1.

Qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos

principalmente; cmo se clasifican segn su proporcin de Agar
y segn su suministro de nutrientes?

La composicin precisa depender de la especie que se quiera cultivar,

porque las necesidades nutricionales varan considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de
laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes

orgnicos (hidratos de carbono, aminocidos, vitaminas, etc) y
nutrientes inorgnicos (P, Fe, N, Mg, S, etc)

Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante

(agar-agar), tampones, indicador de pH, etc.

Durante las prcticas se van a manejar medios de cultivo de composicin

muy variada y de tres tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios
slidos, semislidos y lquidos. Este ltimo aspecto es importante a la hora de
la preparacin de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintticos se
pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden
adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay
que aadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composicin,
la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e
incluso como debe esterilizarse.
CLASIFICACION:
Segn sus agares:
Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que
no presentan exigencias particulares. No es diferencial.
Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la
investigacin de los diversos tipos de hemlisis(, gamma ). Se utiliza
para el crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se
puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado
enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La
adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que
estn en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores
del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente
que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y

para que se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolbiles.La

sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero
diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras
especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolticas
o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen
sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados grmenes.
Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de
adicionarla al medio base. Por esta razn el agar chocolate contiene
hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el
crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un
medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos
ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en
uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de
crecimiento no contenidas en la sangre.
Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificacin
de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los grmenes Gram positivos
por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su
contenido en sales biliares. En su composicin lleva un azcar (lactosa) y un
indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. Los
grmenes que fermenten la lactosa producen una acidificacin del medio que
hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Las colonias
lactosa negativas sern incoloras, apareciendo del mismo color que el medio
subyacente (naranja).
Agar C.L.E.D: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est
recomendado para el do para el recuento e identificacin presuntiva de los
microorganismos de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita
la invasin de los cultivos por Proteus.La presencia de lactosa en su
composicin le confiere el carcter de medio diferencial, aunque la
interpretacin sea diferente al anterior medio por la incorporacin de otro
indicador: el azul de bromotimol. Las colonias lactosa positivas aparecern de
color amarillo y las lactosa negativas lo harn con un color verdoso, blanco o
azulado.
Agar S.S. :El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de
Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene sales
biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y grmenes
Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten
diferenciar las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no
lo hacen (incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan
nunca la lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las
colonias que no cumplan este requisito. El agar SS es doblemente diferencial,

porque adems de indicarnos el comportamiento de los grmenes con

relacin a la lactosa, nos muestra los grmenes que son capaces de producir
cido sulfhdrico, que se manifiesta como un precipitado de color negro en el
centro de la colonia.
Agar Hektoen :Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar
SS. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia
de tres azcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder
diferencial de este medio. Este medio es capaz de detectar los grmenes
formadores de SH2, igual que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se
deben a su riqueza en peptonas y azcares, que neutralizan el efecto
inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos grmenes de cultivo delicado
(Shigella en particular).El crecimiento de Salmonella es excelente, igual que
el de Shigella, obtenindose colonias ms numerosas y voluminosas que en
los medios selectivos usuales. La inhibicin tiene lugar, esencialmente, sobre
E. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Hay que sealar que
el vibrin colrico crece bien en este medio.
Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la
realizacin de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los
antimicrobianos. A l nos referiremos ms ampliamente en el captulo
correspondiente
Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de
grmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio
muy enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es
un medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de
aerobios, anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al
aumentar, se manifiesta por un color rosa del medio.
Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos.
Su elevado contenido en cloruro sdico permite la inhibicin de la mayora de
los otros grmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este
medio en diferencial: as se puede identificar presuntivamente el
Staphylococcus aureus, ya que estegrmen crece bien en medios salados y
fermenta el manitol (colonias amarillas).
Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa
positivos, a la vez que los diferencia del resto.
Agar Kligler: Medio especfico para pruebas de identificacin de
enterobacterias. Aunque de l hablaremos conms detenimiento en el
captulo de pruebas de identificacin bacteriana, podemos ir adelantando que
se tratade un medio diferencial que permite conocer el comportamiento del
microorganismo ante dos azcares (glucosa y lactosa), investigar la

formacin de gas y comprobar si el microorganismo puede producir

sulfatoferroso a partir del tiosulfato sdico.
Agar Levine EMB (Eosina azul de metileno):Se utiliza para aislamiento de
enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia
muy bien a E. coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo
metlico caracterstico.
Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas, inhibiendo Gram
positivos y la mayora de enterobacterias.El segundo pone adems de
manifiesto la pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV.
Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el
cultivo de anaerobios.
Agar Gardnerella: Agar con sangre humana ms una mezcla de antibiticos
que permiten la observacin de colonias betahemolticas caractersticas de
Gardnerella vaginalis
Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract): Se utiliza para el aislamiento de
bacterias del gnero Legionella.

2. Cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un

caldo de un medio slido?
Es empleado como un mtodo fundamental para el estudio de las bacterias y
otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y
veterinaria.

Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patgeno

(secrecin purulenta, orina, rgano, fecas, etc.) o de un alimento
(leche, carne, etc.)

Estudio morfolgico de las colonias.

Conservacin de cepas identificadas (coleccin de cepas microbianas

o cepario).

Clasificacin y tipificacin de bacterias por estudio de sus propiedades

bioqumicas en medios diferenciales.

Obtencin de toxinas o investigacin de sus caractersticas.

Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboracin de productos

biolgicos (vacunas, antgenos, bacterinas, toxoides, etc.).

Y lo que diferencia de un medio solido es que los medios slidos tienen

generalmente agaragar como agente solidificante, espesante o gelificante.
El agar-agar es una sustancia hidroflica de carcter coloidal procedente de
diversas especies de algas marinas, especialmente del gneroGelidium, que
tiene la propiedad de formar un gel. Qumicamente el agar-agar es un
polisacrido de cadena larga, dependiendo de su tamao el poder gelificante.
El agar-agar se expende en forma granulada o en polvo, es insoluble en agua
fra, se disuelve solamente a temperatura de ebullicin, se mantiene en forma
viscosa a 6080 C y solidifica en forma de un gel estable a 4045 C.
Resiste perfectamente la esterilizacin a 121 C y por su capacidad de
retener agua no se deshidrata fcilmente, lo que permite almacenar los
medios por un largo perodo de tiempo a 5 C.
La gelatina no puede reemplazar al agar en la preparacin de medios slidos,
ya que descompuesta por muchos tipos de bacterias. Se aade a los medios
de cultivo para estudiar si las bacterias son capaces de degradarla (presencia
de enzimas gelatinasas).

3. Cul es el punto crtico para preparar un medio de cultivo slido?

El control de la calidad en la preparacin y evaluacin de los medios

de cultivo es considerado como una esencial y buena prctica de
laboratorio, necesaria para mantener el nivel y la ejecucin de
cualquier tcnica microbiolgica. Por esta razn, se le confiere una
gran importancia y est considerado como uno de los puntos crticos
de control en el anlisis microbiolgico, del cual depende la seguridad
de los resultados que emiten los laboratorios de ensayo.

La temperatura.

El pH

4. Grafique el procedimiento sobre la preparacin del medio de

cultivo