Disciplinarum Scientia. Srie: Cincias da Sade, Santa Maria, v. 14, n. 1, p. 47-59, 2013.

Recebido em: 04.06.2010. Aprovado em: 25.07.2012.

ISSN 2177-3335

DETERMINAO QUANTITATIVA DE GLICLAZIDA EM COMPRIMIDOS

POR ESPECTROFOTOMETRIA NO ULTRAVIOLETA1
QUANTITATIVE DETERMINATION OF GLICLAZIDE IN TABLETS BY UV
SPECTRUMPHOTOMETRY
Carla G. Batistela2, Luciane Varini Laporta3 e Marcos Roberto dos Santos4
RESUMO
A gliclazida um antidiabtico oral, pertencente classe das sulfonilureias, que atua reduzindo os nveis
de glicose no sangue por estimulao da secreo de insulina pelo pncreas. Est disponvel no mercado
farmacutico brasileiro na forma de comprimidos na concentrao de 30 mg. Somente a Britsh Pharmacopoeia
possui monografia para a quantificao de gliclazida comprimidos, que utiliza o mtodo por cromatografia
lquida de alta eficincia. O presente trabalho teve como objetivo otimizar e validar mtodo rpido, por
espectrofotometria de absoro no ultravioleta para a determinao quantitativa de gliclazida. O mtodo foi
validado utilizando-se acetonitrila e gua como solventes, amostra na concentrao de trabalho em 80 g/
mL e a quantificao do ativo em 244 nm. Este se mostrou especfico, linear na faixa de 40 a 120 g/mL,
limite de deteco de 6,32 g/mL e quantificao de 18,99 g/mL, preciso com DPR < 1%, exatido mdia
de 100,74% e robustez adequada. O mtodo validado por espectrofotometria de absoro no ultravioleta no
apresentou diferena significativa quando comparado ao mtodo oficial, por cromatografia lquida de alta
eficincia, podendo ser utilizado com segurana na quantificao de gliclazida comprimidos.
Palavras-chave: gliclazida, controle de qualidade, espectrofotometria no UV, validao.
ABSTRACT
Gliclazide is an oral antidiabetic that belongs to the sulfonylureas glass and acts by reducing levels of blood
glucose by stimulating insulin secretion by the pancreas. It is available in the Brazilian pharmaceutical market
in tablet form at a concentration of 30 mg. Only Britsh Pharmacopoeia has monograph for making gliclazide
tablets. It uses the method of high efficiency liquid chromatography. This study aimed to optimize and validate
a rapid method based on UV absorption spectrumphotometry for the quantitative determination of gliclazide.
The method was validated using acetonitrile and water as solvent with a sample of working concentration
of 80 g/mL and quantification at 244 nm. This was specific and linear in the range from 40 to 120 g/L,
identification limit of 6.32 g/mL and quantification of 18.99 g/mL, precision with RSD< 1%, average accuracy
of 100.74% and adequate hardiness. The method, validated by ultraviolet absorption spectumphotometry,
showed no significant difference when compared to the official method by liquid chromatography with high
efficiency and can be safely used in quantification of gliclazide tablets.
Keywords: Glicazide, quality control, spectrumphotometry on UV, validation.

Trabalho Final de Graduao - TFG.

Acadmica do Curso de Farmcia - UNIFRA. E-mail: luciane.laporta@terra.com.br
3
Orientadora - UNIFRA.
4
Colaborador - UNIFRA.
1
2

