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de Qualidade no
Laboratrio de
Microbiologia Clnica
Mdulo II
NDICE
1.
Mod II - 1
ANEXO
REGULAMENTO TCNICO PARA FUNCIONAMENTO DE LABORATRIOS CLNICOS
1 HISTRICO
O Regulamento Tcnico de Funcionamento do Laboratrio Clnico foi elaborado a partir de trabalho
conjunto de tcnicos da ANVISA, com o Grupo de Trabalho institudo pela Portaria n. 864, de 30 de
setembro 2003. Este Grupo de Trabalho foi composto por tcnicos da ANVISA, Secretaria de Ateno
a Sade (SAS/MS), Secretaria de Vigilncia a Sade (SVS/MS), Vigilncias Sanitrias Estaduais,
Laboratrio de Sade Pblica, Sociedade Brasileira de Patologia Clnica/Medicina Laboratorial,
Sociedade Brasileira de Anlises Clnicas, Provedores de Ensaio de Proficincia e um Consultor Tcnico
com experincia na rea.
A proposta de Regulamento Tcnico elaborada pelo Grupo de Trabalho foi publicada como Consulta
Pblica n. 50 em 6 agosto de 2004 e ficou aberta para receber sugestes por um prazo de 60
(sessenta) dias, os quais foram prorrogados por mais 30 (trinta) dias.
As sugestes recebidas foram consolidadas pelos tcnicos da Gerncia Geral de Tecnologia em
Servios de Sade - GGTES/ANVISA, pelos componentes do Grupo de Trabalho juntamente com o
Consultor. Aps discusses, as sugestes pertinentes foram incorporadas ao texto do Regulamento
Tcnico, sendo produzido o documento final consensual sobre o assunto.
O presente documento o resultado das discusses que definiram os requisitos necessrios ao
funcionamento do Laboratrio Clnico e Posto de Coleta Laboratorial.
2 OBJETIVO
Definir os requisitos para o funcionamento dos laboratrios clnicos e postos de coleta laboratorial
pblicos ou privados que realizam atividades na rea de anlises clnicas, patologia clnica e citologia.
3 ABRANGNCIA
Esta Resoluo de Diretoria Colegiada aplicvel a todos os servios pblicos ou privados, que
realizam atividades laboratoriais na rea de anlises clnicas, patologia clnica e citologia.
4 DEFINIES
4.1 Alvar sanitrio/Licena de funcionamento/Licena sanitria: Documento expedido pelo rgo
sanitrio competente Estadual, Municipal ou do Distrito Federal, que libera o funcionamento dos
estabelecimentos que exeram atividades sob regime de vigilncia sanitria.
4.2 Amostra do paciente: Parte do material biolgico de origem humana utilizada para anlises
laboratoriais.
4.3 Amostra laboratorial com restrio: Amostra do paciente fora das especificaes, mas que ainda
pode ser utilizada para algumas anlises laboratoriais.
4.4 Amostra controle: Material usado com a finalidade principal de monitorar a estabilidade e a
reprodutibilidade de um sistema analtico nas condies de uso na rotina.
4.5 Analito: Componente ou constituinte de material biolgico ou amostra de paciente, passvel de
pesquisa ou anlise por meio de sistema analtico de laboratrio clnico.
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Calibrao:
Conjunto
de
operaes
que
estabelece,
sob
condies
especificadas,
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4.23 Instruo escrita: Toda e qualquer forma escrita de documentar as atividades realizadas pelo
estabelecimento e ou servio.
4.24Instrumento laboratorial: Designao genrica para dispositivos empregados pelo laboratrio
clnico que auxiliam na execuo de uma tarefa analtica.
4.25 Insumo: Designao genrica do conjunto dos meios ou materiais utilizados em um processo
para gerao de um produto ou servio.
4.26 Laboratrio clnico: Servio destinado anlise de amostras de paciente, com a finalidade de
oferecer apoio ao diagnstico e teraputico, compreendendo as fases pr-analtica, analtica e psanaltica.
4.27 Laboratrio de apoio: Laboratrio clnico que realiza anlises em amostras enviadas por outros
laboratrios clnicos.
4.28 Laudo laboratorial: Documento que contm os resultados das anlises laboratoriais, validados e
autorizados pelo responsvel tcnico do laboratrio ou seu substituto.
4.29 Limpeza: Processo sistemtico e contnuo para a manuteno do asseio ou, quando necessrio,
para a retirada de sujidade de uma superfcie.
4.30 Material biolgico humano: Tecido ou fluido constituinte do organismo humano.
4.31 Metodologia prpria em laboratrio clnico (in house): Reagentes ou sistemas analticos
produzidos e validados pelo prprio laboratrio clnico, exclusivamente para uso prprio, em pesquisa
ou em apoio diagnstico.
4.32 Paciente de laboratrio: Pessoa da qual coletado o material ou amostra biolgica para ser
submetida anlise laboratorial.
4.33 Posto de coleta laboratorial: Servio vinculado a um laboratrio clnico, que realiza atividade
laboratorial, mas no executa a fase analtica dos processos operacionais, exceto os exames
presenciais, cuja realizao ocorre no ato da coleta.
4.34 Produto para diagnstico de uso in vitro: Reagentes, padres, calibradores, controles, materiais,
artigos e instrumentos, junto com as instrues para seu uso, que contribuem para realizar uma
determinao qualitativa, quantitativa ou semi-quantitativa de uma amostra biolgica e que no
estejam destinados a cumprir funo anatmica, fsica ou teraputica alguma, que no sejam
ingeridos, injetados ou inoculados em seres humanos e que so utilizados unicamente para provar
informao sobre amostras obtidas do organismo humano.
4.35 Profissional legalmente habilitado: Profissional com formao superior inscrito no respectivo
Conselho de Classe, com suas competncias atribudas por Lei.
4.36 Rastreabilidade: Capacidade de recuperao do histrico, da aplicao ou da localizao daquilo
que est sendo considerado, por meio de identificaes registradas.
4.37 Responsvel Tcnico - RT: Profissional legalmente habilitado que assume perante a Vigilncia
Sanitria a Responsabilidade Tcnica do laboratrio clnico ou do posto de coleta laboratorial.
4.38 Saneante: Substncia ou preparao destinada higienizao, desinfeco, esterilizao ou
desinfestao domiciliar, em ambientes coletivos, pblicos e privados, em lugares de uso comum e no
tratamento da gua.
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4.39 Superviso: Atividade realizada com a finalidade de verificar o cumprimento das especificaes
estabelecidas nos processos operacionais.
4.40 Teste Laboratorial Remoto-TLR: Teste realizado por meio de um equipamento laboratorial situado
fisicamente fora da rea de um laboratrio clnico. Tambm chamado Teste Laboratorial Porttil -TLP,
do ingls Point-of-care testing -POCT.
4.41 Validao: Procedimento que fornece evidncias de que um sistema apresenta desempenho
dentro das especificaes da qualidade, de maneira a fornecer resultados vlidos.
4.42 Verificao da calibrao: Ato de demonstrar que um equipamento de medio apresenta
desempenho dentro dos limites de aceitabilidade, em situao de uso.
5 CONDIES GERAIS
51 Organizao
51.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem possuir alvar atualizado, expedido
pelo rgo sanitrio competente.
51.2 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem possuir um profissional legalmente
habilitado como responsvel tcnico.
5.1.2.1 O profissional legalmente habilitado pode assumir, perante a vigilncia sanitria, a
responsabilidade tcnica por no mximo: 02 (dois) laboratrios clnicos ou 02 (dois) postos de coleta
laboratorial ou 01 (um) laboratrio clnico e 01 (um) posto de coleta laboratorial.
51.2.2 Em caso de impedimento do responsvel tcnico, o laboratrio clnico e o posto de coleta
laboratorial devem contar com um profissional legalmente habilitado para substitu-lo.
