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INTRODUCCION

Debido a la compleja organizacin interna de las clulas eucariotas, distribuir y dirigir a las protenas
hacia sus destinos adecuados son tareas considerables. El primer paso en la distribucin de las
protenas tiene lugar mientras an est en marcha la traduccin. Muchas protenas destinadas al
retculo endoplsmico, al aparato de Golgi, a los lisosomas, a la membrana plasmtica y a ser
secretadas se sintetizan en los ribosomas unidos a la membrana del retculo endoplsmico. A
medida que la traduccin contina, las cadenas polipeptdicas se transportan al interior del retculo
endoplsmico, donde tiene lugar el plegamiento y procesamiento de las protenas. Desde el retculo
endoplsmico, las protenas se transportan en vesculas al aparato de Golgi, donde son nuevamente
procesadas y distribuidas para el transporte a los lisosomas, a la membrana plasmtica o a ser
secretadas desde la clula. El retculo endoplsmico, el aparato de Golgi y los lisosomas
se diferencian de esta manera de otros orgnulos citoplsmicos en que intervienen conjuntamente en
el procesamiento de las protenas y en que estn conectados mediante vesculas de transporte.

CAPITULO I

DISTRIBUCIN Y TRANSPORTE DE PROTENAS


Retculo endoplsico
El retculo endoplsmico es una red de tbulos y sacos (cisternas) rodeados de membrana que
se extiende desde la membrana nuclear por todo el citoplasma (Fig. 9.1). Todo el retculo
endoplsmico est rodeado por una membrana continua y es el orgnulo ms grande de la mayora
de las clulas eucariotas. Su membrana puede representar aproximadamente la mitad de todas las
membranas de la clula, y el espacio encerrado por el RE (la luz, o espacio de las cisternas) puede
representar alrededor del 1 0 % de todo el volumen celular. Como se trat previamente, hay dos
tipos distintos de RE que realizan funciones diferentes en la clula. El RE rugoso, que est cubierto
por ribosomas en su superficie externa, participa en el procesamiento de las protenas. El Re liso
no est asociado con los ribosomas y est implicado en el metabolismo de los lpidos, en lugar de en
el de las protenas.
Retculo endoplsmico y secrecin de protenas

Figura 9.1

El papel del retculo endoplsmico en el procesamiento y distribucin de las protenas fue


demostrado por primera vez por George Palade y sus colaboradores en los aos 60 (Fig. 9.2). Estos
investigadores estudiaron el destino de las protenas recin sintetizadas en unas clulas
especializadas del pncreas (clulas pancreticas acinares) que secretan enzimas digestivas al
intestino delgado. Debido a que la mayora de las protenas sintetizadas por estas clulas son
secretadas, Palade y colaboradores fueron capaces de estudiar la ruta tomada

Figura 9.2
Va secretora. Las clulas acinares pancreticas, que secretan la mayor parte de sus protenas sintetizadas de novo
en el tracto digestivo, se marcaron con aminocidos radiactivos para estudiar la va intracelular utilizada por las
protenas secretadas. Tras un corto periodo de incubacin con aminocidos radiactivos (marcaje de 3 minutos), la
autorradiografa puso de manifiesto que las protenas sintetizadas de novo se localizaban en el RE rugoso. Tras
una in cubacin posterior con aminocidos no radiactivos (caza), se observ que las protenas se haban
desplazado desde el RE al aparato de Golgi y despus, en el interior de vesculas de secrecin, a la membrana
plasmtica y al exterior de la clula.

Figura 9 .2

por las protenas secretadas simplemente mediante el marcaje con aminocidos radiactivos de las
protenas recin sintetizadas. La localizacin en la clula de las protenas marcadas radiactivamente
se determin a continuacin mediante una autorradiografa, poniendo de manifiesto los lugares
celulares implicados en los procesos que conducen a la secrecin de las protenas. Despus de
una breve exposicin de las clulas acinares pancreticas a los aminocidos radiactivos, se
detectaron protenas sintetizadas de novo en el RE rugoso, por lo que se le identific como el
lugar de sntesis de las protenas destinadas a la secrecin. Si a continuacin las clulas se
incubaban durante un corto perodo de tiempo en un medio que contena aminocidos no
radiactivos (proceso conocido como caza), las protenas marcadas radiactivamente se detectaban
en el aparato de Golgi. Tras perodos de caza ms largos, las protenas marcadas radiactivamente
migraban desde el aparato de Golgi a la superficie celular en vesculas de secrecin, que
posteriormente se fusionaban con la membrana plasmtica para liberar su contenido fuera de la
clula.
Estos experimentos definieron una va tomada por las protenas secretadas, la va
secretora RE rugoso, Golgi , vesculas de secrecin-exterior de la clula. Estudios adicionales
ampliaron estos resultados y demostraron que esta va no est restringida a las protenas destinadas
a ser secretadas. Las protenas de la membrana plasmtica y las lisosmicas tambin migran desde
el RE rugoso hasta el Golgi y posteriormente a sus destinos finales. Otras protenas pasan por las
etapas iniciales de la va secretora pero posteriormente son retenidas y su actividad tiene lugar en el
RE o en el aparato de Golgi.
Por lo tanto, la entrada de las protenas en el RE representa un cruce de caminos muy importante en
el trfico de protenas en las clulas eucariotas. Las protenas destinadas a ser secretadas o a
incorporarse en el RE, aparato de Golgi, lisosomas, o membrana plasmtica son dirigidas

inicialmente al RE. En las clulas de los mamferos, la mayora de las protenas son transferidas al
RE mientras estn siendo traducidas por los ribosomas unidos a la membrana (Fig. 9.3).

Por el contrario, las protenas destinadas a permanecer en el citosol o que se van a incorporar al
ncleo, a las mitocondrias, cloroplastos o peroxisomas son sintetizadas en los ribosomas libres y
liberadas al citosol cuando finaliza su traduccin.

Marcaje de las protenas para dirigirse al retculo endoplsmico


Las protenas pueden ser translocadas al RE durante su sntesis en los ribosomas unidos a la
membrana (translocacin cotraduccional) o una vez que la traduccin se ha completado en los
ribosomas libres en el citosol (translocacin postraduccional). En las clulas de los mamferos,
la mayora de las protenas entran en el RE de manera cotraduccional, mientras que en las levaduras
se utilizan tanto la va cotraduccional como la postraduccional. El primer paso en la va
cotraduccional es la asociacin de los ribosomas con el RE. La marca que determina que los
ribosomas se unan con la membrana del RE es la secuencia de aminocidos de la cadena
polipeptdica que est siendo sintetizada, en vez de propiedades intrnsecas del propio ribosoma.
Los ribosomas libres y los unidos a la membrana son funcionalmente indistinguibles, y toda la
sntesis proteica se inicia en los ribosomas que estn libres en el citosol. Los ribosomas implicados
en la sntesis de protenas destinadas a ser secretadas estn marcados para dirigirse al retculo
endoplsmico mediante
localizada en el extremo amino-terminal de la cadena polipeptdica en crecimiento. Estas secuencias
seal son pequeos segmentos de aminocidos hidrfobos que son escindidos de la cadena
polipeptdica durante su transferencia a la luz del RE.

Figura 9.4

El papel general de las secuencias seal para dirigir a las protenas a sus localizaciones adecuadas
en la clula se dilucid por primera vez mediante estudios sobre la internalizacin de las
protenas de

secrecin en el RE. Estos experimentos utilizaron preparaciones n vitro de RE rugoso, que


se aislaron de extractos celulares mediante centrifugacin en un gradiente de densidad (Fig. 9.4).
Cuando las clulas se rompen, el RE se fragmenta en pequeas vesculas denominadas. Puesto que
las vesculas derivadas del RE rugoso estn recubiertas por ribosomas, stas pueden
separarse de vesculas similares derivadas del RE liso o de otras membranas (p. ej., la membrana
plasmtica). Concretamente la gran cantidad de ARN existente en los ribosomas aumenta la
densidad de las vesculas de membrana a las que estn unidos, permitiendo la purificacin de las
vesculas derivadas del RE rugoso (microsomas rugosos) mediante centrifugacin de equilibrio en
gradientes de densidad.