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INTRODUO
O nmero de pessoas portadoras de diabetes vem crescendo a cada ano e necessitam, na
maioria das vezes, alm de dieta e realizao de exerccios, da utilizao de medicamentos que
venham a controlar o nvel da glicemia. Em razo de sua elevada prevalncia, acentuada morbidade
e mortalidade, e por fim, das repercusses econmicas e sociais decorrentes do impacto de suas
complicaes, o diabetes um problema de sade pblica. Caracteriza-se por uma deficincia absoluta
ou relativa de insulina que ir influenciar negativamente o metabolismo dos glicdios (OLIVEIRA;
MILECK, 2004). O diabetes mellitus tipo 2 tm se tornado um dos distrbios mais comuns em clnica
mdica, sendo considerado uma doena sistmica crnica e grave, com alto risco de morbidade e
mortalidade (ARAJO et al., 2000).
Os medicamentos utilizados para evitar a hiperglicemia so divididos de acordo com o mecanismo
de ao: secretagogos de insulina, que compreendem as sulfonilurias, metiglinidas e inibidores
das 4-dipeptidilpeptidase; os sensibilizadores de insulina, como as tiazolidinedionas/glitazonas e as
biguanidas; e os inibidores da captao de carboidratos, grupo formado basicamente pelos inibidores de
-glucosidase (INZUCCHI, 2006).
A gliclazida (Figura 1) um antidiabtico oral pertencente classe das sulfonilureias de
segunda gerao, que atua reduzindo os nveis de glicose no sangue, estimulando a secreo de
insulina pelo pncreas. Suas doses dirias podem variar de 30 mg a 320 mg, sendo administrada
em jejum ou juntamente com a primeira refeio substancial. Possui meia vida de 4 a 6 horas com
efeitos hipoglicemiantes evidentes at 24 horas aps a administrao (KATZUNG, 2003; FUCHS;
WANNMACHER; FERREIRA, 2006; KOROLKOVAS, 2008).

O
S

N
H

N
H

H3 C
Figura 1 - Estrutura qumica da gliclazida.

Apresenta-se na forma de um p cristalino branco, com faixa de fuso entre 180 a 182
C. Seu nmero no Chemical Abstract 21187-98-4 com a seguinte denominao qumica

N-[[(hexaidrociclopenta[c]pirol-2(1H)-il)amino]carbonil]-4-metilbenzenosulfonamida (THE MERCK

INDEX, 2001). praticamente insolvel em gua, facilmente solvel em cloreto de metileno,

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parcialmente solvel em acetona e levemente solvel em etanol (BRITSH PHARMACOPOEIA, 2008).

A escolha de uma metodologia analtica adequada de fundamental importncia para
se proceder ao controle de qualidade de uma substncia ativa, como tal, ou sob uma determinada
forma farmacutica e depende de vrios fatores, tais como a natureza do frmaco, complexidade
da formulao, pureza e quantidade de amostra, bem como o propsito de quantificao, ou seja,
qualitativo, semi-quantitativo ou quantitativo. As disponibilidades econmicas, de equipamentos e
reagentes, tambm devem ser consideradas (MEHTA, 1997; ERMER, 2001).
A espectrofotometria na regio do ultravioleta (200 a 400 nm) representa um dos mtodos
instrumentais mais empregados, em razo da maioria das substncias apresentarem absoro nessa
regio (GIL, 2007). A cromatografia a lquido de alta eficincia atualmente, um dos mtodos
preferenciais das indstrias farmacuticas, devido a sua boa sensibilidade e baixa vulnerabilidade
a interferentes, j que se trata de uma tcnica de separao acoplada a sistema de deteco, alm
da vantagem da automao. Esse mtodo apresenta algumas desvantagens como o alto custo da
instrumentao e operao, a falta de um detector universal e a necessidade de experincia no seu
manuseio (COLLINS; BRAGA; BONATO, 1997; GIL, 2007).
As Farmacopeias so os cdigos oficiais e as monografias descritas nesses compndios so de uso
obrigatrio, tanto para os produtores como para os laboratrios de controle de qualidade. A monografia
da gliclazida comprimidos est descrita na British Pharmacopoeia (2008), que utiliza cromatografia
lquida de alta eficincia (CLAE) para a sua quantificao. No Brasil, o produto comercializado nas
formas farmacuticas de comprimidos e no tem nenhum mtodo oficial descrito na Farmacopeia
Brasileira (1988). Assim, neste trabalho tem-se por objetivo principal validar metodologia analtica por
espectrofotometria no UV para a quantificao de gliclazida na forma farmacutica de comprimidos.
MATERIAL E MTODO
Substncia Qumica de Referncia (SQR): Gliclazida - Farmacopeia Brasileira (Lote: 1057).
Amostra: Gliclazida 30 mg, medicamento referncia (Lote: 9L0620).
Reagentes: gua destilada; Acetona (MERCK); Acetonitrila (MERCK); Etanol (MERCK);
Fosfato de potssio monobsico (VETEC); Hidrxido de sdio (CARLO ERBA); Acetonitrila grau
cromatogrfico (MERCK); Trietilamina (MERCK); cido trifluoractico (VETEC).
Equipamentos e acessrios: Aparelho de desintegrao, PHARMA TEST, modelo PTZ; Aparelho
de dissoluo, PHARMA TEST, modelo PTWS-3E; Espectrofotmetro, SHIMADZU UV 1650
PC; Membrana filtrante porosidade 0,45 mm, Millipore; Balana analtica, BOSCH, modelo SAE

