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Debido a la compleja organizacin interna de las clulas eucariotas, distribuir y dirigir a las protenas
hacia sus destinos adecuados son tareas considerables. El primer paso en la distribucin de las
protenas tiene lugar mientras an est en marcha la traduccin. Muchas protenas destinadas al
retculo endoplsmico, al aparato de Golgi, a los lisosomas, a la membrana plasmtica y a ser
secretadas se sintetizan en los ribosomas unidos a la membrana del retculo endoplsmico. A
medida que la traduccin contina, las cadenas polipeptdicas se transportan al interior del retculo
endoplsmico, donde tiene lugar el plegamiento y procesamiento de las protenas. Desde el retculo
endoplsmico, las protenas se transportan en vesculas al aparato de Golgi, donde son nuevamente
procesadas y distribuidas para el transporte a los lisosomas, a la membrana plasmtica o a ser
secretadas desde la clula. El retculo endoplsmico, el aparato de Golgi y los lisosomas
se diferencian de esta manera de otros orgnulos citoplsmicos en que intervienen conjuntamente en
el procesamiento de las protenas y en que estn conectados mediante vesculas de transporte.
CAPITULO I
Figura 9.1
Figura 9.2
Va secretora. Las clulas acinares pancreticas, que secretan la mayor parte de sus protenas sintetizadas de novo
en el tracto digestivo, se marcaron con aminocidos radiactivos para estudiar la va intracelular utilizada por las
protenas secretadas. Tras un corto periodo de incubacin con aminocidos radiactivos (marcaje de 3 minutos), la
autorradiografa puso de manifiesto que las protenas sintetizadas de novo se localizaban en el RE rugoso. Tras
una in cubacin posterior con aminocidos no radiactivos (caza), se observ que las protenas se haban
desplazado desde el RE al aparato de Golgi y despus, en el interior de vesculas de secrecin, a la membrana
plasmtica y al exterior de la clula.
Figura 9 .2
por las protenas secretadas simplemente mediante el marcaje con aminocidos radiactivos de las
protenas recin sintetizadas. La localizacin en la clula de las protenas marcadas radiactivamente
se determin a continuacin mediante una autorradiografa, poniendo de manifiesto los lugares
celulares implicados en los procesos que conducen a la secrecin de las protenas. Despus de
una breve exposicin de las clulas acinares pancreticas a los aminocidos radiactivos, se
detectaron protenas sintetizadas de novo en el RE rugoso, por lo que se le identific como el
lugar de sntesis de las protenas destinadas a la secrecin. Si a continuacin las clulas se
incubaban durante un corto perodo de tiempo en un medio que contena aminocidos no
radiactivos (proceso conocido como caza), las protenas marcadas radiactivamente se detectaban
en el aparato de Golgi. Tras perodos de caza ms largos, las protenas marcadas radiactivamente
migraban desde el aparato de Golgi a la superficie celular en vesculas de secrecin, que
posteriormente se fusionaban con la membrana plasmtica para liberar su contenido fuera de la
clula.
Estos experimentos definieron una va tomada por las protenas secretadas, la va
secretora RE rugoso, Golgi , vesculas de secrecin-exterior de la clula. Estudios adicionales
ampliaron estos resultados y demostraron que esta va no est restringida a las protenas destinadas
a ser secretadas. Las protenas de la membrana plasmtica y las lisosmicas tambin migran desde
el RE rugoso hasta el Golgi y posteriormente a sus destinos finales. Otras protenas pasan por las
etapas iniciales de la va secretora pero posteriormente son retenidas y su actividad tiene lugar en el
RE o en el aparato de Golgi.
Por lo tanto, la entrada de las protenas en el RE representa un cruce de caminos muy importante en
el trfico de protenas en las clulas eucariotas. Las protenas destinadas a ser secretadas o a
incorporarse en el RE, aparato de Golgi, lisosomas, o membrana plasmtica son dirigidas
inicialmente al RE. En las clulas de los mamferos, la mayora de las protenas son transferidas al
RE mientras estn siendo traducidas por los ribosomas unidos a la membrana (Fig. 9.3).
