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16/10/2016

Sistema Lewis
MRCIA CRISTINA PENA FIGUEIREDO

Os sistemas ABO, Hh e Lewis so considerados associados e,


portanto, devem ser estudados juntos, uma vez que seus
antgenos so partes de molculas complexas que possuem as
especificidades ABO, H e Lewis

16/10/2016

Sistema Lewis
O gene Lewis (Le) no ativo no eritroblasto, sendo que os
glicolipdeos Lewis presentes na membrana eritrocitria, so
sintetizados fora dele e posteriormente adsorvidos a membrana

As glicoprotenas ABO, H e Lewis dos lquidos biolgicos (ex:saliva),


constituem o melhor meio de estudo destas substncias

O locus Lewis est localizado no cromossoma 19, posio 19q-13.3,


ligado ao locus C3 (frao do complemento)
No recm-nascido, os antgenos Lewis so evidenciveis nas
secrees, mas s podem ser determinadas com segurana, nas
hemcias, aps 2 a 3 anos de idade

Os antgenos Lewis devem ser pesquisados em amostras de sangue de


estocagem recente, j que os mesmos podem se eluir aps estocagens
prolongadas

16/10/2016

16/10/2016

Anticorpos Lewis
geralmente so IgM (4C a 22C)
No atravessam a barreira placentria e geralmente no
ocasionam DHPN*
Fixam complemento
Geralmente de ocorrncia natural
Se reativos a 37C so capazes de fixar C e causar quadro
hemoltico severo
reatividade com hemcias tratadas por enzimas
Anticorpos anti-Lex reagem com todos os fentipos Lewis,
independentemente do fentipo ABO

Sistema Rh (D)
MRCIA CRISTINA PENA FIGUEIREDO

16/10/2016

Sistema Rh

Sistema Rh (ISBT: 004 - RH)


Vrias nomenclaturas
Possui mais 50 antgenos
D, E, e, C, c so responsveis pela maioria dos
problemas clnicos associados ao sistema Rh
8 hapltipos: Dce(R1),Ce(r), DcE(R2), cE(r), Dce(R0),
dce(r), DCE(RZ), CE(ry)
Daniels et al. Vox Sang. 2009; 96:153-6

Sistema Rh

Sistema Rh (ISBT: 004 - RH)


Antgeno D
Imunognico
Reaes transfusionais
Doena hemoltica perinatal (DHPN)

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Sistema Rh
Eventos importantes na histria do Sistema Rh
Descoberta do antgeno D 1939
Observao de que a incompatibilidade ABO protegia
parcialmente a imunizao contra o antgeno D
Desenvolvimento da imunoglobulina Rh - anos 60
Isolamento das protenas que carreiam os antgenos incio
dos anos 80
Clonagem dos genes anos 1990
Determinao da base molecular
Conhecimento da estrutura do gene explicou a razo do
polimorfismo do sistema Rh

Sistema Rh

Sistema Rh (D)

O termo Rh positivo e Rh negativo refere-se presena ou


ausncia do antgeno D
O antgeno D o mais clinicamente significante

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Fentipo D fraco
Sistema Rh (D)

Deve ser investigado sempre que o resultado for negativo


em centrifugao imediata
So aqueles antgenos D que reagem menos que 2+ em
qualquer uma das fases ou aqueles que reagem somente
em AGH

Variantes do antgeno Rh (D)


D parcial:
Mutaes de ponto (missenses) no gene RHD
Rearranjos gnicos entre RHCE e RHD (alelos hbridos)

D fraco
Mutaes de ponto

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Fentipos Rh

Grupos

Antgenos eritrocitrios

Rh+

Rh-Rh

Rh negativo

Rh positivo

Herana Rh
Fisher & Race:
Propuseram a herana dependente de trs loci gnicos ligados, formando um
hapltipo:
Ex: Dce, DCe, DcE, DCE, dce, dCe, dcE, dCE
*Hapltipo:corresponde a uma combinao de um grupo de alelos de loci adjacentes,
que fazem parte do mesmo cromossomo
Wiener:
Propuseram a herana dependente de um locus gnico, que pode ser ocupado por
oito alelos mltipos:
Ex: R0, R1, R2, RZ, r, r, r, ry

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Nomenclatura Rh
Fisher & Race

