Analisis Resistensi Mycobacterium leprae Terhadap Ofloxacin

Setelah Terapi Rifampicin Ofloxacin Minocycline (ROM)

Arif Risdianto Karim1, Muh Dali Amiruddin1, Farida Tabri1, R.

Satriono2, Mochammad Hatta3, Marianti Manggau4
1
Departemen
Dermatologi, Fakultas Kedokteran Universitas
Hasanuddin, Makassar, Indonesia
2
Demartemen Pediatrik, Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin,
Makassar, Indonesia
3
Departemen
Mikrobiologi,
Fakultas
Kedokteran
Universitas
Hasanuddin, Makassar, Indonesia
4
Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin, Makassar, Indonesia
Abstrak
Latar Belakang: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui korelasi
antara indeks morfologi dan IgM anti PGL-1, dan mutasi pada gen
gyrA untuk mendeteksi resistensi ofloksasin pada pasien dengan
kusta multibasiler (MB).
Metode: Penelitian ini dilakukan di Rumah Sakit Umum dr. Wahidin
Sudirohusodo dan rumah sakit jaringan di Makassar menggunakan
desain kohort retrospektif. Sampel penelitian terdiri 21 pasien dengan
kusta tipe MB yang telah menyelesaikan Rejimen pengobatan ROM,
dan yang telah diperiksa indeks bakteri (BI), indeks morfologi (MI),
antibodi IgM anti PGL-1, PCR, dan urutan, jumlah lesi kulit, dan
keteraturan pengobatan.
Hasil: Hasil penelitian menunjukkan bahwa semua sampel tidak
mengalami mutasi gen gyrA yang bertanggung jawab terhadap
tingkat resistensi ofloksasin; Namun, ada korelasi antara BI dan
antibodi IgM anti PGL-1, dan antara Antibodi IgM anti PGL-1

dan

jumlah kulit lesi.

Kesimpulan: Tidak ada sampel yang ditemukan mengalami mutasi
gen gyrA, ini dapat digunakan sebagai referensi untuk menilai korelasi
antara indeks morfologi dan antibodi IgM anti PGL-1 dengan mutasi
gen gyrA.

Kata kunci: gyrA Gen, Indeks Morfologi, Antibodi IgM anti PGL-1 ,
Resisten Ofloxacin

1. Pendahuluan
Kusta adalah penyakit infeksi kronis yang disebabkan oleh
Mycobacterium leprae (M. leprae).(1) Tujuan utama dari program
eliminasi kusta adalah untuk memutus rantai transmisi, mengobati
dan menyembuhkan, mencegah kecacatan dan resistensi. Terapi
multidrug Program (MDT) diprakarsai oleh Organisasi Kesehatan
Dunia (WHO) pada tahun 1981, secara resmi dikeluarkan pengobatan
kusta

dengan rejimen kombinasi

obat dapson,

rifampisin

dan

clofazimine, yang selanjutnya dikenal sebagai MDT-WHO rejimen. (2)

Dalam

banyak

penelitian,

sudah

sering.

diperoleh

komponen

resistensi obat dalam MDT-WHO. Oleh karena itu banyak penelitian

untuk menemukan rejimen alternatif yang lebih efektif, masa
pengobatan yang lebih pendek, dengan perbaikan klinis, bakteriologi
dan histopatologi.

(3)

Salah satu regimen alternatif untuk pengobatan kusta adalah

kombinasi rifampisin ofloksasin minocycline (ROM), yang memiliki
kepatuhan tingkat tinggi karena tidak diambil sehari-hari dan
pengobatan yang lebih pendek.

(4)

Ofloxacin mengalami resistensi

pada pengobatan kusta pertama kali dilaporkan oleh Cambau et al di

1997.

(5)

Meskipun tingkat resisten terhadap ofloksasin masih rendah,

tetapi perlu diawasi.

(4)

resistensi Ofloxacin pada M. leprae dikenal

sebagai hasil dari mutasi spesifik di kodon 89 dan 91 dalam gen gyrA.
(4)

Selain diagnosis, pemeriksaan bakteriologi berguna untuk

menentukan klasifikasi, menilai hasil pengobatan dan resistensi obat.
Pemeriksaan

menentukan

Indeks

morfologi

(MI).