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200; Estufa a vcuo, modelo VACUCELL 55; Estufa de secagem, Vidraria calibrada, aparelho de
friabilidade, PHARMA TEST, modelo PTF 10E; Banho ultra-snico, Unique, USC 1400, Mesa
agitadora, TECNAL, modelo TE 140. Cromatgrafo lquido de alta eficincia, SHIMADZU, com
sistema de bombas LC-10AD. Desgaseificador FCV-10AL. Alto injetor 10AD. Forno CTO-10AS e
detector SPD-10A com software CLASS-VP.
VALIDAO DA METODOLOGIA ANALTICA
O mtodo proposto foi validado conforme Resoluo RE 899, The United States Pharmacopeia
e International Conference on Harmonization (ICH), sendo utilizando o medicamento referncia para
a realizao dos testes.
PADRONIZAO DO MTODO ANALTICO
Determinao do melhor solvente
Para otimizao de mtodo espectrofotomtrico na regio do ultravioleta inicialmente,
investigou-se o espectro de absoro do frmaco em diferentes solventes para definir as bandas
de absoro mxima suas intensidades e para escolher o comprimento de onda de trabalho, onde
no devem ser observadas interferncias de excipientes, impurezas ou de solventes. A gliclazida
solvel em etanol, acetona, metanol, acetonitrila, clorofrmio e solues aquosas de hidrxidos
alcalinos. Com base na sua solubilidade foi avaliado o emprego de etanol, acetonitrila e acetona
como co-solventes e de gua, hidrxido de sdio 0,1 M e 1 M, acetona e etanol como diluentes para
determinao quantitativa do frmaco em comprimidos.
Espectros de absoro
Prepararam-se solues de SQR de gliclazida na concentrao de 100 g/mL, utilizando-se
etanol (M1), acetona (M2) e acetonitrila (M3). Diluram-se as amostras M1, M2 e M3 at a concentrao de 10 g/mL com: gua (M1, M2 e M3), hidrxido de sdio 0,1 M e 1 M (M1 e M2), etanol
(M1) e acetona (M2). Traou-se o espectro de cada uma das solues obtidas, na faixa de 200 nm a
400 nm para observar a presena de sinais na faixa analtica.
Soluo estoque de gliclazida SQR
Foram pesadas analiticamente quantidades de SQR previamente desidratada a 110 C por 2 horas,
correspondente a 25 mg de gliclazida, as quais foram transferidas para balo volumtrico de 25 mL.
Completou-se o volume com o mesmo diluente, obtendo-se soluo na concentrao de 1000 g/mL.

