UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

DEPARTAMENTO DE CINCIAS BIOLGICAS

Microbiologia e Imunologia
BIO 401

NUTRIO, REPRODUO
E CRESCIMENTO
BACTERIANO
Profa. Ms. Rafaela Galante
rsgalante@gmail.com

NUTRIO
De todos os organismos vivos, os microrganismos so os
seres vivos mais versteis em suas exigncias nutricionais;

Os nutrientes podem ser manipulados in vitro para o

crescimento controlado de determiandas bactrias

Para determinar a propriedades morfolgicas, fisiolgicas

e bioqumicas de uma amostra bacteriana necessrio o
cultivo em laboratrio:
Cultivo in vitro: quando se conhece as exigncias nutricionais
Cultivo in vivo: quando as exigncias nutricionais so
desconhecidas

NUTRIO
Em relao aos nutrientes celulares, eles so divividos
em:
Macronutrientes: so os compostos utilisados em grandes
quantidades pelas clulas
Micronutrientes: so os compostos utilisados em pequenas
quantidades pelas cluals

C
N
H
P, S, K, Na ...
Matria seca
gua

NUTRIO: macronitrientes
Fontes de Carbono:

Carboidratos
Lipdeos
Aminocidos
Monxido e dixidos de carbono
metano

Fontes de Nitrognio:

Aminocidos
Protenas
Nitratos e Nitritos
Amnia
N2 atmosfrico

NUTRIO: macronitrientes
Traos dos seguintes METAIS so necessrios na
composio de um meio de cultura:
Zn
Cu
Mn
Co
Mo
B

Exercem funo estrutural em vrias enzimas

NUTRIO: meios de cultura

Solues nutrientes para promover o crescimento de
microrganismos:

Classes

Quimicamente definidos: sais, compostos orgnicos purificados, gua

Complexos: utilizam hidrolisados casena, carne, soja, levedura

No existe um meio de cultura universal, mas existem

vrios tipos meios para diversas finalidades.

NUTRIO: meios de cultura

Identificao de Microrganismos a partir de meios de
Cultura:
Para a identificao de bactrias Gram positivas do gnero
Streptococcus necessrio o meio de cultura gar Sangue para
a avaliao de hemlise (beta, alfa e gama)

NUTRIO: meios de cultura

Identificao de Microrganismos a partir de meios de
Cultura:
Para a identificao de bactrias Gram negativas so necessrios
diversos meios de cultura para a identificao de variados compostos
e estruturas.

KLIGER
SIM
MACCONKEY
EMB
CITRATO/ACETATO
CALDO/GAR NUTRIENTE

NUTRIO: meios de cultura

KLIGER
Avaliao: fermentao de carboidratos (Glicose e Lactose);
Interpretao dos resultados se d pela avaliao da fermentao da
lactose na rampa e da glicose no fundo;
Componentes do meio:
Peptonas
Extratos

Fonte de protenas

Sulfato ferroso
Tiossulfato de sdio
Lactose
Glicose

Identificao de sulfeto de hidrognio

Fonte de carbono e a concentrao importante para a identificao de

degradao de lactose

Vermelho neutro

Indicador de pH

NUTRIO: meios de cultura

KLIGER
Interpretao dos resultados
1 e 2 Rampa/bisel= Alc/ Fundo = Alc
3 Alc/A
4 Alc/A com H2S
5 A/A com CO2
6 A/A com H2S

Peptonas
Extratos
Sulfato ferroso
Tiossulfato de sdio
Glicose
Lactose

NUTRIO: meios de cultura

SIM
Avaliao de motilidade,
produo de indol e H2S.

Interpretao dos resultados

Difuso da bactria no
meio.
Crescimento nos limites da
inoculao.
Colorao rsea no meio:
indol +.
Precipitado negro: H2S +
Triptofano
Tissulfato de sdio
p-dimetilaminobenzaldedo
NaCl
Peptonas

Motilidade

Mot +

Mot -

Indol

NUTRIO: meios de cultura

MACCONKEY
Crescimento exclusivo de bactrias Gram negativas.
Avaliao da degradao de lactose (bactrias lactose ou lactose +)
Componentes do meio:
Lactose
Fonte de carbono
Sais biliares
Cristal Violeta
Peptona
Polipeptonas

NaCl

Inibidor de bactrias Gram positivas

Fonte de protenas - N

Mantenedor de isotonicidade do meio

Vermelho neutro

Indicador de pH

NUTRIO: meios de cultura

MACCONKEY
Interpretao dos resultados
Colorao rsea: colnias e meio de cor rosa = Lactose +
Colorao amarela: colnias brancas ou translcidas e meio
amarelo = Lactose -

