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Qumica Forense

Serologia

Tipos de sangue: classificao do sangue ABO


O sangue uma mistura complexa de clulas, fragmentos de clulas
(plaquetas), protenas e ies inorgnicos suspensos ou dissolvidos num
liquido

amarelado

plido

chamado

plasma.

Os

componentes

mais

importantes do ponto de vista da classificao so s clulas vermelhas


(RBCs), as clulas responsveis pelo transporte de oxignio dos pulmes
para as clulas atravs do corpo. A cor vermelha devido hemoglobina
com o Fe(III).
A superfcie das clulas vermelhas coberta com uma variedade
muito grande de molculas.
Sr. V.; 323, 415, 278, 199, 301, 894, 111, 300, 793, 232, 109
Sr. W.: 323, 489, 278, 199, 301, 894, 771, 300, 443, 232, 109
Cada nmero representa uma molcula diferente.
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As RBCs diferem entre indivduos e sempre que um indivduo recebe um
sangue diferente o seu sistema imunitrio comea a trabalhar para destruir
estes invasores.
Estas molculas que atacam so os anticorpos. Para cada molcula
especifica no familiar para o sistema imunitrio de uma pessoa molculas
conhecidas como antigenes o sistema imunitrio produz um anticorpo
especifico. Cada anticorpo liga-se a um antigene especfico numa interao
tipo Chave/fechadura

A natureza qumica dos antigenes responsveis pelos tipos de


sangue que os classifica nos grupo ABO foram pela primeira
vez descobertos em 1953 pelos bioqumicos ingleses, Walter
Morgan (1900-2003) e Winifred Watkins (1924-2003).

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Todos os 3 antigenes tm estruturas similares: uma molcula simples de
glucose (Glu) ligada a uma molcula de galactose (Gal), uma molcula de
N-acetilglucosamina (Nag), outra molcula de galactose e uma molcula de
fructose (Fru)
Nesta conformao a estrutura
-cauda lipidica-Glu-Gal-Nag-Gal-Fru actua como antigen O
Se uma molcula da Nag adicionada ao terminal galactose a estrutura actua
como antigen A. Se uma molcula de galactose adicionado ao terminal Gal e
actua como um antigen B

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Uma pessoa classificada com um sangue tipo A significa que a superfcie
das suas clulas RBCs tm o antigen A. Tal pessoa tm tambm anticorpos
que no reconhecem e por isso atacam clulas do tipo B. Eles so os
anticorpos anti-B.
Se a uma pessoa com sangue A
dado sangue tipo B o seu sistema
imunitrio no reconhece as
clulas tipo B e os seus anticorpos
anti-B comeam a atacar o sangue
da transfuso.

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A tabela seguinte indica qual o tipo de sangue que uma pessoa pode
doar ou receber.

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O processo fsico de testar os tipos de sangue para ABO muito simples e
necessita de apenas dois reagentes, serum anti-A e serum anti-B. A amostra a
ser analisada testada com cada um dos reagentes separadamente uma de
cada vez.
A tabela seguinte apresenta os resultados esperados e qual a informao que
fornece:
Se o teste positivo (produz
aglutinao) com o serum anti-A mas
negativo (nenhuma aglutinao) com o
serum anti-B, o sangue considerado
de tipo A.
Um resultado negativo com o serum
anti-A e um resultado positivo com o
serum anti-B, indica que o sangue de
tipo B.
Finalmente resultados positivos e
negativos com ambos os reagentes
indicam a presena do tipo AB ou O
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respectivamente.

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Caracterizao de manchas de sangue

A caracterizao de uma mancha de sangue refere-se ao processo de


identificao de uma mancha como, sangue humano ou no, e depois no
reconhecimento de outras propriedades essenciais do sangue tal como o
grupo sanguneo e protenas polimrficas e isoenzimas que possam estar
presentes.
O primeiro passo verificar se uma mancha aparente de sangue sangue e
no tinta vermelha, ketchup ou outro material.
Primeiro teste foi desenvolvido em 1904 por Oskar e
Rudolf Adler. Fazia uso da benzidina (p-diaminodifenilo).
Este teste de benzidina baseava-se no facto da hemoglobina do sangue se
comportar como se fosse uma enzima peroxidase. As peroxidases so
enzimas que aumentam a eficincia do perxido de hidrognio na oxidao
de certas substncias tais como fenis e aminas aromticas.
Quando benzidina e H2O2 adicionado ao sangue ocorre uma reaco de
oxidao/reduo na qual a benzidina convertida a um produto
12 aula polimrico com cor azul-esverdeada conhecido como corante diazo.