Por el contrario, las protenas destinadas a permanecer en el citosol o que se van a incorporar al
ncleo, a las mitocondrias, cloroplastos o peroxisomas son sintetizadas en los ribosomas libres y
liberadas al citosol cuando finaliza su traduccin.
Figura 9.4
El papel general de las secuencias seal para dirigir a las protenas a sus localizaciones adecuadas
en la clula se dilucid por primera vez mediante estudios sobre la internalizacin de las
protenas de
David Sabatini y Gnter Biobel propusieron por primera vez en 1971 que la seal para la unin
del ribosoma al RE era una secuencia de aminocidos prxima al extremo amino-terminal de la
cadena polipeptdica en crecimiento. Esta hiptesis fue apoyada por los resultados de la traduccin
in vitro de ARNm que codifican protenas secretadas, como las inmunoglobulinas (Fig. 9.5). Si
un ARNm que codifica una protena secretada era traducido in vitro por ribosomas libres, se
observaba que la protena producida era ligeramente mayor que la protena normal secretada.
Sin embargo, si se aadan microsomas al sistema la protena traducida in vitro se incorporaba a
los microsomas y se escinda en el tamao adecuado, Estos experimentos condujeron a que se
formulara de una manera ms detallada la hiptesis de la seal, proponiendo que una secuencia
gua amino-terminal marca y dirige la cadena polipeptdica a los microsomas y que es escindido
posteriormente por una proteasa microsomal. Muchos hallazgos posteriores han sostenido este
modelo, incluyendo experimentos con ADN recombinante que han demostrado que la adicin de
una secuencia seal a una protena que normalmente no es secretada es suficiente para dirigir la
incorporacin de la protena recombinante al RE rugoso.
Figura 9.7
El mecanismo por el que las protenas secretadas son dirigidas al RE durante su traduccin
(va cotraduccional) se
conoce bien
actualmente.
Las secuencias seal
estn
constituidas aproximadamente por 20 aminocidos, incluyendo un grupo
de residuos hidrfobos, habitualmente en el extremo amino-terminal de la cadena polipeptdica (Fig.
9.6). A medida que salen del ribosoma, las secuencias seal son reconocidas y unidas a una que
est constituida por seis polipptidos y un ARN citoplsmico pequeo ( ). La PRS se une tanto al
ribosoma como a la secuencia seal, inhibiendo la traduccin y dirigiendo todo el complejo (PRS,
ribosoma, y la cadena polipeptdica en crecimiento) al RE mediante la unin al receptor de la PRS
en la membrana del RE (Fig. 9.7). La unin al receptor libera a la PRS del ribosoma y de la
secuencia seal de la cadena polipeptdica en crecimiento. Entonces el ribosoma se une a un
complejo de translocacin de protenas en la membrana del RE, y la secuencia seal es insertada en
un canal de la membrana. En las levaduras y en las clulas de los mamferos, los canales de
translocacin que atraviesan la membrana de RE estn constituidos por tres protenas
transmembrana, denominadas protenas Sec6l. Las protenas Sec6l de las levaduras y los
mamferos estn estrechamente relacionadas con las protenas de la membrana plasmtica que
translocan los polipptidos secretarios en las bacterias, demostrndose una conservacin
significativa de la maquinaria de secrecin de protenas en las clulas procariotas y eucariotas. La
transferencia de ribosoma desde la PRS al complejo Sec6l permite que se reanude la
traduccin, y la cadena polipeptdica en crecimiento se transfiere directamente al canal Sec6l y
atraviesa la membrana del RE a medida que contina la traduccin. As, el proceso de la sntesis de
protenas dirige directamente la transferencia de las cadenas polipeptdicas en crecimiento a travs
de canal Sec6l y al interior del RE. A medida que contina la translocacin, la peptidasa seal
escinde la secuencia seal y el polipptido es liberado en la luz del RE.
