Le microscope optique ou microscope photonique est un instrument

d'optique muni d'un objectif et d'un oculaire qui permet de grossir l'image d'un objet
de petites dimensions (ce qui caractrise son grossissement) et de sparer les
dtails de cette image (et son pouvoir de rsolution) afin qu'il soit observable par l'il
humain. Il est utilis en biologie, pour observer les cellules, les tissus,
en ptrographiepour reconnatre les roches, en mtallurgie et en mtallographie pour
examiner la structure d'un mtal ou d'un alliage.
Il ne faut pas le confondre avec la loupe binoculaire qui n'exige pas des chantillons
plats de faible paisseur, ou rflchissants, et permet d'observer des pices
naturelles sans prparation en grossissant l'image d'un facteur peu lev, mais en
gardant une vision stroscopique propice l'examen macroscopique rvlateur de
grains, de criques, de fissures, etc.

Principe du microscope optique de base

Principe d'un microscope.

Le microscope optique est un systme optique lentilles dans le but d'obtenir une
image agrandie de l'chantillon observer.
L'objet observer est plac devant le premier groupe optique appel objectif . Si
l'objet est au-del de la distance focale, cela forme une image relle renverse et de
taille diffrente ; l'image est plus grande que l'objet si celui-ci est situ une distance
infrieure au double de la distance focale de l'objectif.

Le deuxime groupe optique du ct de l'observateur est l'oculaire : il est positionn

de sorte que l'image soit dans son plan focal. Ainsi, l'il observe une image
l'infini (pour un observateur standard) , donc en relchant les muscles chargs de
l'accommodation, ce qui reprsente un meilleur confort visuel.

Principe d'un microscope simplifi.

Il s'agit d'un systme centr dioptrique, compos en partie de doublets pour en
corriger certaines des aberrations optiques.
A contrario d'autres systmes optiques qui sont dfinis par leur grossissement
optique (tlescope) ou leur grandissement (appareil photographique), le terme
appropri, pour le microscope, est sa puissance, rapport de l'angle, sous lequel est
vu l'objet travers l'instrument, la longueur de cet objet.
La technique d'illumination la plus utilise en microscopie champ large classique
est l'illumination de Khler, qui garantit une qualit d'image optimale.

Limites du microscope optique

La rsolution d'un microscope dsigne sa capacit sparer des dtails trs voisins.
Indpendamment du capteur utilis et des aberrations ou imperfections des lentilles,
la rsolution du microscope optique est fondamentalement limite par
la diffraction de la lumire. En effet, du fait de la diffraction, l'image d'un point n'est
pas un point, mais une tache (la tache d'Airy ou plus gnralement la fonction
d'talement du point - PSF). Ainsi, deux points distincts mais voisins auront pour
images deux taches dont le recouvrement peut empcher de distinguer les deux
points images : les dtails ne sont alors plus rsolus.
Selon la thorie d'Abbe, la limite de rsolution (transverse) d'un microscope, c'est-dire la plus petite distance en dessous de laquelle deux points voisins ne seront
plus distingus, peut tre exprime simplement l'aide de la longueur d'onde
d'illumination , de l'indice de rfraction en sortie d'objectif, et du demi angle du
cne de lumire maximum accessible .

o NA dsigne le produit
ou ouverture numrique de l'objectif. On peut
donc augmenter la rsolution de deux manires :

en augmentant l'indice de rfraction. Ceci peut tre ralis en utilisant un

objectif immersion : on immerge la frontale de l'objectif dans un liquide dont
l'indice de rfraction est proche du maximum de 1,5 - celui du verre ;
en diminuant la longueur d'onde. Toutefois, si on reste dans la lumire visible,
il n'est pas possible de descendre en dessous de 400 nm.

La limite de rsolution d'un microscope photonique classique est d'environ 0,2

m. Le microscope lectronique en transmission atteindra, lui, une limite 1000
fois plus petite

Grossissement optique
Le grossissement optique est une grandeur sans dimension dfinie comme le
rapport entre langle
sous lequel est vue limage forme par le systme optique et
langle sous lequel est vu lobjet1 :

et
sont des angles orients. Si l'image est inverse, le grossissement est
ngatif.
Pour un systme non afocal, le grossissement dpend de la distance entre le
dtecteur et l'objet observ, et on standardise sa valeur commerciale en prenant
cette distance gale la distance minimale de vision distincte (voir Grossissement
commercial)2.
Pour un systme afocal, destin l'observation d'objets lointains, le grossissement
devient gal au grandissement angulaire, et les deux termes sont alors synonymes2.
La notion de grossissement n'est en revanche pas directement utilise pour
caractriser :

le microscope optique, instrument subjectif, dont une des caractristiques est la

puissance optique (rapport de 2 grandeurs physiques diffrentes) ;
lappareil photographique, instrument objectif, pour lequel on utilise
le grandissement transversal et le grandissement linaire

pouvoir separateur
Le pouvoir de rsolution, ou pouvoir de sparation, ou la rsolution spatiale, est
la distance ou l'angle minimal qui doit sparer deux points contigus pour qu'ils soient
correctement discerns par un systme de mesure ou d'observation1. Cette notion
caractrise les systmes optiques, tel que les microscopes, les tlescopes ou l'il,
mais aussi certains dtecteurs, particulirement ceux utiliss en imagerie.
Le pouvoir de rsolution peut caractriser une capacit de rsolution spatiale,
spectrale2 et mme temporelle3.

Les instruments optiques contiennent le plus souvent une chambre noire. La lumire
passant par l'ouverture de la chambre noire subit une diffraction. Or la diffraction
limite le pouvoir de rsolution des instruments optiques : un objet ponctuel donne
une image floue , appele tache de diffraction. Si deux dtails d'un objet sont trop
proches, les taches de diffraction se chevauchent et il devient impossible d'obtenir
des images spares de ces dtails.
Pour un instrument optique dont l'ouverture a un diamtre D observant
une longueur d'onde , le pouvoir de rsolution maximal, exprim en radians, est :

Profondeur de chemp
Pour un rglage et une utilisation donns d'un appareil photographique
champ correspond la zone de l'espace dans laquelle doit se trouver le sujet
photographier pour que l'on puisse en obtenir une image que l'il (ou un
autre systme optique) acceptera comme nette.
L'tendue de cette zone dpend des paramtres de la prise de vue ; notamment de
la distance de mise au point, de l'ouverture dudiaphragme et des dimensions de la
surface sensible. La connaissance de la profondeur de champ est ncessaire la
matrise des prises de vues, en photographie comme en cinma et en vido. Dans la
pratique, le contrle de la profondeur de champ est important pour mettre en valeur
un sujet dans les techniques de portrait, de paysage et de nature morte. Plus la
profondeur de champ est tendue, plus elle intgre le sujet dans son
environnement. A contrario, plus elle est courte, plus elle l'isole. Les plans en avant
et en arrire du sujet seront alors plus ou moins flous.