INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniera campus Guanajuato

Reactor de inmersin
temporal para plantas
Ingeniera de Biorreactores
Integrantes:
Camarena Alba Juan David
Gasca Jimnez Kendra Alejandra
Lino Lpez Izamar Itzel
Lpez Castaeda Mariana
Rojas Maldonado Coimbra
Valverde Rojas Daniela

Objetivos

Objetivo General
Disear y analizar un biorreactor de inmersin
temporal para la micropropagacin de Carnegiea gigantea.

Objetivos Especficos

Establecer los parmetros cinticos de productividad y volumen de operacin para C.

gigantea.
Realizar una simulacin de cultivo por lote para C. gigantea.
Diseo de los sistemas de aireacin, agitacin, transferencia de calor y transferencia
de masa de un biorreactor de inmersin temporal para satisfacer la productividad del
proceso de bioconversin.

Introduccin
La micropropagacin con medio lquido es una tcnica biotecnolgica de cultivo in vitro
aplicada a la propagacin vegetativa de plantas.
Ventajas

Tasas de crecimiento
Plantas libres de bacterias, hongos y virus
Produccin de plantas todo el ao

Control de las condiciones de operacin

Facilidad de escalado (producir grandes volmenes
de plantas).
Facilidad
de
preparacin,
esterilizacin
y
manipulacin
Mayor rapidez en la absorcin de sustancias nutritivas
y la difusin de sustancias txicas producidas por el
metabolismo de las plantas

Desventajas

Gran cantidad de pequeos recipientes

de cultivo
mano de obra calificada

Tiempos y costos de produccin.

Caracterizar y optimizar la cintica de
multiplicacin del material vegetal

Sahuaro (C. gigantea)

Introducin

Cactcea columnar del Desierto Sonorense

Alcanza los 16 m de altura y vivir ms de 175
aos.
Su recambio poblacional es muy lento y est
determinado por la acumulacin de aos con
lluvias extraordinarias.
Sus usos son muy variados: la colecta de sus
frutos y la utilizacin para la construccin de
casas y muebles.
En

peligro

de

extincin.

MEDIO DE CULTIVO Y
CINTICA DE CRECIMIENTO

Medio de cultivo

Aumento de biomasa

Frascos de cultivo de capacidad 3 L de

volumen total

Luz artificial: fotoperodo de 16 horas de

luz, temperatura 372C.
(Murashige & Skoog, 1992)

Reologa del medio

Ventajas en medio lquido aireados

Mejor contacto con las plantas

Control de la composicin del medio y de la
atmsfera gaseosa
Posibilidad de manipular la biomasa vegetal
en relacin al volumen del medio.

Caractersticas del medio

Medio de cultivo MS (Murashige y

Skoog, 1962)
pH 5.5-5.9
Reguladores de crecimiento

Componentes del SIT

Dos frascos 3L de capacidad.

Manguera de silicona que mediante conectores atraviesen la tapa.
Manguera en la parte interna, la cual desciende hasta el fondo en ambos recipientes.
Dos electrovlvulas conectadas a un temporizador programable para determinar el tiempo y frecuencia de la
inmersin.
Filtros hidrofbicos para garantizar la esterilidad del aire.

Balance de materia

C12H22O11 + NH4NO3 +

H2O = CH1.89O0.63N0.03+ O2

Ecuacin de balance

Sistema de Inmersin

Sistema RITA dos compartimentos

uno

superior

donde

se

encuentran las plantas

uno inferior donde se deposita

el medio de cultivo

Se inyecta aire con una bomba al

compartimiento inferior donde se impulsa el
medio de cultivo quedando las plantas
inmersas el tiempo que dure la inyeccin de
aire.

(Perrugora, 2016)

Tiempo y frecuencia de
inmersin
Suponiendo que:

Para estudiar el tiempo de inmersin en la fase de multiplicacin se estudian tres tratamientos:

10, 20 y 30 minutos.

El volumen de medio de cultivo en la fase de multiplicacin es de 2 L por Sistema de Inmersin

Temporal.

La frecuencia de inmersin es de cuatro inmersiones por da (cada seis horas).

Las evaluaciones se realizan a los 21 das de cultivo y se emplean 40 explantes por frasco de
cultivo y tres repeticiones por tratamiento
(Ventura et al., 2002).

Efecto de la frecuencia de
inmersin
Suponiendo que:
Se estudian tres frecuencias de inmersin, cada 3, 6, y 8 horas por da, con el mejor tiempo
de inmersin obtenido como resultado en las variables en el experimento anterior (10
minutos de inmersin).
Se utilizan las mismas condiciones del experimento efecto del tiempo de inmersin, as
como el medio de cultivo.
Se mantiene el mismo volumen de 2 L de medio de cultivo por frasco.

(Ventura et al., 2002)

Determinacin del volumen

del medio de cultivo

A partir de los resultados obtenidos, se estudia la densidad de inculo con el objetivo de mejorar
las condiciones de cultivo, as como la calidad del proceso.
Influencia de cuatro densidades de inculo: 20; 40, 60 y 80 explantes por frasco.

Mtodos para evaluaciones

Simulacin (lote)

Crecimiento Vegetal

Velocidad de crecimiento
El

clculo

Rendimiento

se

realiza

los

pesos

El clculo del rendimiento respecto

hmedos de la biomasa de la

al sustrato se obtiene a partir del

planta.

balance

obteniendo

reaccin
La velocidad especfica de
crecimiento mxima (max)
se calcula como:

estequiomtrico
que

anteriormente.

se

de

la

estableci

Suponiendo:
Volumen de operacin: 2 L
Tiempo de inmersin:
10 minutos de inmersin cada
3 horas

Simulacin de cultivo por lote

Potencia de aireacin

Considerando las presiones

Obteniendo la Fuerza

Obteniendo el trabajo

DETERMINACIN DE
CONDICIONES DE
OPERACIN Y DISEO

Sistema RITA
El tubo de entrada de aire posee un
difusor tipo piedra porosa que genera el
burbujeo en el medio.