51.3 Todo laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial, pblico e privado devem estar inscritos
no Cadastro Nacional de Estabelecimentos de Sade - CNES.
5.1.4 A direo e o responsvel tcnico do laboratrio clnico e do posto de coleta laboratorial tm a
responsabilidade de planejar, implementar e garantir a qualidade dos processos, incluindo:
a) a equipe tcnica e os recursos necessrios para o desempenho de suas atribuies;
b) a proteo das informaes confidenciais dos pacientes;
c) a superviso do pessoal tcnico por profissional de nvel superior legalmente habilitado durante o
seu perodo de funcionamento;
d) os equipamentos, reagentes, insumos e produtos utilizados para diagnstico de uso in vitro, em
conformidade com a legislao vigente;
e) a utilizao de tcnicas conforme recomendaes do fabricante (equipamentos e produtos) ou com
base cientfica comprovada;
f) a rastreabilidade de todos os seus processos.
5.1.5 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem dispor de instrues escritas e
atualizadas das rotinas tcnicas implantadas.
5.1.6 O posto de coleta laboratorial deve possuir vnculo com apenas um laboratrio clnico.
5.1.6.1 Os postos de coleta laboratorial localizados em unidades pblicas de sade devem ter seu
vnculo definido formalmente pelo gestor local.
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5.5.3 O reagente ou insumo preparado ou aliquotado pelo prprio laboratrio deve ser identificado
com rtulo contendo: nome, concentrao, nmero do lote (se aplicvel), data de preparao,
identificao de quem preparou (quando aplicvel), data de validade, condies de armazenamento,
alm de informaes referentes a riscos potenciais.
5.5.3.1 Devem ser mantidos registros dos processos de preparo e do controle da qualidade dos
reagentes e insumos preparados.
5.5.4 A utilizao dos reagentes e insumos deve respeitar as recomendaes de uso do fabricante,
condies de preservao, armazenamento e os prazos de validade, no sendo permitida a sua
revalidao depois de expirada a validade.
5.5.5 O laboratrio clnico que utilizar metodologias prprias - In House, deve document-las
incluindo, no mnimo:
a) descrio das etapas do processo;
b) especificao e sistemtica de aprovao de insumos, reagentes e equipamentos e instrumentos.
c) sistemtica de validao.
5.5.5.1 O laboratrio clnico deve manter registro de todo o processo e especificar no laudo que o
teste preparado e validado pelo prprio laboratrio.
5.6 Descarte de Resduos e Rejeitos
5.6.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem implantar o Plano de Gerenciamento
de Resduos de Servios de Sade (PGRSS) atendendo aos requisitos da RDC/ANVISA n 306 de
07/12/2004, suas atualizaes, ou outro instrumento legal que venha substitu-la.
5.7 Biossegurana
5.7.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem manter atualizados e disponibilizar, a
todos os funcionrios, instrues escritas de biossegurana, contemplando no mnimo os seguintes
itens:
a) normas e condutas de segurana biolgica, qumica, fsica, ocupacional e ambiental;
b) instrues de uso para os equipamentos de proteo individual (EPI) e de proteo coletiva (EPC);
c) procedimentos em caso de acidentes;
d) manuseio e transporte de material e amostra biolgica.
5.7.2 O Responsvel Tcnico pelo laboratrio clnico e pelo posto de coleta laboratorial deve
documentar o nvel de biossegurana dos ambientes e/ou reas, baseado nos procedimentos
realizados, equipamentos e microorganismos envolvidos, adotando as medidas de segurana
compatveis.
5.8 Limpeza, Desinfeco e Esterilizao
5.8.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem possuir instrues de limpeza,
desinfeco e esterilizao, quando aplicvel, das superfcies, instalaes, equipamentos, artigos e
materiais.
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5.8.2 Os saneantes e os produtos usados nos processos de limpeza e desinfeco devem ser utilizados
segundo as especificaes do fabricante e estarem regularizados junto a ANVISA/MS, de acordo com a
legislao vigente.
6 PROCESSOS OPERACIONAIS
6.1 Fase pr-analtica
6.1.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem disponibilizar ao paciente ou
responsvel, instrues escritas e ou verbais, em linguagem acessvel, orientando sobre o preparo e
coleta de amostras tendo como objetivo o entendimento do paciente.
6.1.2 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem solicitar ao paciente documento que
comprove a sua identificao para o cadastro.
6.1.2.1 Para pacientes em atendimento de urgncia ou submetidos a regime de internao, a
comprovao dos dados de identificao tambm poder ser obtida no pronturio mdico.
6.1.3 Os critrios de aceitao e rejeio de amostras, assim como a realizao de exames em
amostras com restries devem estar definidos em instrues escritas.
6.1.4 O cadastro do paciente deve incluir as seguintes informaes:
a) nmero de registro de identificao do paciente gerado pelo laboratrio;
b) nome do paciente;
c) idade, sexo e procedncia do paciente;
d) telefone e/ou endereo do paciente, quando aplicvel;
e) nome e contato do responsvel em caso de menor de idade ou incapacitado;
f) nome do solicitante;
g) data e hora do atendimento;
h) horrio da coleta, quando aplicvel;
i) exames solicitados e tipo de amostra;
j) quando necessrio: informaes adicionais, em conformidade com o exame (medicamento em uso,
dados do ciclo menstrual, indicao/observao clnica, dentre outros de relevncia);
k) data prevista para a entrega do laudo;
l) indicao de urgncia, quando aplicvel.
6.1.5 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem fornecer ao paciente ambulatorial ou
ao seu responsvel, um comprovante de atendimento com: nmero de registro, nome do paciente,
data do atendimento, data prevista de entrega do laudo, relao de exames solicitados e dados para
contato com o laboratrio.
6.1.6. O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem dispor de meios que permitam a
rastreabilidade da hora do recebimento e/ou coleta da amostra.
6.1.7 A amostra deve ser identificada no momento da coleta ou da sua entrega quando coletada pelo
paciente.
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6.1.7.1 Deve ser identificado o nome do funcionrio que efetuou a coleta ou que recebeu a amostra de
forma a garantir a rastreabilidade.
6.1.8 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem dispor de instrues escritas que
orientem o recebimento, coleta e identificao de amostra.
6.1.9 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem possuir instrues escritas para o
transporte da amostra de paciente, estabelecendo prazo, condies de temperatura e padro tcnico
para garantir a sua integridade e estabilidade.
6.1.10 A amostra de paciente deve ser transportada e preservada em recipiente isotrmico, quando
requerido, higienizvel, impermevel, garantindo a sua estabilidade desde a coleta at a realizao do
exame, identificado com a simbologia de risco biolgico, com os dizeres Espcimes para Diagnstico
e com nome do laboratrio responsvel pelo envio.
6.1.11 O transporte da amostra de paciente, em reas comuns a outros servios ou de circulao de
pessoas, deve ser feito em condies de segurana conforme item 5.7.
6.1.12 Quando da terceirizao do transporte da amostra, deve existir contrato formal obedecendo
aos critrios estabelecidos neste Regulamento.
6.1.13 Quando da importao ou exportao de Espcimes para Diagnstico, devem ser seguidas a
RDC/ANVISA n 01, de 06 de dezembro de 2002 e a Portaria MS n 1985, de 25 de outubro de 2001,
suas atualizaes ou outro instrumento legal que venha substitu-las.
6.2. Fase Analtica
6.2.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem dispor de instrues escritas,
disponveis e atualizadas para todos os processos analticos, podendo ser utilizadas as instrues do
fabricante.
6.2.2 O processo analtico deve ser o referenciado nas instrues de uso do fabricante, em referncias
bibliogrficas ou em pesquisa cientificamente vlida conduzida pelo laboratrio.
6.2.3 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem disponibilizar por escrito, uma
relao que identifique os exames realizados no local, em outras unidades do prprio laboratrio e os
que so terceirizados.
6.2.4 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem definir mecanismos que possibilitem
a agilizao da liberao dos resultados em situaes de urgncia.