Muchas protenas en las levaduras, as como algunas protenas en las clulas de los mamferos, son
dirigidas al RE tras haber sido traducidas (translocacin postraduccional), en lugar de ser
transferidas al RE durante su sntesis en los ribosomas unidos a la membrana. Estas protenas son
sintetizadas en ribosomas citoslicos libres, y su incorporacin postraduccional al RE no requiere
una PRS. En su lugar, sus secuencias seal son reconocidas por protenas receptoras
diferentes (el complejo
Sec62/63) asociadas con el complejo Sec6l en la membrana del RE (Fig. 9.8). Se requieren
chaperonas citoslicas para mantener las cadenas polipeptdicas en una conformacin desplegada
para que puedan entrar en el canal Sec6l, y se requiere otra chaperona en el RE (denominada BiP)
para tirar de la cadena polipeptdica a travs del canal y hacia dentro del RE. Parece que la unin
de las cadenas polipeptdicas a BiP es necesaria para dirigir la traslocacin postraduccional de
las protenas al RE, mientras que la translocacin cotraduccional de las cadenas polipeptdicas en
crecimiento est dirigida directamente por el proceso de la sntesis proteica.
Figura 9.8
Figura 9.9
Las protenas tambin pueden anclarse en la membrana del RE mediante secuencias seal internas
que no son escindidas por la peptidasa seal (Fig. 9.12). Estas secuencias seal internas son
reconocidas por la PRS y trasladadas a la membrana del RE de la manera vista hasta ahora. Sin
embargo, debido a que no son escindidas por la peptidasa seal, estas secuencias seal actan como
hlices alfa transmembrana que abandonan el canal de translocacin y anclan a las protenas a la
membrana del RE. Es importante sealar que las secuencias seal internas pueden estar
orientadas de tal manera que dirijan la translocacin a travs de la membrana bien del extremo
amino o bien de extremo carboxilo termina de la cadena polipeptdica. Por tanto, dependiendo de
la orientacin de la secuencia seal, las protenas insertadas en la membrana mediante este
mecanismo pueden tener bien su extremo amino o bien su extremo carboxilo terminal expuesto al
citosol.
Las protenas que atraviesan la membrana varias veces se piensa que son insertadas como resultado
de una serie alternante de secuencias seal internas y secuencias transmembrana de detencin de la
transferencia. Por ejemplo, una secuencia seal interna puede dar lugar a la insercin en la
membrana de una cadena polipeptdica con su extremo amino termina en el lado citoslico (Fig.
9.13). Si a continuacin se encuentra una secuencia de detencin de la transferencia, el polipptido
formar un bucle en la luz del RE, y la sntesis de la protena continuar en el lado citoslico de la
membrana. Si aparece una segunda secuencia seal, la cadena polipeptdica en crecimiento se
insertar otra vez en el RE, dando lugar a otro dominio en forma de bucle en el lado citoslico de la
membrana. A esto le puede seguir otra secuencia de detencin de la transferencia, por lo que una
serie alternante de secuencias seal y de detencin de la transferencia pueden dar lugar a la insercin
de las protenas que atraviesan la membrana varias veces, con dominios en forma de bucle
expuestos tanto a la luz del RE como al lado citoplsmico.
membrana que no deriva del glicerol) en el aparato de Golgi. Por lo tanto, el RE es el responsable
de la sntesis de los productos finales o de los precursores de todos los lpidos principales de las
membranas eucariotas.
El RE liso es abundante en las clulas que son particularmente activas en el metabolismo lipdico.
Por ejemplo, las hormonas esteroideas se sintetizan (a partir del colesterol) en el RE, por lo que se
encuentra una gran cantidad de RE liso en las clulas que producen esteroides, como las de los
testculos y del ovario. Adems, el RE liso es abundante en el hgado, donde contiene enzimas que
metabolizan varios compuestos liposolubles. Estas enzimas desintoxicantes inactivan un nmero
importante de drogas potencialmente nocivas (p. ej., fenobarbital), convirtindolas en compuestos
hidrosolubles que pueden eliminarse de cuerpo a travs de la orina. Por lo tanto, el RE liso
est implicado en mltiples aspectos de metabolismo de los lpidos y de los compuestos liposolubles.
