P R O T O C O LOS 1

TINCIN CON COOMASSIE COLOIDAL

Reactivos
Metanol
Acido fosfrico
Sulfato amnico
Coomassie Blue G-250
Soluciones
Solucin de fijacin: 50 % Metanol, 2% cido fosfrico
Solucin de equilibrado: 33% metanol, 17% sulfato
amnico, 3% cido fosfrico
Solucin de Coomassie: 66% Coomassie Blue G-250
Protocolo
Fijacin: Dejar el gel en contacto con la solucin de fijacin
entre 3h o O/N
Lavados: Lavar con Agua MilliQ 3 veces, durante 10 min
Incubacin: Dejar el gel con la solucin de equilibrado
durante 1h
Tincin: Aadir a la solucin de equilibrado que est en
contacto con el gel, la solucin de Coomassie hasta dejarla a 0.06%
Coomassie, durante un O/N
Destincin: Hacer lavados con agua MilliQ hasta que el fondo
est lo ms claro posible

Centro de Genmica y Protemica - Unidad de Protemica

Facultad de Farmacia - UCM - Pza Ramn y Cajal , s/n . 28040 Madrid
Tl. 91.394.16.13 email: cai.proteomica@pas.ucm.es

P R O T O C O LOS 2

TINCIN CON COOMASSIE

Reactivos
Azul de Coomassie G-250 o R-250
Metanol
cido Actico
Agua Milli-Q
Soluciones
Solucin de tincin: 0.1 % de azul de Coomassie G-250 en
50 % Metanol 10% cido Actico
Solucin de distincin: 40 % metanol
Protocolo:
Tincin: Sumergir el gel en una solucin de tincin durante al
menos 1 hora
Destincin: Retirar la solucin de tincin y desteir con la
solucin de destincin. Al principio es necesario cambiar con
frecuencia esta solucin cuando ha tomado color azul.
El tiempo que tardan en aparecer las manchas o bandas es
variable en funcin del tamao y grosor del gel. Si son geles muy
grandes puede realizarse la destincin durante la noche disminuyendo
la concentracin de metanol.
Los resultados mejoran si una vez que se observan las bandas se
retira la solucin de destincin y se deja en agua 1 da.
Conservacin: En agua milli-Q.

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P R O T O C O LOS 3

TINCIN CON PLATA COMPATIBLE CON MS

Reactivos
cido Actico
Metanol
Tiosulfato Sdico
Nitrato de plata
Carbonato sdico
Formaldehdo al 35%
Protocolo
1. FIJACIN
50%

30 min en una solucin de cido actico al 5 % y metanol al

2. LAVADO
15 min en una solucin de metanol al 50%
15 min en agua milli-Q
3. SENSIBILIZACIN
1 min en una solucin de tiosulfato sdico al 0.01%
4. LAVADO
2 lavados de 1 min con agua milli-Q
5. TINCIN
Incubar con la solucin de NITRATO DE PLATA al 0.1% durante
20 min a 4C

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P R O T O C O LOS 4

6. LAVADO
2 lavados de 1 min con agua milli-Q
7. REVELADO
Solucin de carbonato sdico al 2% en formalina (formol al
35%) al 0.04%
8. FIJACIN
5 min en una solucin de cido actico al 5%
9. CONSERVACIN
A 4C en cido actico al 1%
Todas las soluciones han de prepararse en el momento de su uso con
agua mQ
Es especialmente necesario el uso de guantes en todo el proceso
para evitar la contaminacin con queratinas

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P R O T O C O LOS 5

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