6.2.5 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem definir limites de risco, valores
crticos ou de alerta, para os analitos com resultado que necessita tomada imediata de deciso.
6.2.5.1 O laboratrio e o posto de coleta laboratorial devem definir o fluxo de comunicao ao mdico,
responsvel ou paciente quando houver necessidade de deciso imediata.
6.2.6 O laboratrio clnico deve monitorar a fase analtica por meio de controle interno e externo da
qualidade.
6.2.7 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem definir o grau de pureza da gua
reagente utilizada nas suas anlises, a forma de obteno, o controle da qualidade.
6.2.8 O laboratrio clnico pode contar com laboratrios de apoio para realizao de exames.
6.2.8.1 O laboratrio de apoio deve seguir o estabelecido neste regulamento tcnico.
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7 REGISTROS
7.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial devem garantir a recuperao e
disponibilidade de seus registros crticos, de modo a permitir a rastreabilidade do laudo liberado.
7.2 As alteraes feitas nos registros crticos devem conter data, nome ou assinatura legvel do
responsvel pela alterao, preservando o dado original.
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8 GARANTIA DA QUALIDADE
8.1 O laboratrio clnico deve assegurar a confiabilidade dos servios laboratoriais prestados, por meio
de, no mnimo:
a) controle interno da qualidade;
b) controle externo da qualidade (ensaios de proficincia).
9 CONTROLE DA QUALIDADE
9.1 Os programas de Controle Interno da Qualidade (CIQ) e Controle Externo da Qualidade (CEQ)
devem ser documentados, contemplando:
a) lista de analitos;
b) forma de controle e freqncia de utilizao;
c) limites e critrios de aceitabilidade para os resultados dos controles;
d) avaliao e registro dos resultados dos controles.
9.2 Controle Interno da Qualidade - CIQ
9.2.1 O laboratrio clnico deve realizar Controle Interno da Qualidade contemplando:
a) monitoramento do processo analtico pela anlise das amostras controle, com registro dos
resultados obtidos e anlise dos dados;
b) definio dos critrios de aceitao dos resultados por tipo de analito e de acordo com a
metodologia utilizada;
c) liberao ou rejeio das anlises aps avaliao dos resultados das amostras controle.
9.2.2 Para o CIQ, o laboratrio clnico deve utilizar amostras controle comerciais, regularizados junto a
ANVISA/MS de acordo com a legislao vigente.
9.2.2.1 Formas alternativas descritas na literatura podem ser utilizadas desde que permitam a
avaliao da preciso do sistema analtico.
9.2.3 O laboratrio clnico deve registrar as aes adotadas decorrentes de rejeies de resultados de
amostras controle.
9.2.4 As amostras controle devem ser analisadas da mesma forma que amostras dos pacientes.
9.3 Controle Externo da Qualidade - CEQ
9.3.1 O laboratrio clnico deve participar de Ensaios de Proficincia para todos os exames realizados
na sua rotina.
9.3.1.1 Para os exames no contemplados por programas de Ensaios de Proficincia, o laboratrio
clnico deve adotar formas alternativas de Controle Externo da Qualidade descritas em literatura
cientfica.
9.3.2 A participao em Ensaios de Proficincia deve ser individual para cada unidade do laboratrio
clnico que realiza as anlises.
9.3.3 A normalizao sobre o funcionamento dos Provedores de Ensaios de Proficincia ser definida
em resoluo especfica, desta ANVISA .
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10 DISPOSIES TRANSITRIAS
10.1 O laboratrio clnico e o posto de coleta laboratorial tm o prazo de 180 (cento e oitenta) dias
para se adequarem ao estabelecido neste Regulamento Tcnico a partir da data de sua publicao.
BRASIL
Ministrio
da
Sade.
Secretaria
Executiva.
Subsecretaria
de
Assuntos
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11.22 BRASIL. Ministrio da Sade. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Resoluo RDC n. 33,
de 25 de fevereiro de 2003. Dispe sobre o Regulamento Tcnico para o gerenciamento de resduos
de servios de sade Dirio Oficial da Unio da Repblica Federativa do Brasil, Braslia, 05 mar. 2003.
11.23 IATA - Dangerous Good Regulations (DGR) 44. Edicion, 2003.
11.24 ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas - Gesto da qualidade no laboratrio clnico NBR 14500 - jun 2000.
11.25 ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas - Glossrio de termos para uso no laboratrio
clnico e no diagnstico in vitro - NBR - 14501 - mar 2001.
11.26 ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas - Diagnstico in vitro - Recomendaes e
critrios para aquisio, recepo, transporte e armazenamento de produtos - NBR 14711 - jun 2001.
11.27 ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas - Laboratrio Clnico - NBR 14785 - dez de
2001.
11.28 ABNT - Associao Brasileira de Normas Tcnicas - Laboratrio Clnico - Requisitos de segurana
- NBR 14785 - dez 2001.
11.29 WORLD HEALTH ORGANIZATION. Guideline for the Safe Transport of Infectious Substances and
Diagnostic Specimens, Who/EMC/97.3. [online]. Available from World Wide Web:
http://www.who.int/emc/pdfs/emc97_3.pdf
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Elaborar e viabilizar normas para coleta, conservao e transporte de material de interesse clnico;
de
Infeco
Hospitalar
do
rastreamento
INFRA-ESTRUTURA FSICA
RECURSOS MATERIAIS
O equipamento mnimo para funcionamento de um laboratrio de microbiologia consiste em:
estufa bacteriolgica
forno de Pasteur
autoclave
microscpio binocular
bico de Bunsen
homogeneizador
geladeira
decimais
Alm desse equipamento mnimo, o laboratrio poder contar com outros aparelhos opcionais:
microscpio estereoscpico
congelador (-20oC ou -70oC)
bomba de vcuo para filtrao com membranas
potencimetro
balana analtica
RECURSOS HUMANOS
recomendvel que a superviso tcnico-cientfica do laboratrio esteja a cargo de mdico ou
profissional de nvel superior, especializado em microbiologia, e, se possvel, em tempo integral.
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SEGURANA LABORATORIAL
Pode ser definida como sendo um conjunto de aes voltadas para a preveno, minimizao ou
eliminao de riscos inerentes a estas atividades e que podem comprometer a sade do homem, dos
animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.
A rotina do Laboratrio de Microbiologia envolve exposio tanto com material clnico e reagentes
qumicos como com potenciais agentes patognicos concentrados em meio de cultura. Assim
profissionais da rea de sade e outros trabalhadores que exercem suas atividades em laboratrios,
esto sob risco de desenvolver doena por exposio a agentes infecciosos, produtos qumicos txicos
e inflamveis, entre outros.
Atualmente, com a sofisticao das novas tcnicas de diagnstico, observamos profissionais de outras
reas, tais como fsicos, qumicos, analistas de sistemas, etc, envolvidos em atividades com exposio
a agentes infecciosos e por outro lado, microbiologistas manipulando substncias qumicas ou
materiais radioativos.
A responsabilidade legal pela segurana em ambientes de trabalho cabe aos administradores de
hospitais e laboratrios. No entanto, os funcionrios tambm so responsveis pela sua adeso s
tcnicas microbiolgicas seguras e da incorporao das normas de biossegurana ao seu trabalho
dirio delineadas no Manual de Segurana de Laboratrio.
Deve-se designar um encarregado ou uma comisso de segurana cujas atribuies incluem a
redao, publicao e implementao das normas e instrues de segurana. Dentre os regulamentos
de segurana inclui-se medidas de proteo pessoal; manuseio de equipamentos, amostras e
materiais; e outras precaues. Os funcionrios devem ser informados destas normas e instrues
atravs de cursos e treinamentos regularmente programados. Cabe tambm ao encarregado/comisso
de segurana juntamente com os administradores/supervisores dos hospitais e laboratrios de ajustar
e corrigir falhas ou irregularidades de conduta.
