dimerizacin
impide la replicacin del ADN apropiado
[20]. Por esta razn, la radiacin UV se
utiliza constantemente en entornos
mdicos para esterilizar instrumentos y
maquinaria debido a su capacidad para
interrumpir la divisin bacteriana [21].

2) Para la lectura del crecimiento

bacteriano se realiz cada 2hrs durante
un da (excepto en la noche),
utilizando un espectrofotmetro marca
Thermo Spectronic, las lecturas
arrojadas por el equipo fueron
tabuladas para posterior tratamiento.

METODOLOGA:
A presente investigacin busco dar
respuesta sobre la influencia que poseen
las diferentes longitudes
de onda
(espectro visible y luz ultravioleta) sobre
el crecimiento de E. coli, para ello se
utiliz cultivo de la bacteria a estudiar
con no ms de 16 hrs de incubacin el
cual se debi encontrar en fase
exponencial, a partir de este cultivo se
realiz una suspensin bacteriana en agua
destilada estril (transfiriendo una asada)
a 10 ml de ADE.
A partir de esta suspensin se realiz el
ensayo, el cual se estructuro de la
siguiente manera:
1) A partir de la suspensin de E. coli se
tom 1 ml y se inoculo en 9 ml de
caldo BHI, para promover el
crecimiento bacteriano, cada tubo se
llev a incubar a temperatura
ambiental, en un espacio cerrado en
el cual la luz solar no pudo irrumpir,
cada tubo con el inoculo se someti
a la exposicin lumnica de diferentes
colores (azul, verde,
rojo y
ultravioleta) ver imagen 1 ,
adicionalmente un tubo ms inoculo
se incubo bajo las mismas
condiciones pero no estuvo expuesto
a ninguna longitud de onda sirviendo
como testigo.

Imagen 1: montaje ensayo para cada

longitud de onda evaluada.
RESULTADOS Y DISCUSIONES:
Los resultados obtenidos en cuanto a las
medidas de crecimiento utilizando el
espectrofotmetro (ver imagen 1) como
instrumento de medida se resumen en la
siguiente tabla (ver tabla 1)
Imagen 1: medida del crecimiento de E.
coli, mediante espectrofotometra.

Tabla 1: resultados de la absorbancia en

cada uno de los tratamientos en el
intervalo de tiempo
luz
luz
verd luz
luz ultraviol contr
e
roja azul
eta
ol
T
1 0,50 0,59 0,49
0,487 0,603

2
3
4
5
6

8
0,52
5
0,58
7
0,65
3
0,67
5
0,68
7

0,60
2
0,64
0,66
9
0,69
3
0,70
6

5
0,51
2
0,55
7
0,60
5
0,63
5
0,65
9

0,501 0,634
0,545 0,686
0,583 0,721
0,586 0,764
0,603 0,789

Los resultados obtenidos mediante

espectrofotometra
los
cuales
se
encuentran connotados en la tabla 1,
fueron utilizados para realizar un grfico
de dispersin (ver grfico 1) en donde se
puede observar el comportamiento del
crecimiento de E. coli, sometida a la
exposicin de diferentes longitudes de
onda de espectro visible y luz ultravioleta.

ABS de los cultivos

luz verde vs tiempo
0.83
luz roja
0.73
luz azul

ABS 0.63

0.53
luz
ultravioleta
0.43
02468
control
TIEMPOS

Grafico 1: comparacin de medida del

crecimiento de E. coli en los diferentes
tratamientos.
Como se logra observar en el grafico 1,
en los cultivos irradiados con luz
ultravioleta y luz azul se obtuvieron las
menores
medias
de
absorbancia,
queriendo
decir
que
estos
dos
tratamientos tuvieron un efecto negativo
sobre el crecimiento de E. coli, vindose
este ralentizado e inhibido en un bajo