Mientras que la mayora de las protenas viajan desde el RE al Golgi, algunas protenas han de
retenerse en el RE en lugar de continuar a lo largo de 1 va secretora. Concretamente, las protenas
que realizan su funcin en el R (incluyendo BiP, la peptidasa seal, la protena disulfuro isomerasa,
y otras enzimas tratadas previamente), deben retenerse en el interior de dicho orgnulo. Por lo tanto,
ser exportadas al Golgi frente a ser retenidas en el RE es la primer disyuntiva con la que se
encuentran las protenas que estn siendo distribuida a sus destinos correctos en la va secretora.
Un cruce de caminos similar aparece en cada paso posterior de transporte, como la retencin en el
Golgi frente la exportacin a los lisosomas o a la membrana plasmtica. En cada caso, una seales
especficas de localizacin dirigen a las protenas a sus destinos intra celulares correctos.
La distincin entre las protenas que han de ser exportadas desde el RE aquellas que son
retenidas en l parece que se produce por dos tipos diferentes de secuencias directoras que marcan
especficamente a las protenas como aquellas (1) destinadas para el transporte al Golgi o (2)
destinadas para la retencin en el RE. Muchas protenas se retienen en la luz del RE debido a
la
Es interesante destacar que las seales KDEL y KKXX no impiden que la protenas solubles
del RE sean empaquetadas en vesculas y transportadas Golgi. Lo que sucede es que estas seales
provocan que las protenas residente en el RE sean recuperadas selectivamente del compartimento
intermedio R Golgi o del complejo de Golgi y devueltas al RE a travs de una va de reciclad
(Fig.
9.21). Las protenas que portan las secuencias KDEL y KKXX parece que se unen a receptores
especficos para el reciclado en la membrana de estos compartimentos y posteriormente son
transportadas selectivamente de vuelta hacia el R La accin de las secuencias KDEL y KKXX
como seales de retencin/recuperacin indica que hay un flujo masivo no selectivo de protenas a
travs de
1a va secretora dirigido desde el RE a la superficie celular. Este flujo desde el RE Golgi puede
ser responsable de la exportacin de muchas protenas desde el R Sin embargo, tambin parece que
algunas protenas destinadas a ser secretada estn marcadas por seales que dirigen activamente su
exportacin desde el R Por lo tanto, la exportacin de protenas desde el RE puede tener lugar
no slo p este flujo masivo, sino tambin por una va regulada que reconoce especficamente las
seales que median el transporte selectivo de las protenas al aparato de Golgi.
Aparato de Golgi
El funciona como una fbrica en la que las protenas recibidas desde el RE se reprocesan y
distribuyen para ser transportadas a sus destinos finales: los lisosomas, la membrana plasmtica o la
secrecin. Adems, como ya se ha mencionado, los glicolpidos y la esfingomielina son sintetizados
Los diferentes procesos de procesamiento y distribucin de las protenas parece que tienen lugar en
una secuencia ordenada en diferentes regiones del complejo de Golgi, por lo que se suele considerar
que el Golgi est constituido por mltiples compartimentos diferenciados. Aunque no se ha
establecido el nmero de tales compartimentos, normalmente se considera que el Golgi est
constituido por cuatro regiones funcionalmente diferentes: la red cis del Golgi, el apilamiento del
Golgi (que se divide en los subcompartimentos medial y trans) la red trans del Golgi (Fig. 9.23).
Las protenas procedentes del RE se transportan al compartimento intermedio RE-Golgi y entran a
continuacin en el aparato de Golgi por la red cis del Golgi.
Posteriormente pasan a los
compartimentos medial y trans del apilamiento del Golgi, donde tienen lugar la mayor parte de
las actividades metablicas del aparato de Golgi. Las protenas modificadas, los lpidos y los
polisacridos migran a continuacin a la red trans del Golgi, que acta como un centro de
organizacin y distribucin, dirigiendo el trfico molecular a los lisosomas, a la membrana plasmtica,
o al exterior de la clula.
Aunque el aparato de Golgi se describi por primera vez hace ms de 100 aos, el mecanismo por
el que las protenas se desplazan a travs del aparato de Golgi an no ha sido establecido y es un
rea de controversia entre los bilogos celulares. Una posibilidad es que sean unas vesculas de
transporte las que lleven las protenas entre una cisterna y otra de los compartimentos del Golgi.