CONTROLE DE QUALIDADE
Para o programa bsico de controle de qualidade em microbiologia, deve-se incluir, alm de uma lista
de itens especficos, o senso comum, o bom julgamento e uma constante ateno aos detalhes. Para o
controle de qualidade deve-se estabelecer o padro mnimo e delinear as diversas etapas que devem
ser seguidas para o controle dirio e vigilncia de todas as facetas do programa.
As diretrizes para o controle de qualidade devem constar em um manual, no qual estejam detalhadas
prticas tais como procedimentos para monitorar o funcionamento dos equipamentos, o controle da
reatividade dos meios e reagentes, os prazos de validade, os resultados de todos os testes, etc.
Devem ser elaborados formulrios adequados para coletar dados, de modo que qualquer
anormalidade possa ser facilmente detectada. O encarregado tambm deve revisar todos os registros
de controle e verificar que sejam anotadas todas as incidncias fora do controle e as respectivas aes
corretivas tomadas.
Os laboratrios devem tambm dispor de uma lista de inspeo para realizar avaliaes pontuais dos
controles de qualidade um requerimento para credenciamento de laboratrios e/ou auditoria e
fiscalizao sanitria.
Procedimento Operacional Padro (POP)
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agentes patognicos e potencialmente letais devendo ser supervisionados por competentes cientistas
que possuam vasta experincia com estes agentes.
Todos os procedimentos que envolverem a manipulao de material infeccioso devem ser conduzidos
dentro de cabines de segurana biolgica ou outro sistema de conteno fsica. Os manipuladores
devem usar roupas de proteo individual.
O laboratrio dever ter instalaes compatveis para o NB-3. Para alguns casos, quando no
existirem as condies especficas para o NB-3, particularmente em instalaes laboratoriais sem rea
de acesso especfica, com ambientes selados ou fluxo de ar unidirecional, as atividades de rotina e
operaes repetitivas podem ser realizadas em laboratrio com instalaes NB-2, desde que
acrescidas das prticas recomendadas para NB-3 e do uso de equipamentos de conteno para NB-3.
Cabe ao Pesquisador Principal a deciso de implementar essas modificaes, comunicando-as a CIBio
e CTNBio.
Classe
de
Risco 1
Classe
de
Risco 2
(baixo risco individual e baixo risco para a comunidade) - organismo que no causa
doena ao homem ou animal. Ex: microrganismos usados na produo de cerveja,
vinho, po e queijo. (Lactobacillus casei, Penicillium camembertii, S. cerevisiae, etc).
(risco individual moderado e risco limitado para a comunidade) - patgeno que causa
doena ao homem ou aos animais, mas que no consiste em srio risco, a quem o
manipula em condies de conteno, comunidade, aos seres vivos e ao meio
ambiente. As exposies laboratoriais podem causar infeco, mas a existncia de
medidas eficazes de tratamento e preveno limita o risco.
Exemplo: bactrias - Clostridium tetani, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus;
vrus - EBV, herpes; fungos - Candida albicans; parasitas - Plasmodium, Schistosoma
Classe
de
Risco 3
Classe
de
Risco 4
(elevado risco individual e elevado risco para a comunidade) - patgeno que representa
grande ameaa para o ser humano e para aos animais, representando grande risco a
quem o manipula e tendo grande poder de transmissibilidade de um indivduo a outro.
Normalmente no existem medidas preventivas e de tratamento para esses agentes.
Exemplos: Vrus de febres hemorrgicas, Febre de Lassa, Machupo, bola, arenavrus e
certos arbovrus.
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OGM DO GRUPO I
Receptor ou parental
- no patognico.
- isento de agentes adventcios.
- com amplo histrico documentado de utilizao segura, ou com a incorporao de barreiras
biolgicas que, sem interferir no crescimento timo em reator ou fermentador, permita uma
sobrevivncia e multiplicao limitadas, sem efeitos negativos para o meio ambiente.
Vetor/Inserto
- deve ser adequadamente caracterizado quanto a todos os aspectos, destacando-se aqueles que
possam representar riscos ao homem e ao meio ambiente, e desprovido de seqncias nocivas
conhecidas.
- deve ser de tamanho limitado, no que for possvel, s seqncias genticas necessrias para realizar
a funo projetada.
- no-patognicos.
- que ofeream a mesma segurana que o organismo receptor ou parental no reator ou fermentador,
mas com sobrevivncia e/ou multiplicao limitadas, sem efeitos negativos para o meio ambiente.
Outros microorganismos geneticamente modificados que poderiam incluir-se no Grupo I, desde que
renam as condies estipuladas no item anterior
- microrganismos construdos inteiramente a partir de um nico receptor procaritico (incluindo
plasmdeos e vrus endgenos) ou de um nico receptor eucaritico (incluindo cloroplastos,
mitocndrias e plasmdeos, mas excluindo os vrus).
- organismos compostos inteiramente por seqncias genticas de diferentes espcies que troquem
tais seqncias mediante processos fisiolgicos conhecidos.
OGM DO GRUPO II
Todos aqueles no includos no grupo II, ou seja, qualquer organismo resultante de organismo
receptor ou parental classificado como patognico para o homem e animais como classe de risco 2, 3,
ou 4.
Nota: Os laboratrios clnicos e de diagnsticos so geralmente classificados como Nvel 2
ou 3 de Biossegurana.
Mod II - 21
Espao suficiente deve ser projetado de modo a permitir a execuo dos procedimentos
laboratoriais de forma organizada e segura, e acesso fcil para limpeza e descontaminao.
Paredes, tetos, pavimentos e bancadas devem ser durveis, lisas, facilmente lavveis,
impermeveis a lquidos, resistentes ao calor moderado e aos produtos qumicos e desinfetantes
normalmente utilizados no laboratrio; o piso deve ser antiderrapante e a exposio de tubulaes
deve ser evitada, quando possvel.
Nos laboratrios NB-3, aberturas, para manuteno de encanamentos, existentes nas paredes,
tetos e pavimentos devem ser selados para facilitar a descontaminao. Dutos e espaos entre
portas e esquadrias tambm devem permitir o selamento para facilitar a descontaminao.
Espao para o armazenamento de insumos e suprimentos deve ser adequado para uso imediato,
evitando assim o aglomeramento nas bancadas e reas de circulao; espao adicional para
estoque de insumos e suprimentos laboratoriais deve ser projetado em locais fora das reas de
trabalho.
Pertences pessoais dos trabalhadores devem ser mantidos em locais fora das instalaes do
laboratrio. Os laboratrios NB-3 devem dispor de sala para a troca de roupas.
Cada laboratrio deve possuir uma pia para lavagem das mos, preferencialmente prxima
sada. Recomendamos a construo de pias que funcionem automaticamente ou que sejam
acionadas com o p ou com o joelho.
As portas devem ter abertura para fora, serem corta-fogo, dotadas com visores de vidro e que se
fechem automaticamente. exigido um sistema de portas com trancas em dependncias que
abrigarem agentes restritos. Para os laboratrios NB-3 as portas devem ser duplas e que
disponham de um sistema de intertravamento; um dispositivo para sada de emergncia deve ser
instalado.
O sistema de ventilao deve ser construdo para permitir descontaminao de gases e que
mantenha um fluxo de ar unidirecional adequado para o laboratrio; o ar circulado no
laboratrio no deve ser reciclado para outras reas do estabelecimento. No entanto, o ar
pode ser filtrado com filtros HEPA, e ento recondicionado e recirculado no prprio do
laboratrio. O ar de exausto do laboratrio (exceto das cabines de segurana) pode ser
descartado para fora das instalaes; recomenda-se que o descarte atravs de filtros HEPA.