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Soluo estoque da amostra

Determinou-se o peso mdio de 20 comprimidos, os quais foram posteriormente triturados.
Pesaram-se quantidades equivalentes a 40 mg de gliclazida transferiu-se para bales volumtricos de
50 mL, com o auxlio de 30 ml de acetonitrila. Agitou-se mecanicamente por 40 minutos, completaram-se os volumes com o mesmo diluente, homogeneizou-se e filtrou-se. Todas as demais diluies
foram realizadas em gua.
PARMETROS ANALTICOS

Os seguintes parmetros analticos foram avaliados na validao do mtodo para a determinao

de teor de gliclazida em comprimidos.

Especificidade

Prepararam-se solues de gliclazida SQR e branco (sem analito), na concentrao de 100 g/mL,

em acetonitrila. Traou-se o espectro da cada soluo na faixa de 200 nm a 400 nm e observou-se a presena
de sinais na faixa do analito.
Intervalo e linearidade
Trs curvas analticas foram preparadas, cada uma com sete nveis de concentrao, a partir
da soluo estoque de gliclazida SQR. Alquotas de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 e 8 mL foram transferidas para
bales volumtrico de 50 mL e diludas com gua, de modo a obter solues nas concentraes de 20
a 160 g/mL. A equao da reta foi obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados e avaliada por Anlise
de Varincia (BRASIL, 2003).
Limite de deteco (LD) e de quantificao (LQ)

O LD e o LQ da gliclazida foram determinados a partir da curva analtica e calculados como

3xs/S e 10xs/S, onde s o desvio padro do intercepto com o eixo y de 3 curvas analticas e S a
inclinao da curva analtica.
Preciso
A repetibilidade foi determinada partindo-se de trs tomadas de ensaio de 40 mg de gliclazida, obtendo-se solues nas concentraes de 40, 80 e 120 g/mL, realizadas no mesmo dia e pelo mesmo analista. A
preciso intermediria foi obtida pela anlise da amostra em trs dias diferentes, por dois analistas diferentes,
na concentrao de 80 g/mL. Mediram-se as absorbncias das solues em 244 nm, utilizando-se gua para
ajuste do zero. Calculou-se a quantidade de gliclazida presente nos comprimidos, a partir da equao da reta,

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obtida na curva analtica. A partir dos resultados calculou-se o Desvio Padro (DP) e o Desvio Padro Relativo (DPR) e os dados foram comparados por Anlise de Varincia (BRASIL, 2003).
Exatido

A exatido expressa, em porcentagem, foi avaliada a partir da adio e recuperao de

quantidades conhecidas de gliclazida SQR na amostra. Foram preparadas solues nas concentraes
finais de 40, 60, 80, 100 e 120 g/mL, sendo a concentrao da amostra constante de 40 g/mL. A
recuperao de 98% a 102% recomendada para a exatido do mtodo (ICH).
Robustez
O planejamento do teste de robustez foi realizado de acordo com Youden e Steiner, que
permite no s avaliar a robustez do mtodo, como tambm ordenar a influncia de cada uma das
variaes nos resultados finais (Tabela 1) (INMETRO, 2003).
Tabela 1 - Matriz de fatores para a determinao da robustez do mtodo.
Valor do fator
1
A
B
C
D
s

Comprimento de onda
Tempo de agitao
Tamanho da amostra
Alquota de transferncia
Resultado

2
A
B
c
D
t

3
A
b
C
d
u

Combinao
4
5
A
a
b
B
c
C
d
d
v
w

6
a
B
c
d
x

7
a
b
C
D
y

8
A
b
c
D
z

Conforme descrito na figura 2, os parmetros alterados para a avaliao da robustez foram:

comprimento de onda (244 nm): A (243 nm) e a (245 nm); tempo de agitao (40 minutos): B (30
minutos) e b (45 minutos); tamanho da amostra (40 mg): C (30 mg) e c (45 mg); volume da alquota
de transferncia (5 ml): D (2,5 ml) e d (10 ml. Concentraes de gliclazida presentes nas amostras
foram determinadas a partir da curva analtica.
Os parmetros A, a, B, b, C, c, D e d foram calculados a partir das eq. de 1 a 8:
A = (s + t + u + v) / 4