Sin embargo, un modelo alternativo que se apoya en una evidencia experimenta considerable
propone que las protenas se transportan a travs de los compartimentos del Golgi dentro de las
cisternas del Golgi, que van madurando y se desplazan progresivamente a travs del Golgi en una
direccin cis-trans.
Glicosilacin de protenas en el Golgi
El procesamiento de las protenas en el Golgi supone la modificacin y sntesis de los restos de
carbohidratos de las glicoprotenas. Uno de los aspectos principales de este procesamiento es
la modificacin de los N-oligosacridos que se unieron a las protenas en el RE. Como ya se ha
tratado en este Captulo, las protenas se modifican en el RE al aadrselas un oligosacrido
constituido por 14 residuos de azcar (vase Fig. 9.15). Seguidamente se eliminan tres residuos de
glucosa y una manosa mientras los polipptidos an estn en el RE. Tras el transporte al aparato
de Golgi, los N- oligosacridos de estas glicoprotenas sufren diversas modificaciones posteriores.
Los N-oligosacridos se procesan en el aparato de Golgi mediante una secuencia ordenada de
reacciones (Fig. 9.24). La primera modificacin de las protenas destinadas a ser secretadas o a la
membrana plasmtica, es la eliminacin de otros tres residuos de manosa. A esto le sigue la adicin
secuencias de una N-acetilglucosamina, la eliminacin de dos manosas ms, y la adicin de una
fucosa y de otras dos N-acetilglucosaminas. Finalmente, se aaden tres galactosas y tres residuos
diferente durante su paso a travs del Golgi, dependiendo tanto de la estructura de la protena como
de la cantidad de enzimas implicadas en el proceso presentes en el complejo de Golgi de los
diferentes tipos de clulas. Por consiguiente, las protenas pueden salir del Golgi con diversos
N- oligosacridos.
El procesamiento del N-oligosacrido de las protenas lisosmicas difiere del de las protenas
secretadas y de la membrana plasmtica. Las protenas destinadas a incorporarse en los
lisosomas, en vez de la eliminacin inicial de tres residuos de manosa, son modificadas mediante
una fosforilacin de la manosa.
En el primer paso de esta reaccin, se aade Nacetilgiucosamina fosfato a residuos especficos de manosa, probablemente mientras la protena an
est en la red cis del Golgi (Fig. 9.25). A esto le sigue la eliminacin del grupo Nacetilgiucosamina, dejando residuos de manosa-6-fosfato en el N-oligosacrido. Debido a esta
modificacin, estos residuos no son eliminados durante el procesamiento posterior. En su lugar,
estos restos de manosa fosforilados son reconocidos especficamente por un receptor de manosa6-fosfato en la red trans del Golgi, que dirige el transporte de estas protenas a los lisosomas.
Por lo tanto, la fosforilacin de los residuos de manosa es un paso crucial en la distribucin de las
protenas lisosmicas hacia su destino intracelular correcto. La especifidad de este proceso reside
en la enzima que cataliza el primer paso en la secuencia de la reaccin -la adicin selectiva de
N- acetilglucosamina fosfato a las protenas lisosmicas. Esta enzima reconoce un determinante
estructura que est presente en las protenas lisosmicas pero no en las protenas destinadas a la
membrana plasmtica o a la secrecin. Este determinante de reconocimiento no es una
simple secuencia de aminocidos, sino que est constituido, en la protena plegada, por la
yuxtaposicin de secuencias de aminocidos de regiones diferentes de la cadena polipeptdica. A
diferencia de las secuencias seal que dirigen la translocacin de protenas al RE, el determinante
de reconocimiento que conduce a la fosforilacin de la manosa, y que por tanto dirige finalmente
las protenas a los lisosomas, depende de la conformacin tridimensional de la protena plegada.
Estos determinantes
se denominan regiones seal, a diferencia de las seales lineales tratadas previamente en este
captulo.