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Teste de Kastle-Meyer. feito misturando hidrxido de potssio,
fenoftaleina e p de zinco. Quando o H2O2 e o zinco so adicionados ao
sangue catalisam a converso de fenoftaleina a uma configurao rosa
profundo.
A fenoftaleina reduzida por dois electres (do zinco) fenoftalin que fica
dissolvida na soluo alcalina. A cor rosa caracterstica da fenoftaleina
passa a amarelo claro/incolor. esta forma que est presente nos teste de
Kastle-Meyer. Para dar novamente a cor rosa tem que haver uma oxidao
da fenoftalin o que acontece na reaco do perxido de hidrognio com
hemoglobina.
HOOH + Fe3+[heme] Fe4+=O[heme] + OH + H+

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Outro teste presuntivo para manchas de sangue envolve o uso de Hemastix
(produto Bayer)
Hemastix so tiras de celulose que contm uma mistura de o-toluidina (2metilanilina) e perxido de hidrognio. So fceis de usar porque apenas
se mergulha a tira na amostra a ser testada. Se o sangue est presente, a
hemoglobina cataliza a converso de o-toluidina a um produto esverdeado.
A intensidade do verde pode dar uma indicao da concentrao de sangue
na amostra.

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Hemident Presumptive Blood ID Kit
Leucomalachite green

Contem: <1% Leucomalachite green (mpola esq)


3% H2O2 (mpola dir)
The reagents are capable of identifying
down to one part per million of blood

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Composto orgnico usado


como corante

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Teste do luminol (5-amino-2,3-dihidro-1,4-ftalazinediona)
Desenvolvido em 1937 pelo criminologista alemo, Walter Specht.
Quando tratado com H2O2 na presena de sangue, um dos anis do luminol
abre, libertando azoto gasoso e produzindo um composto conhecido como
3-aminonaflato num estado excitado (forma indicada com um *). Aps
breves momentos o 3-APA* d um foto com um c.d.o. de cerca de 425
nanometros que corresponde a uma luz azul-violeta; fluoresce.

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Experimental: O reagente de luminol pode ser feito dissolvendo 5 gramas
de carbonato de sdio e 0.1g de luminol em 100 militros de gua destilada.
Mesmo antes de se usar adiciona-se 0.7g de perborato de sdio soluo
de carbonato de sdio/luminol. O teste feito numa cmara escura de tal
modo que a fluorescncia produzida pode facilmente ser vista. Primeiro a
amostra a ser testada coberta com papel de filtro e depois feito o spray
com uma soluo de lixvia caseira. A soluo de luminol depois
adicionada imediatamente em spray por cima do papel de filtro ensopado
em lixvia. Se o sangue est presente ele fluoresce com uma cor azulvioleta.
um teste muito sensvel que tem sido usado em amostras muito diludas.
D teste positivo mesmo com amostras com alguns anos. Muitas vezes
usado quando outros testes presuntivos no do positivo.

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A quimica por detrs do luminol:

O luminol tem primeiro que ser activado com um oxidante. Usualmente


uma soluo de perxido de hidrognio e um sal de hidrxido (base). Na
presena de um catalisador tal como um composto de ferro, o H2O2
decompoem-se em oxignio e gua:
2 H2O2 O2 + 2 H2O
Num laboratrio o catalisador usado o ferrocianeto de potssio.
Do ponto de vista forense, na deteco de sangue, o catalisador o ferro
presente na hemoglobina.
Quando o luminol reage com a base formado um dianio. O oxignio
produzido atravs do H2O2 reage com o dianio do luminol. O produto
desta reaco um dianio orgnico muito instvel e decompem-se
imediatamente com perda de azoto para dar o acido 3-aminoftalico com
electres num estado excitado. Assim que acontece o relaxamento ao
estado fundamental o excesso de energia libertado como um foto
visvel como uma luz azul.
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NH2 O

NH2 O

NH2 O
NH
NH

2OH

N
N

N
N
O

O
Luminol

Dianio

Dianio

Reage com O2 para


produzir um dianio instvel
NH2 O

NH2 O
O
O

+ h

O
Dianio no
estado fundamental (S0)

NH2 O
O
O

O
Dianio singuleto (S1)
Estado excitado

O
O

O
Dianio tripleto (T1)
Estado excitado

http://www.youtube.com/watch?v=EdBuzBX3dxQ
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+ N2

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Teste de Takayama e Teste de Teichmann
Em ambos os testes a adio de um reagente ao sangue resulta na
formao de cristais.
No teste de Teichmann o reagente uma mistura de cido actico glacial e
cloreto de sdio. O reagente provoca a quebra da molcula de hemoglobina
produzindo cristais acastanhados de puro hemin que tm um brilho violeta
quase preto. (Hemin a forma de heme que contem o io Fe3+).
No teste de Takayama piridina adicionado ao sangue, causando a
reduo da hemoglobina a um complexo de piridina-hemoglobina com uma
cor caracterstica rosa-salmo. Em ambos os testes o cristal colorido pode
ser observado ao microscpio.
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ltima fase na deteco de um vestgios como sangue classific-lo com:
humano ou animal
O teste usado chamado de teste precipitina. baseado no principio do
antigene-anticorpo. Quando uma amostra de sangue colocada com
anticorpos contra protenas humanas forma-se precipitina se a amostra de
sangue humano. Este teste realizado com serum de coelhos o qual tem
anticorpos os quais destroem o sangue humano quando adicionado ao teste.
Assim se ocorre precipitao o sangue de origem humana.
Para ler mais: http://www.ehow.com/about_6545261_forensics-history-bloodanalyzing.html#ixzz2TS7YJ2te
Por fim e quando necessrio do ponto de vista forense faz-se a anlise do DNA

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