O ar exaurido das cabines de segurana biolgica deve ser retirado diretamente para fora do
ambiente de trabalho atravs do sistema de exausto do edifcio. Estas devero estar
conectadas de maneira que evitem qualquer interferncia no equilbrio do ar das cabines ou do
sistema de exausto do edifcio. Quando as cabines de segurana biolgica Classe III forem
utilizadas, estas devero estar conectadas diretamente ao sistema de exaustores.
Centrfugas de fluxo contnuo ou outros equipamentos que possam produzir aerossis devero
ser refreadas atravs de dispositivos que liberem o ar atravs de filtros HEPA antes de serem
descarregados do laboratrio. Esses sistemas HEPA devero ser testados anualmente. Uma
outra alternativa seria jogar o ar de sada das cabines para fora, em locais distantes de reas
ocupadas ou das entradas de ar.
Mod II - 22
As linhas de vcuo devero ser protegidas por sifes contendo desinfetantes lquidos e filtros
HEPA, ou o equivalente. Os filtros devero ser substitudos quando necessrio. Uma alternativa
usar uma bomba a vcuo porttil (tambm adequadamente protegida com sifes e filtros).
Deve haver suprimento de boa qualidade de gs, eletricidade assim como de luz de emergncia; o
gerador aconselhvel para os equipamentos essenciais como estufas, cabine de segurana
biolgica, refrigeradores, etc. A manuteno regular e eficiente desses servios obrigatria.
A gua de torneira, no prpria para uso no Laboratrio Clnico; deve ser providenciado um
sistema adequado de suprimento de gua purificada a fim de evitar interferncias nos testes ou
ensaios.
Segurana contra incndios e atos de vandalismo deve ser considerado; portanto portas e janelas
apropriadas e chaves de uso restrito so fundamentais.
Laboratrios NB-3 devem estar localizados isoladamente de reas que so abertas ao trfego
interno irrestrito; deve ser projetado de modo a impedir a entrada de insetos e outros organismos
indesejveis.
ACCESSO
Para NB-1, o acesso ao laboratrio deve ser limitado ou restrito de acordo com a definio do
chefe de laboratrio, quando estiver sendo realizado experimento ou trabalhos com amostras e
culturas; alm dessas exigncias, nos laboratrios NB-2 e NB-3, o chefe de laboratrio tem a
responsabilidade de limitar o acesso; cabe ao mesmo avaliar cada situao e autorizar quem
poder entrar ou trabalhar no laboratrio.
As pessoas que apresentarem um risco maior de contaminao ou que possam ter srias
conseqncias caso sejam contaminadas, no devem ser permitidas dentro dos laboratrios NB-2
e NB-3 ou na sala de animais.
NB-2 e NB-3: as portas devem ser mantidas fechadas e adequadamente identificadas: o smbolo
de Risco Biolgico dever ser colocado na entrada do laboratrio onde agentes etiolgicos
estiverem sendo utilizados. Este sinal de alerta dever conter informaes como o(s) nome(s) o(s)
agente(s) manipulado(s), o nvel de biossegurana, as imunizaes necessrias, o nome e nmero
do telefone do pesquisador, o tipo de equipamento de proteo individual que dever ser usado no
laboratrio e os procedimentos necessrios para entrar e sair do laboratrio.
Nos laboratrios NB-3 nenhum indivduo deve trabalhar sozinho; no mnimo duas pessoas devem
estar nas instalaes do laboratrio.
Desenvolvido com materiais impermeveis a lquidos, resistentes corroso e que atendem aos
requerimentos estruturais.
Mod II - 23
Especificaes devem ser consultadas para se certificar que o equipamento e/ou acessrio possui
os dispositivos de segurana.
Autoclaves
Obs.: Equipamentos como autoclaves e cabines de segurana biolgica devem ser certificadas; a
calibrao dever ser efetuada regularmente de acordo com as instrues do fabricante.
EQUIPAMENTOS DE CONTENO EXIGIDOS
As cabines devem ser instaladas, de forma que a variao da entrada e sada de ar da sala, no
provoque alterao nos padres de conteno de seu funcionamento. As cabines de segurana
biolgica devem estar localizadas longe de portas, janelas que possam ser abertas, reas laboratoriais
muito cheias e que possuam outros equipamentos potencialmente dilaceradores, de forma que sejam
mantidos os parmetros de fluxo de ar nestas cabines de segurana biolgica.
Para os laboratrios NB-3, devem ser utilizadas Cabines de Segurana Biolgica Classe I, II ou
III conforme a classificao, ou outra combinao apropriada de dispositivos de proteo pessoal e
conteno fsica sempre que:
Estas cabines devero estar localizadas distantes de passagens, portas, venezianas, almoxarifado
sistemas de ventilao e reas do laboratrio que possuam um grande movimento.
Cabine de segurana biolgica classe I
uma modificao da cabine usada no laboratrio qumico. uma cabine ventilada com fluxo de ar do
ambiente, podendo ter a frente totalmente aberta ou com painel frontal ou painel frontal fechado com
luvas de borracha. Possui duto de exausto com filtro HEPA. No h proteo para o experimento
somente para o operador e o ambiente. Dentro da cabine so colocadas lmpadas U.V.
recomendada para trabalho com agentes de risco biolgico dos grupos 1, 2 e 3.
Cabine de segurana biolgica classe II
A cabine classe II conhecida com o nome de Cabine de Segurana Biolgica de Fluxo Laminar de Ar.
O Princpio fundamental a proteo do operador, do meio ambiente e do experimento ou produto.
Possui uma abertura frontal que permite o acesso a superfcie de trabalho. Altura de segurana da
Mod II - 24
abertura do painel frontal de 20 cm, podendo ter um alarme que previne contra a abertura
excessiva do painel. Possui filtro HEPA.
Cabine de segurana biolgica classe II A
Fluxo laminar de AR vertical com tiro frontal de ar de 75 ps/min. O ar contaminado aps filtragem
pelo filtro HEPA do exaustor passa ao ambiente onde a cabine est instalada (a cabine deve ter pelo
menos 20 cm de afastamento do teto). No se deve usar este tipo de cabine com substncias txicas,
explosivas, inflamveis ou radioativas pela elevada percentagem de recirculao do ar (recircula 70
%). recomendada para trabalho com agentes de risco biolgico das classes 1 e 2.
Cabine de segurana biolgica classe II B1
Esta cabine possui filtro. O ar que entra na cabine atravessa o filtro HEPA abaixo da rea de trabalho,
30 % do ar recirculam enquanto que 70% saem atravs do filtro exaustor. O tiro de ar no seu interior
de 100 ps/min. Usada para agentes biolgicos tratados com mnimas quantidades de produtos
qumicos txicos e traos de radionucleotdeos. recomendada para o trabalho com agentes de risco
biolgico das classes 1, 2 e 3.
Cabine de segurana biolgica classe II B2
uma cabine de total esgotamento de ar. O ar entra pelo topo da cabine atravessa o pr-filtro e o
filtro HEPA sobre a rea de trabalho. O tiro frontal de ar no seu interior de 100 ps/min. O ar
filtrado, atravessa somente uma vez a rea de trabalho. O esgotamento do ar deve ser realizado
atravs do filtro HEPA conduzindo-o, por um duto, para o exterior. Pode ser usado para agentes
biolgicos tratados com produtos qumicos e radionucleotdeos. recomendada para trabalho com
agentes de risco biolgico das classes 1, 2 e 3.
Cabine de segurana biolgica classe II B3
igual a Cabine de Segurana Biolgica Classe II. A velocidade de fluxo de ar no seu interior de 75
a 100 ps/min. O ar esgotado totalmente atravs de um filtro HEPA por um duto para o exterior.
recomendada para o trabalho com agentes de risco biolgico das classes 1, 2 e 3.
Cabine de segurana biolgica classe III
uma cabine de conteno mxima. totalmente fechada com ventilao prpria, construda em ao
inox prova de escape de ar e opera com presso negativa. O trabalho se efetua com luvas de
borracha presas cabine. Para purificar o ar contaminado so instalados 2 filtros HEPA em srie ou
um filtro HEPA e um incinerador. A introduo e retirada de materiais se efetuam por meio de
autoclaves de porta dupla ou comporta de ar de porta dupla, recipiente de imerso com desinfetante.