Pada

saat

pengobatan berjalan, MI mengalami penurunan yang lebih cepat

dibandingkan dengan BI. Jika terjadi peningkatan MI, kemungkinan
pasien tidak teratur mengambil obat atau gangguan penyerapan
obat, atau telah ada perlawanan untuk obat.

(6-8)

Setelah menerima perawatan, tingkat Antibodi IgM anti PGL-1

menurun 50% atau lebih, disertai lanjut penurunan nilai BI dan MI. Hal
ini menunjukkan bahwa pemusnahan kusta berhasil. Sebaliknya, jika
titer Antibodi IgM anti PGL-1 masih tinggi, ini berarti masih ada basil
kusta yang masih hidup.
Berdasarkan

(6,8)

perihal

diatas

menyatakan,

kami

melakukan

penelitian ini bertujuan untuk menentukan korelasi antara MI dan

Antibodi IgM anti PGL-1 , dan mutasi pada gen gyrA untuk mendeteksi
resistensi ofloksasin pada kusta multibasiler.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

Penelitian ini merupakan penelitian observasional dengan
desain kohort retrospektif. Penelitian ini dilakukan di Rumah sakit
umum dr. Wahidin Sudirohusodo dan rumah sakit jaringannya di
Makassar, mulai dari Januari sampai Maret 2015. Setelah menerima
persetujuan dari komite etik pada penelitian biomedis manusia, kami
memperoleh

21

subyek

yang

memenuhi

kriteria

penelitian

dimasukkan dalam penelitian ini. Kriteria inklusi adalah kusta

multibasiler, berusia di atas 15 tahun, setelah terapi dengan rejimen
ROM, pada saat masa peninjauan masih menunjukkan gejala aktif
klinis penyakit kusta, dan bersedia untuk berpartisipasi dalam
penelitian ini dengan menandatangani formulir informed consent.
Semua subyek yang memenuhi kriteria penelitian, dilakukan
pengambilan

sampel

meliputi

sejarah

keteraturan

pengobatan,

menghitung jumlah lesi kulit yang aktif, celah apusan kulit untuk
pemeriksaan bakteri, darah untuk IgM anti PGL-1 dengan ELISA dan
jaringan biopsi untuk PCR diikuti oleh pengurutan. Analisis data

dilakukan dengan menggunakan SPSS versi 22. Uji statistik dilakukan

dengan menggunakan Kruskall-Wallis, post-hoc Mann-Whitney dan
korelasi Spearman tes dengan tingkat signifikansi p <0,05.

3. Hasil
Data dasar dan perbandingan diperoleh, masing masing
dicatat dan kemudian disusun dalam bentuk tabel di bawah ini.

Tabel 1 menunjukkan karakteristik dari studi sampel yang

pasien lebih laki-laki (57,1%), terapi biasa (95,2%), BI 2 (57,1%), MI
0% (95,2%), jumlah lesi 6-10 (71,4%), dan nilai rata-rata dari IgM anti
PGL-1 adalah 0,27 OD. Dalam penelitian ini kami tidak menemukan
sampel gen gyrA yang bermutasi, sehingga tidak dapat digunakan
sebagai acuan untuk menilai korelasi antara indeks morfologi dan IgM
anti PGL-1 dengan mutasi gen gyrA.

Data pada Tabel 2 menunjukkan bahwa ada korelasi yang

signifikan antara indeks bakteri dengan tingkat IgM anti PGL-1 (p
<0,05).

Tabel 3 menunjukkan bahwa tidak ada korelasi yang signifikan

antara indeks morfologi dengan tingkat IgM anti PGL-1 (p> 0,05) dan
Tabel 4 menunjukkan bahwa korelasi antara Indeks morfologi dan
gyrA mutasi gen tidak dapat dilakukan uji statistik karena tidak ada
mutasi gen gyrA.

Menurut hasil uji korelasi Spearman di Tabel 5, kita memperoleh

bahwa ada korelasi positif yang signifikan antara tingkat IgM anti PGL1 dan jumlah lesi kulit. Temuan ini menunjukkan bahwa semakin
tinggi IgM anti PGL-1, maka jumlah lesi kulit yang juga semakin
meningkat (p <0,05).