David Sabatini y Gnter Biobel propusieron por primera vez en 1971 que la seal para la unin
del ribosoma al RE era una secuencia de aminocidos prxima al extremo amino-terminal de la
cadena polipeptdica en crecimiento. Esta hiptesis fue apoyada por los resultados de la traduccin
in vitro de ARNm que codifican protenas secretadas, como las inmunoglobulinas (Fig. 9.5). Si
un ARNm que codifica una protena secretada era traducido in vitro por ribosomas libres, se
observaba que la protena producida era ligeramente mayor que la protena normal secretada.
Sin embargo, si se aadan microsomas al sistema la protena traducida in vitro se incorporaba a
los microsomas y se escinda en el tamao adecuado, Estos experimentos condujeron a que se
formulara de una manera ms detallada la hiptesis de la seal, proponiendo que una secuencia
gua amino-terminal marca y dirige la cadena polipeptdica a los microsomas y que es escindido
posteriormente por una proteasa microsomal. Muchos hallazgos posteriores han sostenido este
modelo, incluyendo experimentos con ADN recombinante que han demostrado que la adicin de
una secuencia seal a una protena que normalmente no es secretada es suficiente para dirigir la
incorporacin de la protena recombinante al RE rugoso.

Figura 9.7

El mecanismo por el que las protenas secretadas son dirigidas al RE durante su traduccin
(va cotraduccional) se
conoce bien
actualmente.
Las secuencias seal
estn
constituidas aproximadamente por 20 aminocidos, incluyendo un grupo
de residuos hidrfobos, habitualmente en el extremo amino-terminal de la cadena polipeptdica (Fig.
9.6). A medida que salen del ribosoma, las secuencias seal son reconocidas y unidas a una que
est constituida por seis polipptidos y un ARN citoplsmico pequeo ( ). La PRS se une tanto al
ribosoma como a la secuencia seal, inhibiendo la traduccin y dirigiendo todo el complejo (PRS,
ribosoma, y la cadena polipeptdica en crecimiento) al RE mediante la unin al receptor de la PRS
en la membrana del RE (Fig. 9.7). La unin al receptor libera a la PRS del ribosoma y de la
secuencia seal de la cadena polipeptdica en crecimiento. Entonces el ribosoma se une a un
complejo de translocacin de protenas en la membrana del RE, y la secuencia seal es insertada en
un canal de la membrana. En las levaduras y en las clulas de los mamferos, los canales de
translocacin que atraviesan la membrana de RE estn constituidos por tres protenas
transmembrana, denominadas protenas Sec6l. Las protenas Sec6l de las levaduras y los
mamferos estn estrechamente relacionadas con las protenas de la membrana plasmtica que
translocan los polipptidos secretarios en las bacterias, demostrndose una conservacin
significativa de la maquinaria de secrecin de protenas en las clulas procariotas y eucariotas. La
transferencia de ribosoma desde la PRS al complejo Sec6l permite que se reanude la
traduccin, y la cadena polipeptdica en crecimiento se transfiere directamente al canal Sec6l y
atraviesa la membrana del RE a medida que contina la traduccin. As, el proceso de la sntesis de
protenas dirige directamente la transferencia de las cadenas polipeptdicas en crecimiento a travs
de canal Sec6l y al interior del RE. A medida que contina la translocacin, la peptidasa seal
escinde la secuencia seal y el polipptido es liberado en la luz del RE.
Muchas protenas en las levaduras, as como algunas protenas en las clulas de los mamferos, son
dirigidas al RE tras haber sido traducidas (translocacin postraduccional), en lugar de ser
transferidas al RE durante su sntesis en los ribosomas unidos a la membrana. Estas protenas son
sintetizadas en ribosomas citoslicos libres, y su incorporacin postraduccional al RE no requiere
una PRS. En su lugar, sus secuencias seal son reconocidas por protenas receptoras
diferentes (el complejo

Sec62/63) asociadas con el complejo Sec6l en la membrana del RE (Fig. 9.8). Se requieren
chaperonas citoslicas para mantener las cadenas polipeptdicas en una conformacin desplegada
para que puedan entrar en el canal Sec6l, y se requiere otra chaperona en el RE (denominada BiP)
para tirar de la cadena polipeptdica a travs del canal y hacia dentro del RE. Parece que la unin
de las cadenas polipeptdicas a BiP es necesaria para dirigir la traslocacin postraduccional de
las protenas al RE, mientras que la translocacin cotraduccional de las cadenas polipeptdicas en
crecimiento est dirigida directamente por el proceso de la sntesis proteica.

Figura 9.8

Insercin de las protenas en la membrana del RE


Las protenas cuyo destino es ser secretadas o residir en la luz del RE, aparato de Golgi, o
lisosomas son translocadas a travs de la membrana y liberadas en la luz del RE tal como ya se ha
descrito. Sin embargo, las protenas destinadas a incorporarse en la membrana plasmtica o en la
membrana del RE, Golgi, o lisosomas se insertan inicialmente en la membrana del RE en lugar de
ser liberadas a la luz. Desde la membrana del RE continan hasta su destino final por la misma
ruta que la de las protenas secretadas: RE-Golgi-Membrana plasmtica o lisosomas. Sin embargo,
estas protenas son transportadas a lo largo de esta ruta como componentes de la membrana, en
lugar de como protenas solubles.

Figura 9.9

Las protenas integrales de la membrana se incluyen en la membrana mediante regiones hidrofbicas


que atraviesan la bicapa lipdica (Fig. 2.48). Las partes de estas protenas que atraviesan la
membrana suelen ser regiones en hlice alfa constituidas por 20 a 25 aminocidos hidrfobos. La
formacin de una hlice alfa maximiza los puentes de hidrgeno entre los enlaces peptdicos, y las
cadenas laterales hidrfobas de los aminocidos interaccionan con las colas de cidos grasos de los
fosfolpidos. Sin embargo, las distintas protenas integrales de la membrana difieren en cmo
estn insertadas. (Fig.
9.9). Por ejemplo, mientras que algunas protenas integrales atraviesan la membrana una sola vez,
otras tienen mltiples regiones que atraviesan la membrana. Adems, algunas protenas estn
orientadas en la membrana con su extremo amino-terminal en el lado citoslico; otras tienen
su extremo carboxilo-terminal expuesto al citosol. La orientacin de las protenas insertadas en el
RE, Golgi, lisosomas y membranas plasmticas se establece a medida que las cadenas polipeptdicas
en crecimiento se translocan en el RE. La luz del RE equivale topolgicamente al extede las
protenas de la membrana plasmtica que estn expuestos en la superficie celular se corresponden
con las regiones de la cadena polipeptdica que se translocan al interior del RE (Fig. 9.10).

El mecanismo ms directo de insercin en la membrana del RE da como resultado la sntesis


de protenas transmembrana orientadas con sus extremos carboxilo termina hacia el citosol (Fig.
9.1l). Estas protenas tienen una secuencia seal amino termina normal, que es escindido por la
peptidasa seal durante la translocacin de la cadena polipeptdica a travs de la membrana del RE
por el canal Sec. 61. Seguidamente se anclan a la membrana por una segunda hlice alfa que
atraviesa la membrana, localizada en el centro de la protena. Esta secuencia transmembrana,
denominada secuencia de detencin de la transferencia, determina el cierre del canal Sec6l. De
este modo se bloquea que la cadena polipeptdica se siga translocando a travs de la membrana del
RE, por lo que la porcin carboxilo terminal de la cadena polipeptdica en crecimiento se sintetiza
en el citosol. El dominio transmembrana entonces abandona lateralmente el canal de traslocacin
para entrar en la bicapa lipdica. Por lo tanto, la insercin de estas protenas en la membrana
implica la accin secuencia de dos elementos diferentes: una secuencia seal amino terminal
susceptible de ser escindido que inicia la translocacin a travs de la membrana, y una secuencia
transmembrana de detencin de la transferencia que ancla la protena a la membrana.