(1)

a = (w + x + y + z) / 4

(5)

(6)

B = (s + t + w + x) / 4

(2)

b = (u + v + y + z) / 4

C = (s + u + w + y) / 4

(3)

c = (t + v + x + z) / 4

D = (s + t + y + z) / 4

(4)

d = (u + v + w + x) / 4

O mtodo robusto se as condies 1 e 2 forem atendidas:

Condio 1 (para parmetro A e demais parmetros)

(7)

(8)

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Teor de gliclazida (mdia dos valores obtidos no estudo da preciso intermediria) - 5% deste
valor < A < teor de gliclazida + 5% deste valor
Condio 2 (para parmetro A e demais parmetros)
A a < 3% do teor de gliclazida
COMPARAO DE METODOLOGIAS ANALTICAS
A monografia de gliclazida comprimidos encontra-se descrita apenas na British Pharmacopoeia,
2008 que utiliza o mtodo por CLAE para a sua quantificao, com as seguintes condies cromatogrficas:
coluna C8 de 25 cm; fase mvel: trietanolamina, cido trifluoractico, acetonitrila, gua (0,1:0,1:45:55),
fluxo de 0,9 mL/min; detector na regio do ultravioleta a 235 nm e volume de injeo de 20 L; a
amostra e SQR nas concentrao de 200 g/mL. As anlises foram realizadas em triplicata.
O mtodo validado foi comparado com o mtodo oficial, utilizando-se os seguintes programas
estatsticos: Graphpad Instat (verso 3.00) e Origin (verso 5.00).
RESULTADOS E DISCUSSO
VALIDAO DA METODOLOGIA ANALTICA
De todos os solventes testados, a combinao que apresentou melhores resultados e interferncia
mnima dos excipientes foi a de acetonitrila e gua.
Condies espectrofotomtricas
Na tabela 2 encontram-se descritas as condies espectrofotomtricas escolhidas.
Tabela 2 - Resumo das condies espectrofotomtricas escolhidas para a anlise quantitativa de gliclazida.
Quantidade de ativo no ensaio
Diluente inicial
Diluente final
Concentrao de trabalho
Comprimento de onda

40 mg
Acetonitrila
gua
80 g/mL
244 nm

Especificidade
A especificidade do mtodo foi avaliada com base na pesquisa de possveis interferentes na
determinao quantitativa da gliclazida. De acordo com os espectros obtidos para a SQR e branco
(figura 2), constatou-se que o mtodo foi especfico, no havendo interferncia dos excipientes no
comprimento de onda mxima de absoro.

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SQR

Placebo

Diluente

Figura 4 - Espectros de absoro, na faixa de 200 a 400 nm, da gliclazida SQR, do branco simulado e do diluente.

Intervalo e linearidade
O intervalo e a linearidade foram obtidos atravs da elaborao da curva analtica. Segundo a
RE 899/2003, o critrio mnimo aceitvel do coeficiente de correlao de 0,99, sendo obtido o valor de
0,998 para o intervalo e de 0,999 para a curva analtica. A curva obtida demonstrou que os resultados so
diretamente proporcionais concentrao do analito, na faixa de 40 g/mL a 120 g/mL, podendo ser
utilizada para a interpolao dos valores obtidos com a soluo amostra (Figura 3). O estudo da anlise
de varincia (BRASIL, 2003), da curva analtica demonstrou que a mesma apresenta regresso linear
significativa, no havendo desvio de linearidade significativo (p = 0,05).

Figura 3 - Representao grfica da curva analtica e da equao da reta da gliclazida, obtida pelo mtodo
espectrofotomtrico na regio do ultravioleta.

