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19Ene2003
La revista: nmero 11 (Enero 2003)
La tecnologa de DNA recombinante: principios y aplicaciones

Francisco Fontrbel R.
Universidad Mayor de San Andrs, La Paz (Bolivia)
fonturbel@mbotanica.zzn.com
Resumen
La tecnologa de DNA recombinante es un procedimiento de ingeniera gentica que se viene usando desde hace algunos
aos y en la actualidad tiene una amplia variedad de aplicaciones. Esta tcnica se basa en la insercin de DNA forneo al
genoma de una clula hospedadora, para que sta lo exprese como si fuese suyo. Este proceso se realiza mediante el uso
de enzimas de restriccin, vectores de clonacin y hospedadores (procariotas o eucariotas), y consiste en aislar un
fragmento de DNA con genes de inters para el investigador e introducirlo en un vector, el cual se encarga de llevarlo al
hospedero para que ocurra recombinacin.
En la actualidad se producen alimentos transgnicos y biomolculas con esta tecnologa, la cual tambin ha abierto nuevas
perspectivas en el campo de la medicina, la gentica, la bioremediacin y la industria.
Palabras clave: DNA, recombinacin, enzimas, ciclo celular, replicacin, virus, plsmidos.
Abstract
The recombinant DNA technology is an genetic engineering procedure that is using now since few years ago, and today
has a lot of applications. This procedure is based in the insertion of a fragment of foreign DNA into the host cell genome,
and the host cell express this piece of DNA like the own genetic material. The restriction enzymes are fundamental to the
development of this procedure, also the cloning vectors and hosts (prokaryotes and eukaryotes) are required. The foreign
DNA fragment with genes useful to the researcher is isolated, introduced into a vector and carried out to the host for the
recombination.
Today we could produce transgenic aliments and biomolculas with this technology, that also opened new perspectives to
the medicine, genetics, bioremediation and industrial fields.
Key words: DNA, recombination, enzymes, cellular cycle, replication, virus, plasmid.
Introduccin
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Uno de los ms grandes avances de la ciencia contempornea ha sido el desarrollo de la ingeniera gentica y la
biotecnologa. Por medio de estas dos disciplinas muy relacionadas entre s se ha logrado manipular genticamente a
los individuos con el fin de propiciarles nuevas caractersticas.
La tecnologa del DNA recombinante es una tcnica que ha permitido introducir material gentico forneo en un
individuo, y hacer que ste organismo incorpore dicho material a su genoma y lo exprese como si fuera suyo (Bohinski
1991, Greene Rao 1999). Esta tecnologa desarroll a partir del descubrimiento de las enzimas de restriccin (Griffiths et
al. 1998, Klug Cummings 1999) y su accin sobre los cidos nucleicos. Cuando se complement el estudio de las enzimas
de restriccin con la micromanipulacin (conjunto de tcnicas que permiten inyectar y succionar porciones de una clula)
se desarroll esta nueva tecnologa, que ha abierto las puertas a un nuevo y amplio campo de accin a la gentica
molecular (Reina 2000).
El principio de la tecnologa de DNA recombinante se basa en la insercin de un fragmento de DNA forneo (Reina 2000)
en un hospedero de clonaje molecular (Silva 1999) por medio de un vector de clonaje, como ser un virus o un plsmido
(Moreira Mendes 1998). Una vez que el fragmento de DNA forneo se ha introducido en el hospedero, comienza el
proceso de clonaje molecular y la recombinacin, dando como resultado la expresin del gen o los genes introducidos en
un organismo diferente (Madigan et al. 1998).
En la actualidad existe una gran cantidad de aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante a todo nivel. Se aplica
esta tcnica para la produccin de vacunas (Klug Cummings 1999), para la produccin de protenas, aminocidos,
vitaminas y ribonucletidos (Hashimoto Ozaki 1999) y la produccin de curas genticas para algunas enfermedades
(Griffiths et al. 1998, Klug Cummings 1999), en el campo mdico.
La ingeniera gentica en plantas tambin ha provisto la mejora de ciertas especies hacindolas ms resistentes o
introduciendo ciertas caractersticas de otros individuos para mejorarlas (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999).
Otra aplicacin de la tecnologa de DNA recombinante bastante reciente, es la produccin de microorganismos
transgnicos para procesos de bioremediacin de hidrocarburos (Keasling Bang 1998, Timmis Pieper 1999, Pieper
Reineke 2000; Coates Anderson 2000), metales pesados como el mercurio (Chen Wilson 1997, Sayler Ripp 2000). Las
tcnicas de bioremediacin permiten una descontaminacin de ambientes afectados por medio del uso de
microorganismos capaces de degradar ciertas sustancias, en muchos casos se han empleado organismos nativos del lugar
pero tambin se ha trabajado con numerosas cepas modificadas genticamente para amplificar su accin sobre los
contaminantes.
En esta revisin se vern los principios bsicos de la tecnologa de DNA recombnate y se analizarn las diferentes
aplicaciones actuales y potenciales de este proceso.
PRINCIPIOS DE LA TECNOLOGA DE DNA RECOMBINANTE
Enzimas de restriccin: produccin de fragmentos de DNA para recombinacin
Las enzimas de restriccin o endonucleasas de restriccin fueron descubiertas por Werner Aber, Hamilton Smith y Daniel
Nathans (Stryer 1995). Estas son enzimas sumamente especficas que catalizan la hidrlisis de los enlaces fosfodister de
los cidos nucleicos (Bohinski 1991) y son capaces de cortar ambas hebras del DNA en lugares especficos, creando de
esta manera una serie de fragmentos (Stryer 1995). Se ha visto que ciertas cepas de E. coli degradan (cortan) el DNA de
ciertos virus fagos infectivos, a menos que los cidos nucleicos presenten metilacin (adicin de grupos metilo) en
algunos residuos de adenina o citosina del sitio de corte.
La funcin de las enzimas de restriccin es la proteger al organismo de DNA extrao. Cuando una porcin de DNA
forneo ingresa a la clula, las enzimas de restriccin se encargan de degradarlo cortndolo en pequeos fragmentos,
siempre y cuando ste no est modificado (Smith Wood 1998).
Actualmente se conocen unas 200 enzimas de restriccin (las ms conocidas se muestran en la tabla 1), las cuales se
nombran de acuerdo al organismo del cual se extraen, como por ejemplo EcoRI y EcoRII, que se extraen de E. coli o
HaeIII que se extrae de Haemophilus aegyptius.
Tabla 1: Algunas de las principales enzimas de restriccin conocidas y su origen (en base a Griffiths et al. 1998).
Enzima de restriccin Organismo de donde se

extrae
EcoRI
Escherichia coli
EcoRII
Escherichia coli
HindII
Haemophilus influenzae
HindII
Haemophilus influenzae
HaeIII
Haemophilus aegyptius
HpaII
Haemophilus parainfluenzae
PstI
Providencia stuartii
SmaI
Serratia marcesens
BamI
Bacillus amyloliquefaciens
BglII
Bacillus globiggi
Las enzimas de restriccin trabajan nicamente sobre secuencias especficas de bases nitrogenadas, el lugar donde se
produce el corte se denomina sitio de restriccin y producen dos tipos de corte: (1) corte con extremos cohesivos y (2)
corte con extremos romos (ver Fig. 1) (Griffiths et al. 1998). Los extremos cohesivos dejan porciones lineales a ambos
lados del fragmento, es decir, quedan pequeas secuencias de bases sin aparear a cada lado, siendo stas complementarias
entre s, mientras que los extremos romos son aquellos en los que no queda una porcin lineal a ninguno de los lados. De
acuerdo a la especificidad de las enzimas de restriccin, se conocen dos tipos: las enzimas de tipo I cortan en un sitio
cercano al sitio de restriccin, a una distancia que vara aleatoriamente, y por ello no se suelen emplear para DNA
recombinante. Las de tipo II reconocen y cortan en la secuencia especfica, y son las ms empleadas en este tipo de
protocolos por su alta precisin. Las enzimas de restriccin de tipo III son similares a las de tipo II en cuanto a la
precisin del lugar de corte, pero se diferencian de stas en que slo cortan entre nucletidos del mismo tipo, por ejemplo
entre dos adeninas.