Las protenas tambin pueden anclarse en la membrana del RE mediante secuencias seal internas
que no son escindidas por la peptidasa seal (Fig. 9.12). Estas secuencias seal internas son
reconocidas por la PRS y trasladadas a la membrana del RE de la manera vista hasta ahora. Sin
embargo, debido a que no son escindidas por la peptidasa seal, estas secuencias seal actan como
hlices alfa transmembrana que abandonan el canal de translocacin y anclan a las protenas a la
membrana del RE. Es importante sealar que las secuencias seal internas pueden estar
orientadas de tal manera que dirijan la translocacin a travs de la membrana bien del extremo
amino o bien de extremo carboxilo termina de la cadena polipeptdica. Por tanto, dependiendo de
la orientacin de la secuencia seal, las protenas insertadas en la membrana mediante este
mecanismo pueden tener bien su extremo amino o bien su extremo carboxilo terminal expuesto al
citosol.
Las protenas que atraviesan la membrana varias veces se piensa que son insertadas como resultado
de una serie alternante de secuencias seal internas y secuencias transmembrana de detencin de la
transferencia. Por ejemplo, una secuencia seal interna puede dar lugar a la insercin en la
membrana de una cadena polipeptdica con su extremo amino termina en el lado citoslico (Fig.
9.13). Si a continuacin se encuentra una secuencia de detencin de la transferencia, el polipptido
formar un bucle en la luz del RE, y la sntesis de la protena continuar en el lado citoslico de la
membrana. Si aparece una segunda secuencia seal, la cadena polipeptdica en crecimiento se
insertar otra vez en el RE, dando lugar a otro dominio en forma de bucle en el lado citoslico de la
membrana. A esto le puede seguir otra secuencia de detencin de la transferencia, por lo que una
serie alternante de secuencias seal y de detencin de la transferencia pueden dar lugar a la insercin
de las protenas que atraviesan la membrana varias veces, con dominios en forma de bucle
expuestos tanto a la luz del RE como al lado citoplsmico.

Plegamiento y procesamiento de las protenas en el RE


El plegamiento de las cadenas polipeptdicas en sus conformaciones tridimensionales correctas, el
ensamblaje de los polipptidos en protenas constituidas por varias subunidades, y las
modificaciones covalentes implicadas en el procesamiento de las protenas se trataron en el Captulo
7. Con respecto a las protenas que entran en la va secretora, muchos de estos acontecimientos
ocurren durante la translocacin a travs de la membrana del RE o en el interior de la luz del RE.
Uno de estos procesos es la rotura proteoltica del pptido seal a medida que la cadena
polipeptdica se transloca a travs de la membrana del RE. El RE es tambin el sitio donde tiene
lugar el plegamiento de las protenas, el ensamblaje de protenas de varias subunidades, la formacin
de los puentes disulfuro, las primeras etapas de la glicosilacin, y la adicin de anclajes de
glicolpidos a algunas protenas de la membrana plasmtica. De hecho, el papel principal de las
protenas de la luz del RE es catalizar el plegamiento y ensamblaje de los polipptidos recin
translocados.

Como ya se ha dicho, las protenas se translocan a travs de la membrana del RE a modo de


cadenas polipeptdicas sin plegar mientras prosigue su traduccin. Por lo tanto, estos polipptidos se
pliegan en su conformacin tridimensional en el RE, asistidos por las chaperonas moleculares que
facilitan el plegamiento de las cadenas polipeptdicas (vase Cap. 7). Por ejemplo, una de las
protenas principales en la luz del RE es un miembro de la familia de las chaperonas Hsp7O
denominado BiP. Se piensa que BiP se une a la cadena polipeptdica sin plegar cuando sta
atraviesa la membrana y que despus interviene en el plegamiento de la protena y en el ensamblaje
de protenas oligomricas en el RE (Fig. 9.14). Las protenas ensambladas correctamente se separan
de BiP y estn disponibles para el transporte al aparato de Golgi. Sin embargo, las protenas
plegadas anormalmente o ensambladas de manera inadecuada permanecen unidas a BiP y se
retienen en el RE o se degradan, en lugar de ser transportadas ms all en la va secretora.
La formacin de puentes disulfuro entre las cadenas laterales de los residuos de cistena es un
aspecto importante del plegamiento y ensamblaje proteico en el RE. Estos puentes no se forman en
el citosol, que se caracteriza por ser un ambiente reductor que mantiene los residuos de cistena en
su estado reducido (-SH). En el RE, sin embargo, un ambiente oxidante promueve la formacin
de puentes disulfuro (S-S), y los puentes disulfuro formados en el RE desempean un papel
importante en la estructura de las protenas secretadas y de la superficie celular. La formacin de
los puentes disulfuro est favorecida por la enzima
(vase Fig. 7.21) que se localiza en la luz del
RE.

Las protenas tambin son glicosiladas en residuos especficos de asparragina (N-glicosilacin), en


el RE, mientras se estn traduciendo (Fig. 9.15). Como se trat en el Captulo 7, se aaden
unidades de oligosacridos constituidas por 14 residuos de azcar a los residuos de asparragina de
las cadenas polipeptdicas en crecimiento, mientras estn siendo translocadas al RE. El oligosacrido
se sintetiza en un transportador lipdico (dolicol) anclado en la membrana del RE. Despus se
transfiere como una unidad a los residuos de asparragina aceptores en la secuencia consenso AsnX-Ser/Thr mediante una enzima unida a la membrana denominada oligosacaril transferasa. Se
eliminan cuatro residuos de azcar (tres glucosas y una manosa) mientras la protena an est en el
RE, y la protena es modificada posteriormente despus de haber sido transportada al aparato de
Golgi (lo que se tratar posteriormente en este captulo).

Algunas protenas se anclan a la membrana plasmtica mediante glicolpidos en lugar de


mediante regiones de la cadena polipeptdica que atraviesan la membrana. Debido a que estos
glicolpidos

anclados a la membrana contienen fosfatidilinositol, se denominan cuya estructura se muestra en


la Figura 7.32. Los anclajes de GFI se ensamblan en la membrana del RE. Se unen
inmediatamente despus de completarse la sntesis de las protenas, al residuo carboxilo termina de
algunas protenas ancladas en la membrana por una regin C-terminal que atraviesa la membrana
(Fig. 9.16). La regin transmembrana de la protena se intercambia por el anclaje de GFI, por lo
que estas protenas permanecen unidas a la membrana slo a travs del glicolpido. Al igual que
las protenas transmembrana, son transportadas a la superficie celular como componentes de la
membrana a travs de la va secretora. Su orientacin en el RE determina que las protenas
ancladas al GFI sean expuestas hacia el exterior de la clula, permaneciendo unidas a la membrana
a travs del anclaje de GFI.
El oligosacrido se transfiere desde un transportador lipdico de dolicol a las cadenas polipeptdicas
mientras estn siendo translocadas a travs de la membrana del RE.

RE liso y sntesis de lpidos


Adems de su actividad en el procesamiento de las protenas secretadas y de membrana, el RE es
el sitio principal en el que se sintetizan los lpidos de la membrana en las clulas eucariotas. Puesto
que son extremadamente hidrfogos, los lpidos se sintetizan asociados con membranas celulares ya
existentes, en lugar de hacerlo en el ambiente acuoso del citosol. Aunque algunos lpidos se
sintetizan asociados con otras membranas, la mayora se sintetizan en el RE. Despus son
transportados, en vesculas o mediante protenas transportadoras, desde el RE a sus destinos finales,
como se tratar posteriormente en este Captulo y en el Captulo 10.
Las membranas de las clulas eucariotas estn compuestas por tres tipos fundamentales de
lpidos: fosfolpidos, glicolpidos y colesterol. La mayora de los fosfolpidos, que son los
componentes estructurales bsicos de la membrana, derivan del glicerol. Son sintetizados en la cara
citoplsmica de la membrana del RE, a partir de precursores citoslicos hidrosolubles (Fig. 9. 17).
En primer lugar los cidos grasos se transfieren desde los transportadores de coenzima A al glicerol3-fosfato mediante una enzima unida a la membrana, y el fosfolpido resultante (cido fosfatdico) se
inserta en la membrana. Las enzimas en la cara citoplsmica de la membrana del RE catalizan a
continuacin la adicin de diferentes grupos de cabeza polares, dando lugar a la fosfatidilcolina,
fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, o fosfatidilinositol.
La sntesis de estos fosfolpidos en la cara citoplsmica de la membrana del RE permite que las
cadenas hidrfobas de los cidos grasos permanezcan ocultas en la membrana mientras que las
enzimas unidas a la membrana catalizan sus reacciones con precursores hidrosolubles (p. ej., CDPcolina) en el citosol. Sin embargo, y debido a esta topografa, los fosfolpidos nuevos slo se
aaden a la mitad citoslica de la membrana del RE (Fig. 9. 18). Para mantener una membrana
estable, algunos de estos fosfolpidos de nueva sntesis deben transferirse a la otra mitad (la de la
luz) de la bicapa del RE. Esta transferencia no tiene lugar espontneamente ya que requiere el
paso de un grupo polar a travs de la membrana. Por el contrario, las protenas de membrana
denominadas catalizan la translocacin rpida de fosfolpidos a travs de la membrana del RE,
dando lugar a un crecimiento uniforme de las dos partes de la bicapa.
Adems de su papel en la sntesis de los glicerofosfolpidos, el RE tambin es el lugar principal de
la sntesis de otros dos lpidos de membrana: colesterol y ceramida (Fig. 9.19). Como se tratar
posteriormente, la ceramida se convierte en glicolpidos o esfingomielina (el nico fosfolpido
de

membrana que no deriva del glicerol) en el aparato de Golgi. Por lo tanto, el RE es el responsable
de la sntesis de los productos finales o de los precursores de todos los lpidos principales de las
membranas eucariotas.