Pode conter todos os servios como: refrigeradores, estufas, freezers, centrfugas, banho-maria,
microscpio e sistema de manuseio de animais. NO PODE CONTER GS. Os dejetos lquidos so
recolhidos em um depsito para serem descontaminados antes de serem lanados ao sistema de
esgoto. Mxima proteo ao pessoal, meio ambiente e produto. recomendada para o trabalho com
agentes de risco biolgico da classe 4 e material de pesquisa de DNA de alto risco.
GESTO DE SEGURANA
O chefe de laboratrio deve estabelecer polticas e procedimentos com ampla informao a todos
que trabalhem no laboratrio sobre o potencial de risco relacionado ao trabalho, bem como sobre
os requisitos especficos para entrada e sada do laboratrio e das salas onde ocorra manipulao
de animais.
Caber ao diretor o responsvel imediato do laboratrio assegurar que antes que o trabalho com
os organismos designados para o NB-3 se inicie, toda a equipe do laboratrio demonstre estar
apto para as prticas e tcnicas padro de microbiologia e demonstrar habilidade tambm nas
prticas e operaes especficas do laboratrio. Podendo estar includo uma experincia anterior
em manipulao de patgenos humanos ou culturas de clulas, ou um treinamento especfico
proporcionado por peritos em tcnicas microbiolgicas seguras.
Mod II - 25
Todo o pessoal deve ser orientado para a necessidade de ler seguir as especificaes de cada
rotina de trabalho, procedimentos de biossegurana e prticas estabelecidas no Manual.
Uma falha na conteno de organismos patognicos pode ser resultado de acidentes causados por
produtos qumicos, radiao, incndio e por mal funcionamento do sistema eltrico. Portanto de
extrema importncia que se mantenha uma segurana de alto padro nessas reas em qualquer
laboratrio de microbiologia.
SADE OCUPACIONAL
O administrador e/ou diretor juntamente com o chefe de laboratrio responsvel em assegurar a
implementao de um programa de controle mdico de sade ocupacional. As seguintes medidas so
recomendadas:
avaliao mdica e subseqente tratamento; todos os registros mdicos devem ser registrados.
Excluso de indivduos altamente susceptveis (P.ex. grvidas) de reas de trabalho com alto risco
biolgico.
O uso de equipamentos e acessrios de proteo pessoal assim como a adeso aos procedimentos
recomendados.
NB-1
Embora os microrganismos de classe 1 no sejam patognicos, o trabalhador deve fazer um exame
mdico e seu histrico mdico deve ser registrado. Doenas ou acidentes laboratoriais devem ser
registrados e todos os trabalhadores devem ser informados e conscientes da importncia das boas
prticas no laboratrio de microbiologia.
NB-2
Avaliao mdica antes da contratao do trabalhador necessria; o histrico mdico deve ser
registrado.
Mulheres devem tomar conhecimento do risco que existe para o feto da exposio ocupacional a
certos microrganismos como, por exemplo, o vrus da rubola.
NB-3
Alm das exigncias citadas no NB-2:
Mod II - 26
Aps uma avaliao clnica satisfatria, deve-se providenciar para o trabalhador uma notificao
com a foto do mesmo e que descreva que este um funcionrio de um laboratrio de nvel 3 de
biossegurana. A notificao pode incluir informaes para contato, inclusive do chefe ou diretor
do laboratrio, mdico ou encarregado da biossegurana do laboratrio.
Deve-se realizar anualmente radiografia de trax para os funcionrios que se dedicam rotina de
tuberculose (seguir as orientaes do Programa Nacional de Controle de Infeco Hospitalar)
REAS DE TRABALHO
O laboratrio deve ser mantido limpo, arrumado e livre de materiais que no so pertinentes ao
trabalho.
As superfcies das bancadas devem ser desinfetadas no final do trabalho ou ao fim do dia ou
sempre que ocorrer derramamento ou borrifada de material potencialmente perigoso.
proibido comer, beber, fumar e aplicar cosmticos nas reas de trabalho; alimentos devem ser
guardados em reas especficas para este fim, fora do laboratrio.
Avisos como no comer, no beber e no fumar devem ser expostos claramente nas
instalaes do laboratrio.
PROTEAO PESSOAL
Avental para proteo deve ser usado abotoados durante os procedimentos de rotina; deve ser
de mangas longas e, se possvel, de tecido sanfonado (tipo avental cirrgico). NB-3: as roupas de
proteo devem incluir aventais com uma frente inteira ou macaco, gorros e proteo ps
quando apropriado; antes de ser lavada a roupa dever ser descontaminada e dever ser trocada
depois de contaminada.
NB-3: quando apropriado, equipamentos respiratrios devem ser utilizados em salas que
contenham animais infectados
Devem ser usadas luvas quando houver um contato direto com materiais e superfcies
potencialmente infecciosas ou equipamentos contaminados. O mais adequado usar dois pares de
luvas. Essas luvas devem ser desprezadas quando estiverem contaminadas, quando o trabalho
com materiais infecciosos for concludo ou quando a integridade da luva estiver comprometida.
Luvas descartveis no podero ser lavadas, reutilizadas ou usadas para tocar superfcies limpas
(teclado, telefones, etc.), e no devem ser usadas fora do laboratrio. Alternativas como luvas de
ltex com talco devero estar disponveis.
1.
Luva plstica descartvel, deve ser desprezada aps cada uso. Indicaes: para proteo
exclusiva do usurio em situaes como colheita de sangue, recebimento ou entrega de
material biolgico, etc.
2.
Luva domstica que pode ser antiderrapante; no descartvel. Seu uso indicado para
lavagem e desinfeco de materiais e superfcies. Aps o uso, lavar as mos enluvadas com
gua e sabo e descontaminar as luvas em soluo de hipoclorito a 0,5%, por 30 a 60
minutos.
Mod II - 27
3. Luva cirrgica (ltex) de preferncia descartvel, mas pode ser reprocessada, embora
com restries. Indicada para uso em tcnicas asspticas (para proteo do paciente e do
usurio), tais como cateterizao vesical, exames endoscpicos, puno para obteno de
liquor, lquido articular, lquido pleural, etc.
No comer e beber no local de trabalho, assim como no armazenar bebidas e comidas nas
instalaes do laboratrio.
Prender os cabelos; evitar o uso de anis, pulseiras e o uso de roupa social de mangas compridas.
No manusear lentes de contato e quando utilizados, proteger com culos de segurana. As lentes
de contato absorvem certos solventes e podem ser perigosas em casos de respingo e
derramamentos.
Culturas, tecidos e amostras de fludos corpreos ou dejetos potencialmente infecciosos devem ser
colocados em um recipiente com uma tampa que evite o vazamento durante a coleta, o manuseio,
o processamento, o armazenamento, o transporte ou o embarque.
Nos laboratrios NB-2 e NB-3, todas as manipulaes abertas que envolvam materiais infecciosos
devero ser conduzidas no interior das cabines de segurana biolgica ou de outros dispositivos de
conteno fsica.
Nenhum tipo de material deve ser levado boca; etiquetas ou rtulos no devem ser lambidos.
Material descartvel (seringas, agulhas, luvas, toalhas, etc.) deve ser utilizado sempre que
possvel.
Todo procedimento tcnico deve ser executado minimizando a formao de aerossis; sempre que
houver uma probabilidade de formao de aerossol, o trabalho deve ser conduzido na cabine de
segurana.
O uso de agulhas e seringas deve ser limitado e elas no devem ser utilizadas como pipetadores
ou qualquer outro propsito que no seja de injeo parenteral ou aspirao de fludos de animais
de laboratrio e de garrafas de diafragmas.