Fig. 1: Produccin de extremos (a) cohesivos y (b) romos, por medio de enzimas de restriccin en hebras de
DNA.
Otro mtodo para producir fragmentos pequeos de DNA para recombinacin consiste en emplear
ultrasonidos. Los ultrasonidos son capaces de romper al DNA cromosomal en pequeos fragmentos. A pesar
de ser un procedimiento muy sencillo, tiene la desventaja de producir fragmentos aleatorios y no permite
aislar genes con gran precisin (Mateos 2000), sin embargo son empleados por su facilidad de uso.
Algunas enzimas de restriccin como EcoRV encuentran el sitio de restriccin, por medio de un barrido a lo
largo del surco mayor del DNA y reconocen una secuencia palindrmica de seis nucletidos de longitud, en la
que se presenta una simetra rotacional binaria. Cuando la enzima de restriccin encuentra el sitio de corte, se
producen una serie de reordenamientos estructurales en el DNA y se produce un ajuste inducido en el cual el
DNA sufre una torsin de 50 grados. En este proceso se va haciendo un barrido muy rpido sobre la hebra de
DNA, leyendo grupos de seis nucletidos, hasta encontrar la secuencia diana. Esto comprueba el carcter
altamente especfico de las enzimas de restriccin (Stryer 1995).
Los puntos de corte de las enzimas de restriccin pueden ser empleados como marcadores para la elaboracin
de mapas de restriccin (Mateos 2000). Para elaborar un mapa de restriccin, se tien los fragmentos
resultantes de la lisis y se los separa mediante una electroforesis PAGE (Electroforesis en gel de
poliacrilamida) (Smith Wood 1998, Mateos 2000) y se establecen las distancias de migracin, siendo los
resultados muy especficos para cada molcula de DNA en estudio (Griffiths et al. 1998). Los extremos
cohesivos son los ms empleados en la construccin de DNA recombinante, puesto que al tener una porcin
lineal "pegajosa" es ms sencillo que se produzca la unin con el DNA del hospedero, por complementacin
de bases, dicha unin se produce por la intervencin de enzimas denominadas ligasas. Adicionalmente, la
enzima transferasa terminal puede ser usada para generar extremos cohesivos en un fragmento de DNA. A
pesar de ser ms difcil, tambin es posible realizar uniones de extremos romos, mediante la adicin de
conectores sintticos de DNA que actan a manera de extremos cohesivos (como el caso de la transferasa
terminal), sin embargo este procedimiento no es de mucha utilidad para realizar una clonacin directa de
DNA.
Existe otro tipo de enzimas de restriccin de doble funcin, denominadas endoexonucleasas, las cuales son
capaces tanto de aadir nucletidos como de removerlos de una hebra de DNA. Estas enzimas tambin son
muy especficas y reconocen secuencias exactas (Bohinski 1991, Stryer 1995) Fraser (1994), plantea que las
enzimas de restriccin del tipo endoexonucleasas pueden tener un papel fundamental en la reparacin del
DNA y/o en la muerte de clulas defectuosas, gracias a la especificidad de la enzima. Se han hecho numerosos
experimentos con endoexonucleasas aisladas de E. coli, Neurospora crassa, Aspergillus nidulans,
mitocondrias de Saccharomyces cerevisiae, Drosophila melanogaster, clulas de mono y clulas leucmicas
de humano (Fraser 1994). Las potenciales aplicaciones en la medicina de estas enzimas podra llevar a curar
varias enfermedades, este aspecto se ver a detalle ms adelante.
Vectores de clonacin
Una vez que se han aislado los fragmentos de DNA de inters, por medio de enzimas, el siguiente paso es
unirlos a un vector de clonacin. Los vectores de clonacin permiten la unin de los fragmentos de DNA
extrao a su propio DNA por medio de sitios de restriccin compatibles, sin afectar su replicacin, por medio
de un proceso de recombinacin (Madigan et al. 1998, Moreira Mendes 1998, Klug Cummings 1999) El
vector es el vehculo que transporta el gen o genes de inters al hospedero, que normalmente es una bacteria o
una clula eucariota viva. Una vez dentro la clula, el vector se multiplica produciendo varias copias idnticas
del gen que transporta (Moreira Mendes 1998). Para que un vector sea utilizable en la tecnologa de DNA
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recombinante, debera ser fcilmente recuperable de la clula hospedadora, adems de no producir daos.
Actualmente, se usan diferentes tipos de vectores para la produccin de DNA recombinante, los principales
son los plsmidos, los bacterifagos, los csmidos, vectores transbordadores, clulas eucariotas y cromosomas
artificiales, entre otros (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999).
Plsmidos
Los plsmidos (Fig. 2) son molculas de DNA bicatenario de carcter extracromosmico y tienen la capacidad
de replicarse autnomamente. Adems de transportar los genes de inters para el investigador, los plsmidos
transportan otros genes que le confieren propiedades importantes al hospedador, como ser la resistencia a
ciertos antibiticos (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999).
Fig. 2: Plsmido pBR322 con sus diferentes sitios de restriccin (tomado de Klug Cummings 1999).
Los plsmidos pueden dividirse en dos grupos: plsmidos conjugables y plsmidos no conjugables. Los
primeros promueven la conjugacin entre bacterias, pasando de una clula a otra, y confirindola nuevas
caractersticas codificadas en su genoma, los otros actan principalmente en procesos de transformacin. Los
plsmidos se clasifican en plsmidos de fertilidad, plsmidos de resistencia, plsmidos col, plsmidos
degradativos y plsmidos virulentos (Moreira Mendes 1998).
La utilizacin y el diseo de plsmidos para ingeniera gentica ha considerado que estos vectores contengan
un nmero limitado de sitios de restriccin (puesto que la posicin es importante), y adems que posean genes
de resistencia para varios antibiticos. El vector pBR322 fue uno de los primeros plsmidos usados para la
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construccin de DNA recombinante (Klug Cummings 1999). Segn Madigan et al. (1998), este plsmido
presenta nueve caractersticas que lo hacen adecuado como vector de clonacin:
1. Es pequeo, slo tiene 4361 pares de bases.
2. Es estable cuando se encuentra dentro el hospedador.
3. Se pueden producir muchas copias de l, por medio de la inhibicin de la sntesis de protenas.
4. Es fcil de aislar en su forma sper enrollada.
5. Pueden clonar fragmentos insertos relativamente grandes.
6. Se conoce la secuencia completa de bases del mismo.
7. Existen sitios de restriccin nicos para las principales endonucleasas.
8. Posee varios genes de resistencia a antibiticos.
9. Es fcil de introducir a los hospedadores.
Fagos y Bacterifagos
Los virus ms empleados como vectores para DNA recombinante son los bacterifagos lambda y M13, por su
facilidad de incorporar genes de otros individuos a su genoma. La transduccin especializada que presentan
los fagos lambda hacen que sean usados como vectores, pero en este caso la recombinacin se da dentro de la
clula hospedadora y no en los tubos de ensayo (Madigan et al. 1998). Esta transduccin especial se basa en
un proceso de eliminacin del grupo gnico central del DNA del fago, por medio de enzimas de restriccin, y
la posterior insercin y ligamiento del DNA exgeno, para luego proceder al empaquetamiento del virus.
Los fagos lambda silvestres no son tiles como vectores, por lo tanto se deben producir fagos modificados,
que contengan el DNA forneo. El proceso de incorporacin de DNA forneo se muestra en la Figura 3
(Madigan et al. 1998). Los pasos que se deben seguir para la clonacin del fago lambda son los siguientes
(segn Madigan et al. 1998):
1. Aislar el DNA del fago vector y proceder a la digestin por enzimas de restriccin.
2. Ligar los fragmentos esenciales del DNA del vector con el DNA forneo.
3. Empaquetar el DNA hbrido en extractos celulares que contengan las protenas de la cpside y la cola.
4. Producir la infeccin del hospedero.
Los fagos M13 son filamentosos (Moreira Mendes 1998) y se caracterizan por presentar una cadena de DNA
simple, la cual se replica dentro el hospedero formado una doble cadena, denominada forma replicativa. Este
fago es til porque resulta sencillo aadir una porcin de DNA forneo a su cadena lineal, mediante el empleo
de enzimas de restriccin apropiadas. Los vectores M13 tambin pueden ser usados para la secuenciacin de
DNA, mediante la elaboracin de mapas de restriccin, que hacen ms fcil la secuenciacin del material
gentico (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999), mediante un proceso previo de replicacin del material
gentico a una estructura de doble hebra, puesto que las enzimas de restriccin no son capaces de cortar
cadenas simples.
Fig. 3 Pasos a seguir para la incorporacin de DNA forneo a un virus vector (Madigan et al. 1998).
Virus
En la actualidad existen muchos virus conocidos, sin embargo solamente se utilizan dos como vectores para el
trasporte de DNA extrao. Esto se debe a que no todos los virus renen las condiciones necesarias que
permitan insertar en su material gentico otros genes y transportarlos hasta el hospedero. En la actualidad se
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est estudiando a posibilidad de utilizar otros virus como vectores de clonacin, entre ellos estn el SV40,
algunos adenovirus y algunos baculovirus (Moreira Mendes 1998)
Se distinguen dos tipos principales de vectores de clonacin en virus: los vectores de insercin y los vectores
de sustitucin. Los vectores de insercin son aquellos en los cuales se elimina una parte de DNA "no esencial"
para la insercin de los genes forneos, mientras que en los vectores de sustitucin se reemplazan porciones
del DNA "esencial" por medio de la accin enzimtica sobre varios sitios de restriccin (Moreira Mendes
1998).
Csmidos
Los csmidos son modernos vectores hbridos que emplean genes especficos del fago lambda: la secuencia
cos. Estos vectores se construyen con la secuencia cos ms la porcin de DNA forneo insertada en el
extremo cohesivo de este fragmento. La porcin cos se emplea porque es necesaria para el empaquetamiento
del material gentico dentro del virin lambda, las secuencias plasmdicas de replicacin y la informacin
necesaria para la resistencia a antibiticos (Madigan et al. 1998, Moreira Mendes 1998, Klug Cummings
1999).
El DNA forneo se una con la secuencia cos y penetra en la clula como un virus, pero una vez que est
dentro, se comporta como un plsmido. Puesto que la mayora del genoma del fago lambda se ha eliminado, la
porcin de DNA forneo que se puede introducir es mucho mayor (puede transportar hasta 50kb de DNA), lo
cual constituye una ventaja frente a los otros vectores que slo pueden transportar de 5 a 10kb.
Vectores transbordadores
Otros vectores hbridos modernos, son los vectores transbordadores. Estos provienen de diferentes fuentes,
como el virus SV40 y otros plsmidos o virus vegetales y/o animales. Tanto los csmidos como los vectores
transbordadores permiten clonar una mayor cantidad de DNA con un menor nmero de clones (Madigan et al.
1998). Los vectores transbordadores permiten introducir DNA extrao de hasta 50 kb de tamao, en
contraposicin a los virus y plsmidos que estn limitados para transportar de 5 a 10 kb nicamente, puesto
que una porcin de mayor tamao desestabilizara todo el genoma (Klug Cummings 1999).
A menudo, los vectores transbordadores son usados para la investigacin de la expresin gnica.
Otros vectores
Adems de los vectores vistos anteriormente, existen otros que presentan algunas modificaciones tiles. Estos
son los vectores de expresin y los vectores de secrecin. Los vectores de expresin son aquellos que se
emplean para obtener la sntesis de una protena codificada por e gen clonado dentro el vector. Los vectores
de secrecin hacen una tarea similar y adems exportan esta protena fuera de la clula, porque contienen una
secuencia seal (Madigan et al. 1998, Smith Wood 1998).
Otros vectores de gran utilidad son los cromosomas bacterianos artificiales, los cuales son muy tiles para el
estudio de cartografa y anlisis de genomas eucariticos complejos. Estos cromosomas bacterianos
artificiales poseen los genes de replicacin, varias copias del factor F y marcadores para la resistencia a
antibiticos, y son capaces de transportar hasta un milln de bases nitrogenadas.
Tambin se han desarrollado vectores a partir de clulas eucariotas. El ms conocido y empleado consiste en
un juego de cromosomas artificiales de levadura, los cuales son capaces de albergar segmentos muy grandes
de DNA. Estos vectores son capaces de replicarse como si fueran cromosomas normales de levadura y poseen
varios sitos de insercin de genes (PrezGonzlez et al. 1993).
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Hospederos para el clonaje de material gentico recombinante