4. Diskusi
Penelitian ini telah dilakukan pada 21subjek pada penderita
kusta tipe

MB yang telah mendapatkan rejimen pengobatan ROM

yang masih menunjukkan gejala klinis penyakit kulit aktif , diperoleh

mayoritas sampel data antara usia 16-25 tahun. Kusta diketahui
terjadi pada semua usia, tetapi dalam banyak endemic daerah, usia
puncak adalah 10-14 tahun memiliki penyakit dan usia 30-50 tahun.
(9)

Berdasarkan gender, distribusi tertinggi pada jenis kelamin laki-laki

(12 kasus) dibandingkan perempuan (9 kasus). Meskipun kusta dapat

menyerang semua jenis kelamin, tetapi pria lebih menderita daripada
wanita. Di umum, setelah usia pubertas, laki-laki daripada perempuan
memiliki rasio antara 1,5 dan 2: 1.

(10)

Seluruh sampel memiliki jumlah lesi kulit lebih dari 5 lesi.

Menurut kriteria WHO kusta MB adalah semua jenis kusta dengan
jumlah lesi kulit 5 atau lebih dan celah kulit smear positif.

(2)

Sebanyak 95,2% dari sampel menunjukkan keteraturan rejimen

pengobatan. Kepatuhan pasien untuk MDT pada pengobatan kusta
penting untuk meminimalkan risiko kekambuhan dan menghindari
munculnya resistensi obat.

(11)

Penelitian dilakukan oleh Haryanto et al

telah menunjukkan signifikan korelasi antara kepatuhan terhadap

pengobatan MDT dengan Hasil uji laboratorium.

(12)

rejimen ROM

memiliki tingkat tinggi kepatuhan karena tidak diambil rejimen seharihari dan durasi pengobatan yang lebih pendek.(13)
Berdasarkan indeks morfologi menunjukkan hanya 1 (4,8%)
sampel dengan MI 0,5%, sedangkan 20 (95,2%) sampel dengan MI 0.
Dalam kusta lepromatosa, indeks morfologi jatuh dari awal titik
sekitar 5-20% ke nol setelah 5-6 bulan pengobatan tidak terganggu
dengan dapson, atau setelah sekitar lima minggu rejimen terapi
kombinasi dengan rifampisin. Indeks morfologi naik kembali setelah
jatuh, menunjukkan bahwa pasien tidak teratur minum obat atau
dicurigai basil resisten terhadap rejimen obat.

(6)

Dalam penelitian ini,

ada satu sampel dengan nilai MI 0,5% karena ada kecurigaan dari
resistensi

terhadap

pengobatan,

atau

ada

kesalahan

selama

Pewarnaan Ziehl- Neelsen dan pemeriksaan basil tahan asam karena

kesalahan manusia.
Titer IgM anti PGL-1 menunjukkan bahwa sampel memiliki nilai
rata-rata 0,27. Konversi IgM anti PGL-1 adalah dianggap berguna
untuk

memantau

pembersihan

beban

bakteri,

sehingga

dapat

mengukur efek pengobatan MDT. Di kusta lepromatosa yang sedang

dalam perawatan, durasi pengobatan merupakan faktor penting
dalam pengembangan tingkat IgM dari anti PGL-1, karena pasien yang
diobati selama 18 bulan tingkat IgM anti PGL-1 masih positif,
sedangkan pasien yang diobati untuk waktu yang lama (5 tahun atau
lebih) memiliki tingkat antibodi yang normal. Pemeriksaan tingkat IgM
anti PGL-1 adalah sensitif terhadap semua jenis kasus kusta MB dan
hanya 30-60% dapat mendeteksi kusta paucibacillary

(14)

Dalam

penelitian ini menunjukkan bahwa ada hubungan yang signifikan

antara BI setelah pengobatan dengan titer serologi IgM anti PGL-1.
Pembelajaran oleh Lyon et al menunjukkan bahwa kadar IgM anti PGL1 oleh serologi langsung berhubungan dengan beban bakteri pada
pasien, perticularly dengan pemeriksaan BI. Pasien dengan tingkat BI

tinggi memiliki kemungkinan titer IgM anti PGL-1 serologi 19 kali lebih
tinggi.