Wiener

Antgenos

Genes

Rh +

Dce
DCe
DcE
DCE

D, c, e
D, C, e
D, c, E
D, C, E

R0
R1
R2
RZ

Rh0
Rh1
Rh2
RhZ

Rh-

dce
dCe
dcE
dCE

c, e
C, e
c, E
C, E

r
r
r
ry

rh
rh
rh
rhy

Gentica e Nomenclatura

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Gentica e Nomenclatura
Os antgenos do Sistema Rh so codificados pelos genes

RHD
RHCE

Hbridos: resultado da combinao


RHD/RHCE

Complexo Rh

GPB
RHD

RHCE
RHAG

Lipdios

Protena
perifrica

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Organizao gnica
Rh positivo
gene RhD

gene RhCE

10 xons

10 xons

Rh negativo
gene RhCE
10 xons

Base molecular do Sistema Rh


Gene RHD

Gene RHCE

5
1

9 10

10

Gene RHCE
9

5
3

Caixa
Rhesus

RNAm

RNAm

Protena RHD

Protena RHCE

Chr 1
1p34.3-36.13

Gene RHD

SMP1
3

Caixa
Rhesus

SMP1
3

Martine GHM. RH variabiliteit vanuit multi-etnisch perspectief consequenties voor RH genotypering 2005
Rotterdam, The Netherlands ISBN 90-9020176-9 (modificado).

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Expresso das protenas Rh


Gene RHD

Gene RHCE

1p34.3-36.13
10 xons

Gene RHAG
Expresso dos antgenos Rh
6p11-21
est relacionada:
Protena

RHAG 10 xons

1p34.3-36.13
10 xons

Na ausncia dessa protena os


antgenos Rh no se expressam
ou
expressam
fracamente
dando origem ao fentipo
Protena RhAG
Rhnull
409aa

Deleo 600pb no
ntron 4

Protena RhD

Protena RhCE

417aa

417aa

As protenas RhD e RhCE apresentam 92% de homologia e se


diferenciam em 32-35 aminocidos

Locus RH
Genes
Rh positivo

RHCE

RHD
5
5

3 ce, Ce, cE, or CE

3
3
antgeno D

Protenas
RhD

antgenos Cc / Ee

C/c

E/e

Ser103Pro

Pro226Ala

RhCE
Circulos- representam 32-35 diferentes aminocidos entre RhD e RhCE
Westhoff et al. Semin. Hematol. 2007;44:42-50 (modificado)

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Locus RH
Genes
Rh positivo

RHCE

RHD
5

3 ce, Ce, cE, or CE

antgeno D

Rh negativo

antgenos Cc / Ee

X DELETADO X

ce

Protena
No possui protena RhD

RhCE
Westhoff et al. Semin. Hematol. 2007;44:42-50 (adaptado)

RhD negativo
Rh negativo

Rh positivo

Existem basicamente trs mecanismos moleculares de


negatividade do RHD:
1)Deleo completa do gene RHD

Europeus- 15-17%

2) Pseudogene RHD (RHD) caracterizado pela insero de 37


pb no gene RHD, gerando um codon de parada prematuro,
consequentemente interrupo da protena Africanos 66%
3)Gene hbrido: parte do gene RhD substitudo pelo gene RhCE

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Expresso do antgeno D
A expresso do antgeno D nas hemcias varia de acordo com o fentipo
Stios antignicos
D normal
D fraco

10.000 33.000
200 10.000
Legenda
Antgeno
Eptopo

RhD normal

RhD Fraco

RhD Parcial

RhD Parcial/fraco

Fenotipagem Rh

Antgeno D Expresso fenotpica


- Pode variar quali ou quantitativamente
D normal: todos os eptopos presentes =10.000 33.000 stios
antignicos
D fraco : baixa expresso de D (quantitativa)
=200 10.000 stios antignicos
D parcial: ausncia de algum eptopo

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Variao na expresso do antgeno D


D fraco
Tipos de RhD
Fraco
1
2
3

Posies de troca
de aminocido

Aminocidos
substitudos

Localizao na
membrana
eritrocitria

D fraco: as alteraes
quantitativas
por Transmembranria
mutaes de
270
Val ocorrem
Gly
polimorfismo de
nas regies
385nucleotdeo nico
Gly (SNP)
Ala localizados
Transmembranria
intracelular e transmembrana da protena RhD
3

Ser

Cys

Intracelular

4.0 Reduz o nmero


201 de stios antignicos
Thr
Arg
Transmembranria
nas hemcias
4.1 Requer o teste
16 indireto AGH Trp
Cys
Transmembranria
concentrado
4.2 A maioria dos
223indivduos D fraco
Phepodem
Val receberTransmembranria
5
11
15
20

de hemcias
RhD positivo e no
149
Alaproduzir
Asp anti-D Transmembranria
No entanto, indivduos D fraco tipo 4.2 (DAR) e tipo 15
295
Met
Ile
Transmembranria
produzem anti-D
282

Gly

Asp

417

Phe

Ser

Transmembranria

Flegel WA. Transfus Apher Sci 2011; 44: 81-91.