Una vez introducido el DNA forneo en el vector, es necesario que ste sea incorporado a un sistema vivo
para expresar los genes adicionados, la mayora de las veces. Este hospedero, normalmente es una bacteria o
una clula de levadura, aunque tambin se han introducido vectores de DNA recombinante en organismos
eucariotas pluricelulares (Silva, 1999). Un hospedero debe presentar las siguientes caractersticas, para que
sea considerado apto para la produccin de clones de DNA recombinante:
1. Debe tener un crecimiento rpido, para poder observar varias generaciones en poco tiempo.
2. Poder crecer en un medio de cultivo econmico, pues de lo contrario representaran costos muy elevados y
el nmero de estudios estara limitado por problemas econmicos.
3. No ser patgeno, por seguridad del investigador y el personal de laboratorio.
4. Tener el mismo origen de replicacin que el vector, para que as sea factible la insercin del DNA forneo
que ste transporta.
5. Tener las enzimas adecuadas que permitan la replicacin adecuada del vector.
6. Ser un organismo del cual se tenga bastante conocimiento, como E. coli, puesto que mientras ms
informacin se tenga ser ms fcil explicar los fenmenos ocurridos.
Silva (1999) define una tabla (ver tabla 2) con los hospederos ms usados en ingeniera gentica:
La insercin del DNA forneo, mediante el vector, se realiza generalmente por un proceso de transformacin.
Las clulas receptores crecen luego en una placa de cultivo, produciendo varias clulas genticamente
idnticas, llamadas clones, las cuales tienen incorporado el gen o genes que se desea expresar. En el proceso
de insercin del DNA forneo mediante el vector, no todos los intentos son exitosos, y alguna clulas no
reciben el material gentico extra, puesto que stas deben estar en un estado competente para poder recibir
DNA del medio externo, y la cantidad de clula, tiempo de duracin y condiciones del medio para que las
clulas entren en competencia depende de la clula y son caractersticas propias de cada especie. Estas clulas
deben ser aisladas de las recombinantes por medio del uso de medios selectivos, puesto que normalmente el
vector adems contiene ciertos genes para la resistencia a antibiticos, un medio selectivo con diferentes
antibiticos es una buena alternativa (Klug Cummings 1999).
Hospederos procariotas
El primer hospedero empleado para clonacin de DNA mediante esta tcnica, y el ms usado en la actualidad
es E. coli. Esta bacteria, es posiblemente la mejor conocida por los cientficos y se tiene gran cantidad de
informacin sobre su genoma y sus caractersticas fisiolgicas (Madigan et al. 1998, Smith Wood 1998). La
cepa K12 de E. coli constituye un hospedero bastante bueno, por cumplir las condiciones anteriormente
mencionadas. Sin embargo, E. coli en su forma nativa produce una retencin de protenas en el periplasma,
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haciendo difcil su aislamiento. Para contrarrestar este problema se han desarrollado cepas modificadas de esta
bacteria, como ser E. coli mutantes para la bioremediacin de ambientes contaminados con mercurio (Chen
Wilson 1997). Otra ventaja de E. coli es que puede aceptar una amplia gama de vectores, como los plsmidos,
los bacterifagos y los csmidos, entre otros (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999).
Se ha usado a E. coli para la produccin de muchas sustancias de inters mdico, como protenas y vitaminas,
mediante la insercin de los genes que las codifican (Hashimoto Ozaki 1999). Un ejemplo de esto, es la
produccin de grandes cantidades de insulina en cultivos de E. coli transgnica, cuyos productos estn
destinados a los enfermos de diabetes (Bohinski 1991), sin embargo en la actualidad se discute sobre los
problemas que puede acarrear el uso de estas bacterias modificadas, puesto que los productos obtenidos no
son de origen natural y existe la posibilidad que resulten txicos en cierta medida (Kppeli Auberson 1998).
La tecnologa de DNA recombinante llega an ms all de la simple produccin de protenas, se han
modificado cepas de E. coli para la bioremediacin de hidrocarburos (Keasling Bang 1998; Timmis Pieper
1999; Coates Anderson 2000) y mercurio (Chen Wilson 1997), en ambientes altamente contaminados. El
desglose de estas aplicaciones se ver ms adelante,
Otro hospedero procariota utilizado en la tecnologa de DNA recombinante es Bacillus subtilis. Esta bacteria
normalmente no es patgena, no produce endotoxinas y secreta protenas al medio. No existen tantos estudios
de cmo usar esta bacteria como hospedero, como los existentes para E. coli, y muchas veces se presentan
problemas al usarla como hospedador porque no es fcil adaptarla para la clonacin de genes (Madigan et al.
1998), puesto que su maquinaria biosinttica no es tan flexible como la de E. coli.
Hospederos eucariotas
Si bien E. coli es un buen hospedero para muchos propsitos de ingeniera gentica y DNA recombinante,
tiene la desventaja de carecer de ncleo y otros organelos, y al ser un organismo procaritico, es posible que
no exprese correctamente protenas introducidas de origen eucaritico, por ello se ha visto la alternativa de
emplear hospederos eucariticos (Silva 1999).
En la actualidad se vienen usando tambin clulas eucariotas como hospederos para la clonacin de DNA.
Esto ha permitido que se ample notablemente el conocimiento que se tiene sobre cmo funciona la
maquinaria gentica de las clulas eucariotas. El hospedero eucariota ms empleado es la levadura
Saccharomyces cerevisiae, puesto que de sta se conoce mucho desde el punto de vista gentico (Madigan et
al. 1998), y se tiene un "catlogo" completo de genes y mutaciones, as como la identificacin del plsmido
2m , de origen natural, el cual constituye un excelente vector (Klug Cummings 1999). Saccharomyces
cerevisiae tiene un genoma de aproximadamente 2*107 pares de bases, contenidos en 17 cromosomas
lineares, el plsmido 2m tiene 6318 pares de bases y es comn encontrar muchas copias de l en cada clula
alrededor de 50 copias, por lo cual se constituye en un organismo ideal para la clonacin de DNA (Silva
1999).
Tomando como punto de partida la utilizacin de clulas de levadura como hospederos para clonaje
molecular, se han desarrollado otros mtodos para la produccin de DNA recombinante en eucariotas. Uno de
estos mtodos es la construccin de cromosomas artificiales de levadura, los cuales se usan como vectores
(Klug Cummings 1999).
Aparte de las levaduras, se han usado otros hospederos eucariticos para la clonacin de DNA forneo, como
ser hongos (Aspergillus sp. y Neurospora crassa con los ms usados) y algas unicelulares como
Chlamydomonas reinhardtir. Adems se han hecho algunas pruebas con cultivos de clulas animales y
vegetales (Silva 1999). Los cultivos de clulas animales abren un vasto campo de investigacin, muy
relacionado con la medicina, ya que al tener clulas humanas en cultivo, por ejemplo, sera mucho ms fcil
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estudiar fenmenos como el cncer. Sin embargo, el utilizar cultivos de clulas animales, y en cierta medida
cultivos vegetales, significa un costo muy elevado y menores posibilidades de manipulacin que con un
cultivo de bacterias (Madigan et al. 1998, Klug Cummings 1999).
Transfeccin y clonacin del DNA
Una vez que se aislado el fragmento a ser transportado, se lo ha insertado en el vector y se ha seleccionado un
hospedador adecuado, se debe proceder con la transfeccin del material gentico para que comience el
proceso de clonacin de DNA.
La transfeccin del DNA incluido en el vector se la debe hacer tomando en cuenta que la clula posee una
barrera que la limita y escoge selectivamente qu sustancias penetrarn dentro de ella, esta barrera es la
membrana celular. Para superar esta barrera, se han diseado las tcnicas de transfeccin de sustancias, que se
encargan de abrir poros en la membrana o inducir la endocitosis por vas naturales (Reina 2000). Estos
procedimientos se dividen en tcnicas de permeabilizacin celular, microinyeccin y tcnicas de transfeccin
propiamente dichas.
Tcnicas de permeabilizacin celular
Esta tcnica consiste en mantener a las clulas vivas por varias horas en una solucin con condiciones
diferentes a las del medio, para que la diferencia de concentraciones produzca la apertura de poros a todo lo
largo de la membrana celular. Un efecto parecido se obtiene con el uso de detergentes suaves que disuelven
parcialmente la membrana. Este sistema es conveniente y resulta econmico, pero presenta dos grandes
inconvenientes: la escasa duracin del ciclo celular viable, y la prdida incontrolable de componentes
celulares (Reina 2000).
Microinyeccin
Esta tcnica permite la introduccin de material ajeno a la clula mediante una micropipeta (Fig. 4), que se
controla bajo un microscopio de alta resolucin. Esta tcnica es muy sensible, y requiere de equipo muy
sofisticado y costoso, pero se obtienen buenos resultados, a pesar de no ser recomendable para el tratamiento
de varias clula ya que el trabajo se vuelve tedioso (Reina 2000).
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Fig. 4: Microinyeccin de material gentico a un cigoto de mamfero (Klug Cummings 1999).
Existen adems sistemas de microinyeccin biolgicos, como los virus, que inoculan su material gentico
dentro de la clula hospedadora, y es por ello que son muy usados como vectores.
Tcnicas de transfeccin
Estas tcnicas han sido desarrolladas especficamente para la introduccin de cidos nucleicos dentro de las
clulas, y han permito ampliar los conocimientos que se tenan sobre replicacin, regulacin gnica y el
funcionamiento de las clulas a nivel molecular, entre otras, que actualmente se aplican en el campo de la
gentica para la produccin de plantas y animales transgnicos (Cavener 1992; Kppeli Auberson 1998),
lneas celulares modificadas, y una de sus principales aplicaciones es la construccin de DNA recombinante.
La introduccin de una cadena de DNA recombinante en las que se ha situado una secuencia codificante, bajo
una secuencia de regulacin que se desea estudiar permite medir con facilidad las tasas de expresin gentica
en diferentes situaciones experimentales. Por otro lado, la introduccin de un plsmido con secuencias
codificante y reguladora permite la produccin de una protena deseada, en este caso se emplea a la clula
hospedadora como una "fbrica" para este producto (Reina 2000).
Para los dos casos vistos anteriormente puede ser importante la seleccin de las clulas que han recibido el
material gentico incorporado de las que no, para ello se puede realizar un cultivo en medio selectivo, puesto
que normalmente los plsmidos que se insertan incluyen tambin genes de resistencia a algunos antibiticos.
Las tcnicas de transfeccin se pueden dividir en tres grupos:
Mtodos qumicos:
son aquellos en los que se forman complejos para que la clulas sean capaces de aceptar o incorporar
una cierta molcula a su citoplasma, por medio del mecanismo normal de endocitosis. Para esta
finalidad se usan el fosfato de calcio, el DEAE dextrano y el mtodo de la lipofeccin, los dos
primeros se unen al DNA formando complejos asimilables por la clula, mientras que la lipofeccin
se basa en el recubrimiento de la molcula de DNA en un complejo de lpidos capaces de atravesar la
membrana.
Mtodos fsicos:
son aquellos en los que se produce una introduccin mecnica del DNA, como la microinyeccin (que se vio
anteriormente) o la electroporacin, que consiste en aplicar una carga elctrica al medio para forzar la apertura
de poros de membrana por donde penetran las sustancias.
Clonacin de DNA
Una vez que se ha realizado el proceso de transfeccin comienza la etapa de la clonacin de DNA dentro de la
clula hospedadora. Este proceso es diferente en procariotas que en eucariotas, y por ello se vern ambos
casos por separado.
Clonacin en procariotas: En las clulas procariotas como E. coli el proceso de clonacin de cidos nucleicos
se da una vez que se obtienen los organismos recombinantes, a partir de los cuales se obtienen clones por
simple divisin. Para ello se seleccionan las clulas que si recibieron el DNA forneo mediante el vector, y se
12