Las protenas tambin pueden mortificarse mediante la adicin de carbohidratos a las cadenas
laterales de residuos de serina y treonina que formen parte de secuencias especficas (Oglicosilacin) (vase Fig. 7.28). Estas modificaciones tienen lugar en el aparato de Goigi mediante
la adicion secuencial de residuos nicos de azcar. La serina o la treonina se suelen unir
directamente a la N-cetilgalactosamina, a la que despus pueden aadirse otros azcares. En
algunos casos, estos azcares sufren modificaciones posteriores por la adicin de grupos sulfato.
Metabolismo
2
de
lpidos
de
polisacridos
en
el
Golgi
de la actividad metablica del aparato de Golgi en las clulas vegetales se dedica a la sntesis
de polisacridos.
Las protenas que realizan su funcin en el aparato de Golgi deben retenerse en ese orgnulo, en
lugar de ser transportadas a travs de la va secretora. A diferencia del RE, todas las protenas
retenidas en el complejo de Golgi estn asociadas con la membrana del Golgi en lugar de ser
protenas solubles en su interior. Las seales responsables para la retencin de algunas protenas en
el Golgi se han localizado en sus dominios transmembrana, que retienen las protenas en el aparato
de Golgi impidiendo que sean empaquetadas en las vesculas de transporte que salen por la red
trans del Golgi. Adems, al igual que sucede con las secuencias KKXX de las protenas de
membrana residentes en el RE, las seales en las colas citopismicas de algunas protenas del Golgi
son responsables de la recuperacin de estas protenas desde compartimentos posteriores a lo largo
de la va secretora.
La va secretora constitutiva, que est presente en todas las clulas, da lugar a una secrecin
de protenas continua no regulada. Sin embargo, algunas clulas tambin poseen una va secretora
regulada diferente, a travs de la que se secretan protenas especficas en respuesta a
seales ambientales. Ejemplos
de secrecin regulada son la liberacin de hormonas desde las clulas endocrinas, la liberacin de
neurotransmisores desde las neuronas, y la liberacin de enzimas digestivas desde las clulas
acinares pancreticas que se vio al principio de este captulo (vase Fig. 9.2). Las protenas se
distribuyen a la va secretora regulada en la red trans del Golgi, donde son empaquetadas en
vesculas secretoras especializadas. Estas vesculas secretoras, que son ms grandes que otras
vesculas de transporte, almacenan su contenido hasta que unas seales especficas dirigen su fusin
con la membrana plasmtica. Por ejemplo, las enzimas digestivas producidas por las clulas
acinares pancreticas se almacenan en vesculas secretoras hasta que la presencia de comida en el
estmago y en el intestino delgado desencadena su secrecin. La distribucin de las protenas
hacia la va secretora regulada implica el reconocimiento de regiones seal compartidas por
muchas de las protenas que entran en esta va. Estas protenas se acumulan selectivamente en la
red trans del Golgi y se liberan por la gemacin de las vesculas secretoras.
En las levaduras y en las clulas vegetales, que carecen de lisosomas, las protenas son transportadas
desde el aparato de Golgi hacia un destino adicional: la vacuola (Fig. 9.29). En estas clulas, las
vacuolas asumen la funcin de los lisosomas adems de realizar otros cometidos, como el
almacenamiento de nutrientes y el mantenimiento de la presin de turgencia y de equilibrio
osmtico. A diferencia de las protenas destinadas a los lisosomas, las protenas se destinan a
las vacuolas mediante secuencias peptdicas cortas en lugar de por seales de carbohidratos.
Mecanismo de transporte de las vesculas
Como ha quedado claro en las secciones precedentes de este captulo, las vesculas de transporte
desempean un papel central en el trfico de las molculas entre los diferentes compartimentos
rodeados por membrana de la va secretora. Como se tratar en el Captulo 12, las vesculas estn
implicadas de igual forma en el transporte de material que se ha captado en la superficie celular.
El transporte de las vesculas es, por tanto, una actividad celular fundamental, responsable de trfico
molecular entre diversos compartimentos rodeados por membrana, especficos. Por lo tanto, la
selectividad de dicho transporte resulta clave para mantener la organizacin funciona de la clula.
