COTIZACION PARA ANALISIS DE TUBERCULOSIS Y TUBERCULOSIS

MULTIDROGORESSTENTE
FLUJORAMA PROPUESTO PARA ANALISIS DE MUESTRAS SOSPECHOSAS
DE TB y MDR-TB

DETECCION DE TB
Se realizara PCR convencional utilizando los siguientes primers para la
deteccin sensible de tuberculosis
Blanco
IS6110
IS6110
38 Kda

65 Kda

Par de Primers 5 3
Forward: CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG
Reverse: CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG
Forward: GTG CGG ATG GTC GCA GAG AT
Reverse: CTC GAT GCC CTC ACG GTT CA
Externo
Forward: ACC ACC GAG CGG TTC GCC TGA
Reverse: GAT CTG CGG GTC GTC CCA GGT
Interno
Forward: TGA CGT TGG CGG AGA CCG
Reverse: ATG GTG CCC TGG TAC ATG
Externo
Forward: GAG ATC GAG CTG GAG GAT CC
Reverse: AGC TGC AGC CCA AAA GGT GTT
Interno

Tamao fragmento
123 pb
541 pb
Externo
419 pb
Interno
322 pb
Externo
383 pb
Interno

MPB64

Forward: CCA TCG ATC CGA GAC CCT GCT CAA GGG
Reverse: TGC TCT AGA CTC CTC GAC GGT GAT GAC
Forward: TCC GCT GCC AGT CGT CTT CC
Reverse: GTC CTC GCG AGT CTA GGC CA

155 pb
240 pb

DETECCION DE MDR-TB
METODO 1

Ensayo in-house de PCR en tiempo real obtenido y modificado de

Wada et al. 2004 Detecta la presencia de 5 mutaciones asociadas a la
resistencia rifampicina a travs de 5 sondas dirigidas a distintos sitios
del gen rpo, adems detecta la resistencia a etambutol e izoniaziza
relacionadas con 2 mutaciones en los genes emb y kat
PCR Tiempo Real
Primers

Blanco
rpoB
embB
katG
TB control
rpo520/524
rpo510/514
rpo514/520
rpo529/533
rpo524/529
emb306

Sondas TaqMan

kat315

Secuencia 5' -> 3'

Forward: ACACCGCAGACGTTGATCA
Reverse: CTAGTGATGGCGGTCAGGTAC
Forward: CGTGGTGATATTCGGCTTCCT
Reverse: GCCGAACCAGCGGAAATAG
Forward: TGGGCTGGAAGAGCTCGTAT
Reverse: GGAAACTGTTGTCCCATTTCG
FAM-TCTTCGGCACCAGC-MGB
VIC-TCAACCCCGACAGC-MGB
FAM-CCATGAATTGGCTCAGC-MGB
VIC-TTCATGGACCAGAACAA-MGB
FAM-CAGCGCCGACAGT-MGB
VIC-TGACCCACAAGCGC-MGB
FAM-CTCGGGCCATGCC-MGB
VIC-CACCAGCGGCATC-MGB

Antibitico asociado

--------------------------------

Rifampicina
Etambutol
Isoniazida

METODO 2

Utilizando el kit GenoType MTBDRplussl V2. (PCR convencional

seguido de Hibridacin con sondas de DNA en tira)

Detecta la presencia de 11 mutaciones a travs de las siguientes sondas

de estas 5 dirigidas a rifampicina y 6 a isoniazida

SONDA (Mutacion)
Rpo MUT1 (D516V)
rpoB MUT2A (H526Y)
rpoB MUT2B (H526D)
rpoB MUT3 (S531L)
rpoB MUT2A
KatG MUT1 (S315T1)
KatG MUT1 (S315T2)
inhA MUT1 (C15T)
inhA MUT2 (A15G)
inhA MUT3A (T8C)

Antibitico asociado

rifampicina

isoniazida

inhA MUT3B (T8A)

COTIZACIONES
METODO 1
In-house PCR tiempo real

Deteccin de
TB
Deteccin de
MDR-TB

Otros

Extraccin
DNA con kit

Set de primers
PCR master Mix
Electroforesis
Set de Primers
Set de Sondas Fluorogenicas
Inactivacion de muestra con
NALC
Extraccion de DNA
TaqMan Master Mix
Otros insumos (tubos,
guantes, calibracin equipos,
tips etc.)

TOTAL=

Extraccin
DNA con
Ultrasonido

4,8
15
10
2,4
26,4
9

4,8
15
10
2,4
26,4
9

56
30
15

20
30
15

168,6

132,6

Extraccin
DNA con kit
4,8
15
10
56

extraccin con
Ultrasonido
4,8
15
10
20

119

119

15

15

228,8

192,8

METODO 2
Genotype MTBDR plus (Hain)
Deteccin de
TB
Deteccin de
MDR-TB

Otros

TOTAL=

Set de primers
PCR master Mix
electroforesis
Extraccin con kit de
extraccin
Inactivacion de muestra con
NALC
Determinacin por kit (segn
estudio costos OMS en frica)
Otros insumos (tubos,
guantes, calibracin equipos,
tips etc.)

OJO: La implementacin adecuada de este protocolo requera para su

implementacin ms adecuada de equipo para incubar las tiras de hibridacin
Twincubator que costara aproximadamente ms de 18.875 Bolivianos

in-house de PCR en tiempo real

GenoType MTBDRplussl V2.
GenoType MTBDRplussl V2. Mas compra de
Twincubator

168,600
bs.
228,800
bs.
247,675
bs.

Utilizando extraccin
con sonicador

Mtodo

Utilizando extraccin
con KIT

Cuadro comparativo de costos para anlisis de 1000 muestras segn

distintos ensayos

132,600
bs.
192,800
bs.
211,675
bs.