las asla en un nuevo medio de cultivo, dndoles condiciones ideales para que crezcan y se reproduzcan. Esta
seleccin es un proceso que requiere cuidado y existen varias tcnicas para hacerlo. Uno de estos mtodos es
la seleccin rpida, en la que se eliminan a los no mutantes en un medio selectivo (Smith Wood 1998), otro
mtodo frecuentemente usado es el de rastreo o cribado (Klug Cummings 1999), que consiste en separar a los
organismos mutantes de acuerdo a la caracterstica que se ha introducido, este mtodo fundamentalmente se
aplica cuando se usan plsmidos como vectores. El mtodo de rplica tambin se usa para este efecto, siendo
una variacin de la seleccin rpida, puesto que consiste en tomar una "rplica" (Fig. 5) de la placa original y
sembrarla en un medio selectivo.
Fig. 5: Tcnica de produccin de rplicas para aislar mutantes (Klug Cummings 1999).
Clonacin en eucariotas: En algunos eucariotas "inferiores" como la levadura Saccharomyces cerevisiae se

pueden aplicar los mismos mtodos que se usan en la seleccin de procariotas mutantes, mientras que para
hospederos ms "avanzados", como ser tejidos vegetales se usan tcnicas de complementacin, usando una
cadena de DNA complementario (DNAc), en el cual se da una seleccin de los mutantes mediante la
aplicacin de enzimas de restriccin (Smith Wood 1998).
La clonacin de DNA en clulas mutantes tambin puede evidenciarse mediante el uso de la tcnica de la
reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando cebadores especficos que van a reaccionar con un tipo
especfico de secuencia, y permiten distinguir dos tipos celulares distintos en base a sus caractersticas
genticas (Olmos et al. 1999, Klug Cummings 1999).
APLICACIONES DE LA TECNOLOGA DE DNA RECOMBINANTE EN LA ACTUALIDAD
Las aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante estn revolucionando el mundo moderno, puesto que
stas van desde el diseo de nuevos medicamentos y curas para enfermedades hasta la produccin de plantas
mejoradas, pasando por un amplio espectro de aplicacin industrial, adems de contribuir a la biologa y a la
gentica con una mayor comprensin de los mecanismos moleculares que operan en los sistemas vivos.
Utilidad y aplicabilidad de la tecnologa de DNA recombinante en el estudio gentico
La posibilidad de introducir secuencias forneas de DNA al genoma de una clula, para que sta lo exprese
como si fuera suyo ha revolucionado el estudio de la gentica es muchos aspectos, ya que ha permitido
entender mejor cmo se dan los mecanismos de regulacin y expresin gnica, y por la misma va se han
mejorado las tcnicas de mapeo y cartografa de genes.
13

La construccin de genes artificiales tanto en procariotas como en eucariotas (Griffiths et al. 1998) ha sido un
punto de partida muy importante para comprender la dinmica de la informacin gentica en los sistemas
vivos, ya que se ha visto que los diferentes tipos celulares se diferencian en la expresin de un mismo material
gentico, lo cual produce un resultado distinto cada vez. Esta tcnica tambin ha sido el medio para la
deteccin y comprensin de varias enfermedades genticas.
Esta tcnica se est usando actualmente para la cartografa de genes humanos, que dado el tamao y la
complejidad de este genoma, es una tarea ardua y morosa si se la realiza con las tcnicas tradicionales de
mapeo gentico por medio de frecuencias de recombinacin, siendo adems este mtodo impreciso por la
influencia de la interferencia.
La deteccin de enfermedades genticas y otros problemas relacionados se ha visto obstaculizada por la
imprecisin de las tcnicas tradicionales de cartografa, pero hoy en da es posible efectuar estos anlisis con
mayor precisin utilizando como marcadores a los RFLP (polimorfismos de longitud fragmentos de
restriccin), los cuales se producen por la accin de diferentes enzimas de restriccin, y estos fragmentos son
altamente especficos y cualquier variacin da la posibilidad de detectar mutaciones, ya sean stas de carcter
mendeliano o no. Incluso esta tcnica puede ser empleada para el estudio del ligamiento de genes, ya que si se
construyen familias de RFLP en varias generaciones es posible incluso detectar genes completamente ligados,
lo que a veces no se puede hacer con las tcnicas tradicionales pues no se pueden diferenciar de los genes no
ligados (Klug Cummings 1999).
Otra ventaja de la tecnologa de DNA recombinante es que abre la posibilidad de realizar mutaciones
direccionales (Griffiths et al. 1998), que a diferencia de las mutaciones naturales, que ocurren de una manera
aleatoria, permiten analizar una caracterstica en particular, sin importar la complejidad o el comportamiento
del organismo a diferentes condiciones.
Adems la posibilidad de realizar mutaciones dirigidas reduce al mximo el sesgo que representan sobre los
resultados las mutaciones adicionales no detectables que se puedan dar en el proceso de induccin de
mutagnesis por tcnicas fsicoqumicas.
La produccin de cromosomas artificiales ha abierto las puertas a un campo antes poco comprendido por los
cientficos: la regulacin de la expresin gentica. Hasta hace algunos aos todava no se tena claro el
proceso o los procesos por los cuales una sola clula inicial daba lugar a diferentes tipos celulares, y cmo un
mismo genoma poda codificar diferentes protenas en cada uno de estos tipos celulares. La introduccin de
cromosomas artificiales en estos distintos tipos celulares ha llevado a comprender y evidenciar el mecanismo
de regulacin de esta expresin, y estos aplicacin ha sido tambin un importante punto de partida para
verificar la existencia y comprender el funcionamiento de las secuencias de regulacin de genes y los
mecanismos por los cuales actan los interruptores moleculares (Tjian 1995, Fishel 1998). Estos estudios
tambin han ayudado de cierta manera a comprender mejor el funcionamiento de varias enzimas relacionadas
con la replicacin y reparacin de cidos nucleicos, como la enzimas de restriccin y las polimerasas.
Adicionalmente, la posibilidad de producir grandes cantidades de una protena por medio de cultivos
bacterianos de clulas modificadas, ha llevado a reducir notablemente los costos de enzimas industrializadas,
que se usan para la mayora de los estudios en esta rama de la biologa.
Aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante en el campo de la medicina y la salud
La medicina y la salud son quiz los campos de aplicacin ms beneficiados con el descubrimiento y la
implementacin de la tecnologa de DNA recombinante, puesto que sta ha permitido detectar y buscar
alternativas y tratamientos para numerosas enfermedades, la deteccin de enfermedades genticas, la
produccin de sustancias y medicamentos revolucionarios, y como complemento a esto se han desarrollado
tambin terapias genticas para varios males que aquejan diariamente a miles de personas.
14
Produccin de sustancias tiles y medicinas