Por ejemplo, las enzimas lisosmicas deben transportarse especficamente desde el aparato de Golgi
a los lisosomas -no a la membrana plasmtica o al RE-. Algunas de las seales que dirigen a
las
protenas a los orgnulos especficos, como los lisosomas, ya se han tratado en este captulo. Estas
protenas se transportan en vesculas, por lo que la especificidad de transporte se basa en el
empaquetamiento selectivo de la carga seleccionada en vesculas que reconozcan y se fusionen
slo con la membrana diana apropiada. Dada la gran importancia que tiene el transporte de las
vesculas en la organizacin de la clula eucariota, el conocimiento de los mecanismos moleculares
que controlan el empaquetamiento de las vesculas, la gemacin, y la fusin es un rea principal de
investigacin en biologa celular.
Se han desarrollado otros sistemas reconstituidos similares para analizar el transporte entre otros
compartimentos, incluyendo el transporte desde el RE al Golgi y el transporte desde el Golgi a las
vesculas de secrecin, a las vacuolas, y a la membrana plasmtica. El desarrollo de estos sistemas
in vitro ha permitido realizar estudios bioqumicos del proceso de transporte y el anlisis
funciona de las protenas identificadas mediante mutaciones en levaduras, as como el aislamiento
directo de algunas de las protenas implicadas en la gemacin y la fusin de las vesculas.
Los estudios sobre la transmisin sinptica en las neuronas, que representa una forma
altamente especializada de la secrecin regulada, han revelado aspectos crticos de los mecanismos
moleculares del transporte vesicular. Una sinapsis es la unin de una neurona con otra clula,
que puede ser o bien otra neurona o un efector, como una clula muscular. La informacin se
transmite a travs de la sinapsis mediante neurotransmisores qumicos, como la acetilcolina, que se
almacenan en vesculas
Las cubiertas de las vesculas revestidas por clatrina estn compuestas por dos clases de complejos
proteicos, clatrina y protenas adaptadoras, que se unen al lado citoslico de las membranas (Fig.
9.31). La desempea un papel estructural, al ensamblarse formando una estructura semejante a la
red de las canastas de baloncesto que distorsiona la membrana y dirige la gemacin de las
vesculas. La unin de la clatrina a las membranas est mediada por una segunda clase de protenas,
denominadas protenas adaptadoras. El ensamblaje de las vesculas cubiertas por clatrina en la
membrana plasmtica y en la red trans del Golgi est dirigido por protenas adaptadoras
diferentes, y son las protenas adaptadoras las que estn implicadas en la seleccin de molculas
especficas para incorporarse a las vesculas. Por ejemplo, la protena adaptadora AP-1, implicada
en la gemacin de las vesculas desde la red trans del Golgi, se une a la regin citoslica del
receptor de la manosa-6- fosfato, dirigiendo de este modo, al interior de las vesculas cubiertas por
clatrina, a las protenas destinadas a los lisosomas.
Las cubiertas de las vesculas revestidas COPI y COPII estn constituidas por complejos proteicos
diferentes, que funcionan de forma anloga a la clatrina y a las protenas adaptadoras en la gemacin
de las vesculas.
Es interesante sealar que los componentes de revestimiento COPI
interaccionan con el motivo KKXX responsable de la recuperacin de las protenas del RE desde el
aparato de Golgi, lo que concuerda con el papel de las vesculas revestidas COPI en el reciclaje
desde el Golgi al RE.
El ensamblaje de la cubierta de la vescula tambin requiere protenas de unin a GTP, que
parece que regulan la unin de las protenas de revestimiento a la membrana. La gemacin,
tanto de las vesculas revestidas de clatrina como de las vesculas cubiertas COPI desde el
complejo de Golgi, requiere una protena de unin a GTP denominada ARF (factor de ribosilacin
del ADP), mientras que la gemacin de las vesculas revestidas COPII desde el RE requiere una
protena de unin a GTP diferente, denominada Sar l. El papel de estas protenas se muestra por
la funcin de ARF en la formacin de las vesculas cubiertas COPI (Fig. 9.32). El primer paso en
la formacin de una vescula es la asociacin de ARF, unido a GDP, con la membrana del Golgi.