NUTRIO: meios de cultura

EOSIN METHYLENE BLUE - EMB
Crescimento exclusivo de bactrias Gram negativas.
Avaliao da degradao de lactose (bactrias lactose ou lactose +)
Componentes:
Lactose
Sacarose
Peptonas
PO

Fonte de carbono

Fonte de nitrognio e fsforo, respectivamente

Eosina Y
Azul de metileno

Inibidor de bactrias Gram positicas

NUTRIO: meios de cultura

EOSIN METHYLENE BLUE - EMB
Interpretao dos resultados
Colorao verde-metlico: Colnia = Lactose +
Colorao branca opaca ou translcida = Lactose -

NUTRIO: meios de cultura

ACETATO / CITRATO
Inexistncia de carboidrato como fonte de
carbono

Uso de CH3CO2Na ao invs de glicose ou lactose

Interpretao:
Crescimento de colnia e alterao do meio
para azul
= Acetato / citrato +
Inexistncia de crescimento e no alterao
do meio para azul
= Acetato / citrato -

PROBLEMA
Bactrias Gram negativas:

1)

2)

3)

PROBLEMA
Identificao

PROBLEMA
Bactrias Gram negativas:

1)

Salmonella

2)

E. coli

3)

Shigella

TCNICAS DE SEMEIO
Meio Lquido:
Por disperso com uso de ala (a)
Meio slido Tubo:
Picada (b)
Picada e estrias (c)
estrias (d)

TCNICAS DE SEMEIO
Meio slido em Placa: ESTRIAMNETO POR ESGOTAMENTO

DILUIO SERIADA
Para semeio em placa:

TCNICA DE SEMEIO
Para semeio em placa:

CRESCIMENTO MIBROBIANO: efeito da temperatura

CRESCIMENTO MIBROBIANO: efeito do oxignio

CRESCIMENTO MIBROBIANO
Em Microbiologia, o termo
crescimento refere-se a um
aumento do nmero de
clulas e no ao aumento das
dimenses celulares;
Crescimento Populacional
o aumento do nmero/massa
microbiana
exponencialmente;
Esse aumento microbiano
dado pela diviso celular nas
bactria por fisso binria.

CRESCIMENTO MIBROBIANO
O crescimento microbiano, em condies timas
exponencial.
9000
8000
7000

clulas

6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
0

50

100

150
minutos

200

250

300

CRESCIMENTO MIBROBIANO
Crescimento Populacional Total (N)
O crescimento microbiano segue a frmula de progresso
geomtrica:
N= 1x 2n
[Equao 1]
mas o n inicial clulas inoculadas no tempo zero >1
ento:
N= No x 2n
[Equao 2]
onde:
N= nmero final de clulas
No= nmero inicial de clulas
n=nmero de geraes

CRESCIMENTO MIBROBIANO
Crescimento Populacional Total (N)
O crescimento microbiano segue a frmula de progresso
geomtrica:
Aplicando logaritmo (log):

log N= log No + n log 2

n = log N - logNo
log 2
n = log N - log No
0,301

[Equao 3]

n = 3,3 (log N-log No)

[Equao 4]

CRESCIMENTO MIBROBIANO
A partir da Equao 4 possvel calcular o nmero de
geraes (n) que ocorreram em uma cultura se o n
inicial de clulas for conhecido.
Tendo-se o valor de n pode-se calcular o tempo de
gerao (g)
g = t/n
[Equao 5]
Exemplo:
Calcular o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular
passa de 103 para 108 aps 5 horas de cultivo:
n = 3,3 (log 108 - log 103) ----> n = 3,3 (8-3) = 16,5
geraes
g = 5 / 16,5 = 0,3 horas
Tempo para duplicar a populao celular foi de 0,3 horas.

CURVAS DE CRESCIMENTO MIBROBIANO

CURVAS DE CRESCIMENTO MIBROBIANO

Fase Lag
Perodo de adaptao da cultura
Mudana de meio, preparao do complexo enzimtico
Reparao das clulas com danos.

Fase exponencial
Fase mais saudvel das clulas onde todas esto se dividindo.
A maioria dos microrganismos unicelulares apresentam essa
fase, mas as velocidades de crescimento so bastante variveis:
- Procariticos crescem mais rapidamente que os
eucariticos

CURVAS DE CRESCIMENTO MIBROBIANO

Fase estacionria:
Num sistema fechado (tubo, frasco ou biorreator) o crescimento
exponencial no pode ocorrer indefinidamente.
Ocorre a limitao por depleo de nutrientes e acmulo de
metablitos.
Diviso = morte crescimento lquido nulo
Ainda pode ocorrer: metabolismo energtico e produo de
metablitos secundrios

Fase de morte (declnio):

A manuteno de uma cultura no estado estacionrio por longo
tempo conduz as clulas ao processo de morte.
A morte celular acompanhada da lise celular

CONTAGEM MICROBIANA

DUVIDAS ???