El RE liso es abundante en las clulas que son particularmente activas en el metabolismo lipdico.
Por ejemplo, las hormonas esteroideas se sintetizan (a partir del colesterol) en el RE, por lo que se
encuentra una gran cantidad de RE liso en las clulas que producen esteroides, como las de los
testculos y del ovario. Adems, el RE liso es abundante en el hgado, donde contiene enzimas que
metabolizan varios compuestos liposolubles. Estas enzimas desintoxicantes inactivan un nmero
importante de drogas potencialmente nocivas (p. ej., fenobarbital), convirtindolas en compuestos
hidrosolubles que pueden eliminarse de cuerpo a travs de la orina. Por lo tanto, el RE liso
est implicado en mltiples aspectos de metabolismo de los lpidos y de los compuestos liposolubles.

Exportacin de protenas y lpidos desde el RE


Tanto las protenas como los lpidos migran a travs de la va secretora en vesculas de transporte,
que se originan por gemacin en la membrana de un orgnulo y se funden posteriormente con la
membrana de otro. As, las molculas son exportadas desde el RE en vesculas que se originan por
gemacin e el RE y que, en primer lugar, transportan su contenido al compartimento intermedio REGolgi y despus al aparato de Golgi (Fig. 9.20). Pasos posteriores e la va secretora suponen
el transporte de vesculas entre compartimentos diferentes del Golgi y desde el Golgi a los lisosomas
o a la membrana plasmtica. En cada caso, las protenas en la luz de un orgnulo se empaquetan
en un vescula de transporte que se va a escindir por gemacin, y despus se liberan en la luz del
orgnulo receptor tras la fusin de la vescula. Las protenas de membrana y los lpidos se
transportan de forma similar, y es digno de mencionar que su orientacin topolgico se mantiene al
viajar desde un orgnulo rodeado por membrana a otro. Por ejemplo, los dominios de una protena
expuestos en la cara citoslica de la membrana del RE tambin estarn expuestos en la cara
citoslica de las membranas del Golgi y plasmtica, mientras que los dominios de un protena
expuestos en la cara luminal de la membrana del RE estarn expues tos en la cara luminal del Golgi
y al exterior de la clula (vase Fig. 9.10).

Mientras que la mayora de las protenas viajan desde el RE al Golgi, algunas protenas han de
retenerse en el RE en lugar de continuar a lo largo de 1 va secretora. Concretamente, las protenas
que realizan su funcin en el R (incluyendo BiP, la peptidasa seal, la protena disulfuro isomerasa,
y otras enzimas tratadas previamente), deben retenerse en el interior de dicho orgnulo. Por lo tanto,
ser exportadas al Golgi frente a ser retenidas en el RE es la primer disyuntiva con la que se
encuentran las protenas que estn siendo distribuida a sus destinos correctos en la va secretora.
Un cruce de caminos similar aparece en cada paso posterior de transporte, como la retencin en el
Golgi frente la exportacin a los lisosomas o a la membrana plasmtica. En cada caso, una seales
especficas de localizacin dirigen a las protenas a sus destinos intra celulares correctos.
La distincin entre las protenas que han de ser exportadas desde el RE aquellas que son
retenidas en l parece que se produce por dos tipos diferentes de secuencias directoras que marcan
especficamente a las protenas como aquellas (1) destinadas para el transporte al Golgi o (2)
destinadas para la retencin en el RE. Muchas protenas se retienen en la luz del RE debido a
la

presencia de la secuencia marcadora Lys-Asp-Glu-Leu (KDEL, en el cdigo de una nica letra) en


su extremo carboxilo terminal. Si esta secuencia se deleciona en un protena que normalmente se
retiene en el RE (p. ej., BiP), la protena mutada e transportada al Golgi y secretada de la clula.
Por el contrario, la adicin de 1a secuencia KDEL al extremo carboxilo terminal de las protenas
que normalmente son secretadas hace que sean retenidas en el RE. La retencin de algunas
protenas transmembrana en el RE est dictada de una manera similar por secuencia C-terminales
cortas que contienen dos residuos de lisina (secuencias KKXX).

Es interesante destacar que las seales KDEL y KKXX no impiden que la protenas solubles
del RE sean empaquetadas en vesculas y transportadas Golgi. Lo que sucede es que estas seales
provocan que las protenas residente en el RE sean recuperadas selectivamente del compartimento
intermedio R Golgi o del complejo de Golgi y devueltas al RE a travs de una va de reciclad
(Fig.
9.21). Las protenas que portan las secuencias KDEL y KKXX parece que se unen a receptores
especficos para el reciclado en la membrana de estos compartimentos y posteriormente son
transportadas selectivamente de vuelta hacia el R La accin de las secuencias KDEL y KKXX
como seales de retencin/recuperacin indica que hay un flujo masivo no selectivo de protenas a
travs de
1a va secretora dirigido desde el RE a la superficie celular. Este flujo desde el RE Golgi puede
ser responsable de la exportacin de muchas protenas desde el R Sin embargo, tambin parece que
algunas protenas destinadas a ser secretada estn marcadas por seales que dirigen activamente su
exportacin desde el R Por lo tanto, la exportacin de protenas desde el RE puede tener lugar
no slo p este flujo masivo, sino tambin por una va regulada que reconoce especficamente las
seales que median el transporte selectivo de las protenas al aparato de Golgi.

Aparato de Golgi
El funciona como una fbrica en la que las protenas recibidas desde el RE se reprocesan y
distribuyen para ser transportadas a sus destinos finales: los lisosomas, la membrana plasmtica o la
secrecin. Adems, como ya se ha mencionado, los glicolpidos y la esfingomielina son sintetizados

en el Golgi. En las clulas vegetales, el aparato de Golgi, adems, es el sitio en el que se


sintetizan los

polisacridos complejos de la pared celular. As el aparato de Golgi est implicado en procesar


el amplio espectro de constituyentes celulares que viajan a lo largo de la va secretora.
Organizacin del Golgi
Morfolgicamente el Golgi est compuesto por unas bolsas aplanadas, rodeadas de membrana
(cisternas) y por vesculas asociadas (Fig. 9.22). Un aspecto llamativo del aparato de Golgi es su
polaridad tanto en la estructura como en la funcin. Las protenas procedentes del RE entran por su
cara cis (cara de entrada), que es convexa y habitualmente se orienta hacia el ncleo. Entonces son
transportadas a travs del Golgi y salen por su cara cncava trans (cara de salida). Segn
atraviesan el Golgi, las protenas se modifican y se distribuyen para el transporte a sus destinos
finales en la clula.

Los diferentes procesos de procesamiento y distribucin de las protenas parece que tienen lugar en
una secuencia ordenada en diferentes regiones del complejo de Golgi, por lo que se suele considerar
que el Golgi est constituido por mltiples compartimentos diferenciados. Aunque no se ha
establecido el nmero de tales compartimentos, normalmente se considera que el Golgi est
constituido por cuatro regiones funcionalmente diferentes: la red cis del Golgi, el apilamiento del
Golgi (que se divide en los subcompartimentos medial y trans) la red trans del Golgi (Fig. 9.23).
Las protenas procedentes del RE se transportan al compartimento intermedio RE-Golgi y entran a
continuacin en el aparato de Golgi por la red cis del Golgi.
Posteriormente pasan a los
compartimentos medial y trans del apilamiento del Golgi, donde tienen lugar la mayor parte de
las actividades metablicas del aparato de Golgi. Las protenas modificadas, los lpidos y los
polisacridos migran a continuacin a la red trans del Golgi, que acta como un centro de
organizacin y distribucin, dirigiendo el trfico molecular a los lisosomas, a la membrana plasmtica,
o al exterior de la clula.