Esta es una de las primeras aplicaciones que se encontr para la tecnologa del DNA recombinante en el
campo de la medicina. La produccin de protenas, enzimas, vitaminas y cidos nucleicos por medio de
bacterias mutantes (Hashimoto Ozaki 1999) ha permitido la obtencin de estas sustancias en grandes
cantidades a precios mucho ms bajos, hacindolas ms accesibles al pblico.
El ejemplo clsico de esto y una de las mayores producciones bacterianas por DNA recombinante es la
produccin de insulina en cepas de E. coli modificadas (Bohinski 1991). La insulina es una hormona de
carcter proteico que se sintetiza en los islotes de Langerhans en el pncreas de los mamferos (Eckert et al.
1998), la cual se encarga de regular los niveles de azcares en el organismo mediante un complejo sistema de
cascadas enzimticas. La diabetes es una enfermedad que afecta a millones de personas en el mundo, y
produce una deficiencia en la sntesis de esta protena, por lo cual a los enfermos de diabetes se les debe
administrar una dosis diaria de insulina. Hasta hace algunos aos esta insulina se extraa de otros mamferos y
su costo era elevado, pero la tecnologa de DNA recombinante permiti introducir el gen que la codifica en el
genoma de E. coli, la cual produce esta protena como si fuese propia, incluso se ha visto que en algunos
cultivos sta llega a constituir un 40% de la carga proteica total de la clula. Entonces, un cultivo celular de
reducido costo puede producir una gran cantidad de insulina, hacindola ms accesible para los enfermos que
padecen diabetes.
Posiblemente el segundo producto de esta naturaleza en la lista de ventas es la hormona humana del
crecimiento (Smith Wood 1998), la cual se produce en grandes cantidades por medio de cultivos bacterianos y
se usa para el tratamiento del enanismo. Cuando existe un problema en el suministro de esta hormona por
parte de la hipfisis el organismo sufre un crecimiento reducido y en algunos casos atrofia de ciertos tejidos.
Antiguamente se extraa esta hormona en mnimas cantidades de cadveres, pero sta era insuficiente incluso
para pretender hacer un tratamiento a un solo individuo. Hoy en da esta hormona se produce a escala
industrial en cepas modificadas de E. coli.
La capacidad de hacer que bacterias modificadas produzcan ciertas sustancias en cantidades ha marcado una
revolucin en el campo de la medica farmacutica, puesto que hizo factible la produccin en masa de
medicamentos, a los que se aaden ciertas vitaminas, factores de crecimiento y/o protenas de escasa
disponibilidad en la naturaleza. Incluso se han hecho pruebas modificando bacterias para alterar sus vas
metablicas para que stas transformen sus propios productos metablicos en sustancias especficas
(Hashimoto Ozaki 1999), esto se hace por medio de la adicin de enzimas especficas al genoma, las cuales se
encargan de modificar los productos metablicos, por ejemplo se pueden producir aminocidos a partir de
intermediarios del ciclo de Krebs aadiendo genes de transaminasas. Esta tecnologa puede aplicarse por dos
vas, la primera es la conversin directa, e la que una enzima especfica transforma un determinado sustrato
para dar lugar a un solo producto, la segunda estrategia consiste en emplear rutas metablicas completas y
alterarlas para este mismo fin.
Klug Cummings (1999) hacen referencia a la produccin de productos farmacuticos en huspedes animales.
Esta es una aplicacin de la biotecnologa mediante la cual es posible producir ciertas sustancias aadiendo el
o los genes que la(s) codifican en las clulas de algn animal. Recientemente se ha podido incorporar con
xito las principales protenas de la leche materna a la leche de las vacas, este proceso se ha ido produciendo
poco a poco, introduciendo una protena por generacin, y actualmente se cran vacas en Estados Unidos,
cuya leche contiene cerca de un 80% de las protenas de la leche materna humana. Este sin duda, sera un
excelente sustituto a las leches maternas artificiales que se comercializan actualmente.
Deteccin y tratamiento de enfermedades genticas
15

Las tcnicas de clonacin selectiva de DNA, entre las que se incluye el DNA recombinante, permiten el
estudio de muchas enfermedades genticas. El aislamiento y clonaje de un determinado gen responsable de
una enfermedad gentica provee informacin importante para disear estrategias de mitigacin del mal o
incluso puede dar las luces para la produccin de una cura. Dos de las enfermedades genticas que se han
estudiado mediante la tcnica de RFLP son la neurofibromatosis y el sndrome de Marfan.
La neurofibromatosis afecta a 1 de cada 3000 individuos y produce una variedad de defectos en el sistema
nervioso, que son responsables en gran medida de los problemas de aprendizaje y de la aparicin de tumores
benignos en el cerebro. Esta enfermedad se produce por un alelo autosmico y es de carcter recesivo. La
cartografa de este gen por los mtodos tradicionales resulta una tarea prcticamente imposible, puesto que el
estudio de las familias de genes relacionadas con este mal representara una cartografa completa de los 22
cromosomas humanos, puesto que tienen una elevada tasa de mutacin espontnea.
Mediante la tcnica del RFLP se ha podido establecer una cartografa parcial del NF1, por medio de la
elaboracin de un mapa de exclusin (en este tipo de mapa, se toman posibilidades y se las va descartando de
acuerdo a las evidencias experimentales obtenidas), posteriormente se pudo conseguir la secuencia completa
de aminocidos y la secuencia gentica de este gen, lo cual permiti identificar a la protena neurofibromina,
responsable de a prdida de memoria y de los tumores. Ya una vez que se identific y caracteriz esta
protena, los cientficos y los mdicos han emprendido una nueva investigacin en busca de un medicamento
que pueda minimizar sus efectos.
Otro candidato ideal para este estudio es el sndrome de Marfan, que afecta a varios rganos del cuerpo,
produciendo en la mayora de los casos, una muerte por ruptura de los principales vasos sanguneos
(Cummings 1995). El gen responsable de esta enfermedad fue identificado mediante la tcnica de los genes
candidatos. Esta tcnica es una alternativa de cartografa de genes, que consiste en analizar protenas, enzimas
u hormonas que se cree son responsables de la enfermedad, y en base a su secuencia de aminocidos se eligen
genes que se piensa son los que codifican estas protenas, estos son los genes candidatos, una vez que se ha
seleccionado un grupo de genes candidatos se va haciendo una evaluacin ms profunda y descartando genes,
hasta hallar el gen responsable ms probable. El aislamiento y el clonaje de estos genes se lo realiza en base a
los principios detallados en la primera parte. La desventaja de este mtodo es que se puede aplicar solamente
si se tiene informacin previa del tema, no es til para estudios que comienzan desde cero.
Este anlisis ha reflejado que los problemas que conlleva el sndrome de Marfan estn relacionados a
problemas con la protena fibrilina, la cual es parte importante de las membranas oculares, los huesos y los
vasos sanguneos, y es por eso que los que padecen esta enfermedad tienen problemas de vista, huesos y
arterias dbiles y usualmente mueren por un aneurisma al realizar un esfuerzo muy fuerte.
Los dos ejemplos anteriores muestran la aplicacin de las tcnicas de DNA recombinante para el estudio de
enfermedades en adultos afectados, pero es posible detectar estas enfermedades antes del parto?. En
respuesta a esta pregunta se han desarrollado los mtodos de deteccin prenatal de enfermedades. Existen dos
mtodos principales para este efecto: a amniocentesis y la extraccin de vellosidades corinicas. El primero se
basa en la extraccin de una muestra del lquido amnitico que protege al feto dentro las membranas
embrionarias, y el segundo e la extraccin de una pequea muestra de tejido del corion, una de las membranas
de proteccin embrionaria (Klug Cummings 1999).
Ya sea con la muestra de lquido amnitico o con la de tejido de corion, se procede a hacer una serie de
anlisis bioqumicos de las clulas, que inicialmente dan informacin acerca del sexo, tipo de sangre y otra
informacin bsica del feto. Posteriormente, el material gentico de estas clulas puede ser sometido a
enzimas de restriccin y mediante tecnologa de DNA recombinante se hacen cultivos con genes de inters (en
este caso, la enfermedad a detectar debe ser conocida y debe ser posible aislar su secuencia), para ver el efecto
que produce en estos, y de esta manera se determina si el feto padece o no una determinada enfermedad (Fig.
16