La aireacin es proporcionada por una

bomba de pecera con un caudal
constante de aire de 2 L/min.

Biorreactor en estado
de reposo

Comienza a
ingresar el aire al
sistema

Plantas inversas
en el medio de
cultivo

El medio de cultivo
desciende por
gravedad a la
recmara interior

Transferencia de masa
( KLa Coeficiente de transferencia de
oxgeno)

En este caso no se necesita adicionar oxgeno al medio, ya que la planta lo produce

por
s
sola.
Dado que Sahuaro (C. gigantea) es una planta CAM, en caso de que exista un
exceso de oxgeno tiene menos probabilidades de que ocurra la fotorrespiracin.,
esta consiste en invertir la fotosintesis (O2->CO2)

Las condiciones ptimas para micropropagacin:

25-26 C de temperatura ambiente

periodo de luz de 16 horas y 8 horas de oscuridad
(Perrugora, 2016)

CONSIDERACIONES
FINALES PARA LA
OPERACIN

Conveccin natural regida

principalmente por el mecanismo de
fotosntesis de la planta.

Fuente de calor suele externa,

(lmparas especiales controladas
con sensores por lapsos de tiempo).

Mecanismo de
Transferencia de Calor

Transferencia de Calor

Dnde:
h = Coeficiente de conveccin
As = rea del biorreactor en contacto con el
aire
Ts = Temperatura en la superficie de la
planta
Tinf =Temperatura ambiente.

Limpieza y
esterilizacin

Condiciones

Volmenes inferiores a 3 L:
-

Uso del autoclave de laboratorio a 120C

durante 20 min y 2 atm de presin es
ms que suficiente para eliminar esporas.
Stanier et al., (1992)

Siendo el volumen total de 2 L, se

considera trabajar con la bacteria
Bacillus stearothermophilus

Microorganismos presententes con ms frecuencia en medios de cultivos.

Esterilizacin por lote para

el medio de cultivo

Primera etapa:
Enfriamiento

La muerte trmica de los microorganismos

ocurre en cada una de las etapas en que
est constituido el ciclo de esterilizacin, el
cual se disea para reducir la viabilidad de
las esporas originalmente presentes en el
medio (Doran,1995).

Segunda etapa:
Mantenimiento
de la temperatura

Tercera etapa:
Enfriamiento

Cintica de muerte

La constante de muerte a la vez se define

como:

dN/dt = - kd N
Donde
kd : constante de muerte que vara conforme
a la temperatura
N: cantidad de microorganismos presentes
en el medio.

Kd=A*exp(a /RT)
Donde para Bacillus stearothermophilus
A=8.216x10 35 s1
a =282,336.32 J/mol.

Para calentamiento se tiene que:

Mtodo de Richards

T = To + (Hst)/ [Cp*(M+st)]
Mientras que para enfriamiento:

En este mtodo se asume que la

eliminacin de esporas ocurre en el
intervalo de temperatura de 100C a 130C.

Para las etapas de calentamiento y enfriamiento se

pueden expresar de la forma siguiente:

T = Tco + ( To Tco)* exp [(1- e(-Ua/Cpw) ) (-w /M)*t]

Donde:
H: entalpa de vaporizacin.
s: flujo msico
TCO: Temperatura absoluta de la fuente enfriadora
To: temperatura absoluta inicial del medio
w: Flujo msico del refrigerante
Cp: calor especfico del medio
M: Masa inicial de medio a esterilizar
U: Coeficiente de transferencia global
a: Area de transferencia

Mediante suposiciones:

Mtodo de Richards

T0=100

* Calentamiento el tiempo requerido: 11.45

*Enfriamiento:

min

10.46 min

N0= 10^6

N=10^-11

Puesto que Kd es constante durante la etapa de

mantenimiento y total = ln (No/N):
tmantencin= 1.46 min

El tiempo de mantenimiento se calcula a partir de:

Obteniendo un tiempo total de:

ttotal=10.46min+11.45min+2.46min=24.37 min
4.37 min ms a lo establecido por Stainers.

Hoja de especificaciones

Conclusiones

Se seleccion a la planta Carnegiea gigantea para su micropropagacin en el biorreactor de inmersin

temporal para plantas por su valiosa produccin de polen y nctar, y por lla preservacin de la especie.

Se propusieron los parmetros cinticos de productividad y volumen de operacin: 2 L y un tiempo de

inmersin de 10 minutos cada 3 horas.

La condiciones establecidas para mantener al biorreactor fueron: medio de cultivo lquido MS con un pH
de 5.6, 30C de temperatura ambiente, periodo de luz de 17 horas y 7 horas de oscuridad.

El diseo de aireacin terico ms viable en un SIT es el sistema RITA que inyecta aire con una bomba
al compartimiento inferior, el medio de cultivo es impulsado hacia el que contiene las plantas, quedando
estas inmersas en el medio lquido por lo que dure la inyeccin de aire.

Ll mejor mecanismo para el modelado de la transferencia de calor fue la conveccin, debido al tipo de
biorreactor, ya que el aire del ambiente mantendr al medio a la temperatura deseada.

Bibliografa
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