Aunque el aparato de Golgi se describi por primera vez hace ms de 100 aos, el mecanismo por
el que las protenas se desplazan a travs del aparato de Golgi an no ha sido establecido y es un
rea de controversia entre los bilogos celulares. Una posibilidad es que sean unas vesculas de
transporte las que lleven las protenas entre una cisterna y otra de los compartimentos del Golgi.
Sin embargo, un modelo alternativo que se apoya en una evidencia experimenta considerable
propone que las protenas se transportan a travs de los compartimentos del Golgi dentro de las
cisternas del Golgi, que van madurando y se desplazan progresivamente a travs del Golgi en una
direccin cis-trans.
Glicosilacin de protenas en el Golgi
El procesamiento de las protenas en el Golgi supone la modificacin y sntesis de los restos de
carbohidratos de las glicoprotenas. Uno de los aspectos principales de este procesamiento es
la modificacin de los N-oligosacridos que se unieron a las protenas en el RE. Como ya se ha
tratado en este Captulo, las protenas se modifican en el RE al aadrselas un oligosacrido
constituido por 14 residuos de azcar (vase Fig. 9.15). Seguidamente se eliminan tres residuos de
glucosa y una manosa mientras los polipptidos an estn en el RE. Tras el transporte al aparato
de Golgi, los N- oligosacridos de estas glicoprotenas sufren diversas modificaciones posteriores.
Los N-oligosacridos se procesan en el aparato de Golgi mediante una secuencia ordenada de
reacciones (Fig. 9.24). La primera modificacin de las protenas destinadas a ser secretadas o a la
membrana plasmtica, es la eliminacin de otros tres residuos de manosa. A esto le sigue la adicin
secuencias de una N-acetilglucosamina, la eliminacin de dos manosas ms, y la adicin de una
fucosa y de otras dos N-acetilglucosaminas. Finalmente, se aaden tres galactosas y tres residuos

de cido sifico. Como se mencion en el Captulo 7, las distintas glicoprotenas se modifican


de forma

diferente durante su paso a travs del Golgi, dependiendo tanto de la estructura de la protena como
de la cantidad de enzimas implicadas en el proceso presentes en el complejo de Golgi de los
diferentes tipos de clulas. Por consiguiente, las protenas pueden salir del Golgi con diversos
N- oligosacridos.

El procesamiento del N-oligosacrido de las protenas lisosmicas difiere del de las protenas
secretadas y de la membrana plasmtica. Las protenas destinadas a incorporarse en los
lisosomas, en vez de la eliminacin inicial de tres residuos de manosa, son modificadas mediante
una fosforilacin de la manosa.
En el primer paso de esta reaccin, se aade Nacetilgiucosamina fosfato a residuos especficos de manosa, probablemente mientras la protena an
est en la red cis del Golgi (Fig. 9.25). A esto le sigue la eliminacin del grupo Nacetilgiucosamina, dejando residuos de manosa-6-fosfato en el N-oligosacrido. Debido a esta
modificacin, estos residuos no son eliminados durante el procesamiento posterior. En su lugar,
estos restos de manosa fosforilados son reconocidos especficamente por un receptor de manosa6-fosfato en la red trans del Golgi, que dirige el transporte de estas protenas a los lisosomas.

Por lo tanto, la fosforilacin de los residuos de manosa es un paso crucial en la distribucin de las
protenas lisosmicas hacia su destino intracelular correcto. La especifidad de este proceso reside
en la enzima que cataliza el primer paso en la secuencia de la reaccin -la adicin selectiva de
N- acetilglucosamina fosfato a las protenas lisosmicas. Esta enzima reconoce un determinante
estructura que est presente en las protenas lisosmicas pero no en las protenas destinadas a la
membrana plasmtica o a la secrecin. Este determinante de reconocimiento no es una
simple secuencia de aminocidos, sino que est constituido, en la protena plegada, por la
yuxtaposicin de secuencias de aminocidos de regiones diferentes de la cadena polipeptdica. A
diferencia de las secuencias seal que dirigen la translocacin de protenas al RE, el determinante
de reconocimiento que conduce a la fosforilacin de la manosa, y que por tanto dirige finalmente
las protenas a los lisosomas, depende de la conformacin tridimensional de la protena plegada.
Estos determinantes

se denominan regiones seal, a diferencia de las seales lineales tratadas previamente en este
captulo.
Las protenas tambin pueden mortificarse mediante la adicin de carbohidratos a las cadenas
laterales de residuos de serina y treonina que formen parte de secuencias especficas (Oglicosilacin) (vase Fig. 7.28). Estas modificaciones tienen lugar en el aparato de Goigi mediante
la adicion secuencial de residuos nicos de azcar. La serina o la treonina se suelen unir
directamente a la N-cetilgalactosamina, a la que despus pueden aadirse otros azcares. En
algunos casos, estos azcares sufren modificaciones posteriores por la adicin de grupos sulfato.

Metabolismo
2

de

lpidos

de

polisacridos

en

el

Golgi

Adems de procesar y distribuir las glicoprotenas, el aparato de Golgi participa en el metabolismo


lipdico -concretamente, en la sntesis de glicolpidos y esfingomielina. Como ya se ha visto, los
glicerofosfolpidos, el colesterol, y la ceramida se sintetizan en el RE. La esfingomielina y los
glicolpidos se sintetizan a partir de la ceramida en el aparato de Golgi (Fig. 9.26). La esfingomielina
(el nico fosfolpido no glicrico en las membranas celulares) es sintetizada por la transferencia de
un grupo fosforilcolina desde la fosfatidilcolina a la ceramida. Alternativamente, la adicin de
carbohidratos a la ceramida puede dar lugar a diferentes glicolpidos.

La esfingomielina se sintetiza en la superficie luminal del Golgi, pero la glucosa se aade a la


ceramida en la cara citoslica. Sin embargo, parece ser que la glucosilceramida se da la vuelta y
los carbohidratos adicionales se aaden en la cara luminal de la membrana. Ni la esfingomielina
ni los glicolpidos pueden transiocarse a travs de la membrana del Golgi, por lo que slo se
localizan en la mitad luminal de la bicapa del Golgi. Tras el transporte vesicular, se localizan en la
cara externa de la membrana citoplasmtica, con sus grupos de cabeza polares expuestos en la
superficie celular. Como se ver en el Captulo 12, los residuos de oligosacridos de los
glicolpidos son marcadores de superficie imPortantes en el reconocimiento clula-clula.
En las clulas vegetales, el aparato de Golgi tiene la funcin aadida de ser el lugar donde se
sintetizan los polisacridos complejos de la pared celular. Como se tratar con mayor detalle en el
Captulo 12, la pared celular vegetal est compuesta por tres tipos principales de polisacridos.
La celulosa, el constituyente predominante, es un polmero lineal de restos de glucosa. Es
sintetizado en la superficie celular por enzimas de la membrana plasmtica. Sin embar90, los
otros polisacridos de la pared celular (hemicelulosas y pectinas) son molculas complejas de
cadena ramificada que se sintetizan en el aparato de Golgi y que son transportadas posteriormente

en vesculas a la superficie celular. La sntesis de estos polisacridos de la pared celular es una


funcin principal de la clula, y hasta el 80 %

de la actividad metablica del aparato de Golgi en las clulas vegetales se dedica a la sntesis
de polisacridos.

Distribucin y exportacin de protenas desde el aparato de Golgi


Las protenas, al igual que los lpidos y los polisacridos, son transportadas desde el aparato de
Golgi a sus destinos finales a travs de la via secretora. Esto implica que las protenas se
distribuyan en diferentes tipos de vesculas de transporte, las cuales saldrn por gemacin desde
la red trans del Golgi y llevarn su contenido hasta la localizacin celular adecuada. (Fig. 9.27).
Algunas protenas se transportan desde el Golgi a la membrana plasmtica por una va secretora
constitutiva, responsable de la incorporacin de nuevas protenas y lpidos a la membrana plasmtica,
as como de la secrecin continua de protenas desde la clula. Otras protenas son transportadas
a la superficie celular a travs de una va diferente de secrecin regulada, o son dirigidas
especficamente a otros destinos intracelulares, como los lisosomas en las clulas animales o las
vacuolas en las levaduras.