6).
Fig. 6: Tcnica de amniocentesis, para detectar enfermedades genticas y realizar anlisis bioqumicos en el
feto (tomado de Klug Cummings 1999).
Las enfermedades que ms comnmente se detectar prenatalmente son la talasemia y la anemia de clulas
falciformes, porque de stas ya se sabe mucho y se tiene un conocimiento previo de dnde se ubican, y por
consiguiente es fcil aislar los fragmentos de DNA para producir el cultivo en un hospedero y determinar el
comportamiento que tendr esa seccin.
La deteccin de enfermedades genticas se ha revolucionado con la implementacin mdica de la tcnica de
nucletidos especficos y rastreo gentico (Klug Cummings 1999). Esta tcnica, cuya abreviatura es ASO,
utiliza en condiciones adecuadas, una sonda que se denomina oligonucletido especfico de alelo (de esta
frase se deriva la abreviatura ASO, en ingls) el cual hibridar slo con su secuencia complementaria y no con
otras secuencias, aunque stas varen slo en un nucletido. Para rastrear enfermedades como la anemia de
clulas falciformes, se utiliza esta tcnica combinada con anlisis de PCR, ya sea este tradicional o una
modificacin especfica, tal como un PCR de baja temperatura (Iakobashvili Lapidot 1999). En este mtodo se
produce una extraccin de DNA por lisis en los glbulos blancos de la sangre, y posteriormente este DNA es
desnaturalizado por calor. Luego se produce una amplificacin del gen en cuestin (para el caso de la anemia
falciforme, el gen de la bglobina, por ejemplo) mediante la tcnica de PCR. Se coloca una gota del DNA
amplificado en un filtro, y se hibridiza con un ASO, y luego se lee el resultado en los filtros, de haber
hibridacin la molcula resultante es demasiado grande para atravesar los poros del filtro.
Terapia gnica
El rastreo y caracterizacin de los genes que producen las enfermedades genticas desde un principio tuvo la
finalidad de ofrecer un tratamiento a estas enfermedades, de esto surge el concepto de terapia gnica, la cual
consiste en transferir alelos normales a un individuo enfermo para eliminar su problema. Ya se han hecho
varios experimentos en ratones y otros animales, en los cuales se ha logrado exitosamente restaurar el
funcionamiento normal de un alelo por la insercin de la cadena correcta mediante un vector. El que hayan
resultado exitosos los ensayos realizados en ratones abre la mente a creer que en unos aos ms este tipo de
terapia pueda ser usada para curar las cientos de enfermedades genticas de los humanos (Griffiths et al. 1998,
Klug Cummings 1999).
17
La terapia gnica tiene ya una cierta historia, en un principio se aplicaba en humanos, inoculando al
organismo dosis significativas de la protena faltante o defectuosa, por ejemplo, se administraban fuertes dosis
de insulina a enfermos de diabetes, con la finalidad de que una elevada concentracin de la protena funcional
restaure la secuencia gentica. Desafortunadamente este tipo de terapia gnica no tuvo xito, y los estudios
derivados a investigar el o los mecanismos necesarios para el reemplazo de una secuencia defectuosa por una
normal, mediante el uso de vectores y tcnicas de DNA recombinante.
Este proceso todava est en fase experimental y an no hay datos sobre ensayos exitosos en humanos, todas
las prueba realizadas se han hecho en invertebrados como Drosophila y en mamferos pequeos como Mus
musculus. Si bien el proyecto genoma ya ha dado una versin preliminar de la secuencia de los 23
cromosomas humanos, y las tcnicas de transferencia de genes estn cada da ms avanzadas, todava resulta
difcil aislar genes especficos sanos en humanos, y ms difcil an el implantarlos en el sitio correcto, en un
organismo enfermo. El tamao y la complejidad del genoma hacen de sta una ardua tarea.
Lucha contra el cncer
Anualmente millones de personas mueren de cncer. Esta enfermedad ha sido extensamente estudiada por los
cientficos, pero an no se han podido dar curas para este mal, pues todava no se tiene claro cmo se origina
exactamente, y cules son los mecanismos que operan para su tratamiento. Hasta ahora se sabe que el cncer
es producto de una mutacin en un sitio importante del genoma, que ocasiona que las clulas se reproduzcan
sin control generando tumores y destruccin de tejidos. Se han hecho muchos estudios a nivel molecular y se
han lanzado cientos de hiptesis, pero todava no se tiene nada concreto que permita disear una cura.
Uno de los estudios ms interesantes al respecto se lo ha realizado aislando y estudiando los factores que
determinan la muerte celular, pero investigaciones recientes han mostrado que la solucin puede ser ms
simple todava, Fraser (1994) observ que en algunos organismos existen enzimas denominadas
endoexonucleasas aisladas de E. coli, que se encargan de la reparacin del DNA y la muerte celular. Esta
quiz sea la respuesta al cncer, puesto que esta enzima bifuncional es capaz de quitar o aadir nucletidos al
DNA para corregir errores, y si fuera posible introducir el gen que la codifica en las clulas cancerosas, se
abre la oportunidad de una reparacin in vivo de la secuencia mutada, y de esta manera detener e incluso tal
vez, revertir el efecto del cncer en uno o ms tejidos.
Si bien estas enzimas se han aislado inicialmente en E. coli y han sido ampliamente estudiadas por medio de
la tecnologa de DNA recombinante, y otros mtodos como el PCR, se ha encontrado evidencia que existen
enzimas parecidas a estas en Saccharomyces cerevisiae y se ha dejado abierta la posibilidad de que existan
algunas enzimas parecidas a estas en los mamferos.
Si llegara a concretarse un estudio al respecto y ste revelara la factibilidad de introducir el gen que codifica
las endoexonucleasas en clulas humanas, posiblemente la lucha contra el cncer habra encontrado un
remedio, y la solucin a este problema sera aplicar una terapia gnica de inclusin de DNA forneo para
reparar el material daado.
Aplicaciones forenses
La tecnologa de DNA recombinante ha pasado a ser un fuerte aliado de la medicina forense y la investigacin
criminal. Caractersticas genticas especficas estn siendo usadas como pruebas contundentes en cientos de
juicios hoy en da, puesto que basta una clula de donde se pueda aislar DNA para identificar a una persona,
con menos de un 1% de error. Esta tcnica se viene usando desde hace algunos aos para pruebas de
paternidad, problemas de inmigracin (para determinar razas) y como una huella molecular para identificar
criminales. No obstante, estos procedimientos han levantado fuertes crticas ticas, ya que en algunos casos
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estos resultados llevan a discriminaciones raciales y a problemas familiares.
Actualmente se usan los minisatlites o VNTR (secuencias muy repetitivas en tandeo) como huellas
moleculares (Smith Wood 1998, Klug Cummings 1999) puesto que al ser stas altamente variables, la
combinacin de los distintos satlites y la posicin de cada uno es una caracterstica nica de cada persona, la
cual no se puede modificar, ocultar o borrar.
La tecnologa de DNA recombinante y las plantas: aplicaciones en la agricultura
La aplicacin del DNA recombinante en la agricultura ha tenido una gran aceptacin por parte de los grandes
productores, puesto que esta revolucionaria tcnica permite obtener especies transformadas a las cuales se les
aaden o acentan caractersticas especiales, como resistencia a herbicidas, mayor produccin de vitaminas,
etc.
Actualmente hay una gran cantidad de plantas que se pueden transformar, entre estas estn los ctricos, que
son los grupos en los que se han hecho ms estudios y pruebas, muchas de ellas exitosas, todava se sigue
tratando de transformar los cereales como el trigo y el maz, pero an no se ha tenido xito. Lo cultivos de
papa, soya, rbano y tabaco, sin embargo, son fciles de transformar y se han hecho muchas pruebas
introduciendo material gentico usando como vector a la bacteria Agrobacterium tumefaciens, que forma
asociacin naturalmente con estas plantas (Smith Wood 1998).
La bacteria Agrobacterium tumefaciens posee un plsmido inductor de tumores (Ti) que produce un
crecimiento tumoroso o callo en las plantas (Smith Wood 1998). Este callo es un conjunto de clulas vegetales
no diferenciadas, que producen unas sustancias qumicas llamadas opinas, de las cuales se alimenta esta
bacteria. El proceso de DNA recombinante para este caso sigue la siguiente dinmica: el fragmento de DNA a
incluir en la planta es aislado y lo inserta en la regin de homologa del plsmido Ti, luego se induce a la
formacin del callo por accin de las bacterias y stas introducen en plsmido con el DNA forneo en un
cromosoma de manera aleatoria en las clulas del callo. Posteriormente las plantas se regeneran a partir del
callo, expresando el material gentico introducido (Fig. 7).
Este mtodo ha servido para introducir una gran variedad de genes en estas plantas, uno de los experimentos
ms conocidos es la planta de Nicotiana tabacum con genes de luciferasa, la cual brilla en la noche. Esta
planta luminiscente es sin embargo slo un atractivo visual, puesto que no tiene ninguna utilidad, y detrs de
la polmica que ha levantado la construccin de esta planta, estn muchas otras a las que s se les ha hecho
modificaciones tiles, como frutos que se pudren ms lentamente, plantas que llevan vacunas o plantas
resistentes a plagas y herbicida.
19
Fig. 7: Tcnica de produccin de plantas transgnicas por medio de la formacin de callos con Agrobacterium
tumefaciens (Klug Cummings 1999).
20
Gramneas resistentes a herbicidas