Limite de deteco e limite de quantificao

A sensibilidade do mtodo espectrofotomtrico foi avaliada atravs da determinao dos

limites de deteco (LD) e limite de quantificao (LQ) da gliclazida. Os valores obtidos para o LD
e LQ foram de 6,32 g/mL e 18,99 g/mL, respectivamente, indicando boa sensibilidade do mtodo
na concentrao de trabalho escolhida.

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Preciso
A preciso do mtodo analtico determina o grau de concordncia entre resultados de medidas
independentes em torno de um valor central, efetuada vrias vezes em uma amostra homognea. O valor
de DPR (%), preconizado para este estudo de 2%, segundo a The United States Pharmacopeia (2009),
e de 5%, segundo a resoluo RE n 899/2003 (RIBANI et al., 2004). Conforme descrito na tabela 3, o
valor mdio encontrado para a repetibilidade foi de 99,55% e desvio padro relativo de 0,43%.
Tabela 3 - Resultados obtidos na anlise da repetibilidade do mtodo espectrofotomtrico no UV para comprimidos de
gliclazida.
Concentrao da amostra
(g/ml)

Teor (%)

Mdia + desvio padro

DPR (%)

99,31 + 0,72

0,72

99,76 + 0,28

0,28

99,59 + 0,30

0,30

98,73
99,09
100,11
99,50
100,06
99,73
99,89
99,29
99,60

40

80

100

F calculado
0,69

ANOVA
Entre concentraes
* (p=0,05)

F tabelado*
5,14

A preciso intermediria foi determinada em trs dias diferentes por dois analistas. Os valores
experimentais obtidos para as determinaes da preciso intermedirio da gliclazida encontram-se
descritos na tabela 2. O desvio padro relativo mdio, para este ensaio foi de 0,47%.
Tabela 4 - Resultados obtidos na anlise da preciso intermediria do mtodo espectrofotomtrico no UV para comprimidos
de gliclazida.

ANOVA
Inter-dias
Inter-dias analista 1

Analista 1
Analista 2
Teor (%)
Teor (%)
99,09
100,15
100,06
99,48
99,29
99,09
98,90
99,67
99,67
99,09
100,06
99,86
100,25
99,09
99,29
100,06
99,67
100,44
F calculado
0,59
0,19

Inter-dias analista 2

0,30

Dia
1

*(p=0,05)

n
1
2
3
1
2
3
1
2
3

Mdia + desvio
padro

DPR
(%)

99,53 + 0,47

0,47

99,54 + 0,45

0,45

99,80 + 0,54

0,54

F tabelado*
3,68
5,14
5,14

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Os resultados obtidos na determinao da repetibilidade e da preciso intermediria foram

avaliados estatisticamente por anlise de varincia (BRASIL, 2003), a fim de determinar se existe
diferena significativa entre as respostas obtidas nas diferentes concentraes e dias analisados.
Conforme demonstrado nas tabelas 2 e 3, o Fcalculado foi menor do que o Ftabelado, indicando que no h
diferena significativa entre os resultados encontrados (p=0,05). Esta anlise foi realizada no sentido
de complementar a avaliao do ensaio, porm cabe ressaltar que os critrios que estabelecem o
aceite da preciso do mtodo esto preconizados na Resoluo RE n 899, anteriormente citada.
Exatido
A exatido do mtodo analtico representa o grau de concordncia entre o valor mdio obtido
de uma srie de resultados e o valor de referncia aceito. Os resultados experimentais mdios, obtidos
para os testes de exatido, por recuperao, esto descritos na tabela 5. Os limites preconizados para
este teste so de 98% a 102%.
Tabela 5 - Resultados obtidos na anlise da exatido do mtodo espectrofotomtrico no UV para comprimidos de gliclazida.
Mdia da quantidade de SQR recuperada*
(g/mL)
(%)