Extrema precauo deve ser tomada quando forem manuseadas agulhas e seringas de modo a
evitar a auto-inoculao e a produo de aerossis durante o uso e o descarte.
Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade nica
descartvel usada para injeo ou aspirao de materiais infecciosos. As seringas que possuem
um envoltrio para a agulha, ou sistemas sem agulha e outros dispositivos de segurana devero
ser utilizados quando necessrios.
Vidros quebrados no devem ser manipulados diretamente com a mo, devem ser removidos
atravs de meios mecnicos como uma vassoura e uma p de lixo, pinas ou frceps. Os
recipientes que contm agulhas, equipamentos cortantes e vidros quebrados contaminados
devero passar por um processo de descontaminao antes de serem desprezados, de acordo com
os regulamentos locais, estaduais ou federais.
Mod II - 28
MANUSEIO DE AMOSTRAS
As amostras devem ser colhidas em recipientes resistentes, com vedao adequada para evitar
derramamento e perdas. Todas as mostras devem ser consideradas potencialmente perigosas.
Usar luvas descartveis sempre que o trabalho envolver contato com material bilgico.
Antes de centrifugar qualquer material, os tubos, frascos ou garrafas devem ser verificados quanto
presena de rachaduras. Os amortecedores de borracha no fundo dos rotores devem ser
trocados com periodicidade e qualquer fragmento de vidro que possa estar presente deve ser
removido.
Assegurar que a centrfuga esteja perfeitamente equilibrada antes do uso. Os anis dos rotores e
os suportes dos tubos para assegurar o equilbrio de pesos devem ser verificados.
Esperar que a centrifugao cesse por completo antes de abrir a tampa para remover o material.
Cuidados especiais devem ser tomados para impedir contaminao da pele com organismos
contendo molculas de DNA/RNA recombinantes; devem ser usadas luvas no manejo de animais
em experimentao e sempre que houver possibilidade de contato da pele com o OGM.
Devem ser usadas somente seringas com agulha fixa ou agulha e seringa em uma unidade nica
nas atividades de injeo ou aspirao de fludos contendo molculas de DNA/RNA recombinantes.
SEGURANA ELTRICA
Os fios de extenso devem ser utilizados apenas em concordncia com conjunto de polticas e
procedimentos gerais do estabelecimento.
Mod II - 29
Todos os recipientes devem estar claramente rotulados com indicao de: contedo, aviso de
perigo, precaues especiais, data de recebimento e preparao, data de abertura para uso, data
de vencimento, fabricante
DESINFETANTES E QUMICOS
O manual de segurana deve incluir quais e as finalidades dos desinfetantes a serem utilizados e
as instrues de diluio recomendadas para cada desinfetante. O fabricante deve providenciar
todas especificaes relevantes. Hipoclorito de sdio e desinfetantes fenlicos so os mais
recomendados para fins laboratoriais.
Para casos especiais, lcool, iodo e outros oxidantes podem ser efetivos desde que comprovado
que o agente a ser destrudo no seja resistente ao procedimento.
O resduo deve ser armazenado no local onde gerado, em ambiente especfico e arejado,
acondicionado em saco plstico branco, dentro de suas prprias embalagens primrias. Para o
caso da inexistncia de suas embalagens, devem-se utilizar frascos de at dois litros, resistentes,
com tampa rosqueada, vedante e identificado com o nome e frmula do produto qumico, smbolo
e expresso de resduo qumico txico.
Mod II - 30
O descarte de solventes orgnicos solveis em gua com volumes < 500 ml e de orgnicos
insolveis em gua com volumes < 100 ml pode ser na pia:
-
Deixar escorrer, sem respingos, uma corrente de gua fria dentro da pia.
Verter lentamente o lquido, o mais prximo possvel do ralo, sem produzir respingos.
Manter a corrente de gua fria por vrios minutos aps a eliminao do lquido.
Vazamentos de materiais infecciosos devero ser descontaminados, contidos e limpos pela equipe
de profissionais especializados ou por outras pessoas adequadamente treinadas e equipadas para
trabalharem com material infeccioso concentrado. Os procedimentos para remoo do vazamento
devero ser desenvolvidos.
Em caso de exposio percutnea, recomenda-se lavagem exaustiva com gua e sabo ou soluo
anti-sptica de degermante (PVP Iodo ou clorexidina). Aps a exposio em mucosa, est
recomendada a lavagem exaustiva com gua ou soluo.fisiolgica. A indicao do uso de antiretrovirais deve ser baseada em uma avaliao criteriosa do risco de transmisso do HIV em
funo do tipo de acidente ocorrido e da toxicidade dessas medicaes.
Para grandes quantidades de cidos ou bases, lavar a rea com jato forte e abundante de gua
aps a neutralizao.
Mod II - 31
PRODUO DE AEROSSIS
O uso incorreto de equipamento de laboratrio como pipetas, alas de inoculao, agulhas,seringas,
centrfugas e homogeneizadores, pode produzir grandes quantidades de aerossis potencialmente
infectantes.
Exemplos de procedimentos que produzem aerossis:
Mod II - 32
contra-indicada a pipetagem, com a boca, de material clnico (sangue, liquor, urina, etc.) ou de
suspenses bacterianas. Deve-se utilizar, sempre que possvel, pipetas automticas ou bulbos de
borracha.
contato direto: com a pele (quebra de recipiente, derramamento de lquidos, etc.); com a boca
(durante a pipetagem); com o esfago e o estmago (ingesto acidental);
inalao de vapores e ps finos, com conseqentes danos pulmonares; absoro (efeitos txicos
no nvel da medula ssea, dos rins e do fgado).
No se deve pipetar diretamente com a boca produto qumico irritante ou txico, deve-se fazer uso de
buretas ou pr-pipetas de borracha.
Manter no laboratrio somente o suficiente para o uso. O restante deve ser armazenado em
outras salas.
Manter os recipientes de uso em prateleiras localizadas da altura dos olhos para baixo,.evitandose riscos de queda e derramamento.
Nas diluies, nunca se deve juntar gua ao cido concentrado. Sempre adicionar o cido gua
sob resfriamento, de preferncia.
Evitar a respirao junto de vapores de cidos e evitar contato destes com a pele e com os olhos.
Gases txicos:
1.
2.
Ponto de Inflamabilidade
Ponto de ebulio
Exemplos
IA
4,4oC
18,3oC
ter, acetaldedo
IB
22,7oC
37,7oC
IC
22,7oC
37,2oC
Combustveis
Classe
Ponto de Inflamabilidade
Exemplos
II
37,7oC a 54,4oC
III
60oC
Mod II - 34
Lista da localizao exata dos equipamentos, meio de culturas, reagentes, e outros suplementos,
incluindo descrio completa das frmulas e instrues para o uso e preparo.
Para inspeo do laboratrio exigido que o manual de procedimentos seja revisto e atualizado ao
menos uma vez ao ano e que constem as iniciais do diretor ou chefe de laboratrio em cada
procedimento, indicando que a atualizao foi efetuada.
OBJETIVO
O laboratrio clnico de microbiologia responsvel em providenciar informao precisa e relevante
quanto ao diagnstico do paciente. O valor e a preciso clnica das anlises do material clnico e o
respectivo isolamento do microrganismo so dependentes do programa de qualidade, que por sua vez,
avalia a qualidade do material; documenta a validade do mtodo aplicado; monitora a performance
dos procedimentos, reagentes, meios, instrumentos e do indivduo que executou a anlise; e verifica
os resultados do teste quanto aos erros e relevncia clnica. Um programa de qualidade efetivo
depende de um processo de avaliao contnuo e do seu aprimoramento.
ENSAIOS DE PROFICINCIA
O desempenho dos exames de laboratrio clnico realizado atravs de ensaios de proficincia. Este
programa consiste na avaliao de amostras por evento. H um nmero estabelecido de eventos
anuais de testes em cada rea de atividade: bacteriologia, micologia, parasitologia e virologia. As
amostras de proficincia devem ser analisadas pelos trabalhadores que habitualmente realizam as
anlises em questo, de acordo com os procedimentos de rotina e juntamente com as amostras de
pacientes.