Uno de los ms grandes problemas que enfrentan los agricultores es la aparicin de malas hierbas en sus
campos de cultivo. Usualmente estas hierbas se combaten usando sustancias qumicas muy variadas,
denominadas genricamente herbicidas. Estos herbicidas, sin embargo, tambin afectan a las gramneas del
cultivo y las matan, por lo cual su aplicacin es sumamente riesgosa, puesto que adems de matar las hierbas
indeseables se matan las plantas de cultivo.
Mediante la tcnica del DNA recombinante se han producido gramneas resistentes a algunos herbicidas como
el glifosfato. Esto se ha logrado mediante modificaciones que incrementan la sntesis de la EPSP sintetasa,
encargada de sintetizar aminocidos, esta enzima se encuentra en los cloroplastos y es la primera en verse
afecta por el glifosfato, pero al aumentar la sntesis de sta, el efecto de los herbicidas es mnimo, puesto que
se puede continuar con la sntesis de aminocidos de una manera prcticamente normal (Klug Cummings
1999).
Investigaciones similares se han hecho en este campo, para aadir a las plantas factores de resistencia contra
enfermedades virales (como el virus mosaico del tabaco), contra plagas de insectos e incluso contra sequas
prolongadas. Actualmente se trabaja mucho en este campo y prximamente los centros de abastecimiento,
tales como supermercados, ofrecern a la venta productos transgnicos como estos.
Plantas y vacunas transgnicas
Otra de las aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante en las plantas es la produccin de plantas
transgnicas con vacunas. Las formas tradicionales de produccin de vacunas son la utilizacin de capas
inactivadas o atenuadas de la bacteria o virus. La tecnologa del DNA recombinante ha permitido el desarrollo
de vacunas genticas o tambin llamadas vacunas de subunidad, en las que se producen grandes cantidades de
una protena de superficie del virus o la bacteria contra la cual se desea hacer la vacuna, y esta protena va a
generar los anticuerpos necesarios para hacer frente a la enfermedad.
La aplicacin de esta tcnica de biotecnologa funciona as: se asla el fragmento de DNA que codifica la
protena de superficie que ir a constituir la vacuna de subunidad, se utiliza como vector el plsmido Ti de
Agrobacterium tumefaciens y se produce una planta recombinante a partir del callo formado (se sigue el
mismo proceso visto anteriormente), una vez desarrolladas las plantas, stas expresarn el antgeno contra la
enfermedad (Klug Cummings 1999). De esta manera se producen grandes cantidades de vacuna a costos
reducidos, y la administracin de la misma se hace ms fcil, puesto que estos vegetales podran ser
comercializados para su consumo normal, luego de una certificacin previa de los efectos colaterales que
pueda tener el consumo de estas plantas alteradas genticamente. Esta tcnica se ha aplicado con xito en la
produccin de antgenos para la hepatitis B en plantas de tabaco.
Todava falta hacer una gran cantidad de estudios en esta rea, pero las perspectivas actuales muestran una
interesante potencialidad a la produccin de vacunas de subunidad en plantas transgnicas, ya que esto abrira
la posibilidad de prevencin de muchas enfermedades mortales, para las cuales no se conocen vacunas
tradicionales, y adems deja abierta la posibilidad de una vacunacin por medio de los alimentos.
Cun seguro es consumir plantas transgnicas?
Si bien todos los ensayos y pruebas que se han hecho con plantas transgnicas han estado delimitados muy
claramente por un lmite de seguridad, existen razones para dudar de que el consumo de productos
transgnicos sea totalmente inocuo y esto deja abierta una pregunta que hacen Kppeli Auberson (1998):
21

Cun seguro es "suficientemente seguro" en la ingeniera gentica de plantas?. Estos autores plantean que si
bien se tienen todos los cuidados necesarios y se realizan los procedimientos de DNA recombinante de la
manera ms profesional y responsable posible, siempre existen factores naturales de variacin que escapan al
control de los investigadores y pueden resultar peligrosos para el consumidor.
Los productos transgnicos pueden resultan potencialmente txicos para el consumidor final, pues nunca se
sabe a ciencia cierta el efecto que pueden causar las mutaciones inducidas al individuo, las cuales pueden
derivar en la produccin secundaria de toxinas o incluso pueden llegar a producir enfermedades. Cuando se
asla un fragmento de DNA para ser incluido en una planta por medio de la tcnica de A. tumefaciens, el
investigador controla y predice el efecto primario que ocurrir con el campo, es decir, este efecto primario es
el fenotipo que se espera obtener con la modificacin, el mismo que ha sido muy bien delineado, con lmites
conocidos y cuyo efecto es predecible con un elevado grado de certeza.
Adems de este efecto primario, pueden presentarse uno o ms efectos secundarios, los cuales son los
fenotipos y reacciones inesperadas. Estos efectos secundarios se dan por muchas causas en los individuos
transgnicos, pero la principal explicacin es que las plantas son sistemas vivos con un genoma flexible y
dinmico, expuesto a otras mutaciones, cambios espontneos, fenmenos de recombinacin y errores en la
replicacin del DNA. Cualquiera de estos factores es capaz de generar un efecto secundario, que produzca un
fenotipo diferente al esperado, potencialmente daino.
Puesto que estos procesos de variacin, responsables de los efectos secundarios, son impredecibles y no estn
considerados dentro del estudio inicial, no se sabe exactamente cul es su efecto puesto que no se tiene un
conocimiento completo del cambio ocurrido a nivel molecular.
Otra causa de efectos secundarios es un defecto en el proceso de transfeccin del DNA forneo desde el
plsmido Ti (vector) hacia las clulas del callo, como ambos son sistemas biolgicos dinmicos sometidos a
constante variacin, a veces ocurre un desplazamiento en el rea de transferencia de material gentico y se
transfieren otros fragmentos a parte o en lugar del fragmento de inters, produciendo cambios no deseables.
Todos estos factores hacen de la ingeniera gentica en plantas un campo muy promisorio para el futuro, pero
potencialmente peligroso, y la comercializacin de productos transgnicos debera darse una vez realizados
estudios profundos de los impacto a la salud y el ambiente que estos vegetales modificados puedan causar.
Produccin de animales transgnicos mediante DNA recombinante
Si bien la aplicacin de la tecnologa de DNA recombinante para la produccin de animales transgnicos se
viene realizando desde hace algunos aos en los principales centros de investigacin cientfica del mundo,
todava se levanta polmica acerca de la tica y la manipulacin gentica de animales, y ms an de humanos.
Numerosos estudios realizados en animales transgnicos han permitido entender mejor la evolucin de los
sistemas de regulacin gnica (Cavener 1992), la mayor parte de estos estudios se han hecho en Drosophila
melanogaster y ratones de laboratorio. Dichos experimentos han sido un importante respaldo para las
investigaciones que trataron y todava tratan de dilucidar por completo el funcionamiento de las regiones de
control de los genes, y el cmo operan los promotores y los inhibidores de genes, y el papel que stos tienen
en la diferenciacin celular y la produccin diferencial de protenas de acuerdo a lo que se denomin un
subprograma de vida.
Ya no es un secreto para nadie, que en Estados Unidos se han producido vacas transgnicas, cuya leche
contiene adems protenas humanas, propias de la leche materna de esta ltima especie. Un reciente
documental del Discovery Channel mostr a estas vacas pastando como cualquier vaca normal, externamente
se ven idnticas a organismos normales, pero su genoma ha sido alterado para la produccin de protenas
22