Entonces las protenas de la
membrana del Golgi estimulan el intercambio del GDP unido al ARF por GTP, Y las protenas
de
cubierta COPI se unen al complejo ARF/GTP. La formacin de la cubierta se contina con la
deformacin de la membrana y la gemacin de una vescula. Seguidamente el ARF hidroliza su
GTP, pasando el ARF a estar unido a GDP Y a la disociacin de las protenas de la cubierta
de la membrana de la vescula.
Lisosomas
Los lisosomas son orgnulos rodeados de membrana que contienen una serie de enzimas capaces de
degradar todas las clases de polmeros biolgicos -protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y
lpidos-. Los lisosomas funcionan como el sistema digestivo de la clula, sirviendo tanto para
degradar el material captado del exterior de la clula como para digerir los componentes obsoletos
de la propia clula. En su forma ms sencilla, los lisosomas se observan como vacuolas esfricas
densas, pero pueden exhibir diversidad de tamaos y de formas en funcin de los distintos materiales
que hayan captado (Fig. 9.34). Por lo tanto los lisosomas representan orgnulos
morfolgicamente diversos definidos por la funcin comn de degradar material intracelular.
Todas las enzimas lisosmicas son hidrolasas cidas, que son activas al pH cido
(aproximadamente
5) del interior de los lisosomas pero no al pH neutro (aproximadamente 7,2) caracterstico del resto
del citoplasma (Fig. 9.35). El que estas hidrolasas lisosmicas necesiten un pH cido proporciona
una doble proteccin contra la digestin incontrolado de los contenidos del citosol; incluso si se
rompiera la membrana lisosmica, las hidrolasas cidas liberadas seran inactivas al pH neutro del
citosol. Para mantener su pH cido interno, los lisosomas deben concentrar activamente iones H+
(protones). Esto se consigue mediante una bomba de protones en la membrana lisosmica, que
transporta activamente protones al lisosoma desde el citosol. Este bombeo requiere un gasto de
energa en forma de hidrlisis de ATP, ya que mantiene una concentracin de H+
aproximadamente cien veces ms elevada en el interior del lisosoma.
Como se trat previamente, las hidrolasas cidas son dirigidas a los lisosoma por residuos de
manosa-6-fosfato, que son reconocidos por los receptores de manosa-6-fosfato en la red trans del
Golgi y empaquetados en vesculas revestidas d clatrina. Tras la liberacin de la cubierta de
clatrina, estas vesculas de transporte se fusionan con los endosomas tardos, y el pH interno cido
hace que las hidrolasas se disocien de receptor de manosa-6-fosfato (vase Fig. 9.36). Las
hidrolasas son as liberadas en la luz de endosoma, mientras que los receptores permanecen en la
membrana y finalmente son reciclados al Golgi. Los endosomas tardos maduran entonces a
lisosomas a medida que adquieren una carga completa de hidrolasas cidas, que digieren las
molculas originalmente ingeridas por endocitosis.
Fagocitosis y autofagia
Adems de degradar las molculas englobadas por endocitosis, los lisosomas digieren el material
derivado de otras dos rutas: la fagocitosis y la autofagia (Fig. 9.37). En la fagocitosis, clulas
especializadas, como los macrfagos, ingieren y degradan partculas grandes, incluyendo bacterias,
restos de clulas, y clulas envejecidas que han de ser eliminadas del organismo. Estas
partculas grandes son ingeridas en vacuolas fagocticas (fagosomas), que posteriormente se fusionan
con los lisosomas, dando lugar a la digestin de su contenido. Los lisosomas formados de esta
manera (fagolisosomas) pueden ser bastante grandes y heterogneos, ya que su tamao y forma
viene determinado por el contenido del material que est siendo digerido.
Los lisosomas tambin son responsables de la autofagia, la renovacin gradual de los propios
componentes de la clula. El primer paso de la autofagia parece ser el que un orgnulo (p. ej.,
una mitocondria) sea englobado por una membrana derivada del RE. La vescula resultante ( un
autofagosoma) se fusiona despus con un lisosoma, y su contenido es digerido (vase Fig. 9.37).
Como ya se trat en el Captulo 7, la autofagia es la responsable de la renovacin gradual de los
orgnulos citoplsmicos.