Intracelular

Variao na expresso do antgeno D


D parcial
D parcial: tipagem sangunea RhD positivo, mas desenvolvem
anti-D
Alteraes qualitativas da protena RhD so devido as
mutaes de ponto ou rearranjos gnicos com produo de
genes hbridos, localizados na regio extracelular da protena
Eptopos de D alterados

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Categorias de Antgenos D parciais


Categorias

Eptopos Presentes
epD1

epD2

epD3

epD4

epD5

epD6

epD7

epD8

epD9

+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+

II
III a
III c
IV a (Go
(Goa)
IV b
V a (D
(D w )
VI
VII (Tar
(Tar))
DFR

Sistema Rh Nulo

Causa

- Deleo do cromossomo
- Ao de um gene regulador
Consequncia

- Menor sobrevida da hemcia

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Hapltipos silenciosos
Ausncia completa da expresso dos antgenos Rh

cDE / ___

cDE / CDE

CDE / ___

cDE / ___

CDE / ___

___ / ___

Sistema Rh Nulo
Dados

laboratoriais

- reticulcitos
- bilirrubina
- hemoglobina fetal
- antgeno i
- hematcrito
- hemoglobina
- Presena de estomatcitos e esfercitos

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Tipagem Rh
Tipagem direta:
Realizada com soro anti
anti--D albuminoso
albuminoso.. Em casos necessrios deve se utilizar o soro anti
anti--D
salino..
salino

Soro controle Rh:


obrigatrio a utilizao do soro controle Rh em todas as tipagens
tipagens..
O soro controle Rh deve ser do mesmo fabricante do soro anti
anti--D.

Soro anti-CDE:
recomendvel para definir a presena ou ausncia dos antgenos C e E em doadores Rh
negativos..
negativos

Mtodos de tipagem Rh

Gel centrifugao

Gel centrifugao

Tubos
Rh+

Rh-Rh

Lminas

Microplacas

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Fenotipagem Rh

Obrigatrio a utilizao do Controle Rh


- Deve ser do mesmo fabricante do anti-D
- O diluente deve ter exatamente a mesma composio do
anti-D, menos os anticorpos.

Controle Negativo

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Fenotipagem Rh

Realizar o TAD da amostra quando o controle Rh for


positivo

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D fraco
Caractersticas::
variao quantitativa do antgeno D
menor nmero de stios antignicos por clulas
reao varivel com anti-soros comerciais
melhor reao com antiglobulina humana

Tipos:
alto grau
baixo grau

Porque realizar a Pesquisa de D fraco?


A definio de D fraco reagente dependente X nmero de antgeno
RDC 153, anexo I, E.1.2- Determinao do fator Rh (D): Se a reao for
negativa para a presena do antgeno D, deve ser efetuada tcnica
para a excluso de D fraco
A tipagem D fraco no identificada e laudada como Rh D negativo,
ser percebida como erro em outros servios que identifique o D fraco

Gestante

preventivo de hemlise
diminuio dos custos

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D parcial
Caractersticas:
Resulta da expresso de diferentes eptopos no antgeno D.
So definidos por anti-soros monoclonais.

Imunogenicidade

D > c >
Altamente
Imunognico

>

>

Raramente
Imunognico

50 - 75% das
pessoas D-negativas expostas
a eritrcitos D-positivos
produz anti-D

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Anticorpos Rh

Estmulo : transfuso/gestao

Classe: IgG

Sub-classes: IgG1 e IgG3

Geralmente no fixam C

Causam hemlise predominantemente extra-vascular

Tcnica de deteco: enzimtica e antiglobulina

Anticorpos Rh

Anti D - mais freqente, mais imunognico

Anti E - mais freqente depois do anti D

Anti c - causa problemas clinicamente importantes

Anti e - pode ocorrer como alo ou auto-ac

Anti C - raramente encontrado isolado


- geralmente associado ao Anti D
- causa RTH tardia

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Anticorpos Rh

Efeitos da interao Ag/Ac in vivo

Reao Transfusional

DHPN

Identificao de variantes do antgeno D

Testes sorolgicos associados a testes moleculares


auxiliam na identificao de variantes do antgeno D

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OBRIGADA

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