Las protenas que realizan su funcin en el aparato de Golgi deben retenerse en ese orgnulo, en
lugar de ser transportadas a travs de la va secretora. A diferencia del RE, todas las protenas
retenidas en el complejo de Golgi estn asociadas con la membrana del Golgi en lugar de ser
protenas solubles en su interior. Las seales responsables para la retencin de algunas protenas en
el Golgi se han localizado en sus dominios transmembrana, que retienen las protenas en el aparato
de Golgi impidiendo que sean empaquetadas en las vesculas de transporte que salen por la red
trans del Golgi. Adems, al igual que sucede con las secuencias KKXX de las protenas de
membrana residentes en el RE, las seales en las colas citopismicas de algunas protenas del Golgi
son responsables de la recuperacin de estas protenas desde compartimentos posteriores a lo largo
de la va secretora.

La va secretora constitutiva, que est presente en todas las clulas, da lugar a una secrecin
de protenas continua no regulada. Sin embargo, algunas clulas tambin poseen una va secretora
regulada diferente, a travs de la que se secretan protenas especficas en respuesta a
seales ambientales. Ejemplos
de secrecin regulada son la liberacin de hormonas desde las clulas endocrinas, la liberacin de
neurotransmisores desde las neuronas, y la liberacin de enzimas digestivas desde las clulas
acinares pancreticas que se vio al principio de este captulo (vase Fig. 9.2). Las protenas se
distribuyen a la va secretora regulada en la red trans del Golgi, donde son empaquetadas en
vesculas secretoras especializadas. Estas vesculas secretoras, que son ms grandes que otras
vesculas de transporte, almacenan su contenido hasta que unas seales especficas dirigen su fusin
con la membrana plasmtica. Por ejemplo, las enzimas digestivas producidas por las clulas
acinares pancreticas se almacenan en vesculas secretoras hasta que la presencia de comida en el
estmago y en el intestino delgado desencadena su secrecin. La distribucin de las protenas
hacia la va secretora regulada implica el reconocimiento de regiones seal compartidas por
muchas de las protenas que entran en esta va. Estas protenas se acumulan selectivamente en la
red trans del Golgi y se liberan por la gemacin de las vesculas secretoras.

Una complicacin adicional en el transporte de las protenas a la membrana plasmtica surge en


muchas clulas epiteliales que se encuentran polarizadas en los tejidos. La membrana plasmtica de
dichas clulas se divide en dos regiones distintas, el dominio apical y el dominio basolateral
que contienen protenas especficas relacionadas con sus funciones diferenciadas. Por ejemplo, la
membrana apical de las clulas epiteliales de intestino mira hacia la luz de intestino y est
especializada en la absorcin eficaz de nutrientes; el resto de la clula est rodeada por la membrana
basolateral (Fig. 9.28). Los diferentes dominios de la membrana plasmtica se encuentran no slo
en las clulas epiteliales, sino tambin en otros tipos de clulas. Por lo tanto, la va secretora
constitutiva debe transportar selectivamente protenas desde la red trans del Golgi a los diferentes
dominios de la membrana plasmtica. Esto se lleva a cabo mediante el embalaje selectivo de
protenas en, al menos, dos tipos de vesculas secretoras constitutivas que abandonan la red trans
del Golgi, dirigidas especficamente al dominio apical o al dominio basolateral de la membrana
plasmtica de la clula.

La va de distribucin de protenas mejor caracterizada en el Golgi es el transporte selectivo hacia


los lisosomas. Como ya se ha visto, las protenas cuyo destino es el interior de los lisosomas
estn marcadas con manosa-6fosfato, que se origina por la modificacin de sus N-oligosacridos
al poco tiempo de entrar en el aparato de Golgi. Un receptor especfico en la membrana de la red
trans de] Golgi reconoce estos residuos de manosa-6-fosfato. Los complejos constituidos por el
receptor ms la enzima lisosmica se empaquetan en vesculas de transporte destinadas a los
lisosomas. Las protenas cuyo destino es la membrana de los lisosomas estn sealizadas por
secuencias en sus colas citoplsmicas, en vez de por residuos de manosa-6-fosfato.

En las levaduras y en las clulas vegetales, que carecen de lisosomas, las protenas son transportadas
desde el aparato de Golgi hacia un destino adicional: la vacuola (Fig. 9.29). En estas clulas, las
vacuolas asumen la funcin de los lisosomas adems de realizar otros cometidos, como el
almacenamiento de nutrientes y el mantenimiento de la presin de turgencia y de equilibrio
osmtico. A diferencia de las protenas destinadas a los lisosomas, las protenas se destinan a
las vacuolas mediante secuencias peptdicas cortas en lugar de por seales de carbohidratos.
Mecanismo de transporte de las vesculas
Como ha quedado claro en las secciones precedentes de este captulo, las vesculas de transporte
desempean un papel central en el trfico de las molculas entre los diferentes compartimentos
rodeados por membrana de la va secretora. Como se tratar en el Captulo 12, las vesculas estn
implicadas de igual forma en el transporte de material que se ha captado en la superficie celular.
El transporte de las vesculas es, por tanto, una actividad celular fundamental, responsable de trfico
molecular entre diversos compartimentos rodeados por membrana, especficos. Por lo tanto, la
selectividad de dicho transporte resulta clave para mantener la organizacin funciona de la clula.
Por ejemplo, las enzimas lisosmicas deben transportarse especficamente desde el aparato de Golgi
a los lisosomas -no a la membrana plasmtica o al RE-. Algunas de las seales que dirigen a
las

protenas a los orgnulos especficos, como los lisosomas, ya se han tratado en este captulo. Estas
protenas se transportan en vesculas, por lo que la especificidad de transporte se basa en el
empaquetamiento selectivo de la carga seleccionada en vesculas que reconozcan y se fusionen
slo con la membrana diana apropiada. Dada la gran importancia que tiene el transporte de las
vesculas en la organizacin de la clula eucariota, el conocimiento de los mecanismos moleculares
que controlan el empaquetamiento de las vesculas, la gemacin, y la fusin es un rea principal de
investigacin en biologa celular.

Aproximaciones experimentales al conocimiento del transporte de las vesculas


Tres abordajes experimentales diferentes han permitido avanzar en el conocimiento de los
mecanismos del transporte de las vesculas: (1) el aislamiento de mutantes de levaduras defectuosas
en el transporte y distribucin de las protenas; (2) la reconstitucin del transporte de vesculas en
sistemas acelulares; y (3) el anlisis bioqumico de las vesculas sinpticas, que son las responsables
de la secrecin regulada de los neurotransmisores por las neuronas. Cada uno de estos sistemas
experimentales tiene diferentes ventajas para el conocimiento de aspectos concretos del proceso de
transporte. Sin embargo, lo ms importante, es el hecho de que los resultados derivados de estas
tres lneas de investigacin han convergido, indicando que la secrecin est regulada por mecanismos
moleculares similares en clulas tan distintas como las levaduras y las neuronas de los mamferos.
Al igual que ocurre en otras reas de la biologa celular, las levaduras son tiles para estudiar la va
secretora porque son susceptibles de poderse realizar un anlisis gentico. Concretamente,
Randy Schekman y sus colaboradores han sido pioneros en el aislamiento de mutantes de levaduras
defectuosos en el transporte vesicular. Estos incluyen mutantes defectuosos en varios pasos de la
secrecin proteica (mutantes sec), mutantes ni capaces de transportar protenas a la vacuola,
y
mutantes incapaces de retener las protenas residentes en el RE. El aislamiento de tales mutantes en
las levaduras condujo a la clonacin molecular y al anlisis de los genes correspondientes,
identificndose varias protenas implicadas en diversos pasos de la va secretora. Por ejemplo,
ya se vio en este Captulo el papel de Sec6l como un componente fundamental del canal de
translocacin de las protenas en el retculo endoplsmico.
Los estudios bioqumicos sobre el transporte vesicular utilizando sistemas reconstituidos han
complementado estos estudios genticos y han permitido aislar directamente protenas de transporte
en las clulas de mamferos. El primer sistema de transporte acelular lo desarroll James Rothman
y colaboradores, que analizaron el transporte de protenas entre los compartimentos del aparato de
Golgi (Fig. 9.30). El diseo experimenta utiliz una lnea celular mutante de mamfero, que careca
de la enzima requerida para transferir los residuos de N-acetilglucosamina al N-oligosacrido en una
fase temprana de su modificacin en el aparato de Golgi (vase Fig. 9.24). Por lo tanto, las
glicoprotenas producidas por esta lnea celular mutante carecan de las unidades de Nacetilglucosamina aadidas. Sin embargo, si el apilamiento del Golgi aislado de la lnea celular
mutante se incubaba con un apilamiento aislado de clulas normales, los residuos de Nacetilglucosamina se aadan a las glicoprotenas sintetizadas por las clulas mutantes. Diferentes
experimentos establecieron que esto se deba al transporte vesicular de las protenas desde el
apilamiento del Golgi de la lnea celular mutante al apilamiento del Golgi de las clulas normales,
por lo que la adicin de N-acetilglucosamina proporcionaba un marcador detestable sencillo del
transporte de vesculas en este sistema reconstituido.