grado ya que con el pasar de las horas se

presentan asensos en la medida de la
absorbancia indicando de en dichos
tratamientos se present divisin celular
representado en el aumento de la
poblacin el cual resulto ser menor a los
datos obtenidos en los dems tratamiento,
resultados que concuerdan con estudios
realizados por diferentes autores en donde
se encontr que la luz azul presenta cierto
grado de inhibicin bacteriano esto
debido a que estas longitudes de onda en
especial pueden reaccionar con los
medios de cultivos siendo capaz de
catalizar en cierto grado la formacin de
radicales libres del oxgeno, los cuales
resultan ser txicos para las clulas
bacterianas, pudiendo estos generar un
estado bacteriosttico o bactericida
dependiendo de las concentraciones de
estos radicales en los medios, en nuestra
investigacin, se puede deducir que los
niveles de estas molculas en el medio
fueron bajos, ya que no se present un
efecto inhibitorio del todo, lo cual
permiti la estabilidad y supervivencia de
algunas clulas las cuales lograron
multiplicasen y as aumentar su
poblacin.
En cuanto a los resultados obtenidos en el
cultivo de E. coli irradiado con luz
ultravioleta, esta longitud de onda
presento un mayor efecto negativo sobre
el crecimiento de microorganismo, lo cual
era de esperarse ya que cientos de
estudios demuestran que la luz
ultravioleta
a
causa
desarreglos
moleculares en el material gentico (cido
nucleico, DNA) del microorganismo
formando dmeros de pirimidinas los
cuales deforman la estructura de DNA,
esto impide su reproduccin y si no puede
reproducirse, entonces se le considera
muerto, a un que cabe aclarar que la luz
ultravioleta utilizada era de una longitud
de onda casi cercana al espectro visible lo

cual tambin influyo en que esta no

presentara su efecto bactericida el cual se
presenta en longitudes de onda las cuales
van desde los 200 a 30 nanmetros la cual
se ha llamado la regin germicida [22],
sumado a esto tambin que durante las
medidas del crecimiento por absorbancia,
el tubo se expuso a la luz natural lo cual
pudo resultar en un proceso de reparacin
normal de dichos daos provocados por la
luz ultravioleta y por ende se pudo
evidenciar un aumento de la poblacin
(ver tabla 1).
Los cultivos irradiados con luz verde y
roja presentaron un efecto menor sobre el
crecimiento de E. coli, el cual casi su
pudo comparar con el crecimiento de
ensayo control el cual se realiz bajo
condicin de oscuridad, esto quiere decir
que estos tipos de radiaciones al ser de
una menor intensidad no poseen in efecto
tan pronunciado sobre el crecimiento de
esta microorganismo, comparado con la
luz azul y la luz ultravioleta.
En ente ensayo se demuestra que las
longitudes de ondas ms bajas poseen un
efecto sobre el crecimiento de E. coli, el
cual no se encuentra bien dilucidado.
Por ltimo se quiso saber si el la
suspensin utilizada en el ensayo posea
algn tipo de contamnate microbiolgico
el cual pudiera afectar los resultados
obtenidos para ello se realiz siembra en
superficie sobre agar Macconkey, el cual
permite una identificacin rpida de E.
coli. Despus de 24 hrs de incubacin los
resultados mostraron solo el crecimiento
de E. coli, con las siguientes
caractersticas: colonias rojas, de tamao
mediano con un halo turbio alrededor de
la colonia, el medio no cambia de color se
mantiene rojo, esto debido a que E. coli
fermenta la lactosa por ende el medio al
tener rojo neutro no se presenta cambio
del color en el mismo (ver imagen 2).

Imagen 2: crecimiento de E. coli sobre

agar Macconkey.
CONCLUSIN:
La aplicacin de factores fsicos como lo
es la exposicin a energas ionizantes
como lo son las longitudes de ondas del
color azul arrojadas por el espectro visible
y las longitudes de onda del espectro
ultravioleta, resultan tener un efecto sobre
el crecimiento de E. coli.
La utilizacin de estas longitudes de onda
en diferentes escenarios podra ser una
posible solucin, a problemas de
contaminacin por microorganismos
como lo es en el caso de la industria
alimentaria y mdica, a su vez con los
resultados obtenidos en esta investigacin
se abren las puertas a la bsqueda de
nuevos mtodos de desinfeccin los
cuales podran resultar se limpios y no
generen productos contaminantes al
medio ambiente.
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