Amostra

Concentrao final

R1

60

59,69

99,49

R2

80

80,31

100,38

R3

100

101,07

101,07

R4

120

120,92

100,76

De acordo com os resultados obtidos verifica-se que para todas as concentraes experimentais
utilizadas os teores percentuais de recuperao encontram-se dentro dos limites especificados, o que
permite concluir a adequada exatido do mtodo.
Robustez

A robustez do mtodo indica sua capacidade em fornecer resultados inalterados quando sujeito

a pequenas e deliberadas alteraes no mtodo analtico. O mtodo robusto se as condies abaixo

descritas forem atendidas:
Condio 1 (para parmetro A e demais parmetros)
Teor de gliclazida - 5% deste valor < A < Teor de gliclazida + 5% deste valor
99,62% - 5% deste valor < A < 99,62% + 5% deste valor
94,64% < A < 104,60%

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Condio 2 (para parmetro A e demais parmetros)

A a < 3% do teor de gliclazida
A a < 3% 99,62%
A a < 2,99%

Conforme podemos observar nas tabelas 6 e 7, o mtodo atendeu as condies 1 e 2, sendo

portanto considerado robusto.

Tabela 6 - Combinaes ensaiadas para a avaliao da robustez do mtodo espectrofotomtrico no UV para comprimidos
de gliclazida examinando-se a condio 1.
Combinao ensaiada
Resultados
s
t
u
v
w
99,6%
100,0%
99,8%
99,0%
99,5%
Teor (%)
Faixa aceitvel de teor de Gliclazida (99,62% + 5%) = 94,64% < A < 104,60%

100,0%

100,1%

99,6%

Tabela 7 - Combinaes ensaiadas para a avaliao da robustez do mtodo espectrofotomtrico no UV para comprimidos
de gliclazida examinando-se a condio 2.
Teor de gliclazida
A (%)
99,64
B (%)
99,81
C (%)
99,80
D (%)
99,86

a (%)
99,82
b (%)
99,65
c (%)
99,66
d (%)
99,60

Diferenas
A a (%)
-0,18
B b (%)
0,16
C c (%)
0,14
D d (%)
0,26

Mdia (%) (A, a, B, b, C, c, D, d)

99,73

DP

0,10

DPR (%)

0,10

Limite para diferenas

(3% * 99,62%)
2,99%

Robusto

2,99%

Robusto

2,99%

Robusto

2,99%

Robusto

Comparao de metodologia
O mtodo proposto apresenta diferenas significativas do mtodo farmacopeico, no que tange
a simplicidade, rapidez e custo. A espectrofotometria na regio do ultravioleta um mtodo de fcil
execuo e custo relativamente baixo se comparado com a CLAE. A CLAE caracteriza-se por ser
uma tcnica verstil e amplamente utilizada possuindo a vantagem da automao, porm requer
maior treinamento por parte do analista.
Para comparar a metodologia analtica desenvolvida, utilizaram-se os dados obtidos com
a repetibilidade do mtodo, na concentrao de 80 g/ml, e os resultados do doseamento por CLAE.
Aplicou-se, primeiramente o teste de Kolmogorov and Smirnov, para avaliar se todos os dados seguem uma

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Disciplinarum Scientia. Srie: Cincias da Sade, Santa Maria, v. 14, n. 1, p. 47-59, 2013.

distribuio normal e logo aps os valores foram comparados pelo teste t de Student, que no apresentou
valores significativos para um intervalo de confiana de 95%. Na tabela 8 e na figura 4 encontram-se as
mdias, desvios padres e os valores mnimos e mximos obtidos, com ambas as tcnicas.
Tabela 8 - Mdias, desvios padres e os valores mnimos e mximos obtidos na comparao de metodologias para a
quantificao de gliclazida comprimidos.
Mtodo

Teor (%)

Mdia

DP

DPR

Mnimo

Mximo

CLAE

1
2
3

100,81
99,83
101,33

100,66

0,76

0,76

99,83

101,33

UV

1
2
3

99,50
100,06
99,73

99,76

0,28

0,28

99,50

100,06

101,5

CLAE

Teor (%)

101,0

100,5

Ultravioleta
100,0

99,5

Mtodos

Figura 4 - Representao grfica da comparao dos mtodos espectrofotomtrico no UV e CLAE quanto aos valores
mnimos e mximos obtidos.