Se han desarrollado otros sistemas reconstituidos similares para analizar el transporte entre otros
compartimentos, incluyendo el transporte desde el RE al Golgi y el transporte desde el Golgi a las
vesculas de secrecin, a las vacuolas, y a la membrana plasmtica. El desarrollo de estos sistemas
in vitro ha permitido realizar estudios bioqumicos del proceso de transporte y el anlisis
funciona de las protenas identificadas mediante mutaciones en levaduras, as como el aislamiento
directo de algunas de las protenas implicadas en la gemacin y la fusin de las vesculas.
Los estudios sobre la transmisin sinptica en las neuronas, que representa una forma
altamente especializada de la secrecin regulada, han revelado aspectos crticos de los mecanismos
moleculares del transporte vesicular. Una sinapsis es la unin de una neurona con otra clula,
que puede ser o bien otra neurona o un efector, como una clula muscular. La informacin se
transmite a travs de la sinapsis mediante neurotransmisores qumicos, como la acetilcolina, que se
almacenan en vesculas

sinpticas. La estimulacin de la neurona transmisora desencadena la fusin de las vesculas


sinpticas con la membrana plasmtica, lo que produce la liberacin de los neurotransmisores y la
estimulacin de la neurona postsinptica o clula efectora.
Las vesculas sinpticas son
extremadamente abundantes en el cerebro, lo que permite que se puedan purificar en grandes
cantidades para el anlisis bioqumico. Algunas de las protenas aisladas de las vesculas sinpticas
estn estrechamente relacionadas con las protenas que, mediante anlisis gentico de levaduras y
experimentos de reconstitucin, se mostr que desempean un papel crtico en el transporte de las
vesculas; por lo que el anlisis bioqumico de estas protenas ha revelado aspectos importantes del
mecanismo molecular de la fusin de las vesculas.

Protenas de revestimiento y gemacin de las vesculas


El primer paso en el transporte de las vesculas es la formacin por gemacin de una vescula a
partir de la membrana. La superficie citoplsmica de las vesculas de transporte est recubierto por
protenas, y al parecer la unin de estas protenas de revestimiento es lo que dirige la gemacin de
las vesculas al distorsionar la conformacin de la membrana. Se han caracterizado tres tipos de
vesculas revestidas de protenas, que parece que intervienen en diferentes tipos de transporte
vesicular. Las primeras que se describieron fueron las vesculas que son responsables de la
captacin de molculas extracelulares desde la membrana plasmtica mediante endocitosis (vase
el Cap. 12), as como del transporte de molculas desde la red trans del Golgi hacia los lisosomas.
Se han identificado otros dos tipos de vesculas revestidas que se originan a partir del RE y del
complejo de Golgi. Estas vesculas se denominan (COP viene de protena de revestimiento). Un
tipo de estas vesculas (vesculas revestidas COPII) se originan a partir del RE y transportan su
carga a lo largo de la va secretora hasta el aparato de Golgi. Por el contrario, las vesculas
revestidas COPI se originan a partir del compartimento intermedio RE-Golgi o del aparato de
Golgi, y participan en las vas de recuperacin que sirven para retener a las protenas residentes en
el Golgi y en el RE. Por ejemplo, las vesculas revestidas COPI transportan las protenas
residentes del RE, marcadas con las seales de recuperacin KDEL o KKXX, desde el
compartimento intermedio RE-Golgi o desde la red cis del Goigi, de vuelta al RE.

Las cubiertas de las vesculas revestidas por clatrina estn compuestas por dos clases de complejos
proteicos, clatrina y protenas adaptadoras, que se unen al lado citoslico de las membranas (Fig.
9.31). La desempea un papel estructural, al ensamblarse formando una estructura semejante a la
red de las canastas de baloncesto que distorsiona la membrana y dirige la gemacin de las
vesculas. La unin de la clatrina a las membranas est mediada por una segunda clase de protenas,
denominadas protenas adaptadoras. El ensamblaje de las vesculas cubiertas por clatrina en la
membrana plasmtica y en la red trans del Golgi est dirigido por protenas adaptadoras
diferentes, y son las protenas adaptadoras las que estn implicadas en la seleccin de molculas
especficas para incorporarse a las vesculas. Por ejemplo, la protena adaptadora AP-1, implicada
en la gemacin de las vesculas desde la red trans del Golgi, se une a la regin citoslica del
receptor de la manosa-6- fosfato, dirigiendo de este modo, al interior de las vesculas cubiertas por
clatrina, a las protenas destinadas a los lisosomas.
Las cubiertas de las vesculas revestidas COPI y COPII estn constituidas por complejos proteicos
diferentes, que funcionan de forma anloga a la clatrina y a las protenas adaptadoras en la gemacin
de las vesculas.
Es interesante sealar que los componentes de revestimiento COPI
interaccionan con el motivo KKXX responsable de la recuperacin de las protenas del RE desde el
aparato de Golgi, lo que concuerda con el papel de las vesculas revestidas COPI en el reciclaje
desde el Golgi al RE.
El ensamblaje de la cubierta de la vescula tambin requiere protenas de unin a GTP, que
parece que regulan la unin de las protenas de revestimiento a la membrana. La gemacin,
tanto de las vesculas revestidas de clatrina como de las vesculas cubiertas COPI desde el
complejo de Golgi, requiere una protena de unin a GTP denominada ARF (factor de ribosilacin
del ADP), mientras que la gemacin de las vesculas revestidas COPII desde el RE requiere una
protena de unin a GTP diferente, denominada Sar l. El papel de estas protenas se muestra por
la funcin de ARF en la formacin de las vesculas cubiertas COPI (Fig. 9.32). El primer paso en
la formacin de una vescula es la asociacin de ARF, unido a GDP, con la membrana del Golgi.
Entonces las protenas de la

membrana del Golgi estimulan el intercambio del GDP unido al ARF por GTP, Y las protenas
de
cubierta COPI se unen al complejo ARF/GTP. La formacin de la cubierta se contina con la
deformacin de la membrana y la gemacin de una vescula. Seguidamente el ARF hidroliza su
GTP, pasando el ARF a estar unido a GDP Y a la disociacin de las protenas de la cubierta
de la membrana de la vescula.

Fusin de las vesculas


La fusin de una vescula de transporte con su diana implica dos tipos de
acontecimientos.
En primer lugar, la vescula de transporte debe reconocer especficamente la membrana diana
correcta; por ejemplo, una vescula que transporta enzimas lisosmicas tiene que llevar su carga slo
a los lisosomas. En segundo lugar, la membrana de la vescula y la membrana diana deben
fusionarse, entregndose el contenido de la vescula al orgnulo diana. Las investigaciones
realizadas en los ltimos aos han conducido a un modelo de fusin vesicular en el que el
reconocimiento especfico entre una vescula y su diana est mediado por la interaccin especfica
entre pares de protenas transmembrana, seguido de la fusin entre las bicapas fosfolipdicas de la
vescula y de la membrana diana.