(15)

Penelitian ini juga menunjukkan bahwa ada korelasi antara titer

serologi IgM anti PGL-1 dengan jumlah kulit lesi. Hal ini menunjukkan
bahwa jumlah lesi kulit yang lebih besar, memunculkan titer IgM anti
PGL-1 yang lebih tinggi. Penelitian yang dilakukan oleh De Moura et al
menunjukkan bahwa titer tinggi IgM anti PGL-1 menunjukkan bahwa
beban bakteri juga tinggi pada pasien yang secara klinis ditunjukkan
dengan jumlah lesi lebih banyak dan aktif. Individu dengan IgM anti
PGL-1 positif memiliki risiko 7,2 kali lebih tinggi menderita kusta bila
dibandingkan dengan individu dengan IgM anti PGL-1 negatif.
Dari hasil polymerase chain reaction (PCR) menunjukkan
sebanyak 21 sampel (100%) hasil negative ditemukan gyrA mutasi
gen.

PCR

adalah

metode

baru

untuk

mendeteksi

organisme dengan DNA tertentu amplifikasi

(1)

keberadaan

Pengembangan lebih

lanjut dari PCR ini adalah untuk mempelajari resistensi bakteri

terhadap pengobatan. Hasil positif menunjukkan kehadiran rantai
DNA bakteri yang khusus pada jaringan tubuh.

(17)

Hasil sampel sekuensing DNA M. leprae dianalisis menunjukkan

bahwa semua 21 (100%) sampel tidak mengalami mutasi. Analisis
sekuensing DNA adalah untuk mencari mutasi tertentu gen dari M.
leprae, gen misalnya gyrA dikenal untuk mengkodekan pembentukan
enzim yang target aksi ofloxacin. Jika mutasi diperoleh, dapat
disimpulkan bahwa enzim target obat telah berubah, sehingga obat
menjadi tidak mampu
resisten terhadap obat.

bekerja atau dengan kata lain basil menjadi

(17)

Dari penelitian ini, tidak ada gen gyrA mutasi yang bertanggung
jawab

untuk

resistensi

obat

ofloksasin

dalam

semua

sampel

pembelajaran. Penelitian tentang hasil resistensi obat frekuensi

bervariasi di setiap negara, dan antara kasus baru dan kasus kambuh.
Di Indonesia, ofloksasin resistensi mutasi tidak ditemukan dari 121
kasus baru dan 10 kasus kambuh dipelajari. Begitu juga yang terjadi

di penelitian serupa dilakukan di Myanmar dan Filipina.

(18)

Penelitian

di Vietnam oleh Kai et al juga menunjukkan masih belum menemukan

mutasi pada gen gyrA yang menyebabkan ofloxacin perlawanan.

(19)

Resistensi ofloksasin dalam pengobatan kusta adalah pertama

dilaporkan oleh Cambau et al pada tahun 1997, pada pasien laki-laki
35

tahun

dengan

kusta

diberikan

terapi

lepromatosa

dengan

rifampisin dan ofloksasin selama 28 hari dengan pemantauan, terjadi

perbaikan klinis, kemudian terjadi kekambuhan 1 tahun berikutnya.

(5)

M. leprae resisten Ofloxacin merupakan hasil dari mutasi spesifik di

kodon 89 dan 91 dalam gen gyrA. Mutasi yang pernah terdeteksi di
gen gyrA melaporkan bahwa Ala-Val (GCA-GTA) pada kodon 91 gen
gyrA dikonfirmasi oleh Foot Mouse Pad (MFP) dan pada Gly-Cys
(GGCTGC) pada kodon 89 gyrA gen tetapi tidak dikonfirmasi oleh MFP.
(20)

Penelitian oleh Matsuoka dkk dalam kasus kambuh dan kusta yang

tidak diobati di Indonesia, Myanmar dan Filipina menunjukkan bahwa

tidak ada mutasi dalam gyrA

(18)

Cambau et al juga melaporkan hanya

ada satu kasus gen. dari gyrA mutasi gen ketahanan ofloksasin pada
kusta kasus kambuh bahwa mereka jangka panjang diselidiki di
Perancis.
Singkatan
BI: Indeks bakteri
MB: multibasiler
MDT: Terapi multidrug
MFP: kaki tikus bantalan
MI: Indeks morfologi
PCR: polymerase chain reaction
ROM: rifampisin ofloksasin minocycline
WHO: World Health Organization