Laboratorio N6: Metabolismo I. Fermentacin.

OBJETIVO GENERAL:

Evaluar, indirectamente, la produccin de CO2 en un sistema de fermentacin en levaduras.

Determinar el efecto de agentes qumicos (NaF y Oxalato) sobre la fermentacin en
levaduras.

INTRODUCCIN
Para mantener funcionando el complejo grupo de procesos metablicos que sustentan la
vida, las clulas requieren un constante aporte de energa, la que proviene principalmente de los
nutrientes, que son degradados en rutas catablicas de tipo oxidativo. Una de las rutas catablicas
centrales del metabolismo de hidratos de carbono, tanto en procariontes como en eucariontes es
la gliclisis. Este proceso se realiza en el citoplasma, y es un proceso que no requiere de la
presencia de oxgeno. La gliclisis comprende una secuencia de 10 reacciones y normalmente para
su estudio se divide en dos fases: una fase preparatoria donde la glucosa es activada, con gasto de
ATP y una fase oxidativa o de ganancia, donde la hexosa se convierte en dos triosas fosfato que
finalmente darn origen a dos molculas de piruvato con la consecuente liberacin de ATP y NADH

El piruvato formado en la gliclisis puede tener diferentes destinos, y stos dependern de

la disponibilidad de oxgeno en el sistema. En ausencia de oxgeno o anaerobiosis, el piruvato es
destinado a las vas fermentativas que se encuentran en el citoplasma de eucariontes y
procariontes. Existen diferentes tipos de fermentacin, siendo las ms estudiadas la fermentacin
alcohlica que ocurre en levaduras y la fermentacin lctica que ocurre en el msculo esqueltico.
Los productos de la fermentacin son excretados por la clula, lactato en el caso del msculo, o en
etanol y CO2 en las levaduras.

METODOLOGA
Completar 6 tubos de ensayo con las siguientes soluciones:
Reactivo / Tubo
1
Suspensin de Levadura
2 mL
Glucosa 5%
Sacarosa 5%
NaF 0,01 M
NaF 0,1 M
Oxalato 0,01 M
3 mL
Agua
-

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL

2 mL
2 mL

1 mL
1 mL
1 mL
1 mL

1 mL

Mezclar suavemente y sin agitar, y determinar pH de la mezcla con papel pH .

Completar 6 tubos de ensayo con 2 mL de azul de Bromotimol (AB) (pH=8).
Conectar cada tubo de mezcla de fermentacin con un tubo que contiene el AB, utilizando
mangueras de sistema de anaerobiosis.
Incubar por 20 minutos a 37C.
Verificar cambio de pH de la Solucin de mezcla y de AB con papel pH.

Reactivos y Soluciones
1. Suspensin de levaduras 10% p/v.
2. Solucin de Glucosa 5%.
3. Solucin de Sacarosa 5%.
4. Solucin de NaF 0,01M.
5. Solucin de NaF 0,1M.
6. Solucin de Oxalato de Potasio 0,01M.
7. Solucin de Azul de Bromotimol (pH=8)
Equipo y materiales
1. Tubos de ensayo de 10 mL y gradillas.
2. Mangueras para sistema de anaerobiosis
3. Bao de agua a 37C.
4. Gotarios plsticos (3 mL)
5. Papel pH.

CUESTIONARIO
1. Explique cmo reconoce el cambio de pH la solucin de azul de bromotimol, y como esta
variacin se asocia con la produccin de CO2.
2. Indique brevemente cual ser el destino del piruvato producido en la gliclisis cuando el
tejido dispone de oxgeno.
3. Indique el efecto puntual esperado por la presencia de NaF y oxalato en el presente
experimento.
4. Puede ingresar directamente la sacarosa a la gliclisis?
5. Qu aplicacin prctica, en el rea de la salud, tiene el uso de NaF y oxalato como
agentes inhibidores?