O laboratrio que no atender os requisitos dos ensaios de proficincia deve documentar a fonte do
problema, revisar o programa em vigor e tomar medidas corretivas.
Mod II - 35
Parmetros
Coleta e transporte de
amostra
Performance dos
equipamentos e
instrumentos
Diretrizes
- Descreve as instrues de coleta e transporte
- Estabelece o critrio de aceitao e rejeio das amostras
- Documenta a verificao do funcionamento do equipamento e uso freqente que
assegura o funcionamento apropriado
- documenta a manuteno regular
- documenta os registros de manuteno do equipamento
- Mantm o protocolo de controle de qualidade do fabricante
Meios de cultura
prontos
Meios de cultura
preparado no
laboratrio
Reagentes
e
suplementos
Kits comerciais
Funcionrios
Registro de CQ
Manual de
Procedimento
Mod II - 36
As peas devem ser trocadas aps um perodo especfico de uso, mesmo que no paream
alteradas.
A manuteno pode ser executada tanto pelo fabricante como pelo setor de servios de
engenharia do laboratrio, quando existente.
As temperaturas dos equipamentos devem ser medidas diariamente com termmetros calibrados.
Qualquer leitura que resulte em valores fora dos limites de tolerncia definidos pelo s controle de
qualidade, deve-se determinar a causa e corrigir o problema.
Procedimento
Intervalo
Limites de Tolerncia
Refrigeradores
Registro de temperatura *
Dirio ou contnuo
2oC a 8oC
Congeladores
Registro de temperatura *
Dirio ou contnuo
-8oC a -20oC
-60oC a -75oC
Estufas
Registro de temperatura *
Dirio ou contnuo
35,5oC 1oC
Estufas CO2
Medida do contedo de
CO2:
5 a 10%
- Usar analisador de
gases sanguneos ou
dispositivo Fyrite 1
Banhos
Registro de temperatura *
Dirio
36oC a 38oC
55oC a 57oC
Aquecedores
Registro de temperatura *
Dirio
1oC do estabelecido
Autoclaves
Ao menos semanalmente
O no crescimento de
esporos indica corrida
estril.
Medidor de pH
A cada uso
0,1 unidade de pH do
pado em uso.
Jarras de anaerobiose
A cada uso
A conversp da tira de
azul para branco indica
baixa tenso de CO2.
Cultivo de Clostridium
novyi tipo B
Soluo indicadora de azul
de metileno
Peridico
O crescimento indica
baixa tenso de O2.
Utilizada apenas quando
preciso uma tenso de O2
extremamente baixa.
A soluo permanece
incolor se a tenso de O2
for baixa.
Rotador de sorologia
Contagem de rpm
A cada uso
Centrfugas
Mensalmente
Dentro de 5% do
estabelecido no indicador.
Cabines de segurana
Medir a velocidade do ar
atravs da abertura para
o rosto 2
Semestral ou
trimestralmente
Mod II - 37
ALGUMAS RECOMENDAES
Cada bateria de meios deve ser controlada com os quesitos mais exigentes para o crescimento ou
para a produo de atividade bioqumica. A disponibilidade de cepas do laboratrio pode ser
necessria para suplementar aquelas comercialmente disponveis.
Cada tubo de cultura, placa de meio e reagente deve ter uma etiqueta que identifique claramente
o contedo e as datas de preparo e vencimento.
Cada bateria de tubos e placas deve ser tambm controlada quanto esterilidade, principalmente
aqueles nos quais so adicionados suplementos aps a esterilizao. As provas de esterilidade
devem ser feitas visualmente e por meio de subcultivos. Determinados meios seletivos, por
exemplo, podem surpimir o crescimento visvel de bactrias, mas as clulas viveis podem
aparecer nos subcultivos.
Os meios preparados devem ser visualmente avaliados para sinais de deteriorao como
descolorao, turvao, mudana de cor e desidratao.
Os reagentes e testes usados para identificao de micobactria devem ser verificados uma vez ao
dia, quando utilizados, com uma espcie de micobactria que resulte uma reao positiva. Para
verificao de fixao de ferro, o teste deve ser monitorado para controle negativo e positivo.
Os reagentes e testes utilizados para identificao de fungos devem ser examinados uma vez por
semana, quando utilizados, para controle positivo. O reagente nitrato que determina sua
assimilao monitorado com peptona.
Todos os discos para susceptibilidade antimicrobiana devem estar avaliados ao menos uma vez
por semana com microrganismo padro de qualidade, de sensibilidade conhecida como E. coli
(ATCC 25922), S. aureus (ATCC 25923), S. fecalis (ATCC 29212) e P. Aeruginosa (ATCC 27853).
Os kits comerciais devem ser examinados a cada entrega e a cada lote, conforme as
recomendaes do fabricante.
Os componentes de um kit no devem ser utilizados com um kit de lote diferente, a no ser
quando especificado pelo fabricante.
Ateno: A freqncia das provas de controle de qualidade dos produtos comerciais utilizados no
laboratrio deve ser determinado pelo chefe ou responsvel imediato do laboratrio, conforme as
instrues dos respectivos fabricantes ou referncias em literatura.
Microrganismo-controle e reaes para o controle de qualidade dos meios de cultura
Meio
Microrganismo
Reaes
gar Sangue
Streptococcus do Grupo A
Streptococcus pneumoniae
gar bile-esculina
Espcies de Enterococcus
Streptococcus alfa-hemoltico
no do grupo D
gar chocolate
Haemophilus influenzae
Neisseria gonorrhoeae
Bom crescimento
Bom crescimento
Proteus mirabilis
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Mod II - 38
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Dextrose
Neisseria gonorrhoeae
Branhamella catarrhalis
Sacarose
Escherichia coli
Neisseria gonorrhoeae
Maltose
Espcies de Salmonella ou
Neisseria meningitidis
Neisseria gonorrhoeae
Lactose
Neisseria lactamicus
Neisseria gonorrhoeae
Descarboxilases
-
Lisina
Klebsiella pneumoniae
Enterobacter sakasakii
Arginina
Enterobacter cloacae
Proteus mirabilis
Ornitina
Proteu mirabilis
Klebsiella pneumoniae
Serratia marcescens
Enterobacter cloacae
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Shigella flexneri
gar de Hecktoen
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Escherichia coli
Indol
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
gar lisina-ferro
Salmonella typhimurium
Shigella flexneri
Proteus mirabilis
gar MacConkey
Escherichia coli
Proteus mirabilis
Espcies de Enterococcus
Malonato
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Sem crescimento
Bom crescimento, cor azul (positivo)
Motilidade
Proteus mirabilis
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Acinetobacter lwoffi
Espcies de Streptococcus
Escherichia coli
Bom crescimento
Sem crescimento
o-Nitrofil-beta-Dgalactopiranosdeo (ONPG)
Serratia marcescens
Salmonella typhimurium
Fenilalanina desaminase
Proteus mirabilis
Escherichia coli
gar Salmonella-Shigella
Salmonella typhimurium
DNAse
Mod II - 39
Escherichia coli
Sem crescimento
Voges-Proskauer
Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
gar xilose-lisina-dextrose
(XLD)
Espcies de Salmonella
Escherichia coli
Espcies de Shigella
Mod II - 40
7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1.
August, M.J., Hindler, J.A., Huber, T.W., Sewel, D.L. e Cumitech A. Quality control and quality
assurance practices in clinical microbiology. Coord. Ed. A.S. Wessfeld, American Society for
Microbiology, Washington, D.C., 1990.
2.
Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook. American Society for Microbiology, Washington, D.C., 1992.
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6.
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8.
World Health Organization. Laboratory biosafety manual. 2nd. Ed., WHO, Genebra, 2003.
Mod II - 41
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