adicionales. Este proyecto tiene miras de buscar sustitutos "naturales" (si cabe el trmino) para la leche
materna humana, pues se ha visto que los sustitutos sintticos que se comercializan actualmente pueden tener
efectos secundarios sobre los lactantes.
Chile es en este momento el segundo mayor productor de salmn del mundo, lo cual ha obligado a esta
industria a buscar nuevas alternativas para asegurar su produccin, protegiendo a los salmones de
enfermedades (Bioplanet 2000). En la actualidad son muchas las enfermedades que atacan a los salmones y
producen grandes prdidas econmicas a los productores de salmn, adems del efecto nocivo que tiene una
gran epidemia sobre el equilibrio de los ecosistemas. Actualmente no se conocen muchos tratamientos o
vacuna contra estas enfermedades, y los estudios realizados son an insuficientes como para proveer una
solucin por este lado.
Por ello, es que el Instituto Tecnolgico del Salmn, en Chile, ha planteado otra solucin: la biotecnologa.
Para este fin, la compaa chilena de biotecnologa Bios, ha desarrollado una serie de vacunas genticas
(Gurunathan et al. 2000) que permitan a los salmones adquirir resistencia contra estas bacterias, todava poco
conocidas. Este mtodo es altamente eficiente, puesto que la produccin de anticuerpos es alta desde un
principio y condiciona al organismo a estimular y reforzar su sistema inmunolgico. Bajo el lema "es mejor
prevenir que curar", se han desarrollado adems vacunas genticas para enfermedades virales potenciales,
asegurando de esta manera a produccin de salmn de la industria chilena.
Sobre estos mtodos de vacuna gentica, sin embargo, todava faltan realizar estudios de efectos secundarios
que puedan resultar potencialmente txicos al consumidor final.
La tecnologa de DNA recombinante y el ambiente: bioremediacin
Los problemas de contaminacin actualmente estn recibiendo gran atencin por parte de las autoridades
ambientales en el mundo entero. Si bien los problemas de contaminacin no se pueden revertir, en la
actualidad existe otra alternativa: la bioremediacin. Bioremediacin se define como el proceso de
descontaminacin mediante la induccin de bacterias capaces de degradar las sustancias contaminantes. Si
bien esta tcnica tiene apenas 10 aos de antigedad e investigacin, hoy en da son muchas las aplicaciones
que se le da. Se emplea bioremediacin para la degradacin de petrleo, de metales pesados, de insecticidas e
incluso para combatir radiacin.
La bioremediacin puede aplicarse usando bacterias silvestres que tengan la capacidad de degradar el
contaminante con el que se est tratando, sin embargo, en muchos casos se deben construir bacterias
mediante tcnicas de DNA recombinante para la remediacin de un contaminante determinado.
Si bien se conocen cerca de 70 gneros de bacterias silvestres que pueden ser usadas para bioremediacin, la
produccin de bacterias modificadas va ganando terreno e importancia da a da. Numerosos estudios
(Keasling Bang 1998, Timmis Pieper 1999, Coates Anderson 2000, Pieper Reineke 2000, Sayler Ripp 2000)
ha utilizado bacterias modificadas genticamente para la descontaminacin de ambientes, con un impacto
mnimo a largo plazo, puesto que al ser stos descontaminadotes agentes biolgicos, reducen y controlan su
poblacin luego de cumplir su funcin, y viven en los ambientes junto con el resto de la microflora.
En muchos casos, es necesaria la construccin de estas cepas recombinantes, puesto que todava no se
conocen organismos silvestres capaces de efectuar algunos tipos de degradacin. Coates Anderson (2000)
describen la construccin de bacterias recombinantes para la degradacin anaerbica de contaminantes
ambientales, proceso an poco estudiado y poco comn en la naturaleza (la mayora de los procesos de
degradacin de contaminantes requieren de oxgeno). Estudios como el de Katja Top (1997) sugieren una
transferencia de genes a los microorganismos del suelo para acentuar las caractersticas de biodegradacin en
cepas nativas de ese medio.
23
Quiz uno de los casos ms llamativos por su importancia, es el propuesto por Chen Wilson (1997) para la
construccin de cepas de E. coli modificadas capaces de bioremediar mercurio. Todava no se han encontrado
bacterias silvestres capaces de remediar contaminacin por este metal, pero si bacterias que pueden hacerlo
menos txico para el ambiente, cambindolo de forma a complejos orgnicos. Sin embargo, la posibilidad de
construccin de una cepa capaz de bioremediar este metal pesado, abre las puertas al tratamiento de reas
afectadas por la industria, en especial la minera, que vierte grandes cantidades de residuos con mercurio a
suelos y aguas.
Campo de aplicacin del DNA recombinante en la industria
En la actualidad existen muchas aplicaciones industriales para la tecnologa de DNA recombinante. Los
productos que se generan a partir de organismos recombinantes son muchos y tienen diferentes finalidades,
que van desde la industria vitcola hasta la produccin de medicamentos.
El microorganismo protagonista en la industria por DNA recombinante es la levadura Saccharomyces
cerevisiae, que al ser un organismo eucariota simple del cual se tiene ya un gran conocimiento, se facilita la
produccin de sustancias mediante su maquinaria biosinttica. Actualmente se usan cepas de levadura
modificadas para la produccin a gran escala de taumatina y quimosina (Smith Wood 1998). La taumatina es
una protena de origen vegetal, unas 200 veces ms dulce que la sacarosa y es usada comercialmente en
edulcorantes y como aditivo para muchos alimentos. La quimosina, tambin conocida como renina, es una
protena que se utiliza en grandes cantidades para la produccin de queso.
Otra aplicacin de levaduras modificadas genticamente est dada en la industria de los vinos
(PrezGonzlez et al. 1993). Se han construido cepas de levadura recombinante que expresen el gen de la b
(1,4)Endoglucanasa, una enzima que reacciona con los azcares del mosto, dndole al vino un aroma a
frutas ms intenso y agradable. Esta modificacin de la levadura del vino, favorece al proceso de micro
vinificacin, induciendo una fermentacin ms rpida del mosto, sin alterar la calidad y el sabor del vino. El
proceso de modificacin de esta cepa de levadura es complejo y requiere de equipo sofisticado (ver
PrezGonzlez et al. 1993 para mayor informacin), puesto que se debe asegurar el correcto funcionamiento
de la cepa ya que su aplicacin es de gran escala, y un error en la construccin de la cepa puede representar
prdidas millonarias para la industria, pero su correcta aplicacin tambin genera un movimiento econmico
significativo.
Como ya se vio en la parte de aplicaciones mdicas, las bacterias recombinantes se usan ampliamente para la
produccin de ciertos medicamentos y enzimas a gran escala. Este mtodo de produccin tambin ha
revolucionado la industria farmacutica, puesto que desde hace algunos aos que este mtodo ha reemplazado
la produccin tradicional de insulina, enzimas, hormonas y otros, lo cual ha llevado a una masificacin de su
uso y una considerable reduccin de costos. Si se compara el costo y rendimiento de la extraccin de
microlitros de hormona de crecimiento de cadveres, con los volmenes diarios que puede proveer un cultivo
de E. coli recombinante ya diferencia es abismal: gracias a la industrializacin mediante tecnologa de DNA
recombinante, millones de personas en el mundo pueden acceder ahora a tratamientos mdicos con este tipo
de protenas.
El campo de la investigacin gentica y la biologa en general, tambin se han visto favorecidas con la
produccin de gran escala y menor costo de protenas y enzimas necesarias para las investigaciones que se
realizan en los diferentes campos de estas ciencias.
Discusiones y conclusiones
La tecnologa de DNA recombinante es una tcnica de reciente aplicacin, que a tenido un gran impacto en la
24

ciencia y diversos aspectos de la vida cotidiana.
Los principios de esta metodologa se han ido perfeccionando con el tiempo, los estudios que se han ido
realizando sobre vectores y hospederos han abierto las puertas al uso de nuevos mtodos de aplicacin de este
principio, tales como el desarrollo de cromosomas artificiales, los mismos que han permitido entender mejor
los sistemas de regulacin gnica y la expresin.
La gentica se ha visto especialmente beneficiada por el desarrollo de esta tecnologa, ya que ha permitido el
estudio de mecanismos y procesos complejos, que de otra manera habran tomado dcadas en ser dilucidados.
La gentica y la biotecnologa son dos ramas muy relacionadas que se benefician mutuamente, el beneficio
que da la biotecnologa a la gentica se lo acaba de explicar, y a su vez la gentica beneficia a la
biotecnologa, al propiciar el desarrollo de nuevas tcnica y procedimientos en respuesta a la necesidades de
los investigadores.
La capacidad de aislar fragmentos especficos de DNA e insertarlos dentro de otro organismo para su
expresin y su clonacin, ha permitido y permitir la investigacin en genes. En la actualidad esta tcnica
permite la deteccin de enfermedades genticas tanto en individuos adultos como en individuos prenatales,
mediante una combinacin de la tecnologa de DNA recombinante con la tcnica de PCR.
Este cambio dinmico en la tecnologa de DNA recombinante ha propiciado su aplicacin en un conjunto
heterogneo de campos, como ser la industria, la agricultura y la bioremediacin. La posibilidad de crear
organismos recombinantes que expresen genes ajenos a su genoma hace que se puedan masificar procesos
industriales a costos ms bajos, que se puedan crear plantas transgnicas que lleven vacunas, vitaminas o que
tengan una mayor resistencia a la putrefaccin, aunque la seguridad de consumir alimentos transgnicos est
todava en tela de juicio. De la misma manera, hoy en da se producen animales transgnicos en los que se
experimentan terapias gnicas, tambin se producen animales con gran resistencia a enfermedades o que
puedan producir protenas humanas en su leche.
La medicina actual ha experimentado un gran desarrollo desde que se pueden producir protenas y otras
sustancias tiles en gran cantidad y a bajos costos por medio de cultivos bacterianos. Se han planteado
terapias gnicas que permitan sustituir los alelos defectuosos que producen las ms de 500 enfermedades
hereditarias conocidas, por alelos normales para combatir estos males que acechan a millones de personas en
el mundo.
Esta tecnologa de DNA recombinante ha abierto las puertas a la aplicacin masiva de la bioremediacin,
puesto que al poder crear organismos transgnicos capaces de degradar contaminantes, con un efecto
ambiental colateral mnimo, se puede hacer frente de una manera ms efectiva a los problemas ambientales de
contaminacin, ya sea esta por hidrocarburos, metales pesados o radiacin.
Si bien la aplicabilidad de la tecnologa de DNA recombinante ha llegado a diversos campos y ha dado
grandes resultados, todava se discute cun seguro es el utilizar estos productos alterados genticamente,
porque el investigador controla y determina los efectos primarios que se vayan a producir, pero escapan de su
control los efectos secundarios que se puedan producir por los procesos naturales de variacin propios de los
seres vivos, y una alteracin significativa de carcter aleatorio en los organismos transgnicos de uso
comn (alimentos, cepas industriales, etc.) representara un dao econmico y humano muy grande si no se
toman las previsiones del caso.
Tambin se discute mucho acerca de la tica de experimentar con humanos, puesto que el factor intrnseco de
variacin puede dar resultados inesperados, sin embargo esta experimentacin tambin puede conllevar
aspectos positivos como la posibilidad de encontrar una cura para el cncer.
25

En sntesis, la tecnologa de DNA recombinante es una de las principales herramientas de biotecnologa con la
que cuenta el mundo actual, que al tener una variedad tan amplia de aplicaciones, que van junto con un
cambio y mejoramiento dinmico constante, hacen que sea posible extender los horizontes de la cultura
humana ms all de los lmites que se tenan hace algunos aos, y por consiguiente ha llevado a mejorar la
calidad de vida de millones de personas que se han visto beneficiadas con estas aplicaciones. Sin embargo, se
debe tener muy en cuenta que la utilizacin de sta y otras tcnicas de biotecnologa conllevan riesgos
potenciales y problemas ticos que no pueden ni deben pasar desapercibidos.
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