Las protenas implicadas en la fusin de las vesculas


se identificaron por primera vez en el laboratorio de James
Rothman, mediante el anlisis bioqumico de sistemas de
transporte vesicular reconstituidos procedentes de clulas
de mamferos (vase Fig. 9.30). El anlisis de las
protenas implicadas en la fusin de las vesculas en estos
sistemas condujo a Rothman y a sus colaboradores a
proponer un modelo general, denominado la en el que
la fusin de las vesculas est mediada por la interaccin
entre un par especfico de protenas, denominadas
SNAREs, en la membrana de la vescula y en la
membrana diana (v- SNAREs y t-SNAREs,
respectivamente) (Fig. 9.33). Esta hiptesis se vio
reafirmada al identificarse SNAREs que estaban presentes
en las vesculas sinpticas, y por el hallazgo de mutantes
de secrecin de levadura que pareca que codificaban
SNAREs que se requeran para diversas etapas de
transporte vesicular. Por ejemplo, el transporte desde el
RE al Golgi en las levaduras requiere SNAREs
especficos que se localizan tanto en la membrana de 1a
vescula como en la membrana diana. La formacin de
complejos entre las SNAREs de la vescula y las tSNAREs de la membrana diana conduce a la fusin de la
membrana, mediante mecanismos que an no se conocen
por completo
Adems de las SNARES, la fusin de las vesculas
requiere al menos otros dos tipos de protenas. Las
protenas son una familia de protenas pequeas de unin
a GTP que estn relacionadas con las protenas Ras, que
ya se trataron en Captulo 7. Se han identificado ms de
30 protenas Rab diferentes y se ha demostrado que
intervienen en procesos especficos del transporte de
vesculas. Puede intervenir en varios de los pasos del
trfico vesicular, incluyendo la interaccin con SNAREs
para regular y facilitar la formacin de complejos vSNARE/t-SNARE.
Tras la formacin de los complejos entre las SNAREs
complementarias y 1a fusin de las membranas, se
requiere un complejo de otras dos protenas (el complejo
NSF/SNAP) para completar el proceso del transporte de
vesculas. Las protenas NSF/SNAP son reclutadas en las
membranas tras la formacin de los complejos vSNARE/t-SNARE, pero no se requieren para el
emparejamiento vescula/diana o para la fusin de las
membranas apareadas. Por el contrario, las protenas
NSF/SNAP actan despus de la fusin de la membrana
para desmontar el complejo SNARE, y permitir de este

modo que las SNAREs se puedan reutilizar en


ciclos
posteriores de transporte vesicular.

Lisosomas
Los lisosomas son orgnulos rodeados de membrana que contienen una serie de enzimas capaces de
degradar todas las clases de polmeros biolgicos -protenas, cidos nucleicos, carbohidratos y
lpidos-. Los lisosomas funcionan como el sistema digestivo de la clula, sirviendo tanto para
degradar el material captado del exterior de la clula como para digerir los componentes obsoletos
de la propia clula. En su forma ms sencilla, los lisosomas se observan como vacuolas esfricas
densas, pero pueden exhibir diversidad de tamaos y de formas en funcin de los distintos materiales
que hayan captado (Fig. 9.34). Por lo tanto los lisosomas representan orgnulos
morfolgicamente diversos definidos por la funcin comn de degradar material intracelular.

Hidrolasas lisosmicas cidas


Los lisosomas contienen alrededor de 50 enzimas degradativas diferentes que pueden hidrolizar
protenas, ADN, ARN, polisacridos y lpidos. Las mutaciones en los genes que codifican
estas protenas son responsables de ms de 30 enfermedades congnitas humanas diferentes, que se
denominan enfermedades de depsito lisosmico , ya que el material no degradado se acumula en
los lisosomas de los individuos afectados. La mayora de estas enfermedades se deben a
deficiencias en una nica enzima lisosmica. Por ejemplo, la enfermedad de Gaucher (la alteracin
ms comn) se debe a una mutacin en el gen que codifica una enzima lisosmica requerida para la
degradacin de los glicolpidos. Una excepcin curiosa es la enfermedad celular-, que se debe a
una eficiencia en la enzima que cataliza el primer paso en el marcaje de las enzimas lisosmicas con
manosa6-fosfato en el aparato de Golgi (vase Fig. 9.25). El resultado es una alteracin
generalizada en la incorporacin de las enzimas lisosmicas a los lisosomas.

Todas las enzimas lisosmicas son hidrolasas cidas, que son activas al pH cido
(aproximadamente
5) del interior de los lisosomas pero no al pH neutro (aproximadamente 7,2) caracterstico del resto
del citoplasma (Fig. 9.35). El que estas hidrolasas lisosmicas necesiten un pH cido proporciona
una doble proteccin contra la digestin incontrolado de los contenidos del citosol; incluso si se
rompiera la membrana lisosmica, las hidrolasas cidas liberadas seran inactivas al pH neutro del
citosol. Para mantener su pH cido interno, los lisosomas deben concentrar activamente iones H+
(protones). Esto se consigue mediante una bomba de protones en la membrana lisosmica, que
transporta activamente protones al lisosoma desde el citosol. Este bombeo requiere un gasto de
energa en forma de hidrlisis de ATP, ya que mantiene una concentracin de H+
aproximadamente cien veces ms elevada en el interior del lisosoma.

Endocitosis y formacin del lisosoma


Una de las funciones principales de los lisosomas es la digestin del material captado del exterior de
la clula mediante endocitosis, que se discute en detalle en el Captulo 12. Sin embargo, el papel de
los lisosomas en la digestin del material captado mediante endocitosis se relaciona no slo con la
funcin de los lisosomas sino tambin con su formacin. Concretamente, los lisosomas se forman
mediante la fusin de las vesculas de transporte originadas desde la red trans del Golgi con los
endosomas, que contienen las molculas ingeridas por endocitosis a partir de la membrana plasmtica
La formacin de los lisosomas representa as una interseccin entre la va secretora, mediante la que
se procesan las protenas lisosmicas, y la va endoctica, mediante la cual son ingeridas las
molculas extracelulares a partir de la Superficie de la clula (Fig. 9.36). El material del exterior de
la clula es ingerido en vesculas endocticas revestidas de clatrina, que se originan por gemacin de
la membrana plasmtica y seguidamente se funden con los endosomas primarios. A continuacin los
componentes de la membrana son reciclados a la membrana plasmtica (se tratar con detalle en el
Cap. 12) y los endosomas primarios van madurando a endosomas tardos, que son los precursores
de los lisosomas. Uno de los cambios importantes durante la maduracin del endosoma es el
descenso del PH interno hasta aproximadamente 5,5, lo que desempea un papel clave en la
liberacin de las hidrolasas cidas lisosmicas desde la red trans del Golgi.

Como se trat previamente, las hidrolasas cidas son dirigidas a los lisosoma por residuos de
manosa-6-fosfato, que son reconocidos por los receptores de manosa-6-fosfato en la red trans del
Golgi y empaquetados en vesculas revestidas d clatrina. Tras la liberacin de la cubierta de
clatrina, estas vesculas de transporte se fusionan con los endosomas tardos, y el pH interno cido
hace que las hidrolasas se disocien de receptor de manosa-6-fosfato (vase Fig. 9.36). Las
hidrolasas son as liberadas en la luz de endosoma, mientras que los receptores permanecen en la
membrana y finalmente son reciclados al Golgi. Los endosomas tardos maduran entonces a
lisosomas a medida que adquieren una carga completa de hidrolasas cidas, que digieren las
molculas originalmente ingeridas por endocitosis.

Fagocitosis y autofagia
Adems de degradar las molculas englobadas por endocitosis, los lisosomas digieren el material
derivado de otras dos rutas: la fagocitosis y la autofagia (Fig. 9.37). En la fagocitosis, clulas
especializadas, como los macrfagos, ingieren y degradan partculas grandes, incluyendo bacterias,
restos de clulas, y clulas envejecidas que han de ser eliminadas del organismo. Estas
partculas grandes son ingeridas en vacuolas fagocticas (fagosomas), que posteriormente se fusionan
con los lisosomas, dando lugar a la digestin de su contenido. Los lisosomas formados de esta
manera (fagolisosomas) pueden ser bastante grandes y heterogneos, ya que su tamao y forma
viene determinado por el contenido del material que est siendo digerido.
Los lisosomas tambin son responsables de la autofagia, la renovacin gradual de los propios
componentes de la clula. El primer paso de la autofagia parece ser el que un orgnulo (p. ej.,
una mitocondria) sea englobado por una membrana derivada del RE. La vescula resultante ( un
autofagosoma) se fusiona despus con un lisosoma, y su contenido es digerido (vase Fig. 9.37).
Como ya se trat en el Captulo 7, la autofagia es la responsable de la renovacin gradual de los
orgnulos citoplsmicos.