CONCLUSO
O mtodo validado, por espectrofotometria de absoro no ultravioleta, mostrou-se especfico, preciso,
exato e robusto para a quantificao de gliclazida comprimidos e no apresentou diferena significativa,
quando comparado ao mtodo oficial, por CLAE, podendo ser utilizado com segurana. Possui as vantagens
de economia e facilidade de execuo, podendo ser utilizado durante o processo de produo, quando se
necessitam de anlises rpidas, para avaliar o teor e a uniformidade de contedo dos comprimidos.
REFERNCIAS
ARAJO, L. M. B.; BRITO, M. M. S.; CRUS, T. R. P. Tratamento do diabetes tipo 2: novas opes.
Arquivo brasileiro de endocrinologia metablica, v. 44, n. 6, p. 509-518, 2000.
BRASIL, Ministrio da Sade Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos. Agncia
Nacional de Vigilncia Sanitria, Resoluo RE n 899 de 29.05.2003, 2003

Disciplinarum Scientia. Srie: Cincias da Sade, Santa Maria, v. 14, n. 1, p. 47-59, 2013.

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BRITISH PHARMACOPOEIA. London: Her Majestys Stationery Office, 2008. 1 CD-ROM.

COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S. Introduo mtodos cromatrogrficos. 7 ed.
Campinas: Unicamp, 1997.
ERMER, J. Validation in pharmaceutical analysis. Part I: an integrated approach. Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 24, p.755-767, 2001.
FARMACOPIA BRASILEIRA, 4 ed, So Paulo: Atheneu, 1988.
FUCHS, F. D.; WANNMACHER, L.; FERREIRA, M. B. Farmacologia clnica: fundamentos da
teraputica racional. 3 ed. Rio de Janeiro:Guanabara Koogan, 2006.
GIL, E. S. Controle fsico-qumico de controle de qualidade de medicamentos. 2 ed. So Paulo:
Pharmabooks, 2007.
ICH Harmonised Tripartite Guideline. Validation of analytical procedures: Text and Methodology Q2(R1) - Current Step 4 version Parent Guideline Dated 27 October 1994 (Complementary Guideline
on Methodology dated 6 November 1996 incorporated in November 2005) ICH Steering Committee.
Commission of the European Communities, Geneva, 2005. Disponivel em: < www.emea.europa.eu/
pdfs/human/ich/038195en>. Acesso em: 01 out. 2007.
INSTITUTO NACIONAL DE METROLOGIA. Normalizao e Qualidade Industrial. Orientaes
sobre validao de mtodos de ensaios qumicos; DOQ-CGCRE-008, Reviso: 01 - MARO/2003.
INZUCCHI, S. E. Management of hyperglycemia in the hospital setting. N. Engl. J. Med., v. 355,
p. 1903-1911, 2006.
KATZUNG, B. G. Farmacologia bsica e clinica. 8 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003,
p. 628-634.
KOROLKOVAS, A. Dicionrio teraputico guanabara 2008/2009. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2008.
MEHTA, A. C. Quality management in drug analysis. Analyst, v. 12, p. 83 R88 R, 1997.
OLIVEIRA, J. E. P.; MILECK, A. Diabetes mellitus-clnica, diagnstico, tratamento
multidsciplinar. So Paulo:Atheneu Editora, 2004.
RIBANI, M. et al. Validao em mtodos cromatogrficos e eletroforticos. Qumica Nova, v. 27,
n. 5, p. 771-780, 2004.
THE MERCK INDEX. 30th.ed. Whitehouse Station: Merck Research Laboratories, Merck&CO.,
